TEKNOLOGI PRODUKSI ENZIM Dapat ditanam untuk produksi enzim yg - isi lebih mudah diprediksi dan dapat dikontrol

udah diprediksi dan dapat dikontrol 2. Fermentasi untuk produksi enzim

MIKROBA DAN PROSPEKNYA UNTUK seragam Bahan baku yang dapat diandalkan dari 3. Pemurnian enzim skala besar
DIKEMBANGKAN DI INDONESIA Kelemahan : komposisi konstan lebih mudah diatur. 4. Formulasi enzim untuk dijual
- tergantung cuaca/musim Produksi Enzim Dunia: protease, glukoamilase, 5. Customer penghubung untuk kebutuhan
Enzim - dinding sel keras -amilase dan isomerase glukosa mereka
Enzim adalah protein, yang berperan - ketersediaan tdk konsisten 6. Otoritas pengatur.
sebagai biokatalis. - kualitas terbatas
Enzim berukuran besar, molekul - mengandung senyawa racun dalam 1. Screening/Seleksi mikroba
protein tiga dimensi dengan sisi aktif vakuola a.l fenolik
berdasarkan permukaan Persyaratan :
Hasil panen yang tinggi dalam waktu
Sumber Enzim singkat
1.Tanaman (papain, bromelin, ficin) Enzim ekstraselular lebih efisien tidak
2.Hewan (renin) perlu sel pecah (mahal)
Tidak menghasilkan zat beracun
3.Mikroba Bisa tumbuh di media yang murah
Perkembangbiakan meningkat maka t menurun
Rendemen tinggi maka ekonomis Tingkat Sintesis Enzim (re)
stabil Tingkat sintesis enzim dapat berbeda pada
fase pertumbuhan individu
Enzim Komersial - jika fase eksponensial tertinggi, laju
amilase : Aspergillus oryzae Bacillus subtilis spesifik enzim sesuai dengan laju
pertumbuhan mikroorganisme. Contoh: -
Selulase : Aspergillus sp. Trichoderma reesei amilase dari sistem Bacillus sp.
Glukoamilase : A. niger Rhizopus sp. -inducible system dengan represi
katabolik, sintesis enzim maksimum
Lipase : Aspergillus sp. Rhizopus sp. Candida
sering diamati pada fase diam yang
cylindraceae
dioperasikan dalam "dua tahap cascade"
Protease : Aspergillus niger] A. oryzae Contoh: protease akaline dari
Rhizopus sp. Bacillus sp. Streptomyces sp

Enzim Hewan
Enzim lebih bervariasi dibandingkan
enzim tanaman
Sumber yg baik enzim : lipase, esterase,
protease (rennet, pepsin, tripsin,
khimotripsin)
Enzim yg dihasilkan berbeda, dipengaruhi
oleh tipe hewan, turunan/breed, umur,
kondisi & keadaan hewan sebelum
disembelih
Kelemahan : 2. Metode Fermentasi (SSF & SmF)
- ketersediaan tdk konsisten Pengembangan Enzim Komersial Enzim mikroba komersial pertama
Enzim Tanaman - kualitas terbatas 1. Screening untuk enzim baru dan yang lebih amilase yang dihasilkan oleh Aspergillus
Sumber yg baik untuk protease baik high-yielding strain of mikrobes oryzae pada fermentasi solid-substrat
contoh : Enzim Mikroba menghasilkan enzim secara konstitutif dan (SSF) dengan menggunakan nasi lembab
- bromelain (nenas) Mikroba lebih disukai pada tumbuhan dan hewan mengeluarkannya ke media pertumbuhannya atau dedak gandum.
- papain (pepaya) sebagai sumber enzim karena: (enzim ekstraselular) atau induksi harus Sebagian besar enzim industri adalah
- ficin (figs) - umumnya lebih murah untuk diproduksi. dipercepat dan murah. produk proses batch dengan fermentasi
 terendam (SmF) dan hanya sedikit yang
diproduksi fermentasi terus menerus.
Sebagian besar bioreaktor / fermentator
diaduk reaktor tangki menggunakan
media kompleks dengan biaya rendah
yang tidak terdefinisi. (Media kompleks)
Media Untuk Produksi Enzim :
Mengandung sumber karbon &
energi, nitrogen, mineral dan faktor
pertumbuhan
Tidak menggunakan senyawa yg
menyebabkan represi katabolit
penting pemilihan sumber
karbon, contoh sumber C yg mudah
diasimilasi e.g glukosa diatur dgn
pengumpanan lambat pd fed-batch
culture
Bila yang diproduksi enzim
terinduksi (inducible enzyme), maka
diperlukan induser (induktor),
contoh:
- pati untuk produksi amilse
- urea untuk produksi urease
- xilosa untuk produksi xilosa
isomerase
Cara kultivasi
kultur permukaan (=kultur substrat padat = SSF)
& kultur terendam (=kultur cair = SmF)
Kultur Permukaan (SSF)
- tergolong minor di industri kapang :
Aspergillus, Mucor, Rhizopus
- menggunakan substrat dasar yg
mengandung nutrisi tinggi & partikel kecil
(permukaannya luas), contoh : dedak
gandum, dedak beras & tepung sereal dgn
penambahan garam mineral
- wadah kultivasi : baki, drum berputar
- inokulum : spora kapang
- kandungan air substrat yg rendah dpt
mencegah kontaminasi oleh bakteri
- titik kritis proses : kadar air (Aw), suhu
& kontaminasi
Tray Bioreaktor
Lapisan lapisan tipis tersebar di area
horizontal besar (baki).
Tidak ada aerasi paksa, meski alas
nampan bisa dilubangi dan udara
dipaksakan di sekitar nampan.
Pencampuran, jika ada, adalah dengan
perangkat otomatis sederhana atau
manual.
Kultur Terendam (SmF)
Cara kultivasi umumnya : bioreaktor
STR kapasitas10 000 100 000 L &
curah (kultivasi sinambung
digunakan terbatas, e.g glukosa
isomerase)
Produksi enzim tergantung fase
pertumbuhan mikroba, e.g sistem
enzim terinduksi dgn represi katabolit
disintesis pd fase stasioner cara
kultivasi : two-stage cascade
Faktor yg mempengaruhi produksi
enzim :
* nutrien pd media
* jumlah inokulum & kondisi
fisiologis sel mikroba dlm inokulum
penyegaran & propagasi penting
* parameter operasional : pH, O2,
aerasi & agitasi dll.
Fermentasi Terendam
Keunggulan:
- Pengukuran parameter proses lebih mudah
daripada fermentasi solid-state mudah
dilakukan scaling up
- Bakteri dan sel ragi didistribusikan secara
merata ke seluruh medium.
- Ada kandungan air yang tinggi yang sangat
ideal untuk bakteri. Kekurangan:
- Biaya tinggi karena media mahal
3. Proses Hilir
Melibatkan: pemisahan, pemurnian, stabilisasi
dan pelestarian.
Kestabilan enzim harus ditentukan karena
dapat mempengaruhi waktu, dan operasi
yang digunakan dalam pemrosesan hilir.
Tingkat pemurnian yang diterapkan
sangat bervariasi tergantung pada apakah
enzim tersebut bersifat intraselular atau
ekstraselular, dan pada akhirnya
digunakan.
Metode Pemecahan Dinding Sel Mokroba
1. Metode kimia lisis
Alkali
- Untuk enzim yg tahan thd alkali (NaOH).
kelemahan : dapat menginaktivasi protease
Contoh : L-asparaginase diisolasi dari bakteri
pada pH 11.0-12.5
Enzimatis
-Lisozim mengkatalisis hidrolisis ikatan -1,4-
glikosidik peptidoglikan pada dinding sel
bakteri Gram (+)
- Jarang diterapkan pd skala besar, karena
biayanya mahal
- Contoh : aryl acyl amidase diisolasi dari
Pseudomonas fluorescens
- Enzim lain untuk memecah dinding sel :
selulase, papain dll
Deterjen
- Merusak lapisan lemak pada dinding sel
- Contoh deterjen ionik (SLS/sodium lauril
sulfat), kationik (setildietil ammonium bromida)
atau non-ionik (Tween & Triton)
- Kelemahan : adanya deterjen berpengaruh thp
.pemurnian selanjutnya, e.g presipitasi enzim
dgn garam, diatasi dgn pemurnian khromatografi
pertukaran ion atau ultrafiltrasi
- Aplikasi pada skala besar : Triton X-100 untuk
isolasi kholesterol oksidase dari Nocardia sp.
2. Metode fisik lisis sel
Sonikasi (Sonication)
-Ultrasonik : frekuensi di atas selang
pendengaran manusia (20 kHz)
- Bakteri Gram (-) & bentuk batang lebih sensitif
-Skala lab, untuk skala industri kesulitan dlm
transimisi tenaga ke volume suspensi yg besar &
penghilangan panas
Kejutan Osmotik (Osmotik Shock)
-Metode : pencucian sel dgn larutan bufer untuk
menghilangkan sisa media, lalu diresuspensi dlm
larutan sukrosa 20 % (hipertonik,) sampai
keadaan setimbang, lalu dipindahkan ke dalam
air, maka air dari media akan masuk ke dalam sel
membuat sel pecah, kemudian disentrifugasi
- Contoh : - isolasi kanamisin asetil transferase
dari E. coli.
- isolasi luciferase dr Photobacterium
fisheri
Freezing & Thawing
- Kristal es sbg pemecah sel (volume es > air)
-Proses sederhana & dgn suhu rendah, tetapi
prosesnya lama.
-Banyak mikroba yg tahan dan banyak enzim
menjadi inaktif tidak diaplikasikan secara
ekstensif
Solid Shear
-X-Press : pasta sel beku -200C ditekan melalui
lubang kecil dgn tekanan tinggi sel rusak
akibat gaya geser (shear) dgn bantuan kristal es
-Merupakan cara yg baik untuk pemecahan
dinding sel , tetapi repot untuk operasi rutin
Penggilingan (grinding) atau Agitasi dgn
Abrasif (beads)
-Dyno Mill, efisien memecah dinding sel bakteri
yg sulit dipecah(Streptococcus haemolyticus,
Staphylococcus aureus & Micrococcus
lysodiekticus)
Liquid Shear (High-Pressure Homogenizer)
- Metode utama untuk skala besar
- Cara : suspensi bakteri ditekan melalui orifis
dgn tekanan tinggi, terjadi perubahan tekanan
secara mendadak saat sel melewati outlet,
sehingga sel menjadi pecah (Manton-Gaulin
Homogenizer)
- Digunakan untuk a.l Saccharomyces, E. coli,
Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megatherium
- tidak cocok untuk kapang yang berfilamen,
karena katup (valve) bisa tersumbat
3. Isolasi dan Purifikasi
Penghilangan Sisa Sel (untuk Enzim
Intraseluler)
-Setelah sel dipecah & asam nukleat dihilangkan
(diendapkan dg e.g cetyl trimethyl ammonium
bromide, atau nuklease) tahap selanjutnya
dilakukan penghilangan sisa sel, dilakukan
dengan sentrifugasi atau filtrasi
Sentrifugasi : - Curah (batch) atau sinambung
(skala industri)
Filtrasi : - lendir dapat menutup pori-pori filter,
perlu filter aids (e.g celite, perlite, diatomite etc.)
atau Tangensial/cross Flow Filtration
4. Presipitasi
Kelarutan Protein dipengaruhi oleh :
Konsentrasi garam
pH
Pelarut organik
Suhu
- Suhu media biasanya dipertahankan <
40C untuk meminimumkan penurunan
aktivitas enzim
- Stabilizer e.g dithiothreitol atau
merkaptoetanol dapat ditambahkan saat
ekstraksi untuk mencegah oksidasi gugus
sulfuhidril, sehingga dapat mencegah
kehilangan aktivitas enzim
Presipitasi = penambahan senyawa, sehingga
terjadi pengendapan yg dpt memurnikan enzim
Tujuan : purifikasi & pemekatan .
Caranya :
1. Penambahan Pelarut Organik
- Menurunkan konstanta dielektrik media,
sehingga kelarutan protein menurun,
karena pelarut tak cocok untuk enzim yg
bersifat polar
- Untuk mencegah denaturasi, digunakan
suhu < 00C - Presipitan : metanol, etanol,
isopropanol, aseton Kelemahan : mudah
terbakar, harganya mahal & untuk skala
kecil
2. Penambahan Garam
- Konsentrasi garam yang tinggi akan
menghilangkan mantel air dari koloid
protein , mengurangi kelarutan protein =
salting out
- Proses pemisahan yg sederhana &
murah
- Garam : ammoniumsulfat lebih sering
digunakan
3. Polimer Berbobot Molekul Tinggi
- Polietilen glikol (PEG), penggunaan tdk
luas maka enzim yg telah mengendap
dipisahkan dari supernatan dgn
sentrifugasi/filtrasi dan dimurnikan
Pemurnian Enzim dengan Kromatografi dan
Elektroforesis
Khromatografi
Pemisahan berdasarkan perbedaan interaksi
antara komponen-komponen yang akan
dipisahkan dengan fasa diam dan fasa gerak
dalam kolom kromatografi
a. Khromatografi Pertukaran Ion
- Prinsip : interaksi muatan positif dan negatif
antara protein enzim dengan matriks/resin yang
berada di dalam kolom kromatografi. Protein
akan terikat resin berdasarkan interaksi Bentuk enzim :
elektrostatik 1.Cair : pemekatan dgn evaporasi vakum
- Cocok untuk purifikasi skala besar 2. Padat (tepung, tablet & imobil) : pengeringan
b. Khromatografi Filtrasi Gel secara vakum pd suhu rendah (skala lab) atau
- Pemisahan berdasarkan ukuran molekul spray drying/freeze drying (skala industri)
- Kapasitas terbatas, digunakan pada tahap akhir
pemurnian BIOINSEKTISID MIKROBIAL DARI
- Contoh : * endonuclease restriksi (kolom BACILLUS THURINGIENSIS
Sephacryl)
* fosfatase alkalin (kolom Ultrogel)
c. Khromatografi Interaksi Hidrofobik Bahan aktif terdiri dari kristal
- Pemurnian berdasarkan polaritas protein dan spora yang diproduksi
Pada kondisi kekuatan ion tinggi, dapat oleh Bacillus thuringiensis
mengikat banyak senyawa Digunakan untuk membunuh
- Protein enzim diikat matriks dengan interaksi
serangga yang tidak diinginkan di
hidrofobik . Contoh : matriks phenyl-spharose,
octyl atau phenyl-agarose Enzim a yg teradsorbsi hutan, pertanian, dan perkotaan
pada matriks dapat dielusi a.l dgn eluen (pelarut) Insektisida yang dihasilkan oleh
dengan polaritas/ kekuatan ion tinggi
- Contoh : enzim aryl acyl amidase dari P.
mikroorganisme entomopatogen
fluorescene (kolom phenyl-Spharose, dielusi dgn Dapat dikembangkan oleh
Tris HCl bakteri, virus, jamur atau
d. Khromatografi Afinitas protozoa (Ignoffo dan Anderson,
- Berdasarkan afinitas biologis, terjadi adsorbsi
biospesifik antara komponen-komponen kimia 1979).
dgn matriksnya. Keuntungan bioinsektisida pada
- Ligan (molekul yg memp afinitas spesifik thd umumnya (Behle et al., 1999):
molekul yg akan dimurnikan) dilekatkan pada - Spesifik untuk target serangga
matriks/ penyangga dgn ikatan kovalen &
dimasukkan kolom khromatografi. - Aman dan ramah lingkungan
makromolekul (enzim)yg mempunyai afinitas - Tidak ada residu untuk produk
spesifik dgn ligan yg akan tertangkap pertanian dan tanah
Elektroforesis
Teknik pemisahan komponen atau molekul
bermuatan berdasarkan perbedaan tingkat
migrasi protein pada sebuah medan listrik
Elektroforesis gel ialah elektroforesis yang
menggunakan gel sebagai fase diam untuk
memisahkan molekul-molekul. Kecepatan
pergerakan ini berbeda-beda, tergantung dari
muatan dan berat molekul protein. Objek yang
berberat molekul lebih besar akan lebih lambat
berpindah.
4. Formulasi
Setelah enzim dimurnikan sampai batas
yang diinginkan dan terkonsentrasi, tujuan
utama pabrik adalah mempertahankan
aktivitas.

Sejarah penemuan Bt
Pada tahun 1901, ahli biologi Jepang,
penyakit Shigetane Ishiwatari otooto
(penyakit kolaps mendadak) yang
membunuh populasi ulat ulat berukuran
besar - bakteri Bacillus thuringiensis (Bt)
sebagai penyebab penyakit ini.
Pada tahun 1911, Ernst Berliner
mengisolasi sebuah bakteri yang telah
membunuh ngengat tepung Mediterania
dan menemukan kembali Bt. Dia
menamakannya Bacillus thuringiensis,
setelah kota Jerman, Thuringia, tempat
ngengat itu ditemukan.
Pada tahun 1915, Berliner melaporkan
adanya kristal di dalam Bt, namun
aktivitas kristal ini tidak ditemukan
sampai lama kemudian.
Pada tahun 1920, petani mulai
menggunakan Bt sebagai pestisida.
Pada tahun 1938, Prancis segera mulai
membuat formulasi berbasis spora yang
dikomersialkan yang disebut Sporin
digunakan terutama untuk membunuh
ngengat tepung.
Bacillus thuringiensis
Bacillus thuringiensis (B.t.) adalah bakteri gram
positif, aerobik, bentuk batang. Membentuk
spora elips, yang terkandung dalam sporangia
tanpa lengan, dan kristal tubuh (atau kristal
protein) protein, protein kristal diproduksi
selama sporulasi (pada fase diam)
Keterangan
Forespore; Ol, inklusi ovoid; PC, kristal
parasporal; F, forespore; IM, membran Toksisitas bioinsektisida diukur dengan
dalam; OM, membran luar; PW, dinding bioassay (LC50)
sel primordial, E, exosporium, LC, mantel LC50: konsentrasi bioinsektisida yang
spora lamella; OC, mantel spora luar; C, menyebabkan 50% serangga terbunuh
korteks; IMC, menggabungkan
sitoplasma sel induk; S, spora matang
dalam sporangium yang tidak dilapisi.
(Bechtel dan Bulla et al, 1980).
I. fase, 7 jam AF (filamen aksial)
II. Fase, 7-8 jam FS (forespore septum)
III. Fase, 8-9 jam F (forespore)
IV.- fase VI, 9-12 jam E, LC, OC, C dan
IMC
VII. Fase, setelah 12 jam S dan lyse
sporangium
Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki (Bt.k)
Pathotype Bt.k spesifik untuk Lepidoptera
(Ellar et al., 1986)
Lebih dari 100 spesies Lepidoptera (ulat
dan ngengat sebagai hama hasil pertanian)
(Navon, 1993) Faktor-Faktor yang Mempengaruhi
Toksinnya adalah -endotoksin dengan Toksisitas
bentuk bipiramidal yang dihasilkan
Komposisi toksin protein kristal (molekul
selama sporulasi
terkecil dapat dengan mudah diikat
dengan reseptor epitel usus tengah dan
dimasukkan untuk membuat lubang di
usus tengah)
pH pada serangga usus
tengah,memungkinkan protease di usus
tengah untuk menghidrolisis protein
(toksin pro menjadi toksin)
Strain bakteri

Kelebihan dan Kekurangan Bioinsktisida
dari Bt
Kelebihan :
Aktivitas dengan spektrum luas
Tidak beracun untuk vertebrata termasuk
manusia dan tumbuhan
Mudah diproduksi dalam skala besar
Respon cepat terhadap target serangga
Relatif stabil selama penyimpanan
Tidak ada laporan dalam hal perlawanan
Kekurangan:
Tidak stabil dengan paparan sinar UV
Harus dimakan serangga
Persyaratan untuk mengembangkan bakteri
insektisida
Layak diproduksi secara teknis dan terus
menerus
Tidak beracun bagi serangga manusia,
non target, hewan dan tumbuhan
Efektif untuk menargetkan serangga
state ( Capalbo et al, 2001) (produksi Bt Pasta (cairan) (dengan cara sentrifugasi
tolworthi menggunakan beras sebagai media) atau konsentrasi produk)
Tablet (menggunakan filler sebagai
Media Pertumbuhan Bt coating agent)
Secara umum terdiri dari:
- Sumber karbon, misalnya glukosa, pati, ASAM ARAKIDONAT/ARACHIDONIC
sukrosa, dll DAN ASAM LEMAK LAIN DARI
- Sumber nitrogen misalnya urea, (NH4) 2SO4, MIKROORGANISME
bungkil kedelai, dll
- Mineral berupa trace element (Dulmage dan Asam Arakidonat/Arachidonic
Rhodes, 1971) Adalah asam lemak tak jenuh ganda
Dulmage et al., 1990: asam glutamat, asam (PUFA) yang ada dalam fosfolipid
aspartat dan alanin merangsang produksi (terutama phosphatidylethanolamine,
bioinsektisida. phosphatidylcholine dan
- Asam Nitrogen Organik : termasuk asam phosphatidylinositides) dari selaput sel Mikroorganisme Lain
nukleat tubuh, dan berlimpah di otak, otot, hati. Genetic engineered Yarrowia lipolytica :
- Mineral : untuk pertumbuhan dan produksi Dalam tubuh manusia biasanya berasal dapat memproduksi lebih dari 10% asam
metabolit : K, Mg, P, S, Ca, Zn, Fe, Co, Cu, Mo dari sumber makanan hewani - daging, arakidonat (ARA, asam lemak tak jenuh
dan Mn. telur, susu - atau disintesis dari asam ganda omega.-6) dalam total fraksi
- Oksigen : aerasi (Zamola dan Kajfez (1977) di linoleat. minyak (Paten 7588931)
Dulmage et al. (1990) ) telah mematenkan aerasi Asam lemak esensial yang dibutuhkan Mucor circinelloides (asam gamma
yang terputus-putus oleh kebanyakan mamalia linoleat)
Beberapa mamalia kekurangan Rhizopus sp. (Asam gamma linoleat)
Kondisi Fermentasi Bt
kemampuan atau memiliki kapasitas yang
sangat terbatas untuk mengubah asam
PH : 7 linoleat menjadi asam arakidonat, Perlu
Suhu 28-32oC suplemen. Sumber komersial asam
media pH 6,8-7,2 arakidonat telah diturunkan, dari jamur
Mortierella alpina
agitasi 142-340 rpm
panen pada 48 jam

Langkah-Langkah untuk mengembangkan

bioinsektisida mikrobial
1. Isolasi mikroba
2. Karakterisasi isolat potensial
3. Produksi skala lab
4. Perumusan produk
5. Efikasi pada skala terbatas (keamanan pada
dosis tunggal atau berbagai dosis)
6. Pilot plant scale production
7. Efisiensi pada skala yang lebih luas (uji
keamanan untuk lingkungan dan personil)
8. Produksi skala komersil
Produksi Bioinsektisida dari Bt
Secara komersial dengan fermentasi terendam
Sangat jarang menggunakan penanaman solid
Pentingnya Asam Arkodinat dalam Tubuh
Perbaikan dan pertumbuhan jaringan otot
Produk Bioinsektisida/Formulasi skeletal
Wettable powder : diliofilisasi dengan Salah satu asam lemak paling banyak di
otak (jumlah yang sama dengan asam
laktosa sebagai pengisi
docosahexaenoic DHA)
Produksi ARA dari Mikroba
Fermentasi terendam dan substrat padat
Substrat padat menggunakan dedak padi,
dedak gandum, residu tepung kacang
tanah, dan residu ubi jalar
Langkah Produksi
1) Media kuktur dan kondisi
Mortierella tumbuh pada suhu 20 C
dalam kultur membran yang mengandung
(mg / l): 10 glukosa;5 Ekstrak ragi, dan
20 agar pada pH 6.5.
 Mycelia dipanen dari kultur membran
dan dicampur dengan blender mikro-
Waring untuk suspensi miselium
2) Fermentasi terendam
Media basal terendam mengandung pati
larut (mg / l), 20; Ekstrak ragi Bacto, 5;
KNO3, 10; KH2PO4, 1 dan MgSO4
7H2O, 0,5 pada pH 6.5.
Kaldu diinokulasi dengan suspensi
mycelial 5% (v / v) dan dikocok pada 200
putaran min-1 dan pada suhu 20 C
selama 2 sampai 10 hari. Setiap ml
suspensi miselium mengandung fragmen
mitokondria 1,0-1,5 106.
3) Solid state fermentation
Media mengandung (g) substrat padat (dedak
padi, dedak gandum, residu makan kacang
tanah, residu ubi jalar, atau campuran residu ubi
jalar dan dedak padi) 100; Ekstrak ragi bacto
(Difco, Michigan) 2.5; KNO3 5; KH2PO4 0,5
dan MgSO4 7H2O 0,25.
Faktor-Faktor yang Mempengaruhi
Produksi ARA
Kandungan air awal
pH awal
Suhu inkubasi
Suplemen nitrogen
Suplemen minyak
Proses Hilir
Sel dihomogenisasi untuk memutus
dinding sel sehingga produk bisa
diekstraksi
Ekstraksi dengan butana, asam lemak
kasar diperoleh
Pemurnian asam lemak dengan heksana
dan asam sitrat diikuti pemutihan,
deodorisasi dan filtrasi
Analisis Asam Lemak
Lipid diekstraksi dengan volume
kloroform / metanol 5 kali lipat (2: 1, v /
v) oleh ultrasonator ultrasonik selama 2
jam dan dipekatkan dengan evaporator
berputar pada suhu 50 C.
Residu dilarutkan dalam 1 ml larutan
KOH-metanol 0,5 M, dan dimetilasi
dengan 1 ml 20% (b / v) kompleks BF3-
metanol.
Asam lemak metilat dipisahkan dari
lapisan air dengan menambahkan NaCl
jenuh dan Na2SO4 jenuh, kemudian
dilarutkan dalam n-heksana.
Pembentukan lipid dan produksi asam -
linolenat oleh Mucor circinelloides dan
Rhizopus sp., Ditanam pada minyak sayur
Kultivasi terendam dilakukan di labu
Erlenmeyer 250 mL dengan media 50 mL
yang mengandung minyak 1 - 4% (kelapa
sawit, kanola, minyak kedelai yang telah
digunakan untuk menggoreng, wijen, atau
bunga matahari) atau 1 - 4% karbohidrat
(galaktosa, Maltosa, ekstrak malt,
sorbitol) dan ekstrak ragi 1% sebagai
sumber nitrogen.
Setiap labu diinokulasi dengan 1 ml
suspensi spora yang baru disiapkan.
Untuk M. circinelloides, ekstrak malt juga
digunakan untuk menggantikan maltose
dalam media.
Kultur diaduk secara terus menerus
selama 72 jam pada 150 rpm, pada suhu
25C dan dibiarkan selama 48 jam tanpa
agitasi pada suhu 12C.
Biomassa yang dihasilkan dipisahkan
dengan menggunakan filtrasi vakum di
kertas saring Whatman No. 1. Biomassa
basah ditempatkan pada gelas bejana yang
sudah ditimbang pada suhu 105C selama
48 jam untuk menentukan berat kering.
Setelah bagian dari biomassa yang
dihasilkan disisihkan untuk ekstraksi
asam lemak di kemudian hari; Itu
dikeringkan dengan penyimpanan selama
5 hari dalam oven pada suhu 55C.
Proses Hilir
Sekitar 100 mg miselia digunakan untuk
ekstraksi lipid dengan menggunakan kloroform:
metanol: air (2: 1: 0,8) dan pelarut dihilangkan
dalam atmosfir nitrogen.
MIKROBA BIOPOLIMER
Pullulan
Pullulan merupakan polimer polisakarida yang
terdiri dari unit maltotriosa,
juga dikenal sebagai, -1 4 -; -1 ,6-glukan
Tiga unit glukosa dalam maltotriosa terhubung
oleh -1, 4 glikosidik obligasi, sedangkan unit
maltotriosa berurutan terhubung satu sama lain
oleh -1 obligasi, 6 glikosidik.
Mikroorganisme :
Aureobasidium pullulan
Optimum suhu: 26-28oC, pH 5 -6,5
Sumber A. pullullans isolat :
- Kayu
- Kulit
- Hidrokarbon
- Sintetis
- kertas (kertas, bubur kertas)
- kulit manusia
- cat (cat air)
- tanaman
- produk makanan (gandum, gandum
dan biji kacang, tepung, buah-
buahan dan sayuran, jus buah)
- tanah
- tekstil (kapas)
Properties dan parameter kualitas :
- Larut dalam air, tidak larut dalam
pelarut organik, non higroskopis,
larutan air stabil dan menunjukkan
viskositas relatif rendah
dibandingkan dengan polisakarida
lainnya.
- Ini terurai pada 250-280 C.
Membentuk mudah, termo-stabil,
transparan, elastis, film antistatik,
dengan permeabilitas oksigen yang
sangat rendah (dibandingkan dengan
celofan, polypropylene, polyesther,
polyvinylchloride, dll)
- Moldable, dan spinnable perekat,
baik dan pengikat.
- Tidak beracun, dimakan,
biodegradable dan biokompatibel.
Produksi dan Hilir Proses Pulullan pada
umumnya :
- Submerged fermentasi menggunakan
karbohidrat sebagai media utama,
sumber nitrogen, mineral, suhu 28o
C, agitasi 200 rpm
- Pengolahan pengendapanhilir dari
kaldu fermentasi meliputi:
pemisahan biomassa konsentrasi
pemurnian larutan oleh 2 pelarut -
propanol mengandung polisakarida
pullulan-jenis (produk pemurnian
parsial atau teknik ultrafiltrasi
modern dipakai). sangat dimurnikan
filtrat
Contoh Komposisi Menengah pullulan :
Kompleks Nitrogen menengah
5 g KH2PO4, 1 g NaCl, 0,6 g (NH4) 2SO4, 0,2
g MgSO4 7H2O, 1 gram ekstrak ragi, 0,01 g
FeSO4, 0,01 g dan 0,01 g MnSO4 ZnSO4
dalam gram / liter air
ekstrak malt kaldu: 20 g ekstrak malt, 20 g
glukosa dan pepton 1 g per liter air (ATTC
Menengah 325).
Faktor yang mempengaruhi produksi
pullulan :
- Media komponen
- Strain mikroorganisme
- Karakteristik mikroorganisme:
bentuk phylamentous atau
chlamydospores kurang produktif
daripada ragi atau pigmen bebas
blastospores
- Ragi-seperti sel tidak menghasilkan
pullulan banyak kehadiran pigmen,
dan blastospores non bengkak
berpigmen atau blastospores
berkecambah membantu untuk
memicu elaborasi pullulan
Komersial pullulan produk pullulan
derivatif
- Silang pullulan mikropartikel
- karboksimetil pullulan
- Sulfopropyl pullulan
- pullulan asetat
Silang mikropartikel pullulan?
Silang reaksi antara pullulan dan epiklorohidrin
diikuti oleh pemisahan, pencucian, pengeringan
Aplikasi
- dimakan film untuk kemasan
makanan
- napas penyegar atau produk
kesehatan mulut seperti Listerine
PocketPaks Mint Cool.
- Sebagai tambahan makanan,
diketahui dengan jumlah E E1204
(misalnya dalam kosmetik (krim dan
gel
hydrating)
- film agen di farmasi (menghambat
tablet, kapsul dan mikrokapsul)
- Menjebak warna dan rasa
- Tekstil industri (antistatik, dalam
non-woven)
- Kertas industri (pelapisan,
komposisi)
- Photosensible bahan (emulsi)
- Pertanian (pupuk rilis rendah)
- Metalurgi (foundery cetakan atau
casting)
- Pertambangan (floculant, pengikat).
Gellan Gum
polisakarida larut air yang dihasilkan oleh
bakteri Pseudomonas Elodea
digunakan terutama sebagai agen pembentuk
gel, alternatif untuk agar-agar dalam budaya
mikrobiologi.
MW: 500 000
Pembentukan solusi kental, tidak larut dalam
etanol
Struktur
Unit mengulangi dari polimer adalah
tetrasaccharide yang terdiri dari dua residu D-
glukosa dan satu dari setiap residu L-rhamnosa
dan D-asam glukuronat.
Ulangi tetrasacharide memiliki struktur sebagai
berikut: [D-GLC (1 4) D-GlcA (1 4) D- Sellular) gellan gusi per valorisation menarik
GLC (1 4) L-Rha (1 3)] n?. dariliter dan pengurangan 70% dalam BOD5
Karena jelas dari rumus unit tetrasacharide
terhubung satu sama lain menggunakan (1
3) ikatan glikosidik.
Mikroorganisme
Pseudomonas Elodea = Sphingomonas Elodea
Komposisi dan struktur gusi gellan asli yang
dihasilkan oleh fermentasi komersial identik
dengan polisakarida yang terjadi secara alami
dibentuk oleh Sphingomonas Elodea pada
tanaman varietas Lily pad.
Sphingomonas
- Gram negatif batang, berbentuk,
heterotrofik kemo,
- ketat aerobik bakteri
- mengandung glycosphingolipids
(GSLs) dalam amplop sel mereka,
- biasanya menghasilkan pigmen
kuning-koloni
Sifat gellan gum
- kemampuan untuk menunda dengan
kontribusi viskositas minimal
melalui pembentukan solusi gel
cairan unik berfungsi dengan
struktur gel lemah.
- pengaturan suhu, derajat struktur dan
stabilitas termal.
- Larut dalam air
Biosintesis
- intraseluler pembentukan nukleotida
gula prekursor, UDP-GLC, UDP-
GlcA, dan dTDP-l-Rha.
- pembentukan unit ulangi, dengan
transfer berurutan dari donor gula
untuk pembawa lipid diaktifkan oleh
glycosyltransferases berkomitmen
- gellan polimerisasi
- Ekspor ke luar sel
Produksi dan proses hilir pada umumnya :
dihasilkan oleh fermentasi kultur murni
karbohidrat oleh bakteri Pseudomonas Elodea,
dimurnikan dengan pemulihan dengan alkohol,
dikeringkan, dan digiling.
Fermentasi langsung dari whey keju manis
diencerkan 1:5 dengan air menghasilkan
produksi sekitar 7 g EPS (polisakarida ekstra
Dekstran
awal limbah susu industri dan pengurangan
Direksi.
Faktor yang mempengaruhi produksi gellan
gum :
1. Media komponen
Tetes 112,5 g / L, tryptone 1 g / L, asam
casamino 1 g / L, dinatrium hidrogen ortofosfat
1 g / L dan mangan
diproduksi gellan gusi dari 13,81 g /
Lklorida 0,947 g / L
2. Penambahan nukleotida gula menyediakan
prekursor diaktifkan untukprekursor sintesis
tetrasaccharide yaitu
UDP-glukosa, TDP-rhamnosa dan UDP-
asam glukuronat.
3. pertumbuhan ditingkatkan sel
Penambahan asam amino triptofan
4. 6,5-7pH
5.Agitation rate: 250 rpm menggunakan
impeller pita heliks
6. Tinggi DOT (tekanan oksigen terlarut)
tingkat meningkatkan viskositas dan massa
molekul dari polimer
7. Suhu: 30oC
Pemurnian gellan gum :
Setelah pengendapan alkohol, produk dicuci
berulang kali dengan aseton dan eter, dilarutkan
dalam air deionisasi dan didialisis terhadap air
deionisasi dengan menggunakan tabung dialisis
dengan cut-off massa molekul dari 12 000-14
000.
Setelah cuci darah selama 2-3 hari dengan
empat atau lima perubahan air deionisasi,
larutan diliofilisasi untuk merumuskan bubuk
kering gellan
kromatografi filtrasi gel (GFC) juga dapat
digunakan
Aplikasi :
- Aplikasi dalam makanan: stabilizer,
emulsifier, pengental
- Aplikasi dalam industri farmasi
- Padat budaya media untuk
pertumbuhan mikroorganisme dan
tumbuhan
- Gel elektroforesis dalam penelitian
biologi
- Zat imobilisasi
kompleks, bercabang glukan (polisakarida
terbuat dari banyak molekul glukosa) yang
terdiri dari rantai panjang yang bervariasi
Dekstran pertama kali ditemukan oleh Louis
Pasteur sebagai mikroba dengan produk dalam
anggur
Struktur :
Rantai lurus terdiri dari, -1 6 glikosidik antara
molekul glukosa, sedangkan cabang mulai dari
-1, 4 hubungan (dan dalam beberapa kasus, -
1, 2 dan -1, 3 hubungan juga).
berat molekul berkisar antara 10.000 hingga
150.000 Da Da.
Mikroorganisme
Dekstran disintesis dari sukrosa oleh tertentu
asam laktat bakteri, yang paling terkenal yang
Leuconostoc mesenteroides dan Streptococcus
mutans, L. dextranicum, S. salivarius, S. bovis
mengandung dekstranPlak gigi
Produksi dekstran
Sedang: menggunakan sukrosa sebagai sumber
karbon, contoh:
Sukrosa 150,0 g, 2,5 g Peptone.., Yeast extract
2,5 g, K2HPO4., 5,0 g., NaCl 2,5 g., Dan
ekstrak air gula pemurnian arang 2,0 ml.
Sukrosa 150,0 g, asam kasein hidrolisat 5,0 g..,
Yeast ekstrak 1,0 g., K2HPO4 5,0 g., NaCl 2,0
g., Dan MgSO4 0,022 g.
(Gl-1): sukrosa, 150,0; bacto-pepton, 5,0;
ekstrak ragi, 5,0; K2HPO4, 15,0; MnCl2.H2O,
0,01; NaCl, 0,01; CaCl2, 0,05.
Kondisi : 30 oC, 20 jam
Hilir proses:
Media kultur setelah 20 jam diendapkan
menggunakan volume yang sama etanol dingin,
terguncang keras, disentrifugasi pada 10.000
rpm selama 15 menit dan supernatan dituang.
Langkah ini diulang dua kali.
Dekstran endapan dikeringkan dalam vakum
lebih kalsium klorida pada 30 C. Hasil
dekstran dihitung atas dasar berat kering.
Pemurnian :
- Untuk menghilangkan kotoran,
dekstran diperoleh dari curah hujan
dilarutkan dalam air suling.
Bubur dekstran kembali diendapkan
dengan volume yang sama etanol
dingin. Prosedur ini kembali
melarutkan, curah hujan dan
pencucian diulang tiga kali untuk
menghilangkan kotoran sel.
 Dimurnikan dekstran dikeringkan
dalam vakum lebih kalsium klorida
pada 30 C
Aplikasi keperluan medis
- tetes mata sebagai pelumas
- mengurangi trombosis vaskular.
- Dekstran dalam larutan intravena
memberikan cairan osmotik netral
bahwa sekali dalam tubuh dicerna
oleh sel menjadi glukosa dan air
gratis.
Hal ini juga meningkatkan kadar gula darah.
- pengucilan ukuran matriks kromatografi;
contoh adalah Sephadex.
- manik bentuk aplikasi untuk membantu dalam
bioreaktor (imobilisasi)
- menstabilkan lapisan untuk melindungi
nanopartikel logam dari oksidasi
- membuat microcarriers untuk kultur sel
industri
GUM XANTHAN
Gum xanthan : eksopolisakarida mikrobial yang
diproduksi oleh Xanthomonas campestris dari
bahan berkarbohidrat
Sifat Fisiko Kimia :
1. Heteropolisakarida anionik yang
bercabang
2. Mengandung D-glukosa (2.8 mol),
D-manosa (3.0 mol), D-glukuronat
(2.0 mol), asam asetat dan asam
piruvat
3. Rantai utama mirip kerangka
selulosa (rantai glukosa berikatan
1,4)
4. Rantai sisi mengandung dua unit
manosa dan satu unit asam
glukuronat
5. Asetat dan piruvat berikatan pada
ujung manosa
6. BM : 2-50 x 106 atau 3 x 107 dalton
TURUNAN KIMIA DAN KOPOLIMER
CANGKOKAN GUM XANTHAN
1. Gum Karboksimetil xanthan
2. Gum dietilaminotil xanthan
3. Ester propilenglikol xanthan
4. Gum xanthan sulfat
5. Ikatan silang aldehid gum xanthan
6. Gum deasetil xanthan
7. Gum xanthan - g poli akrilamida
Sampai saat ini tidak ada yang diproduksi
secara komersil
SIFAT-SIFAT GUM XANTHAN :
1. Viskositas tinggi pada konsentrasi
rendah,
2. Kekenyalan semu (pseudoplasticity)
tinggi
3. Mudah larut dalam air panas maupun
dingin
4. Viskositas larutan gum xanthan
stabil terhadap suhu
5. Viskositas larutan gum xanthan
stabil terhadap pH
6. Kelarutan dan kestabilan tinggi pada
asam
7. Unggul dalam daya suspensi karena
yield valuenya tinggi
8. Kesesuaian yang baik dengan
berbagai garam
9. Stabilitas pada proses pelelehan dari
keadaan bekunya (freeze thaw)
10. Kompatibel terhadap beberapa
pelarut seperti methanol, ethanol,
isopropanol dan aseton sampai
konsentrasi 50-60 %. Konsentrasi
pelarut > 60 % akan menyebabkan
gelatinisasi atau pengendapan gum
xanthan
11. Tidak terdegradasi oleh enzim
protease, selulase hemiselulase,
pektinase dan amilase, tetapi dapat
terdegradasi oleh pengoksidasi kuat
seperti peroksida, persulfat dan
hipoklorit
12. Sinergi terhadap gum yang lain
seperti gum guar, dan gum dari biji
locust (locust bean gum) serta
galaktomanan
APLIKASI DALAM INDUSTRI :
1. Industri Petroleum :
a. Sebagai cairan pelicin dalam
pengeboran sumur minyak
b. Sebagai cairan untuk mengikat dan
memisahkan garam-garam dari hasil
pengeboran minyak lepas pantai dari
cairan petroleum yang diinginkan
c. Sebagai cairan pemecah (fracturing
fluid ) berbasis air
d. Untuk mempercepat pengambilan
minyak (oil recovery)
2. Industri Kimia dan lainnya
a. Pakan ternak : sebagai cairan
pelengkap pakan (Liquid feed
supplements)
b. Flowable pesticides
c. Pewarnaan dan pengecatan tekstil
d. Pelapis keramik
e. Pembersih
f. Pensuspensi cairan tinta, cat dan
perekat kertas
3. Industri Pharmasi dan Kosmetika :
a. Stabilizer emulsi cream untuk obat
dan kosmetika
b. Pelarut cream dan lotion
c. Pensuspensi pasta gigi atau larutan
pencuci gigi
4. Industri pangan :
a. Pastry filling
b. Penstabil saus dan kaldu
c. Pengemulsi dressing
d. Pengemulsi dan stabilizer dairy
products
BIOSINTESA
Tahapan biosintesa :
1. Metabolisme substrat karbohidrat
2. Sintesis dan interkonversi nukleotida
gula
3. Pengulangan unit monomer
4. Polimerisasi
Ada 4 jenis enzim yang terlibat :
1. Enzim untuk metabolisme awal
substrat : hexokinase
2. Enzim untuk sintesis dan
interkonversi nukleotida gula (UDP
glucose phosphorylase)
3. Enzim untuk pembentukan
pengulangan unit polimer
(monosakarida) (transferase)
4. Enzim polimerase untuk
pembentukan biopolimer
eksopolisakarida
Bakteri penghasil gum xanthan :
Xanthomonas campestris
1. Gram Negatif
2. Membentuk koloni berlendir
berwarna kuning
3. Diisolasi dari daun/tanaman yang
berpenyakit,misalnya daun kedelai
yang terkena pustule, daun kubis,
tebu, dll
SIFAT RHEOLOGI CAIRAN
FERMENTASI GUM XANTHAN SANGAT
KHAS :
1. Pada penggunaan bioreaktor
berpengaduk akan timbul zona
stagnasi
2. Masalah ini diatasi dengan
penggunaan airlift bioreactor
BEBERAPA MERK GUM XANTHAN
KOMERSIL :
1. Keltrol
2. Kelzan
3. Jungbunzlauer
4. Degussa
5. dll
Prospek Pengembangan di Indonesia :
1. Ketersediaan bahan baku : berbagai
jenis sumber karbon dan nitrogen
2. Ketersediaan sumber isolat
3. Aspek teknis teknologis
(penggunaan teknologi fermentasi)
4. Aspek pasar yang terbuka luas
ANTIBIOTIK
Produksi Antibiotik
Antibiotik adalah bahan kimia yang
diproduksi oleh mikroorganisme pada
konsentrasi rendah yang mampu
menghambat pertumbuhan, atau
membunuh mikroorganisme lainnya.
Ada lebih dari 10.000 antibiotik yang
dikenal, tapi Hanya sekitar 200
dikomersialisasikan. Penisilin adalah
produk komersial penting pertama yang
dihasilkan oleh aerobik dengan fermentasi
terendam.
Beberapa antibiotik mis. Kloramfenikol
awalnya diproduksi dengan fermentasi,
tapi sekarang lebih murah diproduksi
secara kimiawi.
 Antibiotik merupakan metabolit sekunder,
diproduksi di alam dan berfungsi dalam
kelangsungan hidup organisme yang
memproduksinya. Metabolit sekunder
adalah senyawa organik yang tidak
terlibat langsung dalam pertumbuhan,
perkembangan, atau reproduksi
organisme normal. Antibiotik diproduksi
dalam medium kultur selama idiophase
(fase diam) karena penipisan yang
disebabkan oleh satu atau lebih nutrisi
dalam media.
Di antara antibiotik yang ditemukan sejauh ini,
ada 4 kelompok besar yang paling banyak
digunakan di seluruh dunia, yaitu penicillins,
cephalosporins, tetracyclines and erythromycins
Sejarah
Aplikasi Antibiotik
1. Antibiotik sebagai antitumor
Ex : actinomycin, adriamycin, etc
2. Antibiotik untuk patologi tumbuhan
Ex : streptomycin dan polyoxin.
3. Antibiotik sebagai pengawet makanan
Ex : tylocin dan nicin.
4. Antibiotik digunakan sebagai promotor
pertumbuhan hewan dan di bidang
kedokteran hewan
Ex : penicillin dan bacitracin.
5. Antibiotik sebagai alat dalam Biokimia &
Biologi Molekuler
Klasisikasi Antibiotik
Pada tahun 1928, Sir Alexander Fleming,
ahli biologi Skotlandia, mengamati bahwa
Penicillium notatum, memperoleh hadiah
Nobel dalam Fisiologi atau Kedokteran
pada tahun 1945 dengan Howard Florey
dan Ernst Boris Chain.
Pada tahun 1939 ahli mikrobiologi
Amerika Ren Dubos menunjukkan
bahwa bakteri tanah mampu
mendekomposisi kapsul dari bakteri
Pneumococcus. Mikroba tanahnya adalah
Bacillus brevis, dimana ia memperoleh
produk, tyrothricin, yang sangat beracun
untuk berbagai bakteri. Tyrothricin,
campuran kedua peptida gramicidin dan
tirosidin, juga ditemukan menjadi racun
bagi sel darah merah dan reproduksi pada
manusia, namun dapat bermanfaat bila
dioleskan sebagai salep pada permukaan
tubuh.
organisme harus ditanam pada skala yang
cukup besar untuk memungkinkan
pemurnian dan analisis kimia dari
antibiotik scale up
Setelah pemurnian, efek antibiotik pada
fungsi normal jaringan inang dan organ
(farmakologi), serta kemungkinan
tindakan toksik (toksikologi) harus diuji
pada sejumlah besar hewan dari beberapa
spesies. Selain itu, bentuk administrasi
yang efektif harus ditentukan.
Setelah langkah-langkah ini selesai,
produsen dapat mengajukan Permohonan
Obat Baru Investigasi dengan Food and
Drug Administration (FDA) Jika
disetujui, antibiotik dapat diuji pada
sukarelawan untuk toksisitas, toleransi,
penyerapan, dan ekskresi.
Jika tes lanjutan pada sejumlah kecil
pasien berhasil, obat tersebut dapat
digunakan pada kelompok yang lebih
besar, biasanya ratusan. Jika semuanya
berjalan dengan baik, obat tersebut dapat
digunakan dalam pengobatan klinis.
Produksi Penicillin dan Tetracycline
Penicillin
Antibiotik pertama yang populer dikenal
& diproduksi
Pelopor kemoterapi
Fungsi: penghambat sintesis dinding sel
(Penisilin mengikat dinding sel bakteri,
mencegah rantai peptida untuk
menghubungkan, dan melilitkannya)
Penisilin aktif terhadap bakteri Gram
positif
Beberapa jenis (misalnya amoxicillin)
juga efektif terhadap bakteri Gram
negatif, kecuali Pseudomonas aeruginosa.
Halo Penisilin (halo dari penghambatan
pertumbuhan bakteri di sekitar cetakan
pada kultur lempeng Staphylococcus.)
Biosintetis Penisilin
Penisilin disintesis dari asam -
aminoadipat, sistein dan valin. Produksi dibatasi
Langkah-Langkah Produksi Antibiotik
oleh penghambatan umpan balik pada jalur
Pengidentifikasian organisme yang
sintesis penisilin. Produk sampingan, L-lysine,
menghasilkan antibiotik dan antibiotik menghambat produksi homocitrate, sehingga
diuji terhadap berbagai jenis bakteri
keberadaan lisin eksogen harus dikendalikan
isolasi & screening
dalam produksi penisilin. Mikroorganisme:
Awalnya digunakan Penicillium notatum (hasil 1
mg / L), sekarang menggunakan Penicillium
chrysogenum & dengan ekstraksi yang lebih baik
(50 g / L). Sumber karbon yang tersedia juga
penting: Glukosa menghambat produksi
penisilin, sedangkan laktosa tidak. Sel
Penisillium ditanam menggunakan kultur
umpan-batch. pH dan kadar nitrogen, lisin,
fosfat, dan oksigen dalam batch juga harus
dikontrol dengan hati-hati.
Media Fermentasi
Sumber Karbon: Laktosa sebagai senyawa
karbon yang sangat baik. Selain itu,
glukosa & sukrosa dapat digunakan.
Sumber Nitrogen:
- Jagung curam minuman keras (CSL)
- Ammonium sulfat dan amonium asetat
- Amonia
Sumber Mineral: Elemen yaitu kalium,
fosfor, magnesium, belerang, seng dan
tembaga. Beberapa di antaranya
diaplikasikan dengan cairan curam jagung
(CSL).
Kalsium (CaCO3) untuk melawan
keasaman alami CSL (penyangga)
PAA (asam fenil asetat) prekursor
Untuk mencegah pembusaan selama
fermentasi, bahan anti pembusaan seperti
minyak babi, octadecanol, dan silikon
digunakan.
Diperlukan sebuah fermenter batch, dan proses
fed batch yang biasanya digunakan untuk
memperpanjang periode stasioner dan
meningkatkan produksi.
Tiga fase yang berbeda:
1. Trophophase: Pertumbuhan miselium cepat
(30-40 jam)
2.Idiophase: Produksi penisilin melalui
fermentasi batch makan (5-7 hari).
3. Sumber karbon dan nitrogen habis, produksi
antibiotik berhenti, cairan miselium melepaskan
amonia dan pH meningkat.
Dalam proses produksi penisilin yang khas,
bioreaktor dialihkan ke fed batch setelah sekitar
40 jam fase pertumbuhan ketika sel-sel
memasuki fase diam.
Penyaringan dengan rotating drum
Drumnya berpori sehingga penisilin
terlarut melewati pusat, sementara filamen jamur
menempel di bagian luar. Filamen ini dilepas
dengan pisau saat drum berputar.
Presipitasi
Cairan yang disaring dengan penisilin dilarutkan
dengan garam kalium. Hal ini memicu penisilin
keluar dari larutan.
Filtrasi
Endapan ini kemudian dapat dikumpulkan
dengan cara penyaringan dan serbuk yang
dihasilkan bisa setinggi penisilin murni 99,5%
Jenis Penisilin
Penisilin alami
Fermentasi penisilin dilakukan tanpa
penambahan prekursor rantai samping (misalnya
benzil penisilin / Penisilin G)
Penisilin Biosintetik
Fermentasi dengan menambahkan kaldu
prekursor rantai samping sehingga hanya satu
penisilin yang diinginkan dihasilkan.
Prekursor rantai :
- asam phenoxyacetic: (POA) untuk Penisilin V
- asam fenilasetat: (PAA) untuk Penisilin G
Turunan Penisilin
Penisilin semisintetik
Untuk menghasilkan penisilin yang paling
baik.
Penisilin G adalah satu-satunya penisilin
alami yang masih digunakan secara klinis.
Namun, penisilin G memiliki stabilitas
asam yang buruk dan rusak saat melewati
perut; Jadi harus diberikan injeksi
intramuskular yang membatasi
kegunaannya. Beberapa penisilin
semisintetik lebih stabil asam dan
karenanya bisa diberikan sebagai obat
oral.
Contoh Pembuatan Penisilin Semi sintetik
Ampisilin
1. Produksi Antibiotika APA (6-amino
penicillanic acid) :
- Benzil Penisilin (hasil fermentasi, penisilin
natural ) dgn enzim penisilin amidase
diimobilisasi ikatan ionik dg selulosa asetat
dikonversi menjadi APA
2. APA + gugus metil -metil benzil penisilin
(=Ampisilin, antibiotika spektrum luas terutama
thd bakteri Gram negatif)
Chlortetracycline
Nama dagang Aureomycin, adalah
antibiotik tetrasiklin tetrasiklin pertama
yang diidentifikasi.
Antibiotik spektrum luas yang diperoleh
dari Streptomyces aureofaciens.
Bertindak sebagai penghambat sintesis
protein
Sebagai antibakteri dan antiprotozoal
yang diberikan melalui mulut, melalui
injeksi intravena, atau dioleskan secara
topikal ke konveyor.
 Antibiotik Macrolide yang memiliki spektrum Menghambat pertumbuhan bakteri tanpa
antimikroba mirip atau sedikit lebih lebar dari membahayakan konsumen
pada penisilin. Dalam struktur, senyawa Obat harus menembus jaringan tubuh
makrosiklik ini mengandung cincin lakton untuk mencapai bakteri (target unik:
beranggota 14 dengan 10 pusat asimetris dan dua dinding sel, sintesis protein, jalur
gula (L-cladinose dan D-desosamine) yang metabolisme)
membentuk senyawa yang sangat sulit dihasilkan Bakteri yang ditargetkan harus berada
melalui metode sintetis. dalam spektrum antibiotik.
Fungsi: Macrolides adalah inhibitor sintesis Obat dapat bersifat bakterisidal atau
protein bakteriostatik
Aplikasi : Antibiotik macrolide digunakan untuk Agen yang berbeda dapat dikombinasikan
mengobati infeksi yang disebabkan oleh bakteri untuk efek sinergis
Gram positif (misalnya Streptococcus Identifikasi mikroorganisme invasif yang
pneumoniae) dan infeksi Haemophilus diperlukan untuk perawatan optimal
influenzae seperti saluran pernapasan dan infeksi Efek samping umum :
jaringan lunak. Spektrum antimikroba dari
Bacitracin Perubahan pada flora tubuh normal
makrolida sedikit lebih lebar daripada penisilin,
Terdiri dari satu atau lebih polipeptida Saluran gastrointestinal menyerang
dan oleh karena itu, makrolida merupakan
antimikroba yang diproduksi oleh strain bakteri simbiotik yang dibunuh oleh
pengganti yang umum untuk pasien dengan
tertentu dari Bacillus licheniformis dan antibiotik => Bakteri resisten mengisi
alergi penisilin.
Bacillus subtilis. kembali niche = sekunder atau
Aplikasi : Biasanya digunakan secara superinfeksi (paling umum: pertumbuhan
Sefalosporin
topikal, terutama terhadap bakteri gram berlebih Clostridium difficile)
Seperti penisilin, sefalosporin memiliki
positif, karena bersifat toksik dan
struktur cincin beta-laktam yang
memiliki bioavailabilitas oral yang
mengganggu sintesis dinding sel bakteri
buruk). Juga digunakan sebagai promotor
dan juga bersifat bakteri (membunuh
pertumbuhan pakan ternak
bakteri).
Mengganggu bakteri Gram positif dan
Senyawa sefalosporin pertama kali
beberapa Gram negatif dengan
diisolasi dari kultur acremonium
mengganggu sintesis dinding sel dan
Cephalosporium
peptidoglikan.
toksisitas rendah
Antibiotik spektrum luas (sebanding
dengan ampisilin)
Penggunaan umum: dalam prosedur
operasi
untuk mengurangi risiko infeksi pasca
operasi.
Dimungkinkan untuk mengubah penisilin
V atau benzil penisilin menjadi
sefalosporin dengan ekspansi cincin
kimia.
Kondisi fermentasi agak mirip dengan
penisilin, namun metionin ditambahkan
untuk meningkatkan produksi. Produksi
dipengaruhi oleh represi katabolisme
karbohidrat dan regulasi fosfat
Produk diekstraksi dari cairan kultur
dengan adsorpsi ke karbon atau resin

Erythromycins Aspek Umum Antibiotik

Prinsip :