Claudio LV

Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Departamento de Qumica
Obteno de disperses de complexos polieletrolticos base de

quitosana e poli(cido metacrlico) e anlise de adsoro de
albumina bovina srica
Cludio Lopes de Vasconcelos
Tese realizada sob a orientao do Prof. Dr. Jos

Lus Cardozo Fonseca apresentada ao Departa-
mento de Qumica da UFRN em preenchimento
parcial dos requisitos para a obteno do grau de
Doutor em Qumica.
Natal - RN
Abril/2007.
Diviso de Servios Tcnicos
Catalogao da Publicao na Fonte. UFRN / Biblioteca Central Zila Mamede
Vasconcelos, Cludio Lopes de.

Obteno de disperses de complexos polieletrolticos base de quitosana e
poli(cido metacrlico) e anlise de adsoro de albumina bovina srica / Cludio
Lopes de Vasconcelos. Natal, RN, 2007.
98 p. : il.
Orientador : Jos Lus Cardozo Fonseca.
Tese (Doutorado) Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Departamento

de Qumica.
1. Quitosana Tese. 2. Poli(cido metacrlico) Tese. 3. Complexo polieletroltico

Tese. 4. Massa molar Tese. 5. Fora inica Tese. 6. Efeito polieletroltico Tese.
7. Polimerizao em molde Tese. 8. Adsoro Tese. I. Fonseca, Jos Lus Cardozo.
II. Ttulo.
RN/UF/BCZM CDU 547.458(043.2)

Para Ceclia (in memoriam) e Guilherme com amor
Cludio Lopes de Vasconcelos. Obteno de disperses de complexos polie-
letrolticos base de quitosana e poli(cido metacrlico) e anlise de adsoro
de albumina bovina srica. Tese de Doutorado, Universidade Federal do Rio
Grande do Norte, Programa de Ps-Graduao em Qumica, rea de concentra-
o: Fsico-Qumica, Natal/RN, Brasil.
O RIENTADOR: Prof. Dr. Jos Lus Cardozo Fonseca.
BANCA EXAMINADORA
P RESIDENTE: Prof. Dr. Jos Lus Cardozo Fonseca (DQ/UFRN)
M EMBROS :
Prof.a Dra. Mrcia Rodrigues Pereira (DQ/UFRN)
Prof.a Dra. Nedja Suely Fernandes (DQ/UFRN)
Prof. Dr. Francisco Arnaldo Viana (DQ/UERN)
Prof. Dr. Emanuel Alves de Souza (CEFET-Imperatriz/MA)
2
PARTE DESTA TESE FOI PUBLICADA OU ENCONTRA - SE SUBMETIDA , DE ACORDO
COM A DESCRIO ABAIXO :
1. C. L. de Vasconcelos, P. M. Bezerril, D. E. S. dos Santos, T. N. C. Dantas, M. R.

Pereira, J. L. C. Fonseca. Effect of molecular weight and ionic strength on the for-
mation of polyelectrolyte complexes based on poly(methacrylic acid) and chitosan.
Biomacromolecules 7, 1245 - 1252 (2006).
2. C. L. de Vasconcelos, P. M. Bezerril, T. N. C. Dantas, M. R. Pereira, J. L. C. Fonseca.

Adsorption of bovine serum albumin on template-polymerized chitosan/poly(methacrylic
acid) complexes. Langmuir (no prelo).
3
Agradecimentos
Dirijo o meu reconhecimento
Ao Prof. Jos Lus Cardozo Fonseca e Prof.a Mrcia Rodrigues Pereira pela orienta-
o, dedicao, compreenso e amizade que estiveram sempre presentes no decorrer deste
trabalho;
Aos meus pais que sempre me apoiaram, mesmo distncia;
minha esposa pelo apoio e conforto, sempre presentes;
Ao Cypriano Neto pela fora, amizade e prestao de servios que tem nos acompa-
nhado durante esses anos;
Aos companheiros de laboratrio que acompanharam nosso trabalho durante estes anos;
Aos funcionrios do Departamento de Qumica;
Prof.a Tereza Neuma de Castro Dantas pelo suporte dado a este trabalho;
Ao Instituto Multidisciplinar de Materiais Polimricos (IMMP), Ministrio da Cincia

e Tecnologia (MCT), ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico
(CNPq), Fundao Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CA-
PES), FINEP, ao CT-PETRO e Pr-Reitoria de Pesquisa da Universidade Federal do Rio
Grande do Norte (PROPESQ-UFRN) pelo suporte financeiro dado a este trabalho.
4
Resumo
Disperses formadas a partir de complexos polieletrolticos de quitosana e de poli(cido me-

tacrlico), PMAA, foram obtidas tanto pelo mtodo de gotejamento, como pelo mtodo de
polimerizao em molde. O efeito da massa molar do PMAA e da fora inica na forma-
o dos complexos de quitosana/poli(cido metacrlico), CS/PMAA, foi avaliado usando o
mtodo de gotejamento. O aumento da massa molar do PMAA inibiu a formao dos com-
plexos insolveis, enquanto o aumento da fora inica primeiramente favoreceu a formao
dos complexos, depois a inibiu, em altas concentraes de eletrlitos de baixa massa molar.
A complexao dos polieletrlitos foi fortemente dependente das dimenses macromolecu-
lares, tanto em termos da massa molar quanto do efeito de expanso/contrao dos novelos,
devido ao efeito polieletroltico. As partculas resultantes tanto do mtodo de gotejamento,
como da polimerizao em molde foram caracterizadas por apresentarem regies com di-
ferentes densidades de carga: a quitosana predominantemente presente na regio central e
o poli(cido metacrlico), na superfcie, sendo, portanto, as partculas carregadas negativa-
mente. A albumina foi adsorvida nos complexos de CS/PMAA obtidos por polimerizao
em molde (depois de sofrerem reticulao covalente usando glutaraldedo) e o pH foi con-
trolado a fim de se obter duas condies: (i) adsoro de albumina carregada positivamente
e (ii) adsoro de albumina em seu ponto isoeltrico. As isotermas de adsoro e as medi-
das de potencial zeta mostraram que a adsoro da albumina foi controlada por ligaes de
hidrognio/interaes de van der Waals e que as estruturas em forma de escova puderam
aumentar a adsoro da albumina nessas partculas.
Palavras-chave: quitosana, poli(cido metacrlico), complexo polieletroltico, massa molar,

fora inica, efeito polieletroltico, polimerizao em molde, adsoro.
5
Abstract
Dispersions composed of polyelectrolyte complexes based on chitosan and poly(methacrylic

acid), PMAA, were obtained by the dropping method and template polymerization. The ef-
fect of molecular weight of PMAA and ionic strength on the formation of chitosan/poly(meth-
acrylic acid), CS/PMAA, complexes was evaluated using the dropping method. The increase
in molecular weight of PMAA inhibited the formation of insoluble complexes, while the in-
crease in ionic strength first favored the formation of the complex followed by inhibiting it at
higher concentrations. The polyelectrolyte complexation was strongly dependent on macro-
molecular dimensions, both in terms of molecular weight and of coil expansion/contraction
driven by polyelectrolyte effect. The resultant particles from dropping method and template
polymerization were characterized as having regions with different charge densities: chi-
tosan predominating in the core and poly(methacrylic acid) at the surface, the particles be-
ing negatively charged, as a consequence. Albumin was adsorbed on template-polymerized
CS/PMAA complexes (after crosslinking with glutardialdehyde) and pH was controlled in
order to obtain two conditions: (i) adsorption of positively charged albumin, and (ii) adsorp-
tion of albumin at its isoelectric point. Adsorption isotherms and zeta potential measure-
ments showed that albumin adsorption was controlled by hydrogen bonding/van der Waals
interactions and that brush-like structures may enhance adsorption of albumin on these par-
ticles.
Key words: chitosan, poly(methacrylic acid), polyelectrolyte complex, molecular weight,

ionic strength, polyelectrolyte effect, template polymerization, adsorption.
6
Smbolos
KM coeficiente de equilbrio de adsoro;

Mv massa molar viscosimtrica mdia;
red viscosidade reduzida;
inh viscosidade inerente;
[] viscosidade intrnseca;
k constante de Huggins;
c concentrao;
IC fora inica;
Ci concentrao do on;
zi valncia do on;
potencial zeta;
E mobilidade eletrofortica;
viscosidade;
0 permissividade do vcuo;
r permissividade dieltrica relativa do meio;
dp dimetro mdio das partculas;
ms massa dos slidos;
Vs volume dos slidos;
Vp volume do picnmetro;
mw massa de gua;
Vw volume da gua;
7
s densidade dos slidos;
w densidade da gua;
VA volume de soluo de albumina;
C0 concentrao inicial;
mp massa de partculas;
CE concentrao de equilbrio;
densidade de adsoro;
turbidez;
max densidade de adsoro mxima;
energia de interao adsorbato-adsorbato;
s energia de interao adsorbato-superfcie;
8
Lista de Tabelas
4.1 Viscosidade intrnseca, [], e k para o PMAA obtido a partir de diferentes

razes de iniciador/MAA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
9
Lista de Figuras
2.1 Representao esquemtica da reao de polimerizao em molde tipo I. . . 32

2.2 Representao esquemtica da reao de polimerizao em molde tipo II. . 33
2.3 Os dois modelos da protena mostram uma vista lateral (lado esquerdo) e
uma vista evidenciada pela direo da seta do dmero protico. O tamanho
do monmero protico cerca de 9,0 x 5,5 x 5,5 nm. . . . . . . . . . . . . 35
2.4 Modelo que representa os trs domnios da albumina bovina srica. A seta
dupla indica a posio para a formao do dmero protico. A seta larga
simboliza o hipottico modo de adsoro side-on com uma rea de adsoro
9,0 x 5,5 nm2 . A seta estreita indica o modo de adsoro end-on com uma
rea de adsoro 5,5 x 5,5 nm2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
3.1 Estrutura qumica da quitosana (a) e do poli(cido metacrlico) (b). . . . . 39
4.1 Espectro de FTIR da quitosana (a), dos PECs obtidos pelo mtodo de polime-
rizao em molde [rCOOH/NH2 = 5, 6] (b), dos PECs obtidos pelo mtodo
de gotejamento [rCS / PMAA = 0, 25] (c) e do PMAA (d). . . . . . . . . . 49
4.2 Difratogramas de raios-X da quitosana, CS, do poli(cido metacrlico), PMAA,
e do complexo polieletroltico, PEC. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
4.3 Turbidez, (quadrados), e viscosidade, (crculos), das disperses de CS/PMAA
em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH usando LPMAA. . . . . . . . . 53
em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH usando HPMAA. . . . . . . . . 55
10
4.5 pH em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH para o LPMAA (quadrados)
e o HPMAA (crculos). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH usando HPMAA com CNaCl =
1, 00 104 M. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
1, 00 103 M. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
1, 00 102 M. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
4.9 Potencial zeta, , em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH para as part-
culas obtidas a partir do LPMAA (quadrados) e do HPMAA (crculos). . . 64
4.10 Potencial zeta, , das partculas de PECs em funo do pH. Crculos, rCOOH/NH2 =
5, 6. Quadrados, rCOOH/NH2 = 8, 3. Diamantes, rCOOH/NH2 = 11, 1. . . 66
4.11 Curva de isoterma de adsoro em pH 3,04 para a albumina adsorvida nos
complexos de CS/PMAA. rCOOH/NH2 = 5, 6. . . . . . . . . . . . . . . . 69
4.14 Esquema representado a superfcie das partculas e a estrutura em forma de
escova. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
4.15 Potencial zeta, , em pH 3,04 para a albumina adsorvida nos complexos de
CS/PMAA. rCOOH/NH2 = 5, 6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 74
CS/PMAA. rCOOH/NH2 = 5, 6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
11
4.17 Esquema representando uma possvel interao por meio de ligaes hidro-
gnio entre um grupo carbonila da albumina e um grupo carboxila de uma
partcula de PEC. Como resultado desta interao, o equilbrio deslocado
na direo da protonao dos grupos carboxlicos das partculas de PEC. . . 76
CS/PMAA. rCOOH/NH2 = 11, 1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
12
Sumrio
1 Introduo e objetivos 15
2 Complexos interpolimricos 20
2.1 Complexos polieletrolticos entre polmeros naturais . . . . . . . . . . . . 23
2.2 Complexos polieletrolticos entre polmeros sintticos e naturais . . . . . . 24
2.3 Partculas coloidais base de quitosana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
2.4 Propriedades mucoadesivas das partculas base de quitosana e dos polia-
crilatos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.5 Complexos interpolimricos obtidos a partir da polimerizao em molde . . 31
2.6 Adsoro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
3 Metodologia 38
3.1 Materiais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
3.2 Polimerizao em soluo aquosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
3.3 Preparao das partculas de CS/PMAA pelo mtodo de gotejamento . . . . 40
3.4 Preparao dos complexos de CS/PMAA via polimerizao em molde . . . 41
3.4.1 Reticulao covalente das partculas . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.5 Determinao do pH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.6 Caracterizao das partculas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.6.1 Viscometria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.6.2 Medidas de turbidez . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
3.6.3 FTIR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
13
3.6.4 Difratometria de raios-X . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
3.6.5 Medidas de potencial zeta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
3.7 Tamanho de partculas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
3.8 Densidade das partculas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
3.9 Experimentos de adsoro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
3.9.1 Isotermas de adsoro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
3.9.2 Anlise da carga superficial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
4 Resultados e discusso 47
4.1 Polimerizao do MAA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
4.2 FTIR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
4.3 Medidas de difrao de raios-X . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
4.4 Viscometria e turbidimetria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
4.4.1 Efeito da massa molar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
4.4.2 Efeito da fora inica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58
4.5 Medidas de potencial zeta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63
4.5.1 Potencial zeta das partculas de CS/PMAA obtidas pelo mtodo de
gotejamento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63
4.5.2 Potencial zeta das partculas no-reticuladas de CS/PMAA obtidas a
partir do mtodo de polimerizao em molde . . . . . . . . . . . . 65
4.6 Adsoro de albumina bovina srica nas partculas reticuladas obtidas a par-
tir do mtodo de polimerizao em molde . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67
4.6.1 Isotermas de adsoro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
4.6.2 Anlise da carga superficial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
5 Concluses 79
14
Captulo 1
Introduo e objetivos
Para definir um colide, deve-se considerar pelo menos dois aspectos do sistema: a estru-
tura do colide, ou seja, como os componentes do sistema esto interagindo entre si, e as
dimenses das unidades dispersas no sistema.1
Em solues homogneas, h uma mistura de espcies distintas que so misturadas ou
dispersas como molculas individuais (onde o tamanho molecular dos dois materiais so
comparveis entre si). Entretanto, entre materiais puros e solues molecularmente dispersas
encontram-se uma grande variedade de importantes sistemas nos quais uma fase dispersa
em uma segunda, mas em unidades que so muito maiores do que a unidade molecular, ou
nos quais o tamanho molecular do material disperso significativamente maior do que o do
solvente ou da fase contnua (uma soluo macromolecular ou polimrica). Tais sistemas
so, geralmente, definidos como colides, embora haja a limitao do tamanho da unidade
que compe a fase dispersa.
Em geral, um colide um sistema que consiste em uma substncia (a fase dispersa -
um slido, lquido ou gs) finamente dividido e distribudo uniformemente em uma segunda
substncia (a fase dispersora ou fase contnua - um slido, lquido ou gs).2 Exemplos mais
comuns de colides so o leite (lquido disperso como finas gotculas lipdicas em uma fase
aquosa), a fumaa (partculas slidas dispersas no ar), a nvoa (pequenas gotculas de lquido
dispersos no ar), as tintas (pequenas partculas slidas dispersas no lquido), a gelia (grandes
molculas proticas dispersas em gua) e o material sseo (pequenas partculas de fosfato de
15
clcio dispersos em uma matriz slida de colgeno).
Os diferentes tipos de sistemas dispersos so classificados dependendo da natureza da
fase dispersa e da fase contnua. Um slido ou lquido disperso em um gs denominado
aerosol, sendo a fumaa um exemplo comum de um sistema slido disperso em ar. Um
sistema lquido disperso em ar uma neblina. O leite uma emulso, no qual um lquido
disperso em um outro lquido. As tintas so sis ou disperses coloidais que consistem de
partculas slidas dispersas em um lquido.
Uma segunda classe de colides de particular importncia no contexto geral da qumica
de superfcie a dos colides de associao. Os colides de associao consistem de agre-
gados ou unidades de um nmero de molculas que se associam em um processo dinmico
e termodinamicamente dirigido, que leva a um sistema que pode ser simultaneamente uma
soluo molecular e um sistema coloidal. A formao de um colide de associao envolve
substncias especficas que dependem de vrios fatores tais como concentrao, tempera-
tura, composio do solvente e estrutura qumica especfica. Muitos sistemas biolgicos,
incluindo a formao da membrana celular e o fenmeno de transporte sanguneo, envolvem
vrias formas de estruturas coloidais associadas.
Alm dos colides compostos de componentes insolveis ou imiscveis, h os colides
lifilos que so, na realidade, solues; no entanto, as molculas de soluto (os polmeros)
so muito maiores do que as molculas de solvente. Os colides lifilos so um tanto nicos,
capazes de se expandirem para uma outra grande rea, a cincia dos polmeros. O estudo das
interaes entre polieletrlitos em soluo, e a posterior formao de disperses coloidais
a partir da complexao desses polieletrlitos sero abrangidos durante todo o curso deste
trabalho.
Um considervel nmero de fatores relacionados aos aspectos estruturais dos polmeros
e aos parmetros ambientais tem sido determinante na formao dos complexos polieletrol-
ticos. A respeito do efeito das dimenses moleculares dos polieletrlitos, Bechern-Marn
et al.3 investigaram a estequiometria e o grau de complexao dos produtos de reao entre a
quitosana e o alginato. Eles observaram que no houve dependncia da composio qumica

do alginato e da massa molar da quitosana na formao dos complexos. Janes e Alonso4
16
desenvolveram um sistema nanoparticulado de quitosana a partir do processo de gelatinao
ionotrpica com tripolifosfato de sdio (TPP) e encontraram que a massa molar da quitosana
foi um fator determinante para algumas propriedades fsico-qumicas das disperses, tais
como o tamanho das nanopartculas e o seu potencial zeta, . Usando um mtodo similar
com TPP, Ko et al.5 tambm reportaram que a massa molar da quitosana afetou o tamanho
microparticular e a morfologia de superfcie. Eles atestaram que maiores massas molares de
quitosana estavam correlacionadas a micropartculas mais esfricas, com tamanho particular
na faixa de 500 a 700 m.
A influncia da fora inica da fase dispersora tambm tem sido analisada para diferen-
tes sistemas de polieletrlitos, de modo a correlacionar a presena de sais de baixa massa
molar formao de complexos macromoleculares de polieletrlitos.6, 7 A importncia des-
ses estudos reside na caracterizao dos processos de agregao em suspenses de partculas
coloidais carregadas, na presena de polieletrlitos opostamente carregados, assim como no
efeito de dissociao nos complexos de polieletrlitos e/ou complexos de polieletrlitos e
surfactantes, em uma faixa crtica de fora inica e/ou valncia inica dos sais.810
Entre esses complexos, a combinao de quitosana (um polieletrlito catinico muco-
adesivo) e poli(cido metacrlico) com macromolculas naturais e sintticas tem recebido
considervel ateno.11 Os complexos polieletrolticos de quitosana-poli(cido acrlico) j
tm sido preparados em sistemas aquosos,10, 12, 13 embora no tenha havido relatos a respeito
dos efeitos da fora inica e da massa molar do polinion derivado dos poliacrilatos. Nos
sistemas polieletrolticos obtidos com quitosana, esses poliacrilatos estariam presentes nas
regies mais externas das partculas, enquanto a quitosana estaria presente nas regies mais
centrais das mesmas partculas. Neste trabalho, um primeiro enfoque foi dado aos comple-
xos polieletrolticos obtidos a partir dos polieletrlitos pr-formados (polieletrlitos estes que
comportam grupos inicos fracos). Sendo assim, complexos polieletrolticos foram obtidos
a partir da mistura de quitosana e poli(cido metacrlico) em razes no-estequiomtricas,
em soluo aquosa na ausncia de sais e em solues aquosas de sal de baixa massa molar.
O comportamento dos complexos resultantes e a faixa de razo de mistura foram estudados
empregando medidas de viscosidade e de turbidez, e anlise de carga superficial. A espec-
17
troscopia na regio do infravermelho foi usada para caracterizar quimicamente os complexos
obtidos.
Usando um outro mtodo, um complexo polieletroltico mucoadesivo foi obtido a par-
tir da reao de complexao entre polieletrlitos biocompatveis opostamente carregados,
usando diferentes razes estequiomtricas entre as unidades aminoglicosdicas de quitosana
e as unidades monomricas de cido metacrlico em soluo aquosa. Neste enfoque, a quito-
sana e o cido metacrlico foram usados em um processo reacional baseado na polimerizao
em molde, no qual a quitosana foi usada como molde para a polimerizao do monmero
de cido metacrlico, ambos solubilizados em soluo aquosa com a inteno de se obter
complexos polieletrolticos.
Esses sistemas polimricos biocompatveis obtidos a partir da polimerizao em molde
tm sido freqentemente usados para a incorporao e/ou encapsulao de frmacos. En-
tretanto, quando as macromolculas foram usadas como adsorventes, a adsoro dessas
macromolculas ocorreu principalmente em superfcies inorgnicas.1417 Devido a isso, o
campo de adsoro de macromolculas que apresentam atividade protica e/ou enzimtica
usando complexos polieletrolticos como substrato, tem chamado a ateno mais recente-
mente. A respeito da adsoro macromolecular, a adsoro protica um processo com-
plexo que envolve interaes de van der Waals, interaes hidrofbicas e eletrostticas e
ligaes de hidrognio, e dependente das caractersticas qumicas e fsicas da superfcie do
substrato. Ao examinar esses processos, muitas tcnicas tais como microbalana de cristal
de quartzo (QCM), sistema de impedncia eletroqumica,18 elipsometria e ATR-FTIR,19, 20
microscopia de fora atmica (AFM)21 e microscopia de fluorescncia de refleco interna

total (TIRFM)22 tm sido recentemente usadas para a anlise da adsoro protica e mudan-
as conformacionais em diversos colides. Outras importantes tcnicas, tais como potencial
zeta e monitoramento por UV-vis,23 tambm tm sido usadas para obteno de informa-
o direta a respeito dos modos de adsoro e mudanas da carga superficial em colides e
interfaces proticas.
Portanto, uma segunda parte deste trabalho envolveu a elucidao da natureza do pro-
cesso de adsoro em termos das interaes eletrostticas, hidrofbicas e ligaes de hidro-
18
gnio entre a albumina bovina srica e a superfcie dos complexos de quitosana/poli(cido
metacrlico), obtidos por meio de polimerizao em molde, em diferentes valores de pH. As
quantidades de albumina adsorvidas foram monitoradas por espectroscopia na regio do UV-
vis e o monitoramento da carga superficial das partculas depois do processo de adsoro foi
acompanhado por meio de medidas de mobilidade eletrofortica.
O captulo 2 aborda, de um modo geral, alguns dos aspectos tericos relacionados aos
complexos polieletrolticos, envolvendo tanto os polmeros naturais, como os sintticos, as-
sim como as propriedades mucoadesivas dos complexos base de quitosana e poliacrilatos,
que so responsveis pelo crescente uso destes polmeros nos ltimos anos. Um mtodo de
polimerizao cada vez mais utilizado na obteno de tais complexos, o mtodo de poli-
merizao em molde, tambm abordado neste captulo, alm da descrio do processo de
adsoro em superfcie slida. O captulo 3 trata da metodologia experimental empregada.
No captulo 4, os resultados obtidos so apresentados e discutidos, e no ltimo captulo,
tm-se as concluses finais do trabalho.
19
Captulo 2
Complexos interpolimricos
Os complexos interpolimricos so formados a partir da associao de duas ou mais macro-

molculas naturais ou sintticas. Estes complexos podem ser separados em grupos distintos,
dependendo do tipo de interao dominante:
1. Estereocomplexos formados por foras de van der Waals;
2. Complexos polieletrolticos, que so o resultado da reticulao inica entre dois poli-

eletrlitos oposta e altamente carregados;
3. Complexos formados por ligaes de hidrognio;
4. Complexos de coordenao.
Portanto, os complexos macromoleculares de diferentes polmeros, neutros ou eletrostatica-

mente carregados, podem estar associados atravs de interaes intermoleculares, tais como
ligaes de hidrognio, foras de Coulomb, foras de van der Waals e foras de transfern-
cia. Biofunes24 tais como informao gentica e reaes antgeno-anticorpo, so baseadas
principalmente na complexao de biopolmeros tais como protenas, polissacardeos e ci-

dos nuclicos.
Entre todos os mtodos de desenvolvimento de disperses polimricas para a biomedi-
cina, o emprego dos complexos de polieletrlitos tem se tornado cada vez mais atrativo,
20
principalmente devido simplicidade envolvida no processo de preparao.25 Os complexos
polieletrolticos so preparados a partir da complexao de polieletrlitos que apresentam
grupos ionizveis de um nico tipo de carga, um aninico e outro catinico. Os complexos
polieletrolticos so estruturas em rede que no apresentam nem cristalinidade nem mesmo
uma estrutura de neutralizao intercadeias de cargas inicas organizadas. Possivelmente,
as interaes eletrostticas entre os polions carregados opostamente so difusas e ocorrem
aleatoriamente entre grupos de stios inicos de sinais opostos. Essas reticulaes inicas
so estabelecidas por foras intermoleculares, mas a presena de interaes hidrofbicas no
pode ser ignorada, como uma importante fonte de estabilidade. Uma variedade de complexos
polieletrolticos pode ser obtida, tanto pela mudana da estrutura qumica dos componentes
polimricos, tais como massa molar, flexibilidade, estrutura qumica do grupo funcional,
densidade de carga, balano hidroflico/hidrofbico e compatibilidade, como pelas condi-
es de reao: pH, fora inica, concentrao, razo de mistura e temperatura. Os prin-
cipais campos de aplicao dos complexos polieletrolticos so: membranas para diferentes
usos,2628 revestimentos de filmes e fibras,29 implantes para uso mdico,30 microcpsulas,31
ligao de biomolculas,32 produo de fragmentos de anticorpos33 e isolamento de cidos
nuclicos.34
Os complexos macromoleculares e a formao dos sistemas particulados a partir destes
complexos, com dimenses micromtricas e submicromtricas, geralmente na forma de co-
lides ou suspenses, obtidos por polimerizao, agregao e/ou complexao de polmeros,
tm sido reportados como promissores materiais funcionais.35 Essas disperses polimri-
cas tm sido usadas em uma grande variedade de aplicaes, tais como na preparao de
borracha sinttica,36 revestimentos,37 adesivos para papel e txtil,38, 39 floculantes40, 41 e mo-
dificadores reolgicos.42 Eles tambm tm sido muito usados em aplicaes biomdicas e
farmacuticas, tais como em testes diagnsticos e liberao de frmacos.4345
Em se tratando da biomedicina, tm-se empregado polmeros naturais e sintticos que
sejam biocompatveis, biodegradveis, capazes de se ligar com protenas, genes, cidos nu-
clicos, lipdeos, e ainda que tenham a capacidade de aumentar a absoro e a adeso s
mucosas sem desencadear toxicidade.46 De modo a us-los na incorporao de macromol-
21
culas bioativas e vacinas, tais como anticorpos monoclonais, plasmdeos, antgenos, oligo-
nucleotdeos, enzimas, protenas recombinantes e peptdeos para aplicaes teraputicas, o
desenvolvimento e/ou preparao desses sistemas deve ser monitorado em termos da mor-
fologia das partculas, da distribuio de tamanho, da superfcie qumica e da natureza do
polmero empregado.47
As interaes entre as cadeias longas de polieletrlito e macroestruturas opostamente
carregadas, tais como micelas, dendrmeros, protenas globulares e macroons,48, 49 so de
grande interesse para muitos processos industriais, como o tratamento de guas usando agen-
tes floculantes formados por misturas de compostos insolveis em gua, o processamento de
ps como agentes de disperso, ou na tecnologia de alimentos como modificadores reolgi-
cos. Muitas biomacromolculas, tais como o DNA, so tambm polieletrlitos, e a formao
de complexos com protenas ou membranas, por exemplo, possui papel crtico nos proces-
sos de regulao biolgica com aplicaes em sistemas de liberao teraputica. A fim de
compreender os fatores que controlam a complexao entre essas macroestruturas e as ma-
cromolculas opostamente carregadas, deve-se considerar a distino entre os polieletrlitos
fortes e fracos, uma vez que a adsoro de polieletrlitos fracos em superfcies um processo
mais complicado devido ao fato da sua densidade de carga ser fortemente influenciada pela
conectividade das cargas ao longo da cadeia, pelo pH da soluo, pela concentrao inica
da soluo e pela presena de uma superfcie opostamente carregada.50 Cooper et al.51 en-
contraram que a afinidade de ligao de polieletrlitos aninicos por albumina bovina srica
ou por uma micela opostamente carregada foi fortemente influenciada por trs parmetros
estruturais dos polieletrlitos: a flexibilidade da cadeia, a mobilidade de carga e a densidade
de carga. Alm disso, deve-se notar que outros efeitos parecem dificultar a ligao entre os
polieletrlitos e as protenas. Entre eles, pode-se destacar a rigidez da cadeia, que dificulta
essa ligao em relao sua cadeia mais flexvel, e a heterogeneidade de cargas que, alm
de introduzir foras repulsivas entre polinions e domnios negativos da protena, tambm
altera a natureza do stio de ligao do polinion.52
22
2.1 Complexos polieletrolticos entre polmeros naturais
A quitosana tem sido ao longo de mais de uma dcada um polieletrlito extensivamente

usado na obteno de complexos polieletrolticos. A quitosana (poli- (1 4)-2-amino-
2-desoxi-D -glicopiranose) um polissacardeo natural derivado da N-desacetilao alcalina
parcial da quitina (poli- (1 4)-2-acetamido-2-desoxi-D -glicopiranose), um abundante
mucopolissacardeo presente no exoesqueleto de crustceos, tais como lagosta, camaro,
caranguejo, que apresenta caractersticas estruturais anlogas s glicosaminoglicanas, que
consiste em copolmeros de glicosamina e N-acetilglicosamina. Devido possibilidade de
se obter quitosana purificada em larga escala, junto sua habilidade de ser usada em diver-
sas formas, como ps, solues, gis, filmes, fibras, prolas e membranas, a quitosana tem
sido usada em muitas aplicaes comerciais.53 Nesta ltima dcada, a quitosana tem sido
o biopolmero mais reconhecido como um promissor biomaterial para aplicaes biomdi-
cas. A esse respeito, tem sido mostrado sua aplicabilidade como material de revestimento
de ferimentos, dispositivo hemosttico, sistema de carreamento e liberao de genes/DNA
e engenharia de tecidos. As propriedades fsico-qumicas da quitosana exploradas para pro-
psitos biolgicos so hidrofilicidade, carga eletrosttica positiva, capacidade de se reticular
e dessolvatar. Alm disso, deve-se ressaltar suas conhecidas propriedades biolgicas, tais
como biodegradabilidade, biocompatibilidade, baixa toxicidade, capacidade de se aderir a
superfcies mucosas e a possibilidade de se ligar a protenas, enzimas, genes, cidos nucli-
cos e lipdeos cidos.
Dentre as vrias macromolculas naturais usadas no processo de complexao macromo-
lecular como polinions naturais junto quitosana, temos a carboximetilcelulose,54 o cido
algnico,55 o sulfato de dextrana,56 a heparina,57 a carragenana,58 a pectina59 e a xantana.60
As interaes macromoleculares entre protenas carregadas negativamente e positivamente
tm sido reportadas como responsveis pelo aumento em algumas propriedades funcionais,
incluindo a formao de espuma61 e o fenmeno de agregao ou gelatinizao.62 As intera-
es e a quantidade de precipitao variam dependendo da concentrao de cada protena na
mistura, da fora inica e do pH da soluo. Quando a protena da soja foi misturada ao algi-
23
nato de sdio, os dois polmeros interagiram para formar complexos eletrostticos.63 Essas
interaes melhoraram a solubilidade e a atividade de emulsificao. A xantana e a quito-
sana foram usadas em uma reao de complexao, a fim de se determinar o rendimento da
reao, a estrutura dos complexos e a molhabilidade. A proporo de quitosana no hidrogel
dependeu do grau de desacetilao da quitosana e da razo de quitosana e xantana usada na
reao de complexao.
2.2 Complexos polieletrolticos entre polmeros sintticos e
naturais
A formao de complexos polimricos de protenas com polieletrlitos sintticos tem a fina-

lidade de simular as interaes intermoleculares durante a formao dos sistemas biolgicos.
A formao de complexos entre protenas e polieletrlitos sintticos pode ser evidenciada por
separao de fase, como um coacervado complexo ou um precipitado slido. Isso pode ser
observado em sistemas formados por lisozima e poli(cido acrlico),64 lisozima e poli(cido
metacrlico),65 DNA e poli(etilenoimina).66 As interaes entre protenas e polieletrlitos
sintticos podem ser investigadas por turbidez e tcnicas de espalhamento de luz. Park et
al.67 estudaram a interao entre o poli(cloreto de dimetildialilamnio) e ribonuclease, al-
bumina bovina srica e lisozima. O poliction se ligava, preferencialmente, s protenas de
baixo ponto isoeltrico, o que levou a uma seletividade na etapa de coacervao. A formao
de complexos polieletrolticos entre quitosana e poli(cido acrlico) j foi reportada.68 As
interaes eletrostticas polmero/polmero geraram complexos poliinicos com diferentes
estruturas porosas.
2.3 Partculas coloidais base de quitosana
H uma variedade de veculos coloidais base de quitosana que tem sido descrita para a
associao e liberao de macromolculas. A natureza catinica da quitosana tem sido con-
venientemente explorada para o desenvolvimento de sistemas particulados de liberao de
24
molculas bioativas. Alm de sua capacidade de complexao com polmeros carregados ne-
gativamente, uma outra interessante propriedade da quitosana sua habilidade de gelatinizar
em contato com polinions especficos. Esse processo de gelatinizao se deve formao
de reticulao inter- e intramolecular mediada por esses polinions. Nanopartculas de qui-
tosana j foram obtidas pelo mtodo de gelatinizao ionotrpica.69 Esta tcnica envolve
a adio, temperatura ambiente, de uma fase alcalina (pH 7 - 9) contendo tripolifosfato
(TPP) em uma fase cida (pH 4 - 6) contendo quitosana. As nanopartculas so formadas
imediatamente aps a mistura das duas fases atravs de ligaes inter- e intramoleculares
formadas entre os fosfatos do TPP e os grupos amino da quitosana. A formao de nanopar-
tculas de quitosana-TPP de alto rendimento com tamanho nanomtrico e densidade de carga
predeterminados pode ser simplesmente manipulada e controlada variando-se as condies
de processo como concentrao de quitosana, razo em massa de quitosana e TPP e o pH da
soluo.
As nanopartculas tambm podem ser obtidas de uma combinao de quitosana com ou-
tros polmeros e macromolculas hidroflicas. A introduo de um segundo ingrediente na
formulao do sistema aumenta sua versatilidade em termos da associao e liberao de
protenas e sua susceptibilidade para interagir com superfcies biolgicas. Interessantes pro-
priedades foram observadas com nanopartculas de quitosana revestidas por um copolmero
em bloco de xido de etileno e xido de propileno (PEO-PPO).70 O tamanho e o potencial
zeta dessas nanopartculas puderam ser convenientemente modulados variando-se a razo

quitosana:PEO-PPO. O grande tamanho das partculas e os baixos valores de potencial zeta
foram indicativos de que esse copolmero se tornou integrado estrutura das nanopartculas,
formando uma rede de quitosana/PEO-PPO por meio de ligaes de hidrognio intermo-
leculares entre o oxignio eletronegativo do politer e os hidrognios do grupo amino da
quitosana.71
Uma outra forma de modificar a superfcie das nanopartculas de quitosana tem sido
a formao de um revestimento de poli(etileno glicol) (PEG) ligado covalentemente su-
perfcie das nanopartculas.72 Essa ligao foi mediada por uma reao com carbodiimida,
levando formao de ligaes de amida covalentes entre os grupos amino livres das nano-
25
partculas e o grupo metoxi do PEG. Esse revestimento de PEG foi responsvel por diminuir
significativamente a carga superficial positiva das partculas, melhorando notadamente sua
biocompatibilidade. Devido s condies particularmente brandas necessrias para sua for-
mao, essas nanopartculas de quitosana parecem ser sistemas muito promissores para a
associao e liberao de macromolculas sensveis. Protenas, tais como albumina bovina
srica,73 toxide tetnico,74 toxide da difteria46 e fibrinognio75 so exemplos de macro-
molculas que tm sido eficientemente associadas a essas nanopartculas.
Os estudos de associao de protenas realizados a diferentes valores de pH indicaram
que, para uma determinada protena, uma maior eficincia na associao obtida quando a
protena dissolvida em um pH abaixo de seu ponto isoeltrico, de modo que a macromol-
cula seja predominantemente eletronegativa.71 Essa observao sugere que o mecanismo de
associao das protenas quitosana , ao menos parcialmente, mediado por uma interao
inica entre as duas macromolculas. Esse mecanismo tambm suportado pela neutrali-
zao da carga superficial da nanopartcula observada devido associao de quantidades
crescentes de protena. Em outro trabalho,73 foi observado que a encapsulao de albumina
pelas nanopartculas de quitosana foi diminuda com a adio de poli(etileno glicol) solu-
o de quitosana. Neste caso, ligaes de hidrognio intermoleculares puderam ser formadas
entre o tomo de oxignio eletronegativo do poli(etileno glicol) e os grupos amino da qui-
tosana, competindo com os grupos cidos da albumina, de modo que o emaranhamento das
cadeias de poli(etileno glicol) com as molculas de quitosana obstruiu a encapsulao da
albumina pelas nanopartculas.
A capacidade de interagir eletrostaticamente com macromolculas de carga oposta j
tem sido usada com grandes vantagens para a formao de complexos. Entretanto, no caso
das nanopartculas de quitosana ionicamente reticuladas com TPP, sabe-se que h outros
mecanismos envolvidos na associao com protenas. Esses mecanismos incluem no apenas
interaes hidrofbicas, ligaes de hidrognio, e outras foras fsico-qumicas de natureza
especfica protena associada, mas tambm o mecanismo fsico de incorporao causado
pelo processo de gelatinizao da quitosana na forma nanoparticulada. Esses mecanismos
permitiram justificar a significante quantidade de insulina incorporada s nanopartculas de
26
quitosana, mesmo em um pH no qual a insulina apresentava-se carregada positivamente.76
Outros compostos macromoleculares, tais como oligonucleotdeos, tambm podem ser
associados s nanocpsulas de quitosana muito eficientemente.77 Estudos recentes tm mos-
trado que essas macromolculas so capazes de formar complexos inicos com as cadeias
polimricas catinicas da quitosana.
A sntese de partculas de quitosana a partir do uso de agentes de dessolvatao tambm
j tem sido reportada na literatura. Berthold et al.78 primeiramente propuseram o uso de sul-
fato de sdio como agente de precipitao para formar partculas de quitosana. A adio por
gotejamento de sulfato de sdio em uma soluo de quitosana e polisorbato 80 (usado como
um estabilizante para a suspenso) sob agitao e ultrassonicao dessolvatou a quitosana na
forma particulada. A extenso da precipitao foi controlada pela concentrao de sulfato
de sdio e, portanto, a quantidade de sulfato de sdio necessria para a preparao das mi-
croesferas dependeu da massa molar da quitosana. Devido carga positiva da superfcie das
partculas, estas so capazes de adsorver quantidades significativas de molculas bioativas
hidroflicas e aninicas superfcie.79
A auto-montagem de quitosana modificada quimicamente em nanopartculas tem sido in-
vestigada para a liberao de macromolculas. A conjugao fracionada de PEG quitosana
foi capaz de formar auto-agregados em pH bsico, devido s ligaes de hidrognio inter-
moleculares em soluo aquosa.80 Esses agregados podem se associar a pequenas molculas
hidrofbicas, cuja liberao pode ocorrer a partir de uma mudana de pH para condies
cidas.
Nanopartculas de quitosana tm sido cada vez mais obtidas a partir de um processo de
auto-agregao, por meio de interaes eletrostticas entre materiais lipdicos carregados
negativamente e a quitosana carregada positivamente. Sonvico et al.81 apresentaram um
sistema nanoparticulado, formado por uma estrutura auto-organizada resultante da interao
eletrosttica entre a quitosana e a lecitina, devido presena de componentes carregados
negativamente na mistura lipdica. Outras nanopartculas de quitosana estruturalmente auto-
organizadas, base de cido colnico82 e cido linolico83 j tm sido descritas na literatura
como sendo potencialmente eficazes no carreamento de peptdeos usados no tratamento de
27
tumores. Os efeitos de conjugao da quitosana com cido deoxiclico tambm tm sido
investigados no sentido de desenvolver um novo carreador para liberao de DNA.84 Estes
compostos capazes de se auto-agregarem, podem formar complexos quando misturados com
plasmdeos de DNA atravs de interaes eletrostticas. As caractersticas desses complexos
variaram de acordo com a razo de carga, o pH do meio e o tempo de incubao.
2.4 Propriedades mucoadesivas das partculas base de
quitosana e dos poliacrilatos
As propriedades mucoadesivas da quitosana foram primeiramente reportadas na literatura

por Lehr et al.,85 que mostraram que a quitosana, em seu estado intumescido, apresentava
apreciveis propriedades mucoadesivas. Esses autores tambm mostraram que a quitosana
apresentava intumescimento mnimo em fluido intestinal artificial, explicado por sua baixa
solubilidade em meio neutro ou levemente alcalino, que poderia ser melhorado pela substi-
tuio de seus grupamentos amino livres por curtas cadeias alquila, a fim de aumentar sua
molhabilidade e possivelmente sua adeso s mucosas. A respeito desse aspecto especial
de mucoadesividade da quitosana, tem sido mostrado que este polmero mucoadesivo pode
ser til para liberao de peptdeos e outras macromolculas hidroflicas. A ineficincia oral
destas macromolculas se deve restrio determinada pelas barreiras epiteliais do trato gas-
trointestinal e pela degradao gastrointestinal a partir da atividade metablica de enzimas
luminais e enzimas presentes nas microvilosidades intestinais. Sendo assim, deve-se citar as
barreiras morfolgicas e fisiolgicas contra a liberao de macromolculas hidroflicas, tais
como as enzimas proteolticas presentes no lmen intestinal (pepsina, tripsina, quimotrip-
sina) e nas membranas das microvilosidades intestinais (endopeptidases), a camada mucosa,
a flora intestinal bacteriana e o prprio revestimento das clulas epiteliais. Esses fatores tm
estimulado a explorao de sistemas carreadores coloidais baseados em materiais polim-
ricos sintticos ou naturais para administrao oral de macromolculas hidroflicas, permi-
28
tindo a proteo contra a degradao digestiva e a absoro no organismo, a partir da reduo
da atividade proteoltica das peptidases e proteases ligadas membrana e ao lmen, assim
como do afastamento das junes intercelulares intestinais.
A fim de melhorar o transporte atravs da mucosa, a permeabilidade intestinal e a absor-
o de macromolculas hidroflicas e polares, tais como peptdeos, protenas e polissacar-
deos, atravs do epitlio intestinal, diversos polmeros naturais e sintticos com propriedades
mucoadesivas e de ligao tm sido usados. As propriedades mucoadesivas de polmeros,
tais como o poli(cido acrlico), so necessrias para a interao com o gel mucoso secre-
tado pelas clulas de clice epiteliais. A biomacromolcula responsvel por essa fixao
mucosa uma glicoprotena de alta massa molar.86 A quitosana um polmero biocompat-
vel que, quando protonado (pH < 6, 5), capaz de aumentar a permeabilidade intestinal de
macromolculas e partculas atravs dos espaos paracelulares, selados pelas junes inter-
celulares. Uma vez que a quitosana uma base fraca, torna-se necessrio um meio cido (pH
1 - 6) para transformar as unidades de glicosamina em unidades carregadas positivamente.
Portanto, molculas protonadas derivadas da quitosana, solveis em solues aquosas, tm
sido avaliadas para sobrepor a limitada solubilidade da quitosana e a sua ineficincia como
aumentadoras de absoro a valores de pH neutro tais como aqueles encontrados no trato in-
testinal, e somente essas molculas em sua configurao estendida podem iniciar a abertura
das junes intercelulares e, conseqentemente, o transporte de macromolculas hidroflicas.
As junes intercelulares so responsveis pela integridade da barreira epitelial intesti-
nal. A identificao de diversos componentes proticos, intimamente associados s junes
intercelulares, tais como ocludina, claudina e molculas de adeso juncional (JAM), tem
contribudo para a elucidao da funcionalidade do complexo juncional.87 O rompimento
das interaes intercelulares na membrana basolateral entre essas molculas diretamente
envolvidas na estrutura da juno intercelular seria o provvel caminho para aumentar a
permeabilidade paracelular.88 As interaes dos componentes do complexo juncional e as
macromolculas fixadas mucosa provocam o aumento do transporte paracelular de ma-
cromolculas a partir da ligao de polmeros ao epitlio mucoso mediado pela carga ou
pela reduo da concentrao de Ca2+ . Alm do mais, a inativao de enzimas proteolticas
29
intestinais tambm contribuem para os efeitos que promovem a absoro.
As propriedades mucoadesivas dos derivados da quitosana e do poli(cido acrlico) tm
sido estudadas em um modelo in vitro derivado de uma linha de clulas de carcinoma de
clon humano, a fim de mediar seus efeitos nas junes intercelulares epiteliais in vitro,
permitindo o transporte paracelular intestinal. Quando ionizados, ambos os polieletrlitos
apresentam propriedades biolgicas intrnsecas. A quitosana capaz de aumentar a per-
meabilidade intestinal de macromolculas e partculas atravs de espaos intercelulares.89
Junginger et al.90 mostraram que o glutamato de quitosana e o carbomer foram capazes de

influenciar a permeabilidade das monocamadas de clulas epiteliais in vitro principalmente
atravs de seus efeitos sobre a resistncia eltrica transepitelial, uma medida da integridade
da camada celular. Diferentes mecanismos so considerados para estes polmeros: a intera-
o entre as molculas polimricas carregadas positivamente e a membrana celular carregada
negativamente o mecanismo mais considerado para a quitosana, resultando em uma reor-
ganizao estrutural das protenas associadas s junes intercelulares. A depleo da con-
centrao de Ca2+ extracelular livre pelos poliacrilatos considerado ser o mecanismo mais
efetivo na abertura das junes permitindo o aumento da permeabilidade paracelular. Alm
disso, um importante aspecto dos poliacrilatos que eles so capazes de inibir a atividade
proteoltica das endopeptidases luminais, tripsina e quimotripsina, e das exopeptidases,
carboxipeptidase A e aminopeptidase citoslica, pela depleo de cofatores essenciais, Ca2+
(nas endopeptidases) e Zn2+ (nas exopeptidases), a partir da estrutura da enzima, resultando
em um aumento da autodegradao da tripsina.91 Um mecanismo similar tem sido notado
para uma outra endopeptidase, a carboxipeptidase B que tambm pode ser inibida pela deple-
o de Zn2+ do seu stio ativo. A depleo de Ca2+ extracelular pelos poliacrilatos tambm
influencia a integridade da juno epitelial.90 A diminuio na concentrao de Ca2+ extra-
celular acarreta alteraes morfolgicas na expresso da F-actina, assim como na localizao
das protenas juncionais funcionais, tambm resultando no aumento da permeabilidade pa-
racelular.90, 92
30
2.5 Complexos interpolimricos obtidos a partir da poli-
merizao em molde
A polimerizao em molde93, 94 foi desenvolvida baseada em processos biolgicos como a

replicao do DNA ou a biosntese das protenas. Neste tipo de reao, a propagao do
polmero em crescimento ocorre ao longo de uma macromolcula linear pr-formada, que
foi adicionada previamente ao sistema reacional. A polimerizao em molde ocorre atravs
de interaes cooperativas (interaes hidrofbicas, ligaes de hidrognio e foras eletros-
tticas) entre os grupos complementares de molculas de monmeros e o molde, formando
um complexo polieletroltico. Interaes de van der Waals no-especficas em combinao
com interaes estereoqumicas do polmero em formao com o molde, tambm pode levar
polimerizao em molde. De modo geral, forma-se um gel interpolimrico compacto ou
um precipitado de complexo polimrico agregado. A presena de um molde normalmente
afeta vrias caractersticas da polimerizao, tais como a cintica, a massa molar e a micro-
estrutura do polmero formado.
O mecanismo de polimerizao em molde depende do grau de adsoro ou complexao
do monmero (M) pelo molde:
M + -T- -T(M)-,
onde -T- significa um stio do molde. A constante de equilbrio de adsoro, KM , depende

de alguns fatores tais como o modo de interao, a temperatura e o solvente. Dois casos
extremos podem ser discutidos: KM = e KM = 0. Quando KM se aproxima do (tipo I),
o monmero est completamente adsorvido por todos os stios do molde por foras eletros-
tticas ou ligaes de hidrognio. Uma forte preferncia do molde pelo monmero indica
que o molde pode ser insolvel no solvente na ausncia do monmero. Se o molde solvel
em um solvente apropriado, ento o solvente pode competir com o monmero pelos stios T,
reduzindo KM . Deste modo, apenas variando o solvente (ou a temperatura), pode-se ajustar
o KM e, portanto, o modo de propagao do molde. Quando KM se torna muito pequeno,
a propagao no molde se procede s custas da reao com o monmero adsorvido adja-
31
Figura 2.1: Representao esquemtica da reao de polimerizao em molde tipo I.
centemente. Quando KM = 0 (tipo II), as macromolculas do molde esto completamente

solvatadas pelo solvente. Um pr-requisito para a propagao em molde sob esta condio
que o oligmero formado na soluo (ou seja, a polimerizao se inicia fora do molde) se
complexe com o molde, depois de atingido um tamanho crtico. A partir da, a propagao
procede ao longo do molde pela adio de molculas de monmero advindos da soluo,
presente na vizinhana do molde. Esses dois tipos de reaes podem ser ilustrados pelos
esquemas apresentados nas Figuras 2.1 e 2.2.
O principal objetivo na tcnica de polimerizao em molde tem sido o desenvolvimento
de carreadores polimricos mucoadesivos de biomolculas.95, 96 Cho et al.9799 prepara-
ram polmeros mucoadesivos por polimerizao em molde de cido acrlico na presena
de diferentes moldes tais como o poli(etileno glicol), a sericina da seda e a quitosana.
Quando a quitosana foi usada como uma matriz,97 o complexo polimrico de poli(cido
acrlico)/quitosana exibiu forte fora adesiva e limitada solubilidade aquosa. Resultados de
FTIR e DMTA mostraram que este complexo polimrico foi formado por ligaes de hidro-
gnio.
32
Figura 2.2: Representao esquemtica da reao de polimerizao em molde tipo II.
2.6 Adsoro
As molculas e os tomos podem se ligar de duas maneiras a uma superfcie slida. Na ad-
soro fsica h uma interao de van der Waals (interao de disperso ou interao dipolo-
dipolo, por exemplo) entre o adsorvato e o adsorvente. As interaes de van der Waals so
de longo alcance, mas fracas, e a energia liberada quando uma partcula adsorvida fisica-
mente da mesma ordem de grandeza que a entalpia de condensao. Esta energia pode
ser absorvida como vibraes da rede do adsorvente e dissipada como movimento trmico.
Uma molcula que se desloque sobre a superfcie perde gradualmente energia e termina por
ser adsorvida; esse processo a acomodao. A entalpia da adsoro fsica pode ser medida
pela determinao da elevao da temperatura de uma amostra cuja capacidade calorfica
seja conhecida. Esta pequena variao de entalpia insuficiente para romper as ligaes qu-
micas, e por isso uma molcula fisicamente adsorvida retm a sua identidade, embora possa
ser deformada pela presena dos campos de fora da superfcie.
Na adsoro qumica, as molculas (ou tomos) unem-se superfcie do adsorvente por
ligaes qumicas e tendem a se acomodar em stios que propiciem o nmero de coordenao
mximo com o substrato. A distncia entre a superfcie do adsorvente e o tomo mais pr-
33
ximo do adsorvato menor na adsoro qumica do que na adsoro fsica. Uma molcula
quimicamente adsorvida pode ser decomposta em virtude de foras de valncia dos tomos
da superfcie e a existncia de fragmentos moleculares adsorvidos que responde, em parte,
pelo efeito catalticos de superfcies slidas.
Um modelo til para uma isoterma de adsoro simples deve levar em considerao to-
dos os fenmenos envolvidos no processo, incluindo o processo de adsoro monomolecular
inicial, adsoro em multicamadas, se presentes, e fenmenos tais como quimissoro e
condensao capilar. Em uma dada situao, alguns ou todos esses fatores podem ser im-
portantes. Como resultado h uma grande variedade de tipos de isotermas. A isoterma mais
simples est baseada teoricamente em trs hipteses:
1. A adsoro no pode ir alm do recobrimento com uma monocamada;
2. Todos os stios de adsoro so equivalentes uns aos outros e a superfcie uniforme

(isto , a superfcie perfeitamente plana em escala microscpica);
3. A capacidade de uma molcula ser adsorvida num certo stio independente da ocu-
pao dos stios vizinhos.
Os complexos de quitosana/poli(cido metacrlico), CS/PMAA, obtidos pelo mtodo de po-

limerizao em molde apresentados neste trabalho, foram aplicados na anlise do processo
de adsoro protica em diferentes condies de pH, usando a albumina bovina srica como
modelo protico para o estudo da interao entre a albumina e a superfcie polimrica bio-
compatvel. A albumina, de massa molar 66462 g mol1 , a protena mais abundante no
sangue bovino, responsvel por transportar cidos graxos juntamente com outras pequenas
molculas por todo o sistema circulatrio e , sobretudo, responsvel pela manuteno do pH
sanguneo.100 Ela tambm executa muitas outras funes, tais como a remoo de radicais
livres de oxignio e a inativao de vrios metablitos lipoflicos txicos, como a bilirru-

bina. Agindo como uma protena transportadora multifuncional, ela tem uma concentrao
de aproximadamente 50 mg mL1 no plasma. A albumina consiste de 583 resduos de ami-
nocidos e trs domnios em uma cadeia polipeptdica simples. A estrutura da albumina
34
Figura 2.3: Os dois modelos da protena mostram uma vista lateral (lado esquerdo) e uma
vista evidenciada pela direo da seta do dmero protico. O tamanho do monmero protico
cerca de 9,0 x 5,5 x 5,5 nm.
bovina srica est ilustrada na Figura 2.3. Ela apresenta uma estrutura que se aproxima de
um formato de corao com dimenses aproximadas de 9,0 por 5,5 nm2 para o modo de
adsoro side-on e 5,5 por 5,5 nm2 para o modo de adsoro end-on, como pode ser obser-
vado na Figura 2.4. A estrutura secundria contm aproximadamente 50-68 % de estrutura
hlice com o restante composto de sheet (16-18%). De modo contrastante, outros
pesquisadores sugeriram que a protena polipeptdica no continha estrutura sheet e, sim,
regies flexveis extendidas e curvadas.101 O ponto isoeltrico (IEP) da albumina est em
torno do pH = 4,7-5, sendo carregado positivamente no pH < IEP.
Muitos trabalhos demonstraram a adsoro/desoro de albumina bovina srica em su-
perfcies de materiais inorgnicos, nos quais avaliaram diferentes parmetros, como o efeito
do pH e da concentrao de eletrlitos sobre o processo de adsoro. Peng et al.102 inves-
tigaram o equilbrio e a cintica de adsoro da albumina bovina srica sobre partculas de
magnetita de tamanho nanomtrico. Eles notaram que o pH apresentou um grande efeito na
adsoro da protena devido sua natureza anfiflica, de modo que o mximo de adsoro de
albumina sobre as partculas magnticas ocorreu no ponto isoeltrico da protena. Segundo
esses autores, a albumina apresenta vrias formas isomricas em diferentes valores de pH e,
portanto, diferentes quantidades de hlice, com uma quantidade mxima de hlice no
seu ponto isoeltrico. Isso significa que a albumina se apresentaria em uma forma mais com-
35
Figura 2.4: Modelo que representa os trs domnios da albumina bovina srica. A seta dupla
indica a posio para a formao do dmero protico. A seta larga simboliza o hipottico
modo de adsoro side-on com uma rea de adsoro 9,0 x 5,5 nm2 . A seta estreita indica o
modo de adsoro end-on com uma rea de adsoro 5,5 x 5,5 nm2 .
pactada, o que resultaria em uma mnima repulso intermolecular e, conseqentemente, em

maiores quantidades de protena adsorvida. Em um outro trabalho,16 eles avaliaram a adsor-
o e dessoro de lisozima sobre nanopartculas magnticas em diferentes valores de pH. A
adsoro mxima de lisozima ocorreu em seu ponto isoeltrico (pH = 11,1). Pode-se notar
que isso um fenmeno comum quando se avalia a adsoro protica. No ponto isoeltrico,
a repulso eletrosttica entre as macromolculas adsorvidas mnima: as macromolculas
proticas podem, portanto, atingir um maior empacotamento entre si, sobre a superfcie das
partculas, em relao s macromolculas que apresentam carga eletrosttica.
Rezwan et al.14 monitoraram as cargas superficiais e os pontos isoeltricos das partcu-
las de alumina, silica, titnio e zircnio em funo das quantidades de albumina carregada
negativamente e lisozima carregada positivamente, adsorvidas no pH 7,5. As quantidades
de protena adsorvidas sobre as superfcies das partculas de alumina, silica e titnio foram
fortemente determinadas pelo potencial zeta das partculas de xido. Para as partculas de
zircnio, menos hidroflicas do que as demais partculas analizadas, foram observadas gran-
des quantidades de protena adsorvida, mesmo sob foras eletrostticas repulsivas. Uma
36
razo seria que o efeito hidrofbico representou um fator mais importante do que a interao
eletrosttica. Em um outro trabalho,23 Rezwan et. al. investigaram a adsoro de albumina
bovina srica sobre partculas coloidais de Al2 O3 em um meio aquoso. Eles propuseram um
modelo de adsoro baseado em duas etapas: em uma primeira etapa, foi obtida uma mo-
nocamada de albumina adsorvida sobre a superfcie de Al2 O3 , seguida da adsoro de uma
segunda camada formada por outras molculas de albumina, de modo a serem formados
dmeros com aquelas j adsorvidas.
37
Captulo 3
Metodologia
3.1 Materiais
A quitosana, CS, (Polymar Ltda, Brasil) usada neste trabalho, tinha um grau de desacetilao
de 90% e uma massa molar de Mv 2, 9 x 105 g mol1 (determinada usando a equao de
Mark-Howink-Sakurada a partir de dados viscomtricos103 ). O cido metacrlico, MAA,
(Aldrich, Alemanha) e o persulfato de potssio, K2 S2 O8 , (P. A., Vetec, Brasil) foram usados
como recebidos. A albumina bovina srica foi adquirida da Sigma Aldrich (USA) e usada
sem qualquer modificao. As estruturas qumicas da quitosana e do cido metacrlico so
mostradas na Figura 3.1 .
3.2 Polimerizao em soluo aquosa
Nas polimerizaes via radical livre, a massa molar regulada pela temperatura, pela con-
centrao do iniciador e pela forma como o iniciador e o monmero so adicionados ao
sistema.104 Para sintetizar o poli(cido metacrlico), PMAA, com diferentes massa mola-
res, foram usados a variao da concentrao do iniciador e o modo como o iniciador e o
monmero so adicionados ao sistema. O MAA foi solubilizado em gua bidestilada de
modo a ser obtido uma soluo aquosa de MAA 5%. O K2 S2 O8 foi adicionado soluo e
a polimerizao se seguiu a 90 C, por 3 h. Foram realizadas, deste modo, duas diferentes
38
Figura 3.1: Estrutura qumica da quitosana (a) e do poli(cido metacrlico) (b).
polimerizaes:
1. A quantidade de iniciador usado (em termos de porcentagem em massa de MAA) foi

1 1
1,5%: 3 adicionado no incio da polimerizao, 3 aps a primeira hora de polimeriza-
o e o restante do iniciador aps a segunda hora de polimerizao;
1
2. Uma razo em massa de iniciador/MAA de 0,375% foi usada: 3 adicionado no incio
1
da polimerizao, 3 aps a primeira hora de polimerizao e o restante do iniciador
aps a segunda hora de polimerizao.
Durante a polimerizao, a mistura reacional tornou-se turva, passando a uma soluo lm-
pida depois de ser resfriada sob agitao at a temperatura ambiente. O poli(cido metacr-
lico), PMAA, slido foi obtido a partir da precipitao do policido de sua soluo usando
o dietil ter, a temperatura ambiente. Embora o ter dietlico seja um solvente de baixa po-
laridade com uma solubilidade cerca de 1,5% em gua, este solvente pode fazer ligaes
de hidrognio com o PMAA. Sendo assim, quando o ter dietlico foi adicionado solu-
o de PMAA, um precipitado de certa adesividade foi formado e repetidamente lavado
39
com o prprio dietil ter. Esta massa de precipitado foi seca em uma estufa temperatura
de 60 C. Foram obtidas solues aquosas de PMAA a 7%, cuja concentrao exata foi
determinada por titulao com NaOH. A viscosidade intrnseca, [], da soluo aquosa de
PMAA foi obtida usando um viscosmetro de Ubbelohde tamanho 0B. O efeito polieletrol-
tico105 foi suprimido pelo uso de dioxano durante essas medidas.106, 107 O tempo de esco-
amento dessas medidas nunca foi menor do que 100 s [o tempo de escoamento do dioxano
foi de (267,8 0,1) s]. Todos esses experimentos foram conduzidos a uma temperatura de
T = (25, 00 0, 05) C. As linearizaes simultneas das seguintes equaes108
red = [] + k []2 c (3.1)

1
inh = [] + k []2 c, (3.2)
2
onde red e inh so, respectivamente, as viscosidades reduzida e inerente, permitiram que
se determinasse os valores de viscosidade intrseca, [], e de k para o PMAA de diferentes
massas molares.
3.3 Preparao das partculas de CS/PMAA pelo mtodo
de gotejamento
As partculas de CS/PMAA foram obtidas a partir da quitosana carregada positivamente e

do PMAA carregado negativamente pelo mtodo de gotejamento. Uma soluo de quitosana
0,02% em cido actico 2% (pH = 2,60 0,05) foi filtrada atravs de um filtro Millipore
Millex 41 m e adicionada por gotejamento a uma soluo aquosa de PMAA 0,02% (pH =
3,70 0.05). Uma disperso opalescente foi instantaneamente formada sob agitao magn-
tica, dependendo da quantidade de soluo de quitosana adicionada. A disperso resultante
permaneceu sob agitao por 1 h a temperatura ambiente, para, ento, se seguirem as anlises
das disperses. As variveis usadas nos experimentos foram a razo em massa de CS em re-
lao ao PMAA, rCS / PMAA (ou a razo molar de NH2 da quitosana em relao ao COOH
40
do PMAA, rNH2 /COOH ), a massa molar do PMAA (indiretamente monitorada atravs da
viscosidade intrseca do PMAA, []) e a fora inica, dada por:109
1
2
IC = Ci z2i , (3.3)
i
onde Ci a concentrao do on i a zi a sua valncia. Para o clculo da fora inica, os

ons H3 O+ e COO advindos da soluo de cido actico deveriam ter sido considerados.
No entanto, uma vez que as concentraes destes ons foram constantes, a fora inica foi
indiretamente monitorada atravs da concentrao de NaCl adicionado, CNaCl , que foram
1, 00 104 , 1, 00 103 e 1, 00 102 M. A CNaCl foi a mesma, tanto na soluo de
quitosana como na soluo de PMAA.
3.4 Preparao dos complexos de CS/PMAA via polimeri-
zao em molde
7,5 g de quitosana foi dissolvida em 500 mL de soluo de cido actico 2% e filtrada

atravs de um filtro Millipore Millex 41 m. A quitosana foi neutralizada provocando a
precipitao das cadeias de quitosana usando uma soluo de NaOH 1,25 M, lavada com
gua destilada e parcialmente dessecada sob vcuo temperatura ambiente antes de seu
uso. Os complexos polieletrolticos, PECs, de quitosana/poli(cido metacrlico), CS/PMAA,
foram obtidos por meio da polimerizao em molde do monmero de cido metacrlico,
MAA, usando a quitosana com molde. A quitosana parcialmente dessecada foi solubilizada
em uma soluo de MAA usando diferentes razes molares de cido metacrlico/unidades
aminoglicosdicas, rCOOH/NH2 , sob agitao magntica, a temperatura ambiente, por 12
h. Uma soluo aquosa de MAA 0,06 mol L1 foi obtida para todos os experimentos de
polimerizao em molde. A polimerizao foi executada a 70 C sob agitao magntica
a partir da adio de 0,002 mol L1 de K2 S2 O8 . Durante a polimerizao, uma disperso
opalescente foi formada espontaneamente. A reao de polimerizao foi mantida a 70 C at
que a disperso se tornasse instvel. A disperso de CS/PMAA obtida, foi filtrada a fim de
41
remover alguma agregao polimrica formada. As partculas de complexos polieletrolticos
de CS/PMAA obtidas, foram separadas da fase dispersora por centrifugao (Himac CR21G,
Himac Inc., Japo), usando 15000 rpm a 4 C por 40 min. Antes de serem levadas a cabo as
anlises, as partculas foram dessecadas sob vcuo a temperatura ambiente.
3.4.1 Reticulao covalente das partculas
As partculas usadas nos experimentos de adsoro (Seo 3.9) foram covalentemente reti-
culadas usando glutaraldedo. Isso foi feito a partir da adio de 5 g de partculas de PECs
midas em 10 mL de uma soluo aquosa de glutaraldedo 2,5%, sendo, a disperso resul-
tante, deixada sob agitao magntica por 6 h a temperatura ambiente. Finalmente, o mate-
rial foi lavado, centrifugado, e seco a temperatura ambiente por 48 h. Um p amarronzado,
insolvel em pH bsico ou cido foi obtido a partir deste procedimento.
3.5 Determinao do pH
Um medidor de pH Micronal, modelo B474 (Brasil), foi usado para determinao do pH das
disperses, depois da reao de complexao, a temperatura ambiente [(25 2) C].
3.6 Caracterizao das partculas
3.6.1 Viscometria
A viscometria das disperses de CS/PMAA obtidas conforme descrito na Seo 3.3, foi
realizada usando um viscosmetro de Ubbelohde tamanho 0B, previamente calibrado com
diferentes fluidos. O tempo de escoamento dessas medidas nunca foi menor do que 100
s (o tempo da gua bidestilada foi de (207.9 0.1) s). Todos esses experimentos foram
conduzidos a uma temperatura T = (25.00 0.05) C.
42
3.6.2 Medidas de turbidez
As medidas de turbidez das disperses de CS/PMAA obtidas conforme descrio apresen-

tada na Seo 3.3, foram realizadas usando um turbidmetro Hach, modelo 2100P (USA). O
instrumento era equipado com uma lmpada de filamento de tungstnio, um detector a 90
para monitorar o espalhamento de luz e um detector de luz transmitida. O microprocessador
do instrumento calculou a razo dos sinais de ambos os detectores, corrigindo as interfern-
cias dos materiais que absorvem cor e/ou luz. A turbidez das partculas de CS/PMAA, que
est relacionada ao tamanho mdio das partculas e concentrao das partculas,110 foi,
ento, determinada.
3.6.3 FTIR
Os espectros de FTIR foram feitos usando um espectrofotmetro Thermo Nicolet Nexus

470 a partir de pastilhas de partculas de CS/PMAA prensadas com KBr. Os parmetros
operacionais foram: nmero de varreduras, 32; resoluo, 4 cm1 .
3.6.4 Difratometria de raios-X
As medidas de difratometria de raios-X das partculas de CS/PMAA foram feitas por meio de
um difratmetro de raios-X Shimadzu LabX XRD-6000 (Japo). As anlises foram obtidas
usando um tubo de Cu K a 30 kV e 30 mA. O ngulo de difrao foi variado na faixa de
5 <2<50 a uma velocidade de 2 min1 .
3.6.5 Medidas de potencial zeta
A mobilidade eletrofortica das partculas de CS/PMAA resultantes do mtodo de goteja-

mento (obtidas a partir de solues livres de sais de baixa massa molar) foi determinada
a temperatura ambiente com disperses resultantes da redisperso das partculas separadas
inicialmente por centrifugao. Nessas medidas, o KCl foi adicionado fase dispersora, de
modo que sua concentrao foi 104 mol L1 , a fim de manter constante a fora inica do
meio. O pH dessa disperso foi mantido a 4,50 0,05. Para as partculas de CS/PMAA
43
resultantes da reao de polimerizao em molde, as medidas de mobilidade eletrofortica
tambm foram levadas a cabo a temperatura ambiente. O efeito do pH sobre o compor-
tamento eletrofortico dessas partculas foi avaliado na faixa de pH 2,35 - 10,64. Cinco
sistemas-tampes [tampo hidrogeno-ftalato de potssio 0,1 M/HCl 0,1 M (pH 2,35 e 3,61);
tampo hidrogeno-ftalato de potssio 0,1 M/NaOH 0,1 M (pH 4,17, 4,85 e 5,77); tampo
dihidrogeno-fosfato de potssio 0,1 M/NaOH 0,1 M (pH 6,36 e 7,01); tampo brax 0,025
M/HCl 0,1 M (pH 8,12); tampo brax 0,025 M/0,1 M NaOH (pH 9,33 e 10,64)], foram
usados nesses experimentos. Para esses experimentos, uma concentrao de partculas de
0,5 g L1 foi usada. As medidas de mobilidade eletrofortica, E , foram feitas a partir de
um Zeta Meter System 3.0+ (Zeta-Meter Inc., USA). O potencial zeta, , das partculas de
uma dada disperso de CS/PMAA foi calculado a partir da E pelo emprego da equao de
Smoluchowski41
E
= , (3.4)
0 r
onde 0 a permissividade do vcuo, r a permissividade dieltrica relativa do meio (cons-

tante dieltrica) e a viscosidade da fase dispersora.
3.7 Tamanho de partculas
O dimetro mdio das partculas reticuladas de quitosana / poli(cido metacrlico), d p , ob-

tidas de acordo com a descrio apresentada na Seo 3.4, foi determinado usando um gra-
nulmetro a laser Cilas 920L a temperatura ambiente, usando gua como fase contnua e
ultrassonicao por 60 s.
3.8 Densidade das partculas
A densidade das partculas reticuladas obtidas de acordo com a descrio apresentada na

Seo 3.4, foi determinada por picnometria clssica. Uma dada massa de slido, ms , foi
adicionado a um picnmetro de volume Vp (este volume foi determinado usando gua bides-
tilada como lquido padro). A gua foi adicionada ao picnmetro, a fim de completar o seu
44
volume e a massa de gua adicionada, mw , foi determinada. A densidade das partculas foi
relacionada a Vp usando a expresso que se segue,
ms mw
Vp = Vs +Vw = + , (3.5)
s w
onde Vw e Vs so, respectivamente, os volumes ocupados pela gua e pelos slidos e s e

w so as densidades dos slidos e da gua, respectivamente. Rearranjando a Equao 3.5,
segue que:

mw 1
s = ms Vs (3.6)
w
3.9 Experimentos de adsoro
Nesses experimentos, foram usadas as partculas obtidas de acordo com a descrio apre-
sentada na Seo 3.4. Tomando como ponto de partida as partculas com a razo molar
de COOH do PMAA em relao ao NH2 da quitosana, rCOOH/NH2 = 5,6, adsorvendo a
albumina em pH = 3,04, foi avaliado a influncia dos seguintes parmetros:
1. Aumento na rCOOH/NH2 para 10,1, o pH permanecendo constante (pH = 3,04);
2. Aumento no pH para 5,09, rCOOH/NH2 permanecendo constante (rCOOH/NH2 =

5,6).
O sistema-tampo usado nesses experimentos foi de hidrogeno-fosfato de sdio 0,2 M / cido

ctrico 0,1 M. O processo de adsoro foi estudado em termos de isotermas de adsoro e
anlise da carga superficial, conforme descrito nas prximas subsees.
3.9.1 Isotermas de adsoro
A adsoro de albumina sobre as partculas de CS/PMAA foi feita a (22 2) C, a partir da

mistura de um volume VA = 5 mL de soluo de albumina, a uma determinada concentrao
C0 , a uma massa (m p = 500 mg) de partculas reticuladas. A mistura foi mantida por 48 h
45
a (22 2) C at atingir o equilbrio e levada centrifugao. Subseqentemente, as dis-
perses foram centrifugadas duas vezes por 10 min a 4000 rpm em uma centrfuga Hermle
Z 200A (Hermle Labortechnik, Alemanha). Depois da centrifugao, as partculas slidas
foram para anlise de carga superficial, de acordo com a descrio da Seo 3.9.2. A con-
centrao de protena no sobrenadante, CE , foi determinada usando um espectrofotmetro
(Genesys 10-UV/Vis, Thermo Electron Corporation, USA), a partir da intensidade de uma
banda em 278 nm e uma curva de calibrao previamente construda para as solues de
albumina. A densidade de adsoro, , de protena foi calculada como se segue
(C0 CE )VA p d p
= , (3.7)
6m p
onde p a densidade da partcula e d p o dimetro mdio da partcula.
3.9.2 Anlise da carga superficial
As partculas obtidas a partir de uma dada centrifugao, conforme se encontra descrito na

seo anterior, foram redispersadas no mesmo tampo usado para a preparao da disperso
original e a mobilidade eletrofortica foi imediatamente medida de acordo com o descrito na
Seo 3.6.5, a fim de estimar o efeito da adsoro de albumina sobre o potencial zeta, , das
partculas.
46
Captulo 4
Resultados e discusso
4.1 Polimerizao do MAA
Os valores de viscosidade intrnseca, [], e constante de Huggins, k , para o PMAA obtido

com razes em massa de iniciador/MAA de 1,500 e 0,375 % so mostrados na Tabela 4.1.
Conforme a quantidade de iniciador diminui, o nmero de centros ativos de polimerizao
tambm diminui, aumentanto, conseqentemente, a massa molar do polmero,111 resultando
em um valor maior de []. Os valores de k para os dois sistemas esto em uma mesma
faixa, indicando que, embora apresentem massas molares diferentes, os polmeros sinteti-
zados apresentaram a mesma natureza hidrodinmica (em outras palavras, tridimensional-
mente, a mesma geometria novelar).112 Daqui para frente, o polmero de maior viscosidade
intrnseca ser referido como sendo HPMAA e o polmero de menor viscosidade intrnseca
como LPMAA.
4.2 FTIR
Os espectros de FTIR do PMAA, da quitosana e das partculas de CS/PMAA obtidas tanto

pelo mtodo de gotejamento como pelo processo de polimerizao em molde so mostrados
na Figura 4.1. O espectro de FTIR da quitosana mostrou a absoro dos grupos amida: ban-
47
Razo em massa de iniciador/MAA [] (dL g1 ) k
1,500% 2, 9 0, 1 0, 286 0, 005
0,375% 5, 0 0, 1 0, 254 0, 001
Tabela 4.1: Viscosidade intrnseca, [], e k para o PMAA obtido a partir de diferentes razes
de iniciador/MAA.
das de amida I e II localizadas em 1647 e 1598 cm1 , respectivamente. A intensa banda em

3420 cm1 estaria relacionada ao estiramento vibracional de OH e/ou NH, assim como
s ligaes de hidrognio intermoleculares das cadeias do polissacardeo.113 As bandas de
absoro em 1154 cm1 (estiramento anti-simtrico de ligaes COC), em 1078 e 1031
cm1 (vibraes envolvendo o estiramento CO) so caractersticos da estrutura sacaros-
dica da quitosana.114 O PMAA, em meio cido, caracterizado por uma estrutura compacta
hiperenovelada, estabilizada por interaes hidrofbicas dos grupos metila e pela forma-
o de ligaes de hidrognio intramoleculares.115 A formao de ligaes de hidrognio
intramoleculares, no espectro do PMAA, pode ser caracterizada por uma larga banda em
3453 cm1 . A presena das bandas na faixa de 1715 - 1175 cm1 tem sido relacionada com
os estiramentos vibracionais CO e CH,113 e a banda de absoro em 1716 cm1 , ao esti-
ramento vibracional C=O dos grupos carboxlicos. Pode ser observado um desvio de 1716
para 1701 cm1 no espectro das partculas de CS/PMAA, atribudo banda de absoro do
grupamento carboxlico do PMAA; as bandas amida no espectro da quitosana desaparece-
ram, e uma nova banda apareceu em 1648 cm1 , que pode ser assinalada como absoro do
NH+ 1
3 da quitosana. Alm disso, as bandas de absoro em 1542 e 1389 cm , presentes no
espectro das partculas de CS/PMAA, resultaram do estiramento vibracional assimtrico e

simtrico de [OC=O]116, 117 .
Estes resultados de FTIR so indicativos da existncia da reao de complexao entre os
grupos carboxlicos dissociados do PMAA e os grupos amina protonados da quitosana por
meio de interaes eletrostticas, resultando nos complexos polieletrolticos obtidos tanto
48
Figura 4.1: Espectro de FTIR da quitosana (a), dos PECs obtidos pelo mtodo de polimeri-
zao em molde [rCOOH/NH2 = 5, 6] (b), dos PECs obtidos pelo mtodo de gotejamento
[rCS / PMAA = 0, 25] (c) e do PMAA (d).
49
pelo mtodo de gotejamento, como pelo mtodo de polimerizao em molde. Os espectros
no mostraram aspectos diferentes em funo da massa molar do PMAA.
Em se tratando do mtodo de polimerizao em molde, a quitosana insolvel em gua
pura, atingindo uma completa solubilizao quando o MAA adicionado soluo. Isso
indica que, tal como ocorre com o cido actico nas solues comuns de quitosana, o MAA
protonou os grupos NH2 da quitosana. Quando a polimerizao comeou, a propagao
das cadeias de PMAA resultou em um aumento da densidade de carga, de modo que, ao
tornar-se crtica, os complexos polieletrolticos insolveis entre a quitosana e o poli(cido
metacrlico) foram formados atravs de interaes eletrostticas. Naturalmente, as interaes
hidrofbicas e as ligaes de hidrognio no podem ser desconsideradas. Os resultados de
FTIR confirmaram, portanto, a complexao polieletroltica entre os grupos carboxlicos
dissociados do PMAA e os grupos amino protonados da quitosana.
4.3 Medidas de difrao de raios-X
As medidas de difrao de raios-X foram realizadas apenas para as partculas obtidas pelo
mtodo de polimerizao em molde. A Figura 4.2 mostra os difratogramas de raios-X para a
quitosana, as partculas de PECs e o PMAA. O perfil de difrao de raios-X da estrutura da
quitosana consiste de duas bandas de reflexo em 2 =11,6 e 20,1 , que esto de acordo com
dados j reportados na literatura.118, 119 A quitosana tem duas formas cristalinas distintas I
e II. A forma cristalina I ortorrmbica tendo uma clula unitria com a = 7, 76 , b =
10, 91 e c = 10, 30 . A banda de reflexo em 2 =11,6 tem sido assinalada forma
cristalina I, que corresponde ao ngulo de difrao no plano (100). A forma cristalina II
tambm ortorrmbica tendo uma clula unitria com a = 4, 4 , b = 10, 0 e c = 10, 3 . A
reflexo mais forte que aparece em 2 = 20, 1 tem sido assinalada forma cristalina II, que
tambm corresponde ao ngulo de difrao no plano (100). Wan et al.120 descreveram que
a cristalinidade da quitosana resulta da capacidade de formao de ligaes de hidrognio
dentro de suas cadeias, o que atribudo ao grau de desacetilao da quitosana. De acordo
50
Figura 4.2: Difratogramas de raios-X da quitosana, CS, do poli(cido metacrlico), PMAA,
e do complexo polieletroltico, PEC.
51
com esses autores, quando o grau de desacetilao aumenta, as cadeias macromoleculares
tornam-se mais flexveis, o que possibilita maior empacotamento, com um maior nmero de
grupos glicosaminas (maior nmero de ligaes hidrognio), aumentando a cristalinidade.
O perfil de difrao de raios-X dos complexos polieletrolticos mostrou que a reao
de complexao modificou a cristalinidade da quitosana, de modo que obtivemos distintos
picos de difrao para os complexos. A reflexo mais larga ocorreu em 2 =15,9 e 31,3
para as partculas de PECs. De maneira similar, o difratograma do PMAA mostrou picos
de difrao em 2 =15,1 e 31,6 . Pode-se notar que a reao de complexao diminui
a intensidade dos picos de difrao, tornando as bandas de reflexo mais largas para os
complexos polieletrolticos. A forma das bandas de reflexo encontradas para os complexos
e o PMAA j tem sido reportada para microgis amorfos de PMAA.121
4.4 Viscometria e turbidimetria
A viscometria e turbidimetria foram usadas de modo a avaliar os efeitos da massa molar do

PMAA e da fora inica na formao das disperses de complexos polieletrolticos de qui-
tosana e PMAA obtidas pelo mtodo de gotejamento, assim como avaliar o comportamento
destas disperses em funo da razo de mistura utilizada neste trabalho.
4.4.1 Efeito da massa molar
A Figura 4.3 mostra os resultados obtidos a partir das medidas de viscosidade, , e de tur-
bidez, , em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH , usando o PMAA de menor massa
molar (LPMAA), sem a adio de NaCl. Quando rCS / PMAA aumentada, a viscosi-
dade aumenta e atinge um valor mximo a rCS / PMAA = 0, 17. De acordo com o que j
tem sido mostrado em trabalhos anteriores, a viscosidade est principalmente relacionada ao
fenmeno que ocorre na fase contnua, enquanto a turbidez est relacionada formao de
partculas slidas.122, 123 Em outras palavras, este aumento na viscosidade o resultado da
formao de complexos solveis, que estariam gerando espcies macromoleculares de gran-
52
Figura 4.3: Turbidez, (quadrados), e viscosidade, (crculos), das disperses de
CS/PMAA em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH usando LPMAA.
53
des dimenses. A diminuio na viscosidade depois desse mximo se deve (1) diminuio
na ocorrncia de complexao e/ou (2) ao nmero de molculas de polieletrlito na fase con-
tnua. O mximo na turbidez, , observado no mesmo valor (rCS / PMAA = 0, 17) favorece
estas hipteses, uma vez que um mximo na turbidez significa um mximo na ocorrncia de
partculas de complexos insolveis, que advm da fase contnua, resultando em uma drstica
reduo do volume hidrodinmico macromolecular. Obviamente, um aumento na turbidez
devido ocorrncia de floculao por formao de pontes interparticulares, no pode ser
desconsiderado.124 A partir de ento, o aumento de rCS / PMAA resultou em uma contnua
diminuio na viscosidade, at rCS / PMAA = 0, 25 0, 33, o que uma indicao de que
a formao de complexos insolveis ainda tem sido importante neste momento. Os valores
de turbidez confirmaram esta hiptese, j que um segundo mximo tambm verificado em
rCS / PMAA = 0, 33. Para valores ainda maiores de rCS / PMAA , a turbidez diminuiu con-
tinuamente (indicando a solubilizao dos complexos formados), assim como a viscosidade
aumentou continuamente (indicando um maior nmero de estruturas de complexos solveis
nestas condies). Este tipo de explanao envolvendo a correlao turbidez/viscosidade na
formao desses complexos j tem sido reportada na literatura.125, 126
Um comportamento similar ao observado para a Figura 4.3 pode ser visto ao se examinar
a Figura 4.4 , que mostra a relao entre a razo em massa de CS/PMAA, rCS / PMAA , a
razo molar de NH2 /COOH, rNH2 /COOH , a viscosidade da disperso, , e a turbidez da dis-
perso, , para as disperses preparadas usando o PMAA de maior massa molar (HPMAA).
Entretanto, algumas diferenas podem ser apontadas: o mximo na viscosidade agora ocor-
reu a rCS / PMAA = 0, 2, com um mximo na turbidez em torno de rCS / PMAA = 0, 25,
embora sem a mesma definio encontrada para o LPMAA. Esses resultados indicam que os
complexos formados com HPMAA so mais solveis em meio aquoso, o que implica que
os complexos formados pelo LPMAA apresentavam estruturas mais compactadas. A maior
solubilidade das partculas base de HPMAA pode ser explicado pelo fato de o LPMAA
apresentar uma maior quantidade de grupos carboxlicos ionizados acessveis por unidade de
massa. Mais exatamente, uma diminuio na massa molar do PMAA implicaria um maior
nmero de novelos macromoleculares, o que implicaria uma maior concentrao de grupos
54
CS/PMAA em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH usando HPMAA.
55
carboxlicos localizados nas regies mais externas dos novelos. Esses grupos carboxlicos
seriam mais facilmente ionizveis e a quitosana formaria, mais efetivamente, complexos ma-
cromoleculares com tais molculas de policido. Embora o HPMAA tenha formado comple-
xos mais solveis, ao se observar novamente as medidas de nas Figuras 4.3 e 4.4, pode-se
ver que o mximo de mais intenso no caso do HPMAA. Isso evidenciou a formao
de estruturas macromoleculares de maiores dimenses com o aumento da massa molar do
polinion em excesso, de acordo com o que j tem sido apontado por Dautzenberg.7
Essa anlise pode ser estendida por meio da Figura 4.5 , que mostra a relao entre o
pH, rCS/PMAA e rNH2 /COOH para as disperses feitas com LPMAA e HPMAA. Pode ser
prontamente notado que o pH para as disperses obtidas a partir do LPMAA menor do que
aquelas obtidas do HPMAA, que consistente com a discusso desenvolvida no ltimo pa-
rgrafo (uma maior quantidade de grupos carboxlicos ionizveis presentes no LPMAA). Os
pHs das solues de PMAA foram 3,70 (HPMAA) e 2,95 (LPMAA), enquanto o pH da so-
luo de quitosana foi 2,60. Os valores de pH abruptamente diminuiram de rCS / PMAA = 0
a rCS / PMAA = 0, 2 0, 25 (o que caracteriza a ocorrncia do ponto de equivalncia cido
fraco-base fraca). Essa faixa de rCS / PMAA se encontra em coincidncia com o mximo
na turbidez encontrado para esses complexos. Isso leva a crer que o completo desenvolvi-
mento na turbidez pareceu estar relacionado a uma reao cido-base. No pH 3, o grau
de ionizao da quitosana est em torno de 1,0,127 enquanto no pH 4, o grau de ionizao
do PMAA est em torno de 0,2128 (valores obtidos para uma faixa de concentrao de 0,01
a 5 %). Em outras palavras, nessas condies, a maioria dos grupos amino da quitosana
estaria na forma protonada, enquanto os grupos carboxlicos do PMAA estariam na forma
no-dissociada, em equilbrio com sua forma dissociada, de acordo com as seguintes reaes
de complexao sugeridas:
ionizao cida: COOH + H2 O COO + H3 O+
formao de reticulao inica: COO + + H3 N COO+ H3 N
56
Figura 4.5: pH em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH para o LPMAA (quadrados) e o
HPMAA (crculos).
57
Desse modo, um aumento na massa molar do PMAA (resultando em uma menor quanti-
dade de grupos carboxlicos ionizados presentes nas regies mais externas dos novelos ma-
cromoleculares) levou a mudanas conformacionais na cadeia e, conseqentemente, uma
maior quantidade de retculos inicos das cadeias de quitosana foi necessrio para a for-
mao dos complexos polieletrolticos de CS/PMAA. Essa a razo para os altos valores de
rCS / PMAA necessrios para se atingir um mximo na turbidez para o HPMAA. A ocorrn-
cia de um ponto de equivalncia aparente em rCS / PMAA = 0, 2 0, 25 (rNH2 /COOH
0, 1) sugere uma morfologia core-shell para as partculas, sendo a parte central da partcula
rica em quitosana e a parte externa ou perifrica, rica em PMAA. Se rNH2 /COOH < 1, isso
significa que h um excesso de grupos COOH. Se a fase contnua rica em grupos COOH, h
uma maior probabilidade de que os grupos COOH excedentes se encontrem na parte externa
das partculas. Essa hiptese j tem sido considerada na literatura, a respeito da formao
de diferentes complexos de polieletrlitos.129, 130 Como conseqncia, tambm h a possibi-
lidade de formao de partculas por floculao por formao de ponte interparticular40, 124
entre as partculas carregadas negativamente e as espcies de complexos solveis.
4.4.2 Efeito da fora inica
As Figuras 4.6, 4.7 e 4.8 mostram os resultados obtidos de viscosidade, , e de turbidez,

, medidos em funo da razo em massa de CS/PMAA, rCS / PMAA , e da razo molar
de NH2 /COOH, rNH2 /COOH , para diferentes concentraes de NaCl, 1, 00 104 , 1, 00
103 e 1, 00 102 M, respectivamente. Aps analisar essas figuras, interessante listar os
possveis efeitos do aumento da concentrao de eletrlito de baixa massa molar, CNaCl ,
sobre e . De acordo com a literatura, h trs principais efeitos que podem representar
importantes papis na formao dos complexos polieletrolticos.41, 124, 129, 131134
1. O aumento de CNaCl pode diminuir as interaes eletrostticas entre as cargas. Desse

modo, a diminuio das interaes eletrostticas entre as cargas opostas resultaria em
58
CS/PMAA em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH usando HPMAA com CNaCl =
1, 00 104 M.
59
1, 00 103 M.
60
1, 00 102 M.
61
uma diminuio na formao dos pares complexados. A turbidez diminuiria, a con-
centrao das macromolculas solubilizadas aumentaria e a viscosidade, dependendo
da intensidade do efeito polieletroltico, aumentaria ou diminuiria.
2. Ainda tratando do efeito polieletroltico, a diminuio na repulso entre as cargas de

mesmo sinal (dentro das cadeias dos polieletrlitos) resultaria em uma diminuio nas
dimenses das macromolculas solubilizadas. Dimenses menores, por outro lado,
poderiam favorecer a formao de espcies de complexos devido a um aumento na
densidade de carga, de acordo com o apontado na Seo 4.4.1. Desse modo, a turbidez
aumentaria e a viscosidade diminuiria.
3. O aumento de CNaCl resultaria na precipitao dos complexos solubilizados por meio

do efeito salting-out. Como resultado, a turbidez aumentaria e a viscosidade diminui-
ria.
Comparando o comportamento da turbidez observado nas Figuras 4.4 (CNaCl = 0) e 4.6

(CNaCl = 1, 00 104 M), pode-se notar que para CNaCl = 1, 00 104 M houve um leve
aumento nos valores de turbidez, indicando a proeminncia dos efeitos (2) e/ou (3). Os mes-
mos efeitos pareceram ser mais importantes quando CNaCl foi aumentada para 1, 00 103
M. Entretanto, quando CNaCl foi aumentada para 1, 00 102 M, as disperses tornaram-se
menos turvas para toda a faixa de rCS/PMAA explorada, indicando a importncia do efeito
(1). Se o efeito salting-out no representou um papel importante para a concentrao de NaCl
mais alta, pode ser deduzido que o efeito salting-out representou nenhuma importncia no
processo de complexao como um todo.
A adio de NaCl diminuiu a viscosidade das disperses para todas as concentraes, o
que tornou os efeitos (1) e (2) possveis para todos os sistemas [uma vez que o efeito (3) tenha
sido desconsiderado]. Alm disso, pode ser visto na Figura 4.6 que h um mnimo na vis-
cosidade antes de ser atingido um mximo a rCS/PMAA 0, 25 (embora o comportamento
da curva de turbidez tenha permanecido com a mesma forma). Essa diminuio pode estar
relacionada ocorrncia do efeito polieletroltico [sem que houvesse a formao de espcies
62
de complexos, inibida pela presena de NaCl, efeito (1)]. Quando rCS/PMAA foi aumen-
tada, a formao de espcies de complexos resultou em um aumento na viscosidade, como
descrito anteriormente na Seo 4.4.1. A Figura 4.7 mostrou que um aumento em CNaCl
para 1, 00 103 M resultou na ocorrncia de um mnimo sem a presena de um mximo,
certamente pelo fato da produo de um complexo no-solubilizado ter atingido um mximo
mais definido a rCS/PMAA = 0, 2 (abaixo de rCS/PMAA 0, 25, indicando que o mximo
na viscosidade deve ter se deslocado para valores de rCS/PMAA abaixo da faixa usada neste
trabalho). Um aumento em CNaCl para 1, 00 102 M resultou em uma situao similar s
disperses sem NaCl (embora com uma viscosidade menor, devido aos efeitos de blindagem
dos eletrlitos de baixa massa molar). De acordo com o que foi colocado no ltimo par-
grafo, o comportamento da viscosidade tambm mostrou que o efeito salting-out no teve
importncia neste caso: para a concentrao mais alta de NaCl, a formao de partculas de
complexos slidos foi desfavorecida.
4.5 Medidas de potencial zeta
4.5.1 Potencial zeta das partculas de CS/PMAA obtidas pelo mtodo
de gotejamento
As consideraes da ltima seo podem ser enriquecidas pela anlise da Figura 4.9 , que
mostra os valores de potencial zeta, , para as partculas de CS/PMAA obtidas a partir da qui-
tosana e do PMAA de diferentes massas molares, sem a presena do sal. Pode ser observado
que, para ambas as disperses de CS/PMAA, a carga superficial foi negativa, sendo a carga
superficial das partculas menos negativa para os complexos de LPMAA. Isso consistente
com a ocorrncia de partculas com suas partes externas ricas em PMAA.
No pH = 2 3, as condies em que as partculas foram preparadas, pode-se encontrar
quitosana complexada solubilizada na fase contnua, associada a uma quantidade conside-
rvel de PMAA no-dissociado (o que mais importante no caso do HPMAA). No pH =
63
Figura 4.9: Potencial zeta, , em funo de rCS / PMAA e rNH2 /COOH para as partculas
obtidas a partir do LPMAA (quadrados) e do HPMAA (crculos).
64
4,5, as condies usadas nas medidas de potencial zeta, no h a presena nem do PMAA
nem de espcies de complexos solubilizados na fase contnua. Os complexos solveis ad-
sorvidos na superfcie das partculas seriam ressolubilizados na fase contnua e os grupos
carboxlicos inicialmente no-dissociados na superfcie poderiam, ento, se dissociar, como
resultado tanto da baixa concentrao do PMAA na fase contnua, como do alto valor de pH.
Como conseqncia, de acordo com o observado nos experimentos, o potencial zeta seria
menor para as partculas base de HPMAA (aqueles com uma grande quantidade de carbo-
xilas no-dissociadas na superfcie). O pH cido, resultante da redisperso das partculas em
gua, corroborou esta hiptese.
Tambm pode ser observado que, para ambas as classes de partculas, inicialmente o
potencial zeta diminuiu com o aumento de rCS/PMAA , indicando um aumento na quanti-
dade de espcies de complexos macromoleculares solubilizados na superfcie da partcula (e,
conseqentemente, de carboxilas inicialmente no-dissociadas). Para o LPMAA, o potencial
zeta, , atingiu um mnimo a rCS/PMAA = 0, 2, indicando que a maioria dos grupos carbox-
licos da superfcie deveria estar no-dissociada neste valor de rCS/PMAA (no pH = 2 3, as
condies em que as partculas foram inicialmente obtidas), enquanto que, para as partculas
de HPMAA, no mudou to abruptamente dentro da faixa de 0, 14 rCS/PMAA 0, 2,
certamente devido a um nmero muito maior de grupos carboxlicos depois da complexao
(no pH = 2 3) e, ento, aumentou da mesma forma que o observado para as partculas
de LPMAA. O aumento no potencial zeta est correlacionado a um aumento na formao
dos pares de complexos (o que significa uma diminuio na quantidade de carbonilas no-
dissociadas). Convm notar que, em torno deste valor de rCS/PMAA , o mximo na turbidez
foi detectado para os complexos base de LPMAA.
4.5.2 Potencial zeta das partculas no-reticuladas de CS/PMAA obti-
das a partir do mtodo de polimerizao em molde
A Figura 4.10 mostra o potencial zeta, , em funo do pH para as partculas de CS/PMAA
65
Figura 4.10: Potencial zeta, , das partculas de PECs em funo do pH. Crculos,
rCOOH/NH2 = 5, 6. Quadrados, rCOOH/NH2 = 8, 3. Diamantes, rCOOH/NH2 = 11, 1.
66
obtidas a partir de diferentes valores de rCOOH/NH2 . Pode-se notar que as partculas apre-
sentaram carga superficial negativa na faixa de pH usada. Isso consistente com o meca-
nismo de complexao baseado em interaes eletrostticas entre os polieletrlitos oposta-
mente carregados, em que as cadeias de quitosana positivamente carregadas foram encober-
tas por camadas de cadeias carregadas negativamente de poli(cido metacrlico), PMAA.135
Tambm pode ser observado que o potencial zeta aumentou quando o pH foi aumentado. Isso
o resultado tanto da neutralizao do grupos carboxila do PMAA, como da desprotonao
dos grupos amino da quitosana. E ainda pode-se inferir que, em valores de pH contantes,
pareceu ser independente de rCOOH/NH2 dentro dos erros experimentais associados.
De modo a finalizar essa anlise, foi verificado que as partculas no foram estveis (elas
foram ressolubilizadas) fora da faixa de pH usada na Figura 4.10 (pH = 4,17 - 5,77). Sa-
bendo que o pKa = 6, 5 e 4,75 para a quitosana e o PMAA, respectivamente,97 em condies
fortemente cidas, como um pH < 3,5, a maioria dos grupos carboxlicos do PMAA pas-
savam a no estar ionizados (embora a quitosana permanecesse completamente protonada),
resultando na desagregao dos complexos polieletrolticos de CS/PMAA. Por outro lado,
em condies de pH > 6, embora os grupos carboxila permanecessem neutralizados, os gru-
pos amino da quitosana passavam a no estar protonados, o que resultou na dissoluo dos
complexos.
4.6 Adsoro de albumina bovina srica nas partculas re-
ticuladas obtidas a partir do mtodo de polimerizao
em molde
A reticulao com glutaraldedo tornou as partculas resistentes a valores de pH nos quais

elas eram previamente solveis. Esta a razo porque os experimentos de adsoro foram
realizados com essas partculas.
67
4.6.1 Isotermas de adsoro
A Figura 4.11 mostra a densidade de adsoro da albumina, , em funo da concentra-

o de equilbrio da albumina no sobrenadante, CE , para a adsoro de albumina nos com-
plexos com rCOOH/NH2 = 5, 6 e pH = 3,04. Pode-se observar que h um mximo com
max 0, 28 g m2 em CE 1 g dm3 . Um comportamento similar foi descrito em al-
guns modelos que relacionam a adsoro de fluidos supercrticos em xidos, usando siste-
mas base de pseudo-ltices envolvendo a energia de interao adsorbato-adsorbato, , e
adsorbato-superfcie, s .136, 137 Uma vez que, neste pH, a quitosana est altamente proto-
nada e o PMAA no est ionizado, em termos eletrostticos, h repulso entre as partculas
carregadas positivamente e a albumina carregada positivamente. A adsoro ocorrer princi-
palmente por meio de ligaes hidrognio e/ou interaes de van der Waals. Por outro lado,
a diminuio em pode ser analisada como uma conseqncia da existncia de espcies
polivalentes carregadas negativamente (e.g. fosfato e citrato, do tampo), na fase contnua, o
que aumenta a possibilidade de interao adsorvente-adsorvente (por meio de formao de
uma ponte interparticular), quando a concentrao de protena foi aumentada. Uma outra
possibilidade a ocorrncia de floculao por depleo,124 como resultado do aumento da
concentrao de protena.
Aumentando o pH para 5,07 no houve um efeito marcante na isoterma, como pode-
se confirmar pela anlise da Figura 4.12 que mostra a isoterma para as partculas com
rCOOH/NH2 = 5, 6 e pH = 5,07. O mximo na adsoro ainda se encontra em 1 g dm3 ;
max , entretanto, est em torno de 0,55 g m2 , indicando que a adsoro foi muito mais
efetiva quando o pH foi aumentado. O ponto isoeltrico da albumina se encontra na faixa de
pH 4, 7 5, 0,14, 23, 138 o que significa que, a respeito desses experimentos, a diminuio na
carga superficial da protena resultou em maior adsoro. Peng et al.102 encontraram que a
adsoro mxima de albumina nas partculas de magnetita carregadas positivamente ocorreu
no ponto isoeltrico da albumina. Roach et al.139, 140 encontraram que a adsoro da albu-
mina em superfcie hidrofbica (rica em CH3 ) maior do que em superfcie hidroflica (rica
em OH), devido maior afinidade de ligao em superfcies hidrofbicas em relao s hi-
68
Figura 4.11: Curva de isoterma de adsoro em pH 3,04 para a albumina adsorvida nos
complexos de CS/PMAA. rCOOH/NH2 = 5, 6.
69
70
71
droflicas. Esse trabalho, entretanto, foi realizado em pH = 7,4 (a albumina estava carregada
negativamente, ao contrrio das condies do presente trabalho) e no havia dados de carga
superficial da superfcie slida (por meio da formao de uma dupla camada). Em outras
palavras, h a possibilidade de que a maior adsoro em uma superfcie menos hidroflica
tenha sido, na verdade, uma maior adsoro de uma partcula carregada negativamente em
uma superfcie menos negativa. Apesar disso, usando os mesmos argumentos apontados por
Roach et al., o aumento na adsoro da albumina, no presente trabalho, poderia se dever
formao de uma superfcie menos hidroflica, j que o NH+
3 seria desprotonado pelo au-
mento do pH. Mas, por outro lado, novos grupos COOH da superfcie da partcula seriam
neutralizados, resultando em uma superfcie mais hidroflica: neste caso, entretanto, a inte-
rao com regies carregadas positivamente da albumina (embora a carga da albumina seja
zero) com a estrutura gerada pela neutralizao dos grupos carboxila poderiam aumentar a
adsoro.
A Figura 4.13 mostra os dados relacionados adsoro de albumina em pH = 3,04
e rCOOH/NH2 = 11, 1. Ao compar-la Figura 4.11, pode-se notar que o aumento em
rCOOH/NH2 modificou a forma da isoterma: h um aumento mais pronunciado na adsoro

a baixas concentraes e a ocorrncia de um plateau entre CE = 0, 1 e 0,6 g dm3 . Por outro
lado, h tambm um mximo em CE = 1 g dm3 , o valor de max sendo 0,35 g m2 , que
maior do que o valor encontrado para rCOOH/NH2 = 5, 6. O aumento em rCOOH/NH2
resultou na possibilidade de ocorrncia de estruturas em forma de escova,75, 141 obtidas a
partir das cadeias de PMAA: essas estruturas aumentariam a adsoro da albumina por meio
de ligaes de hidrogno e interaes de van der Waals. As estruturas em forma de escova
esto representadas na Figura 4.14. A adsoro de albumina em partculas de ltex com
superfcies estruturadas em escova j tem sido reportado na literatura.142
A fim de se averiguar o papel das interaes eletrostticas no processo de adsoro da
albumina, uma anlise da carga superficial das partculas durante o processo de adsoro
deve ser realizada de modo a se obter um mecanismo mais definido de adsoro. Tal anlise
ser feita na seo a seguir.
72
Figura 4.14: Esquema representado a superfcie das partculas e a estrutura em forma de
escova.
73
Figura 4.15: Potencial zeta, , em pH 3,04 para a albumina adsorvida nos complexos de
CS/PMAA. rCOOH/NH2 = 5, 6.
74
75
Figura 4.17: Esquema representando uma possvel interao por meio de ligaes hidrog-
nio entre um grupo carbonila da albumina e um grupo carboxila de uma partcula de PEC.
Como resultado desta interao, o equilbrio deslocado na direo da protonao dos gru-
pos carboxlicos das partculas de PEC.
76
77
4.6.2 Anlise da carga superficial
A Figura 4.15 mostra o potencial zeta, , em funo de CE para a adsoro da albumina

em pH 3,04. Pode-se ver que as partculas apresentaram carga positiva neste pH, o que era
esperado, j que a quitosana se encontra completamente protonada e a ionizao no PMAA
era mnima (de acordo com o apontado na Seo 4.6.1). Como a albumina foi adsorvida
na superfcie das partculas, a carga superficial tendeu a valores mais positivos, o que
consistente com a carga positiva da albumina neste pH.
O efeito do aumento do pH na carga superficial pode ser visto na Figura 4.16, que mostra
os valores de potencial zeta, , em funo de CE para a adsoro de albumina em pH = 5,07 e
rCOOH/NH2 = 5, 6. Pode-se notar que a superfcie das partculas agora se tornou negativa,
o que consistente com a ionizao dos grupos COOH que se apresentavam externamente.
O potencial zeta se tornou menos negativo quando a albumina foi adsorvida, de modo que
duas hipteses puderam ser esboadas:
1. A albumina estava carregada positivamente neste pH. Isso no pareceu ser o caso, haja
visto que a albumina estava muito prximo de seu ponto isoeltrico;
2. A albumina interagiu por meio de ligaes de hidrognio com os grupos carboxila no-
ionizados do PMAA, resultando em uma diminuio na concentrao de carboxilato.
A Figura 4.17 mostra a possibilidade de interao entre os grupos carbonila da albu-
mina e os grupos carboxila das partculas de PECs: como resultado desta interao, a
superfcie das partculas de PECs se tornaria menos negativa.
A Figura 4.18 mostra o resultado do aumento de rCOOH/NH2 para 11,1 (pH = 3,04) sobre o
potencial zeta, . Pode-se notar que, antes da adsoro de albumina (CE = 0), as partculas
estavam em torno de seu ponto isoeltrico, em oposio situao na qual rCOOH/NH2 =
5, 6, em que as partculas estavam carregadas positivamente. A razo para a diminuio
na carga foi o aumento dos grupos carboxila do PMAA: a diminuio na carga aumentaria
a adsoro no-eletrosttica da albumina, alm da ocorrncia das estruturas em escova,
como j observado na ltima seo.
78
Captulo 5
Concluses
Os complexos polieletrolticos de CS/PMAA foram o resultado da reao de complexao

entre os grupos carboxlicos dissociados do PMAA e os grupos amino protonados da qui-
tosana por meio de interaes eletrostticas. As partculas obtidas por ambos os mtodos
apresentaram uma morfologia do tipo core-shell.
As disperses aquosas de CS/PMAA obtidas pelo mtodo de gotejamento, tiveram algu-
mas de suas propriedades influenciadas pela massa molar do PMAA e pela fora inica.
O aumento da massa molar do PMAA pareceu aumentar a solubilidade dos complexos
macromoleculares. Este aumento na solubilidade deve ser o resultado de uma menor pre-
sena de grupos carboxlicos nas partes mais externas dos novelos macromoleculares do
PMAA (mais facilmente ionizados do que aqueles presentes no interior dos novelos) como
resultado do aumento da massa molar. As estruturas macromoleculares obtidas a partir do
PMAA de maior massa molar apresentaram maiores dimenses. A ocorrncia de uma su-
perfcie carregada mais negativamente na partcula pode tambm aumentar a formao de
partculas de complexos por meio de floculao por formao de ponte interparticular dire-
cionada pelos complexos solubilizados.
O aumento da fora inica apresentou dois efeitos na formao dos complexos inso-
lveis: a baixas concentraes, ele favoreceu a formao desses complexos atravs da di-
minuio nas dimenses das molculas dos polieletrlitos (aumento da densidade de carga
superficial); a altas concentraes, ele inibiu a formao desses complexos, possivelmente
79
devido ao efeito de blindagem da atrao eletrosttica entre o COO e o NH+
3.
As partculas CS/PMAA reticuladas obtidas por polimerizao em molde, foram resisten-

tes solubilizao mesmo em pH em torno de 3. As medidas de potencial zeta das partculas
antes do processo de reticulao mostraram que as partculas tinham suas camadas externas
ricas em PMAA.
A albumina bovina srica foi adsorvida nas partculas de CS/PMAA reticuladas quando
a albumina estava carregada tanto positivamente como prximo de seu ponto isoeltrico. A
adsoro ocorreu independente das partculas de CS/PMAA serem carregadas negativamente
ou positivamente, mostrando a importncia das interaes no-eletrostticas no processo de
adsoro da albumina nessas partculas. O aumento na quantidade de PMAA nas partculas,
que favoreceu a ocorrncia de estruturas em forma de escova nelas, tambm favoreceu a
adsoro da albumina. A adsoro diminuiu com o aumento da concentrao de albumina
como resultado da existncia de espcies polivalentes carregadas negativamente na fase con-
tnua e/ou da ocorrncia de floculao por depleo.
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96

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Universidade Federal do Rio Grande do Norte

Obteno de disperses de complexos polieletrolticos base de

Cludio Lopes de Vasconcelos

Tese realizada sob a orientao do Prof. Dr. Jos

Vasconcelos, Cludio Lopes de.

Orientador : Jos Lus Cardozo Fonseca.

Tese (Doutorado) Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Departamento

1. Quitosana Tese. 2. Poli(cido metacrlico) Tese. 3. Complexo polieletroltico

RN/UF/BCZM CDU 547.458(043.2)

O RIENTADOR: Prof. Dr. Jos Lus Cardozo Fonseca.

P RESIDENTE: Prof. Dr. Jos Lus Cardozo Fonseca (DQ/UFRN)

Prof.a Dra. Mrcia Rodrigues Pereira (DQ/UFRN)

Prof.a Dra. Nedja Suely Fernandes (DQ/UFRN)

Prof. Dr. Francisco Arnaldo Viana (DQ/UERN)

Prof. Dr. Emanuel Alves de Souza (CEFET-Imperatriz/MA)

COM A DESCRIO ABAIXO :

1. C. L. de Vasconcelos, P. M. Bezerril, D. E. S. dos Santos, T. N. C. Dantas, M. R.

2. C. L. de Vasconcelos, P. M. Bezerril, T. N. C. Dantas, M. R. Pereira, J. L. C. Fonseca.

Dirijo o meu reconhecimento

Aos meus pais que sempre me apoiaram, mesmo distncia;

minha esposa pelo apoio e conforto, sempre presentes;

Aos funcionrios do Departamento de Qumica;

Ao Instituto Multidisciplinar de Materiais Polimricos (IMMP), Ministrio da Cincia

Disperses formadas a partir de complexos polieletrolticos de quitosana e de poli(cido me-

Palavras-chave: quitosana, poli(cido metacrlico), complexo polieletroltico, massa molar,

Dispersions composed of polyelectrolyte complexes based on chitosan and poly(methacrylic

Key words: chitosan, poly(methacrylic acid), polyelectrolyte complex, molecular weight,

KM coeficiente de equilbrio de adsoro;

4.1 Viscosidade intrnseca, [], e k para o PMAA obtido a partir de diferentes

2.1 Representao esquemtica da reao de polimerizao em molde tipo I. . . 32

3.1 Estrutura qumica da quitosana (a) e do poli(cido metacrlico) (b). . . . . 39

quitosana e o alginato. Eles observaram que no houve dependncia da composio qumica

microscopia de fora atmica (AFM)21 e microscopia de fluorescncia de refleco interna

Os complexos interpolimricos so formados a partir da associao de duas ou mais macro-

1. Estereocomplexos formados por foras de van der Waals;

2. Complexos polieletrolticos, que so o resultado da reticulao inica entre dois poli-

3. Complexos formados por ligaes de hidrognio;

Portanto, os complexos macromoleculares de diferentes polmeros, neutros ou eletrostatica-

principalmente na complexao de biopolmeros tais como protenas, polissacardeos e ci-

A quitosana tem sido ao longo de mais de uma dcada um polieletrlito extensivamente

2.2 Complexos polieletrolticos entre polmeros sintticos e

A formao de complexos polimricos de protenas com polieletrlitos sintticos tem a fina-

2.3 Partculas coloidais base de quitosana

zeta dessas nanopartculas puderam ser convenientemente modulados variando-se a razo

2.4 Propriedades mucoadesivas das partculas base de

quitosana e dos poliacrilatos

As propriedades mucoadesivas da quitosana foram primeiramente reportadas na literatura

Junginger et al.90 mostraram que o glutamato de quitosana e o carbomer foram capazes de

A polimerizao em molde93, 94 foi desenvolvida baseada em processos biolgicos como a

onde -T- significa um stio do molde. A constante de equilbrio de adsoro, KM , depende

centemente. Quando KM = 0 (tipo II), as macromolculas do molde esto completamente

1. A adsoro no pode ir alm do recobrimento com uma monocamada;

2. Todos os stios de adsoro so equivalentes uns aos outros e a superfcie uniforme

Os complexos de quitosana/poli(cido metacrlico), CS/PMAA, obtidos pelo mtodo de po-

livres de oxignio e a inativao de vrios metablitos lipoflicos txicos, como a bilirru-

pactada, o que resultaria em uma mnima repulso intermolecular e, conseqentemente, em

3.2 Polimerizao em soluo aquosa

1. A quantidade de iniciador usado (em termos de porcentagem em massa de MAA) foi

red = [] + k []2 c (3.1)

3.3 Preparao das partculas de CS/PMAA pelo mtodo

As partculas de CS/PMAA foram obtidas a partir da quitosana carregada positivamente e

onde Ci a concentrao do on i a zi a sua valncia. Para o clculo da fora inica, os

3.4 Preparao dos complexos de CS/PMAA via polimeri-