Capitulo II: Marco Terico

2.1. Antecedentes de la investigacin

Los primeros experimentos realizados sobre micropropagacin bajo condiciones
estriles fueron a principios del siglo XX. La mayora de los experimentos
fracasaban debido a que se contaba con pocas tcnicas y muchos de los cultivos
resultaban contaminados. Gottlieb Haberlandt en 1902 cultiv clulas empalizadas
de hoja, sin embargo stas no tuvieron divisin celular. En 1913 descubre un
componente en el floema de las plantas capaz de provocar divisin celular
(citocinina).
En 1934 White gener un cultivo con crecimiento continuo con clulas de meristemo
de tomate en un medio conteniendo: sales, extracto de levadura, sacarosa y tres
tipos de vitamina B, con lo cual estableci la importancia de agregar aditivos al
cultivo. En ese mismo ao se descubri la primera hormona vegetal llamada auxina,
la cual provoca crecimiento en plantas.

A partir de 1939 se tuvieron muchos avances en el rea ya que se estableci el

cultivo de callos en Estados Unidos y Francia. En 1941, Johannes van
Overbeek descubre que la leche de coco tena la capacidad provocar la divisin
celular en plantas.

En 1944, Skoog y colaboradores realizaron el primer cultivo in-vitro de tabaco para

estudiar la formacin de brotes adventicios. En 1946, E. Ball cultiva la primera planta
completa de Lupinus y Tropaeolum a partir de brotes apicales.
Folke K. Skoog y Toshio Murashige se convierten en los pioneros de la
micropropagacin. Ambos fueron los creadores del medio MS (Murashige-Skoog)
en 1962, el cual es un medio de cultivo muy usado en la micropropagacin. Miller,
Skoog y sus colaboradores descubrieron la cinetina, que propicia la divisin
celular. Este descubrimiento permiti la formacin de callos a partir de clulas
diferenciadas. Murashige es considerado una autoridad mundial en lo que respecta
a procedimientos y componentes de medios estriles para una gran variedad de
cultivos. Su publicacin Plant Propagation through Tissue Cultures es una de las
referencias ms citadas para la micropropagacin.

Sus beneficios se hicieron ms conocidos en el rea de la horticultura ya que se

comenzaron a crear plantas libres de virus. A esto le sigui la clonacin mltiple de
orqudeas y cultivos en invernadero de plantas como crisantemos, plantas leosas,
helechos, entre muchos otros, los cuales se han estudiado mucho en las ltimas
dcadas.
Se encontr que mezclando la harina de yuca con agar como agente solidificante
se obtena un buen crecimiento de plantas (Gustavo romay et al. 2006)
El uso de Pectimorf (El pectimorf es un bioproducto de origen natural constituido por
una mezcla de carbohidratos biolgicamente activos) como sustituyente de
solidificacin de medio, para micropogacin, mostro un aumento de velocidad en
crecimiento y divisin celular, aunque con los pices de coloracin verde lima, con
forme avanzaron los das tubo un crecimiento normal, con respecto a pices de yuca
in vitro (Lorenzo Surez 2015)
Maliro y Lameck (2004) Segn se encontr que mezclando la harina de yuca con
agar como agente solidificante se obtena un buen crecimiento de plantas de
Uapaca kirkiana y Faidherbia albida. No obstante, el uso de almidones modificados
de yuca en este estudio permiti obtener plantas con buen desarrollo.
El avance de las investigaciones enfocadas a la sustitucin parcial o total del agar
como agente gelificante en los medios de cultivo in vitro para propagacin, ha
arrojado resultados pro-metedores, principalmente en lo que respecta al uso de
almidones, ya que, aunque algunos resultados con gomas como solidificantes son
muy buenos, los almidones tienen un menor costo y son de fcil adquisicin y
extraccin; adems, pueden ser modificados para conferir propiedades funcionales
especficas, que les permitan ser utilizados con mayor eficiencia en
micropropagacin vegetal in vitro, ya sea como nico agente gelificante, o mezclado
con agar u otro tipo de goma (Diario Alonso 2012).
cido indolbutrico es una hormona vegetal que estimula el crecimiento de las
races. Est presente en altas concentraciones en las puntas de crecimiento de
ramas de sauce. Utilizando las partes activamente crecientes de una rama de
sauce, cortadas y remojadas en agua, se puede obtener cantidades significativas
de hormonas para nuestros esquejes. El cido saliclico(que es una sustancia
qumica similar a la aspirina) es una hormona vegetal que interviene en las defensas
de la planta.Tambin puede desencadenar una respuesta de defensa en plantas
cercanas al convertir el cido saliclico en una forma qumica voltil (Horticultor
2015).
La planta de fresa se propaga en forma asexual, por lo que existe gran diseminacin
de virus, micoplasmas, nemtodos y hongos. El cultivo in vitro de pices
meristemticos representa una alternativa para obtener plantas libre de hongos y
bacterias en el pas, la eficientizacin de este mtodo de reproduccin en fresa
comercial mediante el cultivo in vitro, ofrece ventajas de una tasa de multiplicacin
superior a los mtodos convencionales, alto potencial de propagacin en espacio
reducidos, el empleo de pices merismticos en etapa inicial en la multiplicacin
masiva como material madre y posteriormente multiplicarse en viveros comerciales
controlados (Hurtado y Merino, 1991).

Los explantes para elcultivo de tejidos de fresa pueden provenir de la corona o de

los estolones, aunque es ms fcil la extraccin y la desinfeccin de los explantes
de los estolones. La alta pubescencia de los tejidos y su contacto directo con el
suelo inducen una alta contaminacin de los explantes, especialmente cuando stos
son extrados de plantas provenientes del campo. Existen diversas tcnicas para el
control de la contaminacin in vitro, tales como el uso de fungicidas y antibiticos
en la planta madre, el explante y/o el medio de cultivo; sin embargo, no se
recomienda la adicin de antibiticos al medio para controlar la contaminacin
bacteriana porque no son efectivos en la mayora de los casos (Snchez M y
Salevarra J. 2004).

2.2. Bases Tericas

Con una historia de ms de cinco dcadas, los beneficios del cultivo de tejidos
vegetales (CTV) no han llegado a los agricultores de las regiones ms necesitadas.
El problema radica en la complejidad y costo de aplicacin de la tcnica. En
Venezuela, la yuca (Manihot esculenta Crantz) es cultivada en suelos marginales
por agricultores de escasos recursos. Las limitaciones del cultivo son la carencia de
semilla sana y los bajos niveles de rendimiento. Esta situacin puede superarse
mediante el uso del CTV para la produccin de semilla vegetativa de alta calidad.
Un primer paso para lograr la transferencia tecnolgica es la sustitucin de los
componentes de los medios de cultivo convencionales por otros ms econmicos y
accesibles.
Un primer paso para lograr la transferencia de estas tecnologas a los agricultores
es la sustitucin de los componentes que conforman los medios de cultivo para la
micropropagacin clonal de yuca usados convencionalmente en los laboratorios,
por medios cuyos componentes sean ms econmicos y accesibles a los
agricultores. De los componentes de los medios de cultivo que ms inciden en su
costo est el agente solidificante. El agar ha permanecido como uno de los agentes
solidificantes ms frecuentemente utilizados, asumindose su inocuidad sobre los
tejidos. Sin embargo, algunas dudas se han generado sobre su inocuidad, por lo
que algunas marcas comerciales han tenido que garantizar que han sido probadas
para su uso en medios de cultivos para plantas y con ello se ha elevado el costo de
los mismos (Debergh, 1983).
La reproduccin asexual es utilizada para obtener una gran cantidad de plntulas a
partir de una nica planta.
Dependiendo del caso, se aprovechan bulbos (cebolla), cormos (gladiolos),
rizomas (helechos), tubrculos (papas), tallos (banana), races (batata o boniato,
manzana, mora), hojas (begonia, espada de San Jorge), estacas (vid), etc. Las
plantas obtenidas por
Propagacin asexual o vegetativa son idnticas a la planta madre e idnticas entre
s. En otras palabras, son clones.
Se denomina totipotencia a la capacidad de una clula de generar rplicas
del organismo del cual deriva. Restringida en animales, esta propiedad
caracterstica de las plantas permite la supervivencia en condiciones ambientales
desfavorables o luego del ataque de herbvoros, plagas y patgenos.
El cultivo in vitro la micropropagacin se inicia con la extraccin de pequeos
fragmentos de tejido tomados de diversas partes de la planta, tales como hojas,
races, segmentos nodales y gemas axilares, gemas florales y apicales.
Una vez limpios y desinfectados, los explanes son transferidos en condiciones
aspticas a un medio de cultivo adecuado. Subcultivos peridicos de dichos
explantes permiten la amplificacin del material y, ms tarde, su diferenciacin de
modo de generar una planta completa.
Los estolones de la fresa son tallos que salen de la planta madre, como si se tratara
de un tallo largo, como los que terminan en flor, pero que parece ms bien un
abanico de hojas que no est abierto. Cuando este abanico toca tierra, echar
races y se abrir formando una planta nueva.
Al principio me quedaba observando cada tallo pensando que quizs se tratara de
un estoln, la verdad es que una vez que veas uno, no hay confusin, son muy
diferentes a los tallos florales o a las hojas. Son mucho ms largos y pueden tener
uniones donde tambin crecen hojas.
Si la fresa est plantada en la tierra, los estolones de la fresa buscarn un lugar a
una distancia adecuada para iniciar la nueva planta y es probable que no sea donde
t esperabas y/o hubieras querido. He ledo en otro blog que un estoln de fresa
fue a ubicarse y echar races en una madera de triplay! Y vivi, aunque no dio fruta.
Los estolones se disectan con la ayuda de un microscopio estereoscpico haciendo
un corte en la base de la corona y separando las dos porciones con ayuda de pinzas
de diseccin y se selecciona la parte que contiene al meristemo y se vuelven a
disectar sucesivamente las veces necesarias hasta encontrar el meristemo principal
el cual se recupera con una navaja muy fina y se coloca en un tubo con medio de
cultivo de Murashige ySkoog.

2.3. Definiciones Conceptuales

Fitohormonas:
Las fitohormonas (hormonas vegetales) son componentes qumicos fabricados por
las clulas vegetales en lugares clave de la planta para regular sus fenmenos
fisiolgicos. Las fitohormonas que regulan el crecimiento son: auxinas, giberelinas,
citoquinina, cido abscsico y el etileno. stas no son independientes entre ellas,
dependen todas unas de las otras.
Las auxinas son las causantes de la elongacin de las clulas. Se concentran en
el vrtice de los tallos y se mueven desde all hasta otras partes de la planta,
provocando as el crecimiento de la planta en sentido vertical, tanto hacia arriba
(hacia la luz), como hacia la base (la raz).
En el momento en que se interrumpe la liberacin de auxinas, los niveles de
giberilinas y citoquininas comienzan a aumentar. Si bien las auxinas se encargan
del crecimiento vertical de las plantas, las giberelinas y las citoquininas sern las
causantes de la expansin lateral, creando las ramas, races y hojas, y
proporcionando robustez a la planta. Esto ocurre debido a que la citoquinina
promueve la divisin celular que da paso a que se formen los diferentes rganos y
las giberelinas son las causantes del desarrollo lateral, el crecimiento longitudinal
de los tallos y aportan ms vigor a los nuevas ramas y hojas producidas.
La hormona vegetal opuesta a la giberelina es el cido abscsico, ya que la
giberelina induce a la brotacin de las yemas y es la causante del desarrollo
longitudinal de las ramas, y por el contrario el cido abscsico inhibe el crecimiento
de la planta y el desarrollo de sus rganos. Podramos decir que, si bien las
citoquininas son complementarias a las auxinas y las giberelinas, el cido
abscsico inhibe a estas dos fitohormonas de crecimiento, y lo que hace es regular
el envejecimiento. Otra fitohormona que inhibe el crecimiento de la planta es el
etileno. Es la nica hormona vegetal conocida que aparece en condiciones
normales en estado gaseoso, y es la que regula la feminidad de la planta. Vendr
dado por la gentica de la planta: si los niveles de etileno de stas son suficientes
se expresar como hembra, pero si por el contrario no se genera el etileno
suficiente la planta se presentar como macho.
Cultivo IN VITRO
La micropropagacin permite reproducir in vitro cientos de clones de una misma
especie y te (Kyte Klein 1996) los cuales posteriormente son llevados a un vivero y
luego al campo de cultivo, donde se desarrollarn y darn lugar al producto de
interes econmico que se busca obtener.
Esta tcnica permite optimizar la obtencin de clones resistentes y de elevada
produccin, en grandes cantidades y en un tiempo menor. Las condiciones de
laboratorio en la que se realiza la micropropagacin adems permiten obtener
nuevas plntulas todo el ao, independientemente del factor climtico (temperatura,
luz, humedad, etc.) y gracias a esto se pueden abastecer los viveros durante todo
el ao. Si bien la micropropagacin representa una inversin adicional en la
infraestructura y equipamiento de laboratorio, el beneficio que presenta a mediano
y largo plazo es mucho mayor que el obtenido mediante el cultivo convencional.
Este procedimiento tambin permite mane1ar cultivos libres de enfermedades y
patgenos Gen especial libres de virus. (Fossard 1999) incluso permite obtener
plantas certificadas a nivel internacional para exportacin, que cumplan con todas
las normas fitosanitarias requeridas.
2.4. Formulacin de hiptesis
Determinar si la produccin de un medio de cultivo a nivel casero es obtimo y
eficiente para lograr la micropropagacin o el cultivo de tejidos vegetales
2.4.1. Hiptesis General
Probando diferentes sustitutos de los sustratos utilizados en la preparacin de
medio de cultivo para cultivar tejido y/o esquejes vegetales.
2.4.2. Hiptesis especfica
La eficiencia del medio del cultivo depender de las necesidades bsicas para el
crecimiento de la planta y por ende del sustrato preparado con sustitutos
comerciales.
Bibliografa
Kate, Lydiane. (1996). Plants from test tubes : an introduction to micropropagation
/ Lydiane Kyte and John Kleyn. . Timber Press, c1996. : Portland.
Gustavo Romay, Juan Matehus, Armando Gerstl, Rodrigo Rueda y Mara A.
Santana. (2006). Almidn modificado de yuca como sustituto econmico del
agente solidificante para medios de cultivo de tejidos vegetales.. 2017, de Scielo
Sitio web: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0378-
18442006000900012&lang=pt
Ms.C. Lorenzo Surez Guerra, Mara M. Hernndez Espinosa . (2015). Efecto del
Pectimorf en el cultivo de pices de plantas in vitro de yuca (Manihot esculenta
Crantz), clones `CMC-40 y `Seorita. 2017, de Scielo Sitio web:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0258-
59362015000400007&lang=pt
Hurtado, M. D., y Merino, M.M. E. (1991). Cultivo de tejidos vegetales. Ed.Trillas.
Mxico. D. F. pp. 48-49.
Murashige, T. y Skoog (1962). A revised medium for rapid growth and bioassay
with.tobacco tisuee culture. Physiol. Plant. 15:473-479. Snchez M y Salevarra J.
2004. Control de la oxidacin y contaminacin en el cultivo in vitro de fresa
(Fragaria x ananassa Duch). UDO Agrcola 4(1):21-25

Maliro MFA, Lameck G (2004) Potencial of cassava flour as a gelling agent in

media for plant tissue cultures. African J. Biotechnol. 3: 244-247.
Debergh PC (1983) Effects of agar brand and concentration on the tissue culture
medium. Physiol. Plant. 59: 270-276.

Daro Alonso Martin Gordo, Oswaldo Crdenas Gonzalez, Jos Constantino

Pacheco. (2012) Sustancias utilizadas como agente gelificante alternativas al agar
en medios de cultivo para propagacin in vitro. (2017). Sitio Web:
https://www.researchgate.net/publication/257835724_Sustancias_utilizadas_como
_agente_gelificante_alternativas_al_agar_en_medios_de_cultivo_para_propagacio
n_in_vitro [accessed May 17, 2017]
Juanpa. (2013). Fitohormonas: principios y funciones. 2017, de ElBruixot Sitio web:
http://www.elbruixot.com/semillasdemaria/fitohormonas-principios-y-
funciones/elo.php?script=sci_arttext&pid=S0258-59362015000400007&lang=pt