Kornea Pengaruh Asam salisilat pada Membran Proteome dan

virulensi dari Pseudomonas aeruginosa

Mahesh Bandara, 1,2 Padmaja Sankaridurg, 1,2 Hua Zhu, 1,2 Emma Hume, 1,2 dan Mark
Willcox1,2
1The School of Optometry and Vision Science , University of New South Wales, Sydney, Australia 2Brien Holden Vision
Research Institute, Sydney, Australia
Correspondence: Mark Willcox, Sekolah Optometry dan Vision Science, University of New South Wales, Sydney, NSW 2052,
Australia; m.willcox@unsw.edu.au. Dikirim: 20 Desember 2015 Diterima: 11 Februari 2016 Citation: Bandara M, Sankaridurg
P, Zhu H, Hume E, Willcox M. Pengaruh asam salisilat pada membran teome pro dan virulensi Pseudomonas aeruginosa.
Berinvestasi Ophthalmol Vis Sci. 2016; 57: 1213-1220. DOI: 10,1167 / iovs.15-18990

ABSTRAK

Tujuan :Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh asam salisilat pada proteome
membran, sensitivitas terhadap antibiotik, dan produksi keratitis mikroba oleh Pseudomo- nas
aeruginosa.

Metode : P. aeruginosa 6294 ditumbuhkan dengan adanya atau tidak adanya 30 mM asam
salisilat. Protein membran bakteri diekstraksi dalam buffer karbonat, dipisahkan menggunakan
elektroforesis gel dua dimensi dan diidentifikasi dengan spektrometri massa. Konsentrasi hambat
minimum (MIC) dari berbagai antibiotik ditentukan dengan menggunakan P. aeruginosa 6294
tumbuh di tidaknya asam salisilat. Model awal tikus keratitis mikroba digunakan untuk
menentukan apakah pengobatan dengan 30 mM asam salisilat dapat meningkatkan hasil infeksi.

Hasil :Pertumbuhan asam salisilat diubah proteome membran dari P. aeruginosa 6294. Delapan
belas protein, termasuk OprF, OprD, MexA, OprG, PilQ, dan flagellin-tipe A protein, yang
menurunkan regulasi, enam protein, termasuk OPRM dan OprB, yang diregulasi, dan sembilan
protein yang tidak terpengaruh oleh pertumbuhan asam salisilat. Pertumbuhan asam salisilat
sedikit meningkatkan resistensi terhadap antibiotik carbapenem tetapi tidak mempengaruhi MIC
dari antibiotik lain diuji. Pengobatan asam salisilat secara signifikan mengurangi skor klinis mata
dan beban bakteri di mata selama keratitis mikroba tetapi tidak berpengaruh pada jumlah
infiltrasi neutrofil.

Kesimpulan ;Asam salisilat mengubah protein membran dari P. aeruginosa, sedikit meningkat
perlawanan dari bakteri terhadap antibiotik carbapenem saja, dan mampu mengurangi
patogenisitas terkait dengan infeksi P. aeruginosa kornea tikus. Asam salisilat mungkin berguna
sebagai agen antimikroba dalam pengobatan Pseudomonas keratitis. Kata kunci: asam salisilat,
proteome membran, Pseudomonas aeruginosa, keratitis

Pendahuluan

Pseudomonas aeruginosa tetap yang paling umum adalah menyebabkan oportunistik patogen
infeksi dan kornea untuk orang-orang yang memakai kontak lenses.1 Annualized tingkat
kejadian keratitis mikroba bervariasi dalam studi, meskipun secara keseluruhan mereka berada
dalam perjanjian yang baik, dengan tingkat saat memakai diperpanjang (yaitu, orang tidur di
lensa) menjadi sekitar 20 per 10.000 pemakai per tahun.2 Salah satu masalah yang terkait dengan
infeksi mata dengan P. aeruginosa adalah tingkat peningkatan resistensi terhadap antibiotik
menjadi melaporkanworldwide.1,3

Sistem eflux resistensi multidrug memungkinkan P. aeruginosa untuk melindungi dirinya

sendiri dengan mendetoksifikasi dan mengekstrusi berbagai senyawa beracun termasuk
antibiotik. 4 Overproduksi beberapa sistem eflux obat (MexAB-OprM, MexCD-OprJ, MexEF-
OprN, dan MexXY-OprM) di P. aeruginosa memberikan tingkat toleransi yang meningkat
terhadap pelarut organik dan antibiotik yang berguna secara klinis. 5 Sistem pompa efflux
MexAB-OprM mungkin yang paling penting dari strategi perlawanan ini, bertanggung jawab
untuk melawan berbagai antibiotik dan agen kemoterapi, termasuk kuinolon dan
laktam. 6 , 7 Sistem MexCD-OprJ dan MexEF-OprN kurang signifikan daripada MexAB-OprM,
dan biasanya tetap diam dengan adanya fungsi MexAB-OprM dan berbagai represor
gen. Namun, jika represor gen bermutasi (yang dapat terjadi dengan adanya berbagai antibiotik),
pompa eflux lainnya dapat memediasi resistensi terhadap, misalnya fluoroquinolones,
aminoglikosida, dan beberapa laktam tertentu. Protein membran luar lainnya yang terlibat dalam
resistensi antibakteri P. aeruginosa adalah OprD, 13 dalam hal ini kekurangan protein memediasi
resistensi terhadap sefalosporin.

Ada banyak protein membran luar yang diketahui atau diprediksi (OMPs), termasuk porin
yang terikat membran, dalam genom P. aeruginosa PAO1. 14 Porins memiliki struktur
transmembran barrel dan memungkinkan akses zat seperti gula ke sel. 15 , 16 Porins dapat
berkontribusi pada produksi dan pelepasan sitokin proinflamasi dan menyebabkan cedera sel dan
apoptosis. 17 , 18 P. aeruginosa mengandung selubung sekresi terkait membran yang berbeda yang
terlibat dalam pelepasan sejumlah besar protein ekstraselular, termasuk faktor virulensi, ke
lingkungan luar. 19 Sistem sekresi yang berbeda terlibat dalam pelepasan protease alkali (tipe
I); Elastase (tipe II); Sitotoksin ExoU, ExoS, ExoT, dan ExoY (tipe III); Adhesin CdrA (tipe
V); Dan toksin Tse2 (tipe VI). Selain itu, beberapa struktur virulensi terkait permukaan lainnya,
seperti pili, flagella, lipopolisakarida, dan kapsul, juga melekat pada sel melalui membran luar
dan terpapar pada lingkungan luar.

P. aeruginosa bisa menjadi resisten terhadap banyak antibiotik yang relevan secara klinis,
jadi ada kebutuhan untuk menyelidiki agen alternatif untuk mengendalikan penyakit yang
disebabkan oleh bakteri ini. Asam salisilat dapat mengurangi keterikatan P. aeruginosa ke sel
epitel kornea manusia secara in vitro 21 dan menurunkan sejumlah faktor virulensi pada P.
aeruginosa , 22 , 23 bahkan pada konsentrasi yang tidak terlalu mempengaruhi
pertumbuhan. Namun, asam salisilat diketahui menginduksi resistansi P. aeruginosa terhadap
imipenem melalui downregulation OprD, namun tidak mempengaruhi sensitivitas terhadap
kloramfenikol, norfloksasin, tetrasiklin, atau cefpirome. 24 Asam salisilat dapat meningkatkan
permeabilitas membran luar P. aeruginosa ke laktam nitrocefin. 25 Untuk bakteri
terkait, Burkholderia cepacia , asam salisilat menginduksi resistansi terhadap ciprofloxacin,
kloramfenikol, dan trimetoprim, namun tidak sampai ceftazidime. Pertumbuhan asam salisilat
Escherichia coli menginduksi ketahanan reversibel terhadap kloramfenikol, ampisilin,
tetrasiklin, dan asam nalidiks. 27 Jika asam salisilat adalah agen antibakteri yang berguna, atau
agen tambahan yang digunakan bersamaan dengan terapi antibiotik tradisional dalam pengobatan
penyakit, pemahaman yang lebih rinci tentang tindakannya terhadap bakteri, pengembangan
resistensi, dan pengobatan pada model hewan adalah Dibutuhkan.

Bahan dan metode

Strain Bakteri dan Kondisi Pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa 6294, yang diisolasi dari
kasus keratitis mikroba, 28 disubkultur dalam 10 mL kaldu kedelai tryptic (Oxoid, Ltd., Sydney,
Australia) pada suhu 37 C semalam. Kultur ditanam sampai fase diam tanpa agitasi dan sel
bakteri dipanen dengan sentrifugasi (3000 g , 10 menit, 20 C), dicuci dua kali, dan
ditangguhkan dalam PBS pada konsentrasi unit pengikat koloni 1 10 7 (cfu) / ML (OD 0,1 pada
660 nm).
Isolasi OMP dan Dua Dimensi
Bakteri ditambahkan 1:10 sampai 400 mL baik kaldu kedelai trypticase segar (TSB) saja
(kontrol) atau TSB segar dengan konsentrasi konsentrasi hambat sub-minimum (MIC)
konsentrasi (30 mM; MIC = 120 mM) 23asam salisilat dan Diinkubasi selama 20 jam. Sel-sel
dipanen dengan sentrifugasi pada 3000 g selama 10 menit pada suhu 20 C dan dicuci dua kali
di PBS. Pelet sel dikepang beku pada suhu -80 C dan dikeringkan beku. Protein membran luar
dibuat dengan metode ekstraksi natrium karbonat yang dimodifikasi seperti yang dijelaskan
sebelumnya oleh Nouwens et al. 29 dan beku-kering. Protein membran luar diperoleh dari dua
budaya terpisah dan dianalisis secara terpisah untuk memastikan reproduktifitas
Oksigen beku beku dilarutkan dalam buffer sampel 2oL isoelektrik (IEF)
(tetradecanoylamide-propyl-dimethyl ammoniopropane-sulforate-14 1% wt / vol [Calibiochem-
Novabiochem Co., San Diego, CA, USA]; tributyl phosphine [ TBM; Bio-Rad, Gladesville,
NSW, Australia] 2 mM; urea [BDH, Tingalpa, QLD, Australia] 7 M; Thiourea [Sigma, Castle
Hill, NSW, Australia] 2 M; pembawa ampholfi [Bio-Rad] 0.5 % Wt / vol; bromophenol
biru). Campuran sampel dimuntahkan selama 1 menit dan disentrifugasi (20.000 g , 10 menit, 4
C) untuk menghilangkan zat yang tidak larut. Sampel yang mengandung protein 250 g diisikan
ke 17 cm pH 4-7 strip kering gradien pH amobil (IGP; Bio-Rad) dengan rehidrasi semalam pada
suhu 18 C. Fokus isoelektrik dan elektroforesis SDS-gel berikutnya dilakukan seperti yang
dijelaskan oleh Nouwens dkk. 29 , 30 Bintik protein dicitrakan dan didigitasi menggunakan
PerkinElmer ProXPress Proteomic Imaging System (Melbourne, VIC, Australia). Elektroforesis
dua dimensi dilakukan secara rangkap tiga untuk setiap preparasi sampel; Dengan demikian,
dengan menggunakan persiapan OMP duplikat, enam gel dihasilkan untuk analisis.
Protein yang diekspresikan berbeda didefinisikan sebagai yang menunjukkan peningkatan
atau penurunan intensitas spot lebih besar dari 2 kali lipat rata-rata kontrol dari enam
gel. Perangkat lunak PDQuest (Bio-Rad) digunakan untuk analisis komparatif, kuantisasi spot,
perbandingan gel, dan analisis data gambar gel digital. Tiga puluh lima gel spot menunjukkan
perubahan yang dapat direproduksi secara melimpah, dan 12 titik yang tidak berubah, dipilih
untuk analisis lebih lanjut. Setiap titik protein diidentifikasi dengan pencarian terhadap
proyek sekuensing genom Pseudomonas untuk identifikasi spot yang meyakinkan,% cakupan
urutan, jumlah massa molekul peptida yang sesuai, dan massa protein total dan
p I digunakan. Identifikasi lebih lanjut pada identifikasi diberikan melalui spektrometri massa /
sekuens spektrometri massa dari delapan sinyal peptida terkuat yang dihasilkan dalam
pemindaian spektrometri massa pertama (MS).

Penentuan Pengaruh Asam Salisilat pada MIC Berbagai Antibiotik

Metode yang digunakan mengikuti yang digariskan oleh Clinical and Laboratory Standards
Institute (dokumen M7-A7; ISBN 1-56238-587-9) dengan menggunakan uji mikrodilusi kaldu,
dengan modifikasi berikut. Bakteri secara rutin ditanam di hadapan 30 mM asam salisilat atau
tanpa asam salisilat dan antibiotik berikut: ceftazidime (32-0,25 g / mL), tetrasiklin (32-0,25 g
/ mL), siprofloksasin (2-0,015 g / mL) , Imipenem (32-0,25 g / mL), meropenem (8-0.125 g /
mL), dan eritromisin (640-10 g / mL). MIC ditentukan sebagai konsentrasi antibiotik terendah
yang menghambat pertumbuhan bakteri setelah inkubasi pada suhu 37 C selama 18 jam. MIC
bakteri yang tumbuh dengan keberadaan atau tidak adanya asam salisilat dicatat dan semua
percobaan dilakukan pada setidaknya dua kesempatan yang berbeda

Pengobatan Keratitis Mikroba Dengan Asam Salisilat dalam Model Hewan

Model hewan yang digunakan telah dijelaskan sebelumnya. 31 Sebanyak 12 tikus AJ
(Laboratorium Jackson, Bar Harbor, ME, AS) (dalam dua set 6) digunakan sesuai dengan
pedoman yang diajukan dalam Pernyataan ARVO untuk Penggunaan Hewan dalam Penelitian
Mata dan Penglihatan, dan Persetujuan etika kelembagaan yang diperoleh Secara singkat, setelah
anestesi, kornea yang tepat pada tikus jantan berumur 6 sampai 8 minggu diawetkan dan 10 L
mengandung 3 10 6 cfu P. aeruginosa 6294 , yang sebelumnya ditanam di TSB (tanpa asam
salisilat) diaplikasikan langsung ke Kornea yang terluka.
Setelah 18 jam, mata tikus diobati per jam selama 5 jam berikutnya dengan asam salisilat
30 mM di PBS atau kendaraan sendiri. Tikus dipantau dengan lampu celah oleh pengamat
bertopeng pada 24 jam setelah infeksi bakteri. Masing-masing dari lima parameter (eksudat,
defek epitel, tingkat infiltrasi kornea, opasitas kornea, dan edema kornea), dinilai pada skala 0
(tidak ada) sampai 4 (berat) selama pemeriksaan lampu gantung. Nilai parameter dijumlahkan
untuk menghasilkan skor pemeriksaan lampu celah tunggal mulai dari 0 (mata normal) sampai
maksimum teoritis 20. Setelah tikus diberi euthanasia, kornea dikumpulkan dan dianalisis untuk
jumlah bakteri dan jumlah PMN yang menyusup. Bakteri diukur setelah pertumbuhan pada
trypticase soy agar (Oxoid) selama 18 jam pada suhu 37 C. 31 Jumlah PMN dalam kornea
dihitung berdasarkan jumlah myeloperoxidase pada homogenat kornea. 31 , 32 Hasil dinyatakan
sebagai rata-rata cfu per kornea SD dan rata-rata PMN per kornea SD. Hasil dianalisis
dengan independent t- test untuk perbandingan antar kelompok.

Hasil

Pengaruh Asam Salisilat terhadap Protein Membran P. aeruginosa 6294

Sebagian besar OMPs P. aeruginosa diselesaikan dalam kisaran p I dari 4 sampai 6 dan massa
molekul berkisar antara 18 sampai 45 kDa ( Gambar 1 ) seperti yang ditunjukkan
sebelumnya. 29 , 30 Sebanyak 47 titik protein, 35 titik yang dapat direproduksi secara reproduktif
pada pertumbuhan asam salisilat dan 12 titik yang tetap tidak berubah, diisolasi dan diidentifikasi
dengan desorpsi laser / dibantu matriks dibantu MS-flight setelah in-gel tryptic. intisari. Sebagian
besar protein membran yang ditandai dengan pemetaan massa peptida padapewarnaan P.
aeruginosa 6294 dicocokkan untuk membuka urutan frame baca dari database P.
aeruginosaPOA1. Sebagian besar tempat yang teridentifikasi diverifikasi sebagai OMP atau
fungsi yang tidak diketahui (Tabel 1 ) Tiga puluh lima dari 47 titik yang diidentifikasi terlihat
berubah dalam kelimpahan antara perawatan.Sebagian besar bintik protein hadir dalam
kelimpahan yang lebih rendah pada sampel yang diolah dengan asam salisilat bila dibandingkan
dengan kontrol ( Tabel 1 ). Protein berikut diturunkan: OprF, OprD, MexA, OprG, OprL, protein
yang berasal dari PA1041 (kemungkinan OMP), protein yang berasal dari PA2113 ( opdO ;
probable porin), prekursor protein fimbrial, PilQ, flagellin type-A, HsiC2, peptidyl -prolyl cis-
trans isomerase, ComL, protein yang berasal dari PA2800 ( VacJ ), aconitate hydratase-1, LptE
dan satu protein hipotetis (dari PA1324). Protein berikut diregenerasikan: OprB, protein yang
berasal dari PA2291 ( opbA ; probable porin ), protein yang berasal dari PA0162 ( opdC ;
probable protein), OprM, protein yang berasal dari PA2837 ( opmA ; probable OMP), dan D-ala-
D- Ala-karboksipeptidase Dua belas bintik yang mewakili sembilan protein tidak terpengaruh
oleh pertumbuhan asam salisilat ( Tabel 2 ), termasuk PagL, Opr86, dan OprH.
Gambar 1

Elektroforesis gel dua dimensi protein membran P. aeruginosa 6294. ( A ) Protein yang diambil
dari sel yang tumbuh di TSB saja. ( B ) Protein yang diekstraksi dari sel yang ditanam dalam
asam salisilat TSB + 30 mM. Angka mengacu pada protein yang diidentifikasi pada Tabel 1 .
Tabel 1
Protein luar membran P. aeruginosa Strain 6294 yang menunjukkan lebih dari 2-lipatan
perbedaan dalam kelimpahan setelah pertumbuhan asam salisilat

Tabel 2

Protein luar membran P. aeruginosa Strain 6294 yang tidak berubah oleh pertumbuhan
keberadaan asam salisilat.

Pengaruh Asam Salisilat terhadap Sensitivitas P. aeruginosa 6294 terhadap Antibiotik

Tabel 3 memberikan rincian MIC bakteri yang tumbuh dengan adanya atau tidak
adanya asam salisilat. Hanya dengan imipenem atau meropenem apakah ada kenaikan
MIC bila bakteri tersebut ditumbuhkan dengan adanya asam salisilat. Untuk
imipenem, pertumbuhan asam salisilat membuat sel bakteri menjadi intermediate
dalam resistensi / sensitivitas yang sensitif saat tumbuh dengan tidak adanya asam
salisilat. Meskipun MIC untuk meropenem meningkat, bakteri masih dianggap sensitif
terhadap antibiotik ini saat tumbuh dengan adanya asam salisilat ( Tabel 3 ).
Pengaruh Asam Salisilat Terhadap Produksi Keratitis Mikroba oleh P. aeruginosa 6294
Gambar 2 menunjukkan hasil pengobatan dengan asam salisilat pada keratitis mikroba yang
dihasilkan oleh P. aeruginosa 6294. Ada penurunan yang signifikan pada skor klinis (slit-lamp)
secara keseluruhan ( P = 0,005) dan jumlah bakteri yang tersisa dalam kornea 24 jam. Setelah
inisiasi infeksi ( P = 0,04). Namun, jumlah PMN yang menginfiltrasi kornea pada 24 jam setelah
infeksi tidak terpengaruh ( P > 0,05) dengan pengobatan dengan asam salisilat.

Gambar 2
Pengaruh asam salisilat terhadap produksi keratitis mikroba oleh P. aeruginosa 6294. ( A ) Skor
klinis. ( B ) Jumlah bakteri pada kornea pada tikus. ( C ) Jumlah PMN pada kornea pada tikus. *
Secara statistik berbeda dibandingkan dengan kontrol ( P <0,05).

Diskusi
Penelitian ini telah menunjukkan bahwa pertumbuhan P. aeruginosa dengan adanya
konsentrasi subinhibit asam salisilat mengubah proteome membran bakteri, memiliki sedikit efek
sensitivitas terhadap antibiotik carbapenem, dan dapat mengurangi patogenisitas yang terkait
dengan infeksi kornea. Dengan menggunakan kondisi regangan dan kultur yang sama,
sebelumnya kami telah menunjukkan bahwa perlakuan asam salisilat yang sama dapat mencegah
adhesi P. aeruginosa ke permukaan , mengurangi kedutan dan motilitas kolam bakteri ini, dan
mengurangi produksi protease dan molekul penginderaan kuorum. 21 , 23.
Kemampuan asam salisilat untuk mengurangi adhesi P. aeruginosa terhadap permukaan
dan mengurangi bentuk motilitas 21 , 23 , 33 mungkin terkait dengan temuan dalam penelitian saat
ini bahwa asam salisilat mengurangi produksi dua protein fimbrial, termasuk jenis pilQ dan
flagellin. -A protein. PilQ terlibat dalam mengekstrusi serat pilus tipe IV melalui membran luar
bakteri dan dengan demikian memfasilitasi motilitas berkedut, sedangkan flagella terlibat dalam
pengikatan langsung pada membran epitel. Protein permukaan sel lainnya, OprF, yang berkurang
setelah pertumbuhan asam salisilat, juga telah terbukti berperan dalam adhesi sel epitel. 37 , 38.
 Mutasi oprF mengurangi sekresi efektor sistem sekresi tipe 3 ExoS dan ExoT, serta
faktor virulensi pyocyanin, exotoxin A, lectin PA-1L, dan elastase, dan molekul sinyal
penginderaan kuorum N - (3-oxododecanoyl) -L -homoserine lactone dan N- butanoyl-L-
homoserine lactone. Asam salisilat dapat menghambat produksi pyocyanin, protease, elastase,
lactones homosisteris asilasi, dan invasi sel epitel kornea atau sitotoksisitas, 22 ,23 dan penelitian
saat ini juga menunjukkan adanya downregulation dengan adanya asam salisilat LptE, protein
yang terlibat dalam perakitan. Lipopolisakarida di membran luar, 39 dan HsiC2, protein dari
sistem sekresi tipe VI40 yang terlibat dalam sekresi toksin Tse2. 20 Karena banyak faktor
virulensi ini terbukti penting selama infeksi kornea, 41-45 kami menguji kemampuan asam
salisilat untuk mengurangi virulensi P. aeruginosa 6294 dalam model keratinitis murine. Asam
salisilat secara signifikan mengurangi jumlah bakteri yang hadir di kornea tikus 24 jam setelah
infeksi dan mengurangi skor klinis. Menariknya, asam salisilat tidak mempengaruhi jumlah
PMN di kornea. Asam salisilat adalah obat anti-inflamasi nonsteroid dan dapat menghambat
metabolisme asam arakidonat. Juga, salisilat telah dilaporkan menghambat pembentukan
superoksida oleh neutrofil, 46 namun tidak menghambat respon kemotaksinya secara in
vitro. Berdasarkan temuan ini, tampak bahwa kemungkinan penjelasan tentang efektivitas asam
salisilat untuk mengurangi jumlah bakteri selama keratitis adalah efek langsung pada virulensi
bakteri, namun sedikit atau tidak ada efek rekrutmen neutrofil, walaupun efek asam salisilat pada
Fungsi neutrofil seperti pembentukan superoksida atau fagositosis bakteri tidak dapat
dikesampingkan. Perlu dicatat bahwa P. aeruginosa ditanam secara in vitro dengan adanya asam
salisilat selama 20 jam namun secara in vivo terkena asam salisilat hanya selama 5 jam. Dengan
demikian, ada kemungkinan bahwa perubahan yang terlihat selama pertumbuhan in vitro
mungkin tidak tercermin secara in vivo karena perbedaan waktu pemaparan bakteri.
Protein membran lainnya juga mengalami perubahan dengan adanya asam salisilat. Ini
termasuk protein seperti MexA, OprM, OprD, OprG, OprL, dan OprB. Sistem pengangkut eflux
hambatan yang paling penting di P. aeruginosa adalah keluarga super-resistansi nodus resistansi
(RND), 4 yang terdiri dari mexA , mexB , oprM gen operon di semua strain P.
aeruginosa . Setelah inaktivasi salah satu gen super keluarga ( mexa , mexB , atau oprM ), strain
menjadi jauh lebih peka terhadap antibiotik. Studi saat ini menunjukkan bahwa pertumbuhan
asam salisilat mengurangi produksi MexA, yang menyandarkan kompleks RND ke membran
dalam melalui asam lemak dan bertindak sebagai protein jembatan membran untuk subunit
MexB dan OprM. Penurunan MexA dapat menyebabkan peningkatan sensitivitas antibiotik
seperti karbapenem. 50 Di sisi lain, pertumbuhan asam salisilat meningkatkan ekspresi OprM,
yang mungkin diharapkan dapat meningkatkan ketahanan terhadap antibiotik
karbapenem. 50 Ada sedikit peningkatan resistensi terhadap imipenem dan meropenem setelah
pertumbuhan dengan adanya asam salisilat ( Tabel 3 ). Namun, karena perubahan MexA / OprM
saling berlawanan satu sama lain, kemungkinan kenaikan resistansi karbapenem ini disebabkan
oleh berkurangnya ekspresi OprD, 13 , 51 terutama karena tidak ada peningkatan resistansi
terhadap kuinolon. 7 Berbeda dengan kasus Burkholderia cepacia atau E. coli yang ditumbuhkan
dengan asam salisilat, 26 , 27 P. aeruginosa tidak mengalami peningkatan ketahanan terhadap
ciprofloxacin atau tetrasiklin. Poros difusi gula nonspesifik OprB diregulasi dalam menanggapi
asam salisilat. OprB adalah protein pengangkutan karbohidrat umum yang selektif untuk dilewati
di membran luar gula, termasuk manitol, fruktosa, dan gliserol, dan memainkan peran sentral
dalam pengambilan karbohidrat. OprG adalah protein yang relatif belum dieksplorasi
dalam proteom P. aeruginosa , namun mungkin terlibat dalam respons sitotoksik terhadap sel
epitel. OprG tidak berkontribusi untuk melengkapi resistansi atau pembentukan biofilm, namun
terlibat dalam respon sitotoksik strain PA14, strain sitotoksik P. aeruginosa yang
diketahui . Meskipun strain yang digunakan dalam studi saat ini, P. aeruginosa 6294 , adalah
strain invasif daripada sitotoksik, 28 , 44 strain invasif telah terbukti menghasilkan respons
sitotoksik terhadap sel epitel kornea manusia secara in vitro, 54 dan pengurangan OprG Mungkin
telah mengakibatkan patologi yang berkurang karena pengurangan respons sitotoksik in vivo
sebagai respons terhadap asam salisilat. OprL diturunkan berdasarkan pertumbuhan asam
salisilat. OprL diperlukan untuk mempertahankan integritas membran luar E.
coli 55 dan fluiditas membran luar P. aeruginosa . 56 OprL mengalami penurunan setelah
terpapar P. aeruginosa menjadi tobramycin atau ciprofloxacin. 57

Kesimpulannya, penelitian ini menunjukkan bahwa asam salisilat dapat mempengaruhi

protein membran P. aeruginosa dan menurunkan ekspresi OMPs. Perubahan pada protein ini
dapat bermanifestasi sebagai peningkatan resistensi yang kecil terhadap antibiotik carbapenem
namun perawatan asam salisilat dapatmenyebabkan penurunan kemampuan P. aeruginosa yang
dramatis untuk menginfeksi kornea. Data tersebut menyiratkan bahwa asam salisilat mungkin
merupakan pilihan pemberian obat yang tepat dengan antibiotik fluoroquinolone untuk
pengobatan keratitis P. aeruginosa.