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AO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO

IDENTIFICACIN DE
PHYTOPHTHORA
CINNAMOMI
(OOMYCETES)

TRABAJO PRACTICO ENCARGADO

- ASIGNATURA : FITOPATOLOGA GENERAL.


- DOCENTE : ING. JUAN L. TEJADA HINOJOZA
- ESTUDIANTE : MAVILA PEA, DAVID.

UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA


FACULTAD DE AGRONOMA V CICLO A
ICA JUNIO DE 2017
FITOPATOLOGA GENERAL FACULTAD DE AGRONOMIA JUNIO DE 2017

I. PREMBULO

Anualmente son considerables los gastos econmicos que se producen a


escala internacional por concepto de prdidas en diversos cultivos debido al ataque de
diferentes plagas y enfermedades, as como tambin por el uso de productos qumicos
destinados a prevenirlas y controlarlas.

Es importante resaltar el papel que ocupan las enfermedades fungosas dentro


del conjunto de afecciones que producen daos en las plantaciones, debido
fundamentalmente a su diversidad y a lo difcil que resulta su control.

Un problema fitosanitario bien reconocido lo constituyen las enfermedades


causadas por los hongos del gnero Phytophthora, entre las cuales se destacan: en los
ctricos, la podredumbre del cuello de la raz y parte basal del tallo, la gomosis y el
aguado o podredumbre marrn de los frutos, producidas fundamentalmente por P.
citrophthora y P. parasitica; en el aguacatero o palto, la pudricin de las races
causada por P. cinnamomi y el cncer del tronco producido al menos por tres especies
de Phytophthora (P. cinnamomi, P. heveae y P. citricola); P. palmivora es la causa de la
pudricin de las yemas en el cocotero, en el mango han sido reportadas dos especies de
Phytophthora como agentes causales de enfermedades, como es el caso de P. heveae
(India) y P. palmivora (Ivory Coast), siendo tambin esta ltima la responsable de
considerables daos en el cultivo de la papaya, en varias reas tropicales (Hawaii,
Australia, Costa Rica y Mxico) conjuntamente con P. cinnamomi (reportada en Per).

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II. INTRODUCCIN

Phytophthora es referido algunas veces como un organismo fngico pero


est clasificado entre los chromistas en el grupo denominado Oomicetes. Este es un
buen ejemplo de la evolucin convergente: Phytophthora es morfolgicamente muy
parecido a los hongos verdaderos (Fungi) aunque su evolucin biolgica es diferente. En
contraste con los hongos verdaderos, los Oomicetes estn ms relacionados con las
plantas que con los animales. Mientras las paredes celulares de los hongos estn
principalmente compuestas de quitina, las paredes celulares de los Oomicetes lo estn
de celulosa. Los niveles de ploida y los ciclos bioqumicos tambin son distintos entre
estos dos grupos.

Phytophthora cinnamoni es un oomicete que produce una fitopatologa


(micosis) llamada tinta del castao. Vive en el suelo nutrindose gracias a materias en
descomposicin, e inicia su destruccin por las races ms pequeas, avanzando de
forma centrpeta con el fin de destruir el ncleo del rbol y su sistema conductor. Est
incluido en la lista 100 de las especies exticas invasoras ms dainas del mundo1 de la
Unin Internacional para la Conservacin de la Naturaleza.

"Infeccin de Phytophthora cinnamoni" Este dao de Micosis radicular


frondosa, Comienza con el dao de las races absorbentes(secundarias), causando su
pudricin. Mediante las zoosporas invaden las races estructurales (primarias) y a partir
de aqu se expande al tallo mediante el micelio.

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Numerosos han sido las investigaciones encaminadas al estudio de las


caractersticas de estas especies, su morfologa y fisiologa, su ubicacin taxonmica, su
epidemiologa y medidas de control y sin embargo actualmente los hongos del gnero
Phytophthora continan siendo un problema fitosanitario en muchos de los cultivos
tropicales anteriormente mencionados.

Lo anteriormente expuesto justifica nuestro inters en desarrollar esta revisin


bibliogrfica la cual tiene el objetivo de resumir los antecedentes existentes en la
investigacin de estos patgenos y las enfermedades que provocan en algunos cultivos,
sentando las bases que nos permitan proyectar investigaciones futuras, con el objetivo
ampliar el conocimiento alcanzado sobre los mismos, as como el adecuado control y
manejo de las enfermedades que provocan, y la posterior aplicacin de los estudios que
se realicen para fortalecer la agroindustria.

Foto 1. Phytophthora cinnamomi Rands

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III. OBJETIVOS

- Aislar e identificar a la Phytophthora cinnamomi Rands a partir de


muestras radiculares del cultivo de palto (Persea americana var. Hass)

- Reconocer y diferenciar cada una de las estructuras morfolgicas y


reproductivas que presenta el gnero phytophthora, as como su
posterior estudio y entendimiento.

- Desarrollar habilidades analticas y experimentales mediante la


observacin y el desarrollo del oomiceto asignado, siempre bajo la
supervisin del ingeniero encargado del rea de fitopatologa general.

- Reforzar la capacidad de explicar cientficamente cada uno de los


procesos desarrollados en la prctica de laboratorio.

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IV. ANTECEDENTES

El gnero Phytophthora (del griego Phyton: planta; phthora: destructor) fue


creado por de Bary en 1876 con P. infestans de Bary como especie tipo. Este
investigador reconoci a dicho hongo como causante del blight tardo en la patata, en
Europa (1840), previamente identificado como Botrytis infestans Montagne y luego como
Peronospora infestans.

Los primeros reportes de la presencia de Phytophthora fueron dados a


conocer por Cook y Horne en 1908, quienes la observaron en ciertos citricos, que fue
sealado como muy susceptible. Posteriormente en 1915, Fawcett dio a conocer la
presencia de Phytophthora citrophthora, sobre tangelo y toronja. En 1918 Jonhston y
Bruner confirmaron la presencia de P. citrophthora y localizaron, adems, Phytophthora
parasitica sobre plantas citricas afectadas por la gomosis.

Cook, en 1939 defini a P. parasitica como el agente causal de la pudricin


del pie y la gomosis en las plantaciones citrcolas del pas. Sin embargo, no fue hasta
1975 que Rodrguez y Cabrera mostraron la amplia distribucin de Phytophthora,
afectando distintas especies y variedades de ctricos en las cuales provocaba lesiones de
gomosis en el tronco, y pudricin del pie y las races, sin observar ataque a los frutos.

Por otro lado, Phytophthora infestans fue el agente causante del tizn
tardo de la patata que provoc la gran hambruna de Irlanda entre 1845 y 1849 y que
origin la masiva emigracin de irlandeses a Estados Unidos. Las enfermedades en las
plantas originadas por este gnero son difciles de controlar qumicamente, por eso como
estrategia contra ellas se est extendiendo el cultivo de variedades resistentes.

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V. MARCO TERICO

5.1. CLASIFICACIN TAXONOMICA

- Reino: Stramenopila
- Phylum: Oomycota
- Clase: Oomycetes
- Orden: Peronosporales
- Familia: Pythiaceae
- Gnero: Phytophthora
- Especie: P. cinnamomi Rands

5.2. BIOLOGA
Las Phytophthora se pueden reproducir sexual o asexualmente. Las
oosporas son formaciones reproductivas del tipo sexual (Foto 3). En muchas especies,
las estructuras sexuales nunca han sido observadas o lo han sido slo en
emparejamientos de laboratorio. Durante el acoplamiento, los anteridios introducen los
gametos en la oogonia, ya sea por la introduccin de la oogonia en el anteridio (anfigina)
o por el acercamiento del anteridio a la mitad proximal (inferior) de la oogonia (paragina) y
la unin produce oosporas.

Los rganos de reproduccin asexual comprenden los esporangios,


zoosporas y clamidosporas (Foto 3). Las clamidosporas son generalmente esfricas y
pigmentadas y pueden tener una pared celular gruesa, que acta como una estructura de
la supervivencia. Los esporangios pueden permanecer en las hifas (no caducos) o ser
propagados fcilmente por el viento o agua (caducous), actuando como estructuras de
dispersin. Los esporangios tambin pueden liberar zoosporas, que presentan dos
flagelos disimilares que usan para nadar hacia una planta husped.

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5.3. CICLO VITAL


Phytophthora cinnamomi vive en el suelo y en los tejidos vegetales, puede
tomar diferentes formas y puede moverse en el agua. Durante los perodos de
condiciones ambientales duras, los organismos son clamidosporas latentes. Cuando las
condiciones ambientales son adecuadas, las clamidosporas germinan, produciendo
micelios (o hifas) y esporangios. Las Zoosporas necesitan agua para nadar a travs del
suelo, por lo tanto la infeccin a las plantas mediante su introduccin a travs de la punta
de la raz es ms probable en suelos hmedos. El Micelio crece a lo largo de la raz
absorbiendo los hidratos de carbono y nutrientes provocando la destruccin de los tejidos
de la raz, "descomponindola" e impidiendo la absorcin de agua y nutrientes. Los
esporangios y las clamidosporas se forman en el micelio de la raz infectada, y el ciclo de
infeccin sigue a la planta siguiente.

En las especies homotlicas (autofrtiles), las estructuras sexuales se


producen en un nico cultivo. En las especies heteroticas, las cepas de apareamiento se
designan como A1 y A2 (Foto 2).

Foto 2. Ciclo vital de Phytophthora

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Foto 3. Formaciones reproductivas en Phytophthora: A: Esporangio. B: Zoospora.


C: Clamidospora. D: Oospora.

5.4. MORFOLOGA GENERAL DE LAS ESPECIES DE PYTHOPHTHORA.

5.4.1. Micelio.
Todas las especies del gnero poseen un micelio hialino, continuo, de paredes
paralelas o irregularmente calibrado, donde pueden observarse abundantes gotas
oleaginosas. El micelio es cenoctico, observndose solo raramente la presencia de
algunos tabiques que normalmente se encuentran separando las partes viejas
carentes de protoplasma. Existen algunas especies en las cuales, bajo ciertas
condiciones de cultivo, el micelio se presenta toruloso, con protuberancias y
vesculas como por ejemplo en P. cinnamomi, P. cactorum y P. cryptogea.

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En los medios de cultivo el micelio se presenta areo, el cual puede ser


marcadamente radiado o ligeramente estrellado, presentndose los bordes de la colonia
redondeados o sinuosos y sumergido en el medio siendo precisamente en este ltimo en
el que pueden diferenciarse las protuberancias y engrosamientos, ms o menos notable.
El micelio es capaz de vivir de forma saprfita sobre las partculas de materia orgnica
del suelo en ausencia del husped.

Es importante sealar que en el cultivo in vitro se pueden originar variaciones


del aspecto del micelio en algn sector de la colonia, las cuales pueden ser relevantes
tanto macroscpica como microscpicamente en cuanto a la morfologa, as como desde
el punto de vista fisiolgico y parasitario, debido a la posibilidad de producirse nuevas
razas ms virulentas.

5.4.2. REPRODUCCIN

Las especies del gnero Phytophthora presentan dos tipos de reproduccin: asexual (con
la formacin de clamidosporas y esporangios, que contienen las zoosporas) y sexual
(mediante la formacin de oosporas).

- Reproduccin asexual.
El esporangiforo no se diferencia normalmente de las hifas, aunque en algunas
ocasiones este puede ser ms ancho o delgado que stas y puede presentar
hinchamientos. La presencia de esporangios es comn para todas las especies del
gnero, son incoloros o de color amarillo tenue y de manera general se insertan
terminalmente en el esporangiforo, aunque tambin pueden estar intercalados. El
esporangio muchas veces presenta vacuolas y al microscopio se observa un aspecto
granuloso en su interior.

Existen factores que afectan la produccin y el desarrollo de los esporangios como son:
la humedad, la tensin de oxgeno, la luz, la temperatura y la nutricin. Las zoosporas se
forman dentro del esporangio, para lo cual es necesaria la presencia de agua libre.

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Las especies de este gnero presentan adems clamidosporas, las cuales constituyen
un rgano de conservacin y supervivencia. Generalmente son de forma redondeada con
una pared bien definida (ms de 2 micras de espesor), siendo comnmente intercalares
aunque tambin pueden encontrarse en el extremo terminal de la hifa. Al principio las
clamidosporas son hialinas, tornndose de un color amarillo o ligeramente marrn con la
edad. Es importante sealar que no se forman en todas las especies, por lo cual su
presencia es importante para la taxonoma de las mismas.

- Reproduccin sexual.
Oogonio (rgano sexual femenino): Es de forma esfrica o ligeramente ahusada,
usualmente se encuentra en el pice de una hifa, aunque tambin puede aparecer
intercalado, separado del resto de la hifa por un grueso tabique. En cultivos jvenes es
hialino pero posteriormente, con el envejecimiento, se torna amarillo o ligeramente
marrn. En la mayora de las especies es suave y puede presentar ligeras protuberancias

Anteridio (rgano sexual masculino): Presenta una forma variable, puede ser esfrico,
oval, en forma de clavo o cilndrico. Observndose de manera habitual solitario, hialino y
con una pared externa delgada. Su disposicin respecto al oogonio puede ser anfgino o
paragino, o ambas a la vez, siendo importante tener en cuenta esta disposicin para
realizar la clasificacin taxonmica de las especies.

Oospora: Siempre se presenta de manera individual, ocupando relativamente toda la


cavidad del oogonio. Es de forma esfrica, lisa o moderadamente verrugosa, y su
coloracin puede ser hialina o ligeramente amarillo oscuro. El medio de cultivo ejerce una
influencia considerable en la formacin de la oospora, segn Grente (1961), los medios
naturales ricos, tales como el maz y la avena, son los ms favorables.

Dentro de las especies heterotlicas se encuentran: - P.cinnamomi


- P. palmivora
- P. citrophthora
- P. parasitica
- P. capsici
- P. infestan

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Foto 4: Ejemplo con SAPROLEGNIA: 1. Desarrollo de gametangios, 2. Contacto


gametangial, 3. Formacin de tubos de fecundacin, 4. Desarollo de osporas. 5. Anteridio,
6. Oogonio, 7. Tubo de conjugacin, 8. Oosferas, 9. Ospora.

5.5. SNTOMAS DE LAS ENFERMEDADES PROVOCADAS POR Phytophthora spp


EN EL CULTIVO DE PALTO (Persea americana)

Phytophthota cinnamomi fue descrito por primera vez en 1922 por Rands,
en plantas de canela y desde entonces ha sido encontrado aproximadamente en 70
pases de las regiones tropicales y subtropicales, causando enfermedades en diferentes
cultivos. La incedencia de este patgeno sobre el palto se describi por primera vez en
1927, en Puerto Rico, y actualmente podemos encontrarlo como agente causal de la
pudricin de las races del palto en casi todas las reas del mundo donde se practica este
cultivo (por ejemplo: Estados Unidos, Mxico, Amrica Central y Amrica del Sur, el
Caribe, Australia, Nueva Zelandia, frica, Israel, Espaa, Marruecos, etc.).

La pudricin de las races por P. cinnamomi provoca un declinamiento


progresivo del rbol, en el cual se observan hojas ms pequeas que lo normal,
usualmente de color verde plido o amarillentas y a menudo marchitas. Las ramas
mueren regresivamente producto del avance de la enfermedad y los frutos son de corteza
brillante.

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Como consecuencia de esta enfermedad el rbol muestra un aspecto general


de marchitez y la copa del mismo se va desfoliando, llegando a secarse completamente
en estados avanzados de la enfermedad. Como resultado la fructificacin va decayendo,
aunque a veces se puede producir una fructificacin excesiva, con frutos de pequeo
tamao que no llegan a engordar. Producto del ataque del hongo las races alimenticias
(o races absorbentes) mueren, observndose ennegrecidas y quebradizas, siendo
posible no encontrarlas en estados avanzados de la infeccin, sin embargo la infeccin
raramente se extiende hacia las races principales.

Esta enfermedad se presenta mayormente en los suelos con un drenaje


deficiente, siendo la presencia del hongo y el exceso de humedad los dos factores que
potencian el rpido desarrollo de la enfermedad. En el caso de la pudricin de las races
del palto las zoosporas son atradas por las races mediante un proceso de quimiotctico,
luego germinan y penetran las races inicindose la pudricin de las mismas.

5.6. AISLAMIENTO DE AGENTES FITOPATGENOS

La mayora de las enfermedades de las plantas se diagnostican al


observarlas a simple vista o mediante al microscopio, lo cual hace innecesario el
aislamiento del patgeno. Sin embargo, hay muchas enfermedades de diverso ndole en
las que es imposible identificar al patgeno que ya se encuentra mezclado con uno o ms
contaminantes, porque an no ha producido sus cuerpos fructferos caractersticos y
esporas, debido a que una misma enfermedad puede deberse ya sea a uno o a varios
patgenos morfolgicamente semejantes los cuales deben aislarse y estudiarse.

Como es habitual, los patgenos de enfermedades desconocidas deben


aislarse de los tejidos enfermos de una planta a fin de que se pueda llevar a cabo un
estudio de sus caractersticas, hbitos, etc.

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VI. RESUMEN

En la estructura de los hongos patgenos, las diversas formas que


desarrollan: Estructuras vegetativas, propagativas, reproductivas y de conservacin,
todos estos datos entran en juego cuando se quiere clasificar a los diferentes agentes
fitopatgenos. Para que se logre observar las diferentes estructuras que se mencionaron
anteriormente es necesario en algunas ocasiones y en algunos tipos de hongos
fitopatgenos en especial que se necesita de poder aislarlos para determinar el agente
causal. El aislamiento consiste en el proceso de separacin de microorganismos a partir
de su sustrato natural (plantas, hojas, tubrculos, tallo races o suelo) para hacerlas
crecer en un medio de cultivo artificial (Por ejemplo medio PDA). El aislamiento y cultivo
persigue diversos fines, el ms comn en un laboratorio de fitopatologa es para
diagnosticar la causa de una enfermedad desconocida.

LA TRISTEZA DEL PATO CAUSADA POR EL HONGO P. CINNAMOMI ES EL


PRINCIPAL PROBLEMA FITOSANITARIO DE ESTE FRUTAL EN NUESTRO PAS.

Este hongo provoca pudricin de races que origina decaimiento progresivo


del rbol que se manifiesta con la presencia de hojas pequeas, follaje verde amarillento,
defoliacin, necrosis, rbol semitransparente, frutos pequeos y con golpe de sol y
muerte de raicillas hasta llegar a la muerte de la planta con infecciones severas. La
infeccin provocada por este hongo se ve favorecida con el exceso de humedad en el
suelo y la presencia de heridas en las races lo que significa la entrada para ciertos
agentes infecciosos.

Phythopthora cinnamomi es un habitante comn del suelo y se caracteriza por


producir esporangios y esporas flageladas o mviles que reciben el nombre de zoosporas
y micelio con hinchamientos hifales.

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VII. MATERIALES Y METODOS

- Material Vegetal enfermo. Los primeros sntomas de


la enfermedad en la planta incluyen marchitamiento,
amarillamiento, sequedad del follaje y el oscurecimiento del color
de la raz. La infeccin conduce a menudo a la muerte de la
planta, especialmente en verano, cuando las plantas pueden
secarse. Para su estudio se extrajo muestras radiculares de un RAIZ
rbol de palto con los sntomas anteriormente mencionados. INFECTADA

- Una manzana. La Granny Smith o manzana verde es


una variedad de manzana creada artificialmente, proveniente
de la hibridacin entre las especies Malus domestica y M.
sylvestris. Pero en lo que respecta al medio de cultivo para
Phytophthora cinnamomi, este es el componente principal
MANZANA para dicho mtodo. En cuyo interior se depositara el material
VERDE vegetal enfermo para su posterior manipulacin.

- Etanol. Este compuesto qumico, conocido tambin como


alcohol etlico, es un alcohol que se presenta en condiciones
normales de presin y temperatura como un lquido incoloro e
inflamable con un punto de ebullicin de 78,4 C. usado
comnmente como agente desinfectante. Su principal forma
de accin antimicrobiana, es mediante la desnaturalizacin de
ALCOHOL
las protenas, permitiendo la ruptura de membranas. Tiene una
potente actividad antifngica, incluyendo levaduras.

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- Placas Petri. Estos materiales por su planicidad y


transparencia facilitan la observacin visual de los resultados y
el recuento de colonias. Aptas para recibir esterilizaciones
hmedas o secas sin opacarse o romperse, adems de no ser
afectadas por los factores mecnicos y/o qumicos a los cuales
son comnmente sometidas en los laboratorios. Estas se PLACAS
utilizan particularmente para examinar el comportamiento de
PETRI
diversos medios de cultivos de microorganismos.

- Papel absorbente. Es un tipo de papel que se utiliza en


labores de secado y limpieza. Este tipo de papel tiene casi las
mismas funciones que las toallas convencionales, tales como
secar las manos, limpiar ventanas, quitar el polvo y absorber los
PAPEL lquidos derramados, entre otros. Y en particular usamos este
TOALLA material para mantener asptico el lugar de trabajo y en el secado
al momento de desinfeccin de los dems instrumentos de laboratorio.

- Bistur. Instrumento quirrgico para realizar incisiones


en los tejidos blandos; consiste en un pequeo cuchillo de hoja
muy afilada, larga y estrecha; actualmente el ms corriente es
de hoja desechable. Tambin llamado lanceta, es un
instrumento en forma de cuchillo pequeo, de hoja fina
y puntiaguda. Este material se utiliz al momento de cortar en
pequeos trozos la muestra de raz infectada. BISTUR

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- Agujas de diseccin. Se usan para abrir con notable


facilidad aquellas partes de los tejidos (animales o vegetales). Las
Agujas de Diseccin estn constituidas por una punta recta o curva,
esta es empleada para la seccin de espcimenes y en disecciones
un manejo de tejidos en el copio en el portaobjetos. De vital
AGUJAS DE importancia en el momento de la extraccin del micelio del hongo
DISECCIN
en el agua destilada hacia el porta objeto para su posterior
observacin.

- Frascos. Se incluyen bajo esta denominacin gran


variedad de modelos que cubren todas las necesidades de
laboratorios analticos, bacteriolgicos, etc. emplendose
tambin para el envasado de diversos productos, que por sus
caractersticas requieren absoluta inalterabilidad. Estos
frascos, si son Pyrex, tienen consistencia qumica, mecnica y
trmica. Como conservacion y proteccion de ciertas
FRASCOS
sustancias para evitar algn problema involuntario durante y
posterior al ensayo son productos indispensables en nuestro laboratorio.

- Agua destilada. Aquella sustancia cuya composicin se


basa en la unidad de molculas de H2O y ha sido purificada o
limpiada mediante destilacin. La potabilizacin del agua se
aplica a aguas no aptas para el consumo humano, las cuales a
veces sufren procesos para matar microorganismos y extraer
AGUA
partculas y metales que puedan ser dainos al organismo y
DESTILADA
transformarlas en agua potable. El agua destilada, al estar libre
de estos compuestos, no requiere de potabilizacin. Elemento que forma parte de los
materiales para realizar un adecuado medio de cultivo.

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- Portaobjetos. Lamina de vidrio rectangular de color


transparente utilizada para almacenar muestras y objetos con el fin
de observarlas bajo el microscopio. Las dimensiones tpicas de un
portaobjeto son de 75mm x 25mm, sin embargo estn pueden
variar dependiendo del tipo de objeto o muestra. Se colocan la
muestra u objetos de mnimo tamao, las cuales van a ser PORTAOBJE-
TOS
observadas en el microscopio.

- Cubreobjetos. Tiene como funcin cubrir la muestra que va


ser observada. Un cubreobjetos es una fina hoja de material
transparente de planta cuadrada (normalmente 20 mm x 20 mm) o
rectangular (de 20 mm x 40 mm habitualmente). Se coloca sobre un
objeto que va a ser observado bajo microscopio, el cual se suele
CUBREOBJE- encontrar sobre un portaobjetos. Ambos deben ser manejados
TOS
cuidadosamente por su delicada y frgil estructura.

- Microscopio. Es un instrumento que permite


observar objetos que son demasiado pequeos para ser
vistos a simple vista. Se trata de un instrumento ptico que
contiene una o varias lentes que permiten obtener una
imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.
Es decir sirve para observar objetos tan pequeos como para
poder examinarlos a simple vista. Con ayuda de este equipo
MICROSCOPIO
se puede lograr observar detalles del oomyceto en estudio,
en este caso (Phytophthora cinnamomi).

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- Pinza de metal. La Pinza de Laboratorio se considera


generalmente como una herramienta de metal dentro de un
laboratorio de fitopatologa. Esta permite sostener firmemente
diferentes objetos mediante el uso de un doble brazo o tenaza,
que aprietan el material en estudio pudindose controlar
manualmente. Este instrumento es de utilidad al momento de
PINZAS DE
transportar pequeos materiales o sustancias a cortas METAL
distancias para una cuidadosa manipulacin de este.

- Esmalte/ Sellador. En general los productos cosmticos


de este tipo son compuestos orgnicos con contenido de
nitrocelulosa, tolueno, formaldehdo, entre otros. Para la practica
de laboratorio, esta sustancia tiene por objeto sellar nuestra
preparacin protegiendo as la muestra depositada en el porta
ESMALTE - objetos y por debajo del cubre objetos, adheriendo ambos para
SELLADOR un mejor control del montaje y su posterior almacenamiento.

- Lactofenol. Es una tincin simple y como tal est


basada en la afinidad del colorante por componentes de las
clulas, en este caso por las estructuras fngicas. Aunque
existen otros medios de montaje, este es uno de los ms usados
por su fcil preparacin y alta eficiencia, adems tambin
funciona como solucin fijadora y restauradora de la turgencia
LACTOFENOL
del material, con una sola gota por muestra es suficiente.

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METODOLOGA
Las muestras radiculares se seleccionaron de un campo de cultivo de palto
ubicados en la provincia de Chincha - Per, en donde se seleccionaron rboles de palto
con sntomas caractersticos de ataque de Phytophthora cinnamomi Rands. As mismo
al momento de la recoleccin se evaluaron los factores biticos y abiticos,
caractersticas de la vegetacin y nmero de aislamiento.

Foto 6. rbol de palto con sntoma de muerte descendente, defoliacin y


amarillamiento en algunas hojas de donde obtuvimos nuestra muestra.

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Foto 7. Material radicular extrado del palto, despus con ayuda del bistur se cortaron
pequeos pedazos que permaneceran en el medio de cultivo.

Del Aislamiento: Las muestras de las races colectadas fueron lavadas con agua
destilada estril, se realizaron cortes de 0.5 cm3 luego se sometieron a desinfeccin
superficial con etanol alcohol (70%) por 30s, seguido de un lavado en agua destilada
estril por 30s, despus se sumergieron en hipoclorito de sodio cuya disolucin en agua
es conocida como Leja (3%) por 30s y por ltimo se lavan con agua destilada estril
por 30s. De las muestras desinfestadas se cortaron trozos pequeos (1mm3) y se
sembraron en el medio de cultivo de la manzana para phytophthora sp.

Foto 8. Trozos de manzana con micelio visible, despus de unos das que permaneci en
contacto con la raz infectada.

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Foto 9. Vista inferior del envase, cuya sustancia blanquecina adherida a la manzana ser
observada en el microscopio

Finalmente despus de tener nuestro montaje listo y preparado se procedi a


la observacin en el microscopio (Foto 10). Todos los miembros del grupo trabajamos
individualmente en la bsqueda de nuestro oomyceto encargado encontrando dificultoso
el adecuado enfoque del microscopio, pero con la ayuda del ingeniero, compaeros de
ciclos superiores y junto a nuestra literatura logramos encontrar diferentes estructuras en
cada montaje preparado por c/u de los miembros del grupo de estudio.

Las imgenes capturadas las cuales son requeridas para el correcto


desarrollo de este informe se encuentran en el desarrollo del contenido, especficamente
son 5 las que obligatoriamente debern ser presentan (Foto 6, 7, 8, 9 y 10).

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VIII. RESULTADOS

Aislamiento de Phytophthora cinnamomi Rands de los cultivos de palto,


para su aislamiento las muestras recolectadas fueron evaluadas segn los factores
biticos y abiticos de la zona seleccionada. Las condiciones evaluadas permiten
entender la interaccin y el dao que ocasiona en los cultivos de palto, caractersticas
que se pueden evidenciar de acuerdo a la gravedad de infestacin.

Se ha observado que los agricultores del sector donde obtuvimos el material


vegetal practican el riego por gravedad, Al respecto Fernandez (2002) menciona que la
aplicacin en exceso del agua en el riego y de las lluvias es el factor ms importante en la
diseminacin de la enfermedad en el campo, porque favorece la reproduccin de P.
cinnamomi debido a que producen esporangios y stos liberan zoosporas, tal es as que
el agua es el factor primario y afecta selectivamente la actividad de los microorganismos
por lo menos en cuatro formas:

1) Intercambio de gases (aireacin del suelo),


2) Difusin de solutos,
3) Movilidad de organismos y
4) Energa libre (potencial de agua), la cual determina la disponibilidad
de agua para el crecimiento, nutricin y metabolismo (Cook y Baker,
1983; Grove y Boal, 1991, Fernandez 2002).

Del aislamiento en el medio de cultivo y segn la metodologa referida anteriormente se


pueden observar colonias de color blanco alrededor de cada trozo de manzana que fue
expuesta con la raz infectada anteriormente durante varios das, se observa abundante
micelio algodonoso y crecimiento uniforme o ligeramente petaloide.

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Identificacin de Phytophthora cinnamomi Rands de los cultivos de palto


Variedad Hass.: En lo aislado se observ la formacin de hinchazones hifales en medio
lquido de lactofenol. stas fueron en su mayora esfricas, intercalares y en racimos,
aunque tambin las hubo solitarias y terminales, siendo de mayor tamao y mucho ms
abundantes las producidas por los aislados. Sin embargo todos los aislados obtenidos (1
muestra por integrante, somos 4 integrantes = 4 muestras) se caracterizaron por ser
heterotlicos, con anteridios anfiginos y oosporas plerticas. Adems, los esporangios en
posicin terminal en el esporangiforo, no papilados. La caracterizacin de sus
estructuras vegetativas y de reproduccin fueron realizadas, segn las descripciones de
Waterhouse (1963), Stamps et al. (1990) y Erwin y Ribeiro (1996).

A
C

Foto 10. Se observ: A: Esporangios ovoides con presencia de zoosporas. B: Esporangios


sin zoosporas en su interior. C: Zoosporas. D: Red de hifas.

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IX. DISCUSION

La clasificacin taxonmica de los oomicetos ha sido muy discutida. En un


principio fueron clasificados como una divisin perteneciente al reino Fungi, pero esto ha
cado en desuso. Por ejemplo, sus paredes celulares se componen de celulosa ms bien
que de quitina y no tienen generalmente septacin. Adems, en el estado vegetativo
tienen ncleos diploides, mientras que los hongos los tienen haploides. En la actualidad
Oomycetes se incluye como una clase en el filo Heterokonta o Stramenopila, junto con
las algas pardas y las diatomeas.

Para el control de la enfermedad pueden utilizarse productos fungicidas tales


como el Ridomil (metalaxil) y el Alitte (fosetil Al), sin embargo el tratamiento qumico es
muy costoso. Trabajos previos sobre el uso de patrones resistentes al ataque del hongo
indican que este podra ser el mtodo ms satisfactorio para controlar la pudricin de las
races del palto por Phytophthora cinnamomi.

Es importante tener en cuenta que conociendo la identidad de las especies de


los patgenos, sus poblaciones, su modo de reproduccin y su comportamiento en el
tiempo y en el espacio los fitopatlogos incrementan sus posibilidades de ejercer un
mejor control de los mismos y de predecir su comportamiento en el futuro

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X. CONCLUSIONES

- Se demostr que todas las colonias identificadas pertenecen a P. cinnamomi,


por cuanto son heterotlicos, con anteridios anfiginos y oosporas plerticas,
los esporangios en posicin terminal en el esporangiforo, no papilados.

- En la actualidad han sido notables los adelantos alcanzados en el estudio de


la interaccin parsito-hospedero, para las enfermedades provocadas por
hongos y especficamente para los sistemas Phytophthora-hospedero, todo lo
cual est encaminado a obtener patrones resistentes y medidas ms efectivas
para lograr el control de las enfermedades., basados en un mayor
conocimiento sobre el desarrollo de los mecanismos de defensa en las plantas
y la interaccin con el parsito.

- Estudios realizados en California reportan como relativamente resistentes a los


patrones de palto: Duke 6, Duke 7, G 22, G 6, Huntalis, Barr Duke y Thomas.

- De acuerdo a la historia la bsqueda consiente de resistencia a las


enfermedades causadas por Phytophthora comenz tan pronto como
sucedieron los serios problemas ocurridos en Europa (1845-1846) con la
epidemia provocada por P. infestans en el cultivo de la patata.

- El reconocimiento y uso de los diferentes materiales y equipos de laboratorio


empleados en esta prctica es de gran importancia para el logro de
competencias en el rea de fitopatologa, pues permite a los estudiantes
familiarizarse con el manejo de los mismos.

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XI. LITERATURA CONSULTADA

- AGRIOS, G. N. 1985. Fitopatologa. Mxico, editorial Limusa. 756 p.

- ALVARADO-ROSALES D., SAAVEDRAROMERO L., ALMARAZ-SNCHEZ,


A. 2008. PRIMER REPORTE DE Phytophthora cinnamomi Rands. ASOCIADO
AL ENCINO (Quercus spp.) EN TECOANAPA.

- CADENAS C. (2007) Fitopatgenos que afectan palta Hass y Fuerte en


Luricocha y Huanta UNALM 68(1), 2007 ISSN 0255-0407.

- Fernndez, N.V.J., y Martnez, B.R. 1987. Control qumico de P. cinnamomi


Rands (tristeza del aguacatero) en la regin de Tingambato, Michoacan.
Memorias del XIV Congreso Nacional de Fitopatologa reaslizado en Morelia,
Michoacan, Mexico del 15-17 Julio

- Gallo, LL.L. 1984. Resistencia, patogenicidad y control in vivo e in vitro de


Phytophthora cinnamomi Rands, parasito del aguacate. III Congreso de
Fitopatologa. Consegera de Agricultura y Pesca. Gobierno de Canarias. p-96.

- Gallo, LL.L., Hdez Hdez, J., y Vega, J. S.A. Enfermedades del aguacate
presentes en Canarias con especial referencia a Phytophthora cinnamomi
Rands (Podredumbre de la raz). II Congreso de Fitopatologa. Departamento
de Agricultura y Pesca. Gobierno Vasco. 7 19.

- Judelson, H.S., and Messenger-Routh, B. 1996. Quantitation of P. cinnamomi


in avocado roots using a species- specific DNA probe. Phytopathology (86):
763-768.

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- Laville, E.Y., and Chalandon, A.J. 1081. Control of Phytophthora gummosis in


citrus wiht foliar sprays of Fosetyl Al, a new systemic fungicide. Proc Int Soc
Citriculture: 346- 349.

- M. E. SNCHEZ, S. ANDICOBERRY, A. TRAPERO, 2004. Patogenicidad de


Phytophthora sp. Causantes de podredumbre radical de Quercus ilex ssp.
ballota en viveros forestales, Bol. San. Veg. Plagas, p. 391, 30: 385-401, 2004

- Kortekamp, A. (2005). Growth, occurrence and development of septa in


Plasmopara viticola and other members of the Peronosporaceae using light-
and epifluorescence-microscopy. Mycological research 109 (Pt 5): 640-648.

- RAMREZ J. (2013) Incidencia, diagnstico, comportamiento y alternativas de


manejo de la marchitez del aguacate con nfasis en Phytophthora cinnamomi
Rands.

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XII. ANEXOS

ANEXO. 1: DIFERENTES TIPOS DE ESPORANGIOS DE LAS ESPECIES DEL


GNERO PHYTOPHTHORA

A. Irregular papilado G. Descargando las zoosporas


B. Limoniforme H. Elptico
C. Piriforme I. Ovalado sin papilas
D. Trasovado J. Ovalado con papilas
E. Irregular con dos papilas K. Cuerpo esfrico y pice agudo
F. Globoso L. Mltiple

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ANEXO 2. Diferentes hospederos con su especie de Phytophthora

(A) Azalea infectada de Phytophthora, (B) Boj infectada con Phytophthora


nicotianae, (C) Boj infectada con Phytophthora y (D) Camelia infectada con
Phytophthora cinnamomi

FUENTE: University of Arkansas 2008, Oregon State University 2008.

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ANEXO 3. ESTRUCTURAS MORFOLGICAS DE PHYTOPHTHORA


CINNAMOMI FORMADAS EN AGAR V8

(a-d). Esporangios producidos en agua de estanque no estril; Amadura,


esporangio ovoide no papilar; (B) Esporangio maduro, elipsoide no papilar a
semipapilar; (C, d) La proliferacin anidada interna; E) Cmulo de hinchazn
irregular de las hifas coralloides, algunas formando una densa agregacin; (F)
hinchazn de las hifas corallides irregulares, (g) grupo botryoso de
clamidosporas; (H) Clamidspora; (I-m) Oogona con bases cnicas tpicas,
ligeramente aplastantes a casi pleroticoosporas y anfiginosas, caracterstica de la
anteridia bicelular. Barras de escala = 25 lm

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