Tema 5.

Enzimas

TEMA 5. ENZIMAS

1. Introduccin
2. Importancia de la catlisis biolgica y concepto de enzima
3. Composicin y Estructura: Apoenzima y cofactor
4. Papel de apoenzima y cofactor
5. Propiedades
6. Catlisis enzimtica
a. Modelos de actuacin
7. Cintica enzimtica
a. Factores
8. Regulacin de la actividad enzimtica
9. Clasificacin y nomenclatura
10. Mecanismos para aumentar la eficacia enzimtica
11. Las vitaminas
12. Cuestiones
13. Prcticas laboratorio

1. Introduccin

La vida depende de la existencia de unos catalizadores muy potentes y altamente

especficos denominados enzimas. De hecho, todos los pasos de todos los procesos
metablicos estn catalizados por enzimas; y la capacidad cataltica se considera,
junto con la capacidad de autorreplicacin, una de las caractersticas fundamentales
de la vida.
Vida: Un sistema vivo es un objeto con una frontera definida que continuamente
intercambia materia y energa con el medio circundante manteniendo un bajo nivel de
entropa y presenta mecanismos autorreplicativos para trascender en el tiempo y en el
espacio, todo ello catalizado por enzimas.

2. Importancia de la catlisis biolgica y concepto de enzima

Los catalizadores son compuestos qumicos de distinta naturaleza que facilitan y
aceleran las reacciones qumicas porque disminuyen la cantidad de energa de
activacin que se necesita para que estas ocurran. Los catalizadores no se consumen
en la reaccin que catalizan, actan nicamente mediante su presencia. Por ello cuando
termina la reaccin quedan libres y pueden volver a utilizarse de nuevo, por lo que se
necesitan en pequeas cantidades.
Los catalizadores que actan en los seres vivos se denominan biocatalizadores y son
imprescindibles para que se produzcan las reacciones adecuadamente por dos razones:
1- En los seres vivos los reactivos no pueden ser calentados a T elevadas, ni se
pueden someter a fuertes descargas elctricas ya que eso destruira a las propias
clulas.

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2- En los seres vivos se producen una enorme cantidad de reacciones qumicas lo que
hara necesario una enorme cantidad de energa para que se pudieran llevar a cabo.
Los biocatalizadores son las enzimas, vitaminas y hormonas, aunque las que
realmente intervienen como catalizadores son las enzimas.

3. Composicin (proteica) y Estructura: (globular 3 o 4)

Holoenzima = Apoenzima + Cofactor
a. Apoenzima:
Aminocidos estructurales (d)
Aminocidos de fijacin (centro activo) (a y c)
Aminocidos catalizadores (centro activo) (b)
b. Cofactores
Inorgnicos: oligoelementos inicos ej. ( Fe2+ Fe3+ )

Orgnicos
1. Grupo prosttico: Enlace covalente ej. Grupo Hemo, etc.
2. Coenzimas: Enlaces reversibles. ej. NAD, FAD (nucletidos
derivados de vitaminas)

Con la excepcin de un pequeo grupo de molculas de RNA cataltico (los ribozimas),

todas las enzimas conocidas son protenas globulares con estructura 3aria o en caso de
formarse complejos multienzimticos, con estructura 4aria.

La actividad de algunas enzimas depende solamente de su estructura como protena,

mientras que otras necesitan, adems uno o ms compuestos no proteicos, llamados
cofactores.
El complejo enzima-cofactor catalticamente activo recibe el nombre de holoenzima.
Cuando se separa el cofactor, la protena restante, que por s misma es inactiva
catalticamente, se designa con el nombre de apoenzima.

Holoenzima = Apoenzima + Cofactor

a. Apoenzima

La parte proteica o apoenzima est constituida por varios tipos de

aminocidos:
Aminocidos estructurales (d)
Aminocidos de fijacin (centro activo) (a y c)
Aminocidos catalizadores (centro activo) (b)
Los AA estructurales son los responsables de la estructura general
del enzima, esto es su conformacin definitiva y funcional. El centro
activo constituye la regin concreta donde se produce el
acoplamiento o interaccin espacial especfica con el o los sustratos o reactivos
participantes en la reaccin a catalizar. Dicho centro est integrado por dos tipos de

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AA; los de fijacin que permiten la unin del enzima con el sustrato para formar el
complejo E-S y los AA catalizadores que llevan a cabo la catlisis propiamente dicha
aportando los grupos moleculares necesarios; cuando el apoenzima necesita de la
participacin de un cofactor, ser este quien cumpla dicha funcin.
Estos aminocidos del c. activo pueden encontrarse muy alejados en la secuencia de la
protena enzimtica, pero se encuentran muy prximos entre s debido a la estructura
terciaria de la protena enzimtica; por eso si la protena enzimtica se desnaturaliza
el centro activo se destruye y el enzima dejara de realizar su funcin.

b. Cofactores
Se trata de compuestos no proteicos que completan el enzima aportando grupos
funcionales al centro activo de forma reversible o a travs de enlaces covalentes
formando parte, en este caso del holoenzima.
El cofactor puede ser inorgnico, un ion metlico (oligoelementos inicos como el
(Fe2+ Fe3+) o bien una molcula orgnica, llamada coenzima, si el cofactor orgnico
se encuentra unido dbilmente y de forma reversible a la protena o grupo prosttico,
si est fuertemente unido y de forma irreversible (enlace covalente), el ms conocido
es el grupo Hemo, visto en el tema anterior (ej. hemoglobina).
Las coenzimas son compuestos orgnicos que se unen mediante
enlaces dbiles y de forma temporal al apoenzima (inactivo) y
forman el holoenzima activo. El apoenzima puede necesitar
simultneamente un coenzima y un in metlico (ver figura).
Las coenzimas son portadores de diferentes grupos qumicos,
actuando en las reacciones enzimticas como dadores o
receptores de dichos grupos.

4. Papel del apoenzima y el cofactor

a. Apoenzima (soporte, debilita enlaces)
Proporciona la estructura espacial especfica que permite la unin a los sustratos,
molculas sobre las que actan las enzimas en las reacciones qumicas, de modo que
actan como soporte del proceso debilitando, en ocasiones, ciertos enlaces por lo que
la reaccin se ve favorecida.
b. Cofactor: El cofactor moldea, une o lleva a
cabo la catlisis aportando grupos funcionales al
c. activo complementa al apoenzima
El cofactor puede actuar como:
Centro cataltico primario, llevando a cabo directamente
la catlisis.
Grupo puente para reunir el sustrato y la enzima.
Agente estabilizante de la actividad enzimtica
(conformacin), moldeando definitivamente al enzima.
para que se acople especficamente a su sustrato.

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Se alteran durante la reaccin enzimtica, pero, una vez acabada se regeneran de

nuevo volviendo a ser funcionales. Los coenzimas no suelen ser especficos de un solo
tipo de apoenzima, sino que se unen a diferentes enzimas a nivel de dominios
especficos..
Algunos coenzimas son nucletidos o derivados de nucletidos, y pueden tener en su
composicin vitaminas. Los ejemplos ms conocidos son el NAD+ , NADP+, FAD y CoA.

5. Propiedades

a. Proteicas: solubilidad, desnaturalizacin, Pi, etc.

Como protenas globulares que son, las enzimas presentan todas las propiedades
propias de dichos compuestos, solubilidad en agua (dan dispersiones coloidales), se
desnaturalizan por la accin de agentes desnaturalizantes perdiendo, en consecuencia,
su funcionalidad. Presentan un Pi caracterstico que permite aislarlas e identificarlas
por electroforesis, etc.

b. Especificidad:
Esta es una caracterstica comn de las enzimas, su alto poder cataltico se debe en
parte a su alta especificidad funcional por los sustratos, de forma que basan su
actividad en la interaccin especfica a nivel espacial con su sustrato.
La especificidad de las enzimas es muy importante para los seres vivos. Cada clula
contiene varios cientos de miles de compuestos diferentes, y existen muchas
combinaciones posibles entre las reacciones qumicas que estos compuestos pueden
experimentar. Las enzimas cuidan de que tengan lugar, de manera especfica, aquellas
reacciones que son esenciales e indispensables para que la clula viva.

Adems de la especificidad y la alta eficiencia, otras dos caractersticas que

diferencian a las enzimas de los catalizadores qumicos, son que: las enzimas pueden
saturarse por sustrato y tienen capacidad para regular su actividad.
La especificidad se establece a dos niveles:
1. De Accin: Un tipo de reaccin
Lo que significa que cada enzima cataliza una determinada reaccin qumica, y no otra.
2. De Sustrato: Sobre un tipo de sustrato
Lo que significa que cada enzima acta sobre un determinado sustrato, esta puede ser
absoluta para un nico sustrato, o relativa cuando permite la reaccin de compuestos
diferentes pero con una estructura similar.
Relativa: ej. Lipasa (cataliza la hidrlisis de cualquier lpido saponificable).
Absoluta: ej. Gliceraldehdo 3P deshidrogenasa (cataliza la reaccin de
deshidrogenacin del GAL 3P).

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c. Reversibilidad
Un enzima puede catalizar una reaccin qumica en ambos sentidos, en la prctica esto
no ocurre ya que el producto de la reaccin es utilizado inmediatamente como sustrato
de la siguiente, todo dentro de una determinada ruta metablica y los equilibrios
estn, normalmente desplazados en esa misma direccin.
A EA B EB C EC P (producto final).

d. Eficacia:
Se necesita muy baja concentracin de enzima para catalizar grandes cantidades de
sustrato ya que los enzimas se recuperan ntegramente despus de la reaccin, por lo
que estn en disposicin de volver a actuar sobre nuevas molculas de sustrato.

e. Localizacin
Los enzimas se localizan en aquellas partes u orgnulos celulares donde llevan a cabo
su funcin, de manera que la compartimentacin caracterstica de las clulas
eucariotas permite la aparicin de metabolismos complejos con una gran variedad de
reacciones que se producen simultneamente.

f. Recuperacin
Relacionada como ya se vio con la gran eficacia enzimtica, esta propiedad consiste en
el hecho de que los enzimas se recuperan ntegramente y sin sufrir modificaciones
despus de la reaccin de manera que no intervienen en la misma, ni afectan a su
equilibrio, solamente permiten que esta se realice a mayor velocidad. El caso de las
coenzimas es diferente ya que si salen modificados de la reaccin y deben ser
reciclados posteriormente para que vuelvan a actuar en colaboracin con el
apoenzima.
Enzima: E + S ES E (recuperado ntegramente) + P
Coenzima: ej. AH2 + FAD Deshidrogenasa A + FADH2 (necesita reciclarse)

6. La catlisis enzimtica

Velocidad de reaccin ( factores )

T (no en seres vivos s. Isotrmicos)
Presencia de catalizadores: la E. de activacin

El objetivo ltimo del proceso es aumentar la velocidad de reaccin, o lo que es lo

mismo el n de molculas de producto que aparecen por unidad de tiempo V = P / t.
de manera que el resultado sea compatible con los requerimientos metablicos.
Existen dos mtodos generales, mediante los cuales puede acelerarse la velocidad de
una reaccin qumica. Uno de ellos es la elevacin de la temperatura (ya que provoca un
incremento en la velocidad de las molculas), este mtodo, empleado habitualmente en
laboratorio no es posible en los seres vivos ya que se necesitaran enormes cantidades

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de energa que, entre otras cosas, destruiran las estructuras biolgicas, por ello las
clulas son sistemas isotrmicos que funcionan con fluctuaciones de temperatura
mnimos; el otro consiste en utilizar un catalizador. El catalizador se combina con los
reactivos de modo transitorio activndolos, produciendo un estado de transicin de
menor energa que en la reaccin no catalizada. Una vez formados los productos el
catalizador queda libre, y puede ser de nuevo utilizado.

o Catlisis:
La funcin principal de las enzimas es actuar como catalizadores de las reacciones de
los seres vivos; como tales catalizadores tienen ciertas caractersticas que vamos a
estudiar a continuacin. Todas las reacciones qumicas tienen lugar porque cierta
fraccin de la poblacin de molculas reactantes, poseen la suficiente energa como
para alcanzar un estado activado, llamado estado de transicin, en el que es muy
elevada la probabilidad de que se rompan o se establezcan enlaces para formar los
productos. Este estado de transicin reside en la cima de la barrera energtica que
separa los reactantes de los productos,
como muestra la figura. En ella se observa
el diagrama de energa para una reaccin Sin Catalizador

qumica, no catalizada y catalizada; donde la

energa libre de activacin es la cantidad
de energa necesaria para llevar todas las
molculas de un mol de sustancia, a una
temperatura determinada, al estado de Con Catalizador

transicin.
En toda reaccin enzimtica se diferencian dos fases:

1) El sustrato (reactivos) se fija especficamente al enzima, formndose el

complejo enzima-sustrato.
La unin entre el enzima y el sustrato se debe a enlaces dbiles (puentes de
hidrgeno, atracciones electrostticas etc.), que se rompen fcilmente una vez que el
enzima ha realizado su accin. La unin se produce en una zona del enzima denominado
centro activo.

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Una vez que el enzima se une al sustrato mediante los aminocidos de unin, actan
sobre l los aminocidos catalticos que sern los que producen la ruptura de enlaces y
la formacin de otros nuevos, transformando el sustrato en producto.
Cuando el enzima presenta un cofactor, este se localiza en el centro activo.
Como observamos en la grfica el estado activado de transicin es sustituido por la
formacin del complejo ES lo que reduce sustancialmente la energa de activacin
necesaria de manera que los productos aparecen sin necesidad de un aumento de T.
2) Liberacin de los productos. Una vez producida la accin enzimtica, el
complejo enzima-sustrato se desintegra quedando libre por un lado el enzima, el cual
podr volver a ser utilizado de nuevo y, por otro lado el sustrato pero ya convertido en
producto.
Las distintas Ks representan la constante de equilibrio de cada reaccin,
observemos como la formacin del producto viene determinada por la facilidad con la
que se forma el complejo ES ya que la K4 es despreciable y la K3 determina una
formacin espontnea del producto ya que la reaccin est claramente desplazada
haca la derecha.
Todas las reacciones que constituyen el metabolismo necesitan de la participacin de
enzimas, tanto si son endergnicas (necesitan energa), como si son exergnicas
(liberan energa).

o Modelos
Llave cerradura
Ajuste inducido
Por lo general, la molcula de enzima es mucho mayor que la del sustrato por lo que
slo una pequea parte de la enzima est implicada en la formacin del complejo. El
modelo ms conocido sobre el mecanismos de reaccin de las enzimas, es el de llave-
cerradura que plantea que la molcula de sustrato se adapta al centro activo de la
enzima del mismo modo que lo hara una llave al encajar en una cerradura, es decir, que
tienen una relacin complementaria. No obstante, esta hiptesis tiene ciertas
limitaciones. Otra hiptesis ms aceptada actualmente es la del ajuste inducido, que
sugiere que el sitio activo no necesita ser una cavidad previa geomtricamente rgida y
preexistente, sino que debe tener una disposicin espacial precisa y especfica que se
induce y adapta al sustrato cuando interacciona con l, este modelo es ms realista ya
que contempla la posibilidad de pequeos cambios coformacionales que sufre la
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protena gracias a su plasticidad, solo en presencia del sustrato como lo hara un

guante de ltex al adaptarse a una mano.

Llave cerradura Ajuste inducido

Todos los procesos metablicos estn catalizados por enzimas, tantos las reacciones
de sntesis como las degradativas.

7. Cintica enzimtica.

Los principios generales de la cintica de las reacciones qumicas son aplicables a las
reacciones catalizadas por las enzimas, en los seres vivos. No obstante, estas
muestran (adems del fenmeno de la especificidad, antes comentado) un rasgo
caracterstico que no se observa en los catalizadores no enzimticos, se trata de la
saturacin por el sustrato, entendida como el momento en el cual todas las molculas
de enzima estn formando complejos ES, las enzimas estn saturadas no quedando
ninguna en estado libre EL.
Los trminos Vmax (velocidad mxima) y Km (constante de Michaelis) son dos
parmetros cinticos de gran importancia, caractersticos de cada enzima, que pueden
determinarse experimentalmente.

o Velocidad y V mxima: Ke Et
La velocidad de una reaccin catalizada nos indica la cantidad de sustrato consumido o
producto formado por unidad de tiempo, en el Sistema Internacional se designa por
U (unidad de actividad enzimtica) y corresponde a los moles de sustrato
consumido en 1 min, o bien a los moles de producto formado en 1 min.
V = P / t 1 U mol S/min mol P/min

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En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene constante la concentracin

del E, la velocidad de la reaccin aumenta exponencialmente al incrementarse la
concentracin del sustrato, ya que al existir ms molculas de sustrato es ms
probable el encuentro con el enzima y la formacin del complejo E-S.
Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de sustrato y, a
medida que este aumenta, se va haciendo ms lento hasta que la concentracin del
sustrato alcanza un cierto valor, a partir del cual, aunque aumente la concentracin del
mismo, no aumenta la velocidad de la reaccin. Esto es debido a que el enzima est
saturada por el sustrato; es decir, todas las molculas del enzima estn unidas al
sustrato formando el complejo E-S. Cuando ocurre esto, se dice que la reaccin ha
alcanzado la velocidad mxima. Este valor depende de la cantidad de enzima que
tengamos por lo que la ecuacin de la velocidad a partir de una concentracin
saturante de sustrato solo depender de la Ke o constante caracterstica de cada
enzima y de la cantidad total de enzima disponible:
V max = Ke Et
Leonor Michaelis y a Maud Menten estudiaron la variacin de la velocidad de una
reaccin enzimtica en funcin de la concentracin del sustrato y propusieron la
siguiente ecuacin, que es vlida para concentraciones de sustrato no saturante.

Vmax S
Vo (1)
K m S
Donde:
V es la velocidad de la reaccin para una determinada concentracin de
sustrato.
Vmax es la velocidad mxima de la reaccin.
[S] es la concentracin del sustrato.
Km es una constante denominada constante de Michaelis-Menten, es
caracterstica de cada enzima.

o KM (Cte de Michaelis-Menten)
Afinidad por el S (especificidad): KM Afinidad
La curva que expresa la relacin entre la concentracin de sustrato y la velocidad
inicial tiene la misma forma para la mayora de las enzimas, se trata de una hiprbola
rectangular, cuya expresin algebraica viene dada por la Ec. Michaelis-Menten.

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Si en la ecuacin (1) hacemos que V = Vmax y despejamos Km obtenemos lo siguiente:

[S] [S]
Vmax/2 = Vmax . ------------ ; = ------------ ; Km + [S] = 2[S] ; Km = [S]
Km + [S] Km + [S]

Km se puede definir como la concentracin de sustrato necesario para que la

velocidad de la reaccin sea la mitad de la velocidad mxima. Se mide en unidades de
concentracin.
La Km nos indica la afinidad de un enzima por su sustrato o lo que es lo mismo, la
facilidad con la que se forma el complejo ES, consecuencia de su mayor o menor
especificidad:
Si Km es alta indica que el enzima tiene poca afinidad por el sustrato ya que se
necesita una concentracin de sustrato elevada para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.
Si Km es baja indica que el enzima tiene mucha afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato baja para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.
Esta ecuacin puede deducirse matemticamente a partir de las constantes de
equilibrio que aparecen en el proceso
Km = K2 + K3 (X) No nos interesan
K1 los pasos que nos
llevan de una
(X)
igualdad a otra.

Vmax S
Vo
K m S

El trmino formado por las tres constantes cinticas es igual a la constante de

Michaelis. Comprobamos como la K2 y K3 nos llevan a la destruccin del complejo ES,
mientras que la K1 nos lleva a su formacin. La relacin entre ambas es la Km.

Otro modo sencillo de llegar al concepto de Km es partiendo de la etapa limitante (ms

lenta) del proceso cuya constante coincide con la K1. Ke = K1
K1
E + S ES
Ke = [ E ] . [ S ] / [ ES ]

La mitad de la velocidad mxima se consigue cuando la mitad de los enzimas estn

formando parte del complejo ES, mientras que la otra mitad se encuentra libre, EL,
por lo que [ E ] = [ ES ], simplificando entonces la ecuacin, : Ke = [ E ] . [ S ] / [ ES ],
luego nos queda que en esta situacin Ke = [ S ], donde Ke es la Km.

En muchos casos es de vital importancia conocer estos parmetros cinticos (V max y

Km) ya que las enzimas actan a concentraciones muy bajas y constantes, situacin

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 Tema 5. Enzimas

que no permite variar la Vmax. aumentando la concentracin de enzima y por otro lado
las las concentraciones fisiolgicas de sustrato, normalmente se encuentran en torno
al valor de la Km que es caracterstica de cada enzima.

a. Factores que influyen en la cintica

La eficacia de un enzima se mide por la velocidad de transformacin del sustrato en

producto. La actividad de las enzimas se ve afectada por diversos factores entre los que
destacan los siguientes:
Nota: En todas las grficas consideramos constantes el resto de las variables no
representadas
1. Concentracin de sustrato
En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene
constante la concentracin del E, la velocidad de la
reaccin aumenta, como ya hemos visto, de forma
exponencial al incrementarse la concentracin del
sustrato, ya que al existir ms molculas de sustrato es
ms probable el encuentro con el enzima y la formacin
del complejo E-S.

2. Concentracin del enzima

Si aumentamos la concentracin de enzima, tambin se produce un
aumento de la velocidad, en este caso de forma lineal o
proporcional. Fisiolgicamente esta situacin no suele darse ya que
las enzimas actan a concentraciones bajas y constantes.

3. PH
El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica,
debido a que el pH influye en la ionizacin de los grupos
funcionales de los aminocidos que forman la protena enzimtica.
Cada enzima realiza su accin dentro de un determinado
intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo
donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH
mnimo o por encima del pH mximo el enzima se inactiva ya que
se desnaturaliza. En la mayora de las enzimas el pH ptimo est
prximo a la neutralidad, aunque hay excepciones.

4. Temperatura
La T influye en la actividad enzimtica. En general por cada 10C
que aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de
2 a 4 veces. Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza
un valor mximo (T ptima) donde la actividad es mxima.

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 Tema 5. Enzimas

Esto se debe a que al aumentar la T aumenta el movimiento de las molculas y, por

tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre el S y el E. Si la T aumenta por
encima de la T ptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimtica debido a que
la enzima se desnaturaliza.
Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de
37C. Los animales poiquilotermos dado que carecen de mecanismos para regular la T
corporal, se ven obligados a hibernar en la estacin fra pues la actividad de sus
enzimas, debido a las bajas temperaturas, es muy baja.

8. Regulacin de la actividad enzimtica

Los procesos metablicos no siempre son los mismos o se producen con la misma
intensidad, las clulas deban adaptar su metabolismo a sus necesidades
cambiantes, por ejemplo una situacin de alta actividad fsica requerir un aumento de
aquellos procesos tendentes a proporcionar energa, debiendo reducirse cuando
estamos en reposo. Dado que todos los procesos metablicos necesitan de enzimas,
deben existir mecanismos que regulen la actividad enzimtica, acelerndola,
relentizndola o detenindola.
Las clulas no suelen recurrir para ello a los factores anteriores (cambios de T o pH)
de modo que existen dos mecanismos fundamentales:
Regulacin de la expresin gentica: Mecanismos relacionados con permitir o no
la expresin de genes que codifican enzimas (se vern en el tema de Gentica
Molecular)
Regulacin de la actividad enzimtica: Si ya se dispone de los enzimas, podemos
actuar sobre ellos activndolos o inhibindolos, aumentando o disminuyendo las
velocidades de reaccin, todo ello, al margen de la propia capacidad regulatoria
que presenta toda enzima en funcin de su Km. Este apartado se ocupa de estos
mecanismos:
o Regulacin por Km
La cintica de todo enzima permite adaptar la velocidad de reaccin a la disponibilidad
de sustrato, as aquellas enzimas con baja Km presentan una fuerte pendiente en su
curva hiperblica lo que se traduce en importantes aumentos de Vo ante pequeos
aumentos en la concentracin de sustrato o una importante disminucin cuando
disminuye la concentracin de S, todo ello cuando los valores fisiolgicos de S se
sitan en torno a la Km.

o Activacin: cationes (Ca2+, Mg2+), el sustrato, etc.

La presencia de activadores permite que ciertas enzimas que permanecan inactivas,
se activen. Normalmente la unin al activador hace que el centro activo adquiera una
estructura adecuada para unirse al sustrato.

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 Tema 5. Enzimas

Los activadores pueden ser cationes como Ca2+, Mg2+,

molculas orgnicas o incluso el propio sustrato, en este
ltimo caso las enzimas solo se encontrarn activas en caso de
que en el medio aparezca el sustrato.
No debemos confundir los activadores con los cofactores ya
que estos ltimos actan a nivel del centro activo,
completndolo, mientras que los activadores lo hacen en una
regin diferente al c. activo provocando un cambio
conformacional en el enzima.

o Inhibicin:
Existen sustancias que pueden impedir que la enzima desarrolle su actividad cataltica.
A estas sustancias se las denomina inhibidores enzimticos. Son compuestos qumicos
que se unen al enzima de forma NO permanente, en distintos puntos del mismo y
disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden ser de distintos
tipos: iones, molculas orgnicas y a veces el producto final de la reaccin. A la accin
que realizan se la denomina inhibicin. Atendiendo al papel regulatorio y al papel
fisiolgico de estos compuestos distinguimos entre inhibicin reversible e
irreversible:

I. Reversible
I. Competitiva: Km

El inhibidor se une al enzima de forma temporal mediante enlaces dbiles e impide el

normal funcionamiento del mismo. El inhibidor es similar estructuralmente al sustrato
(anlogo metablico) y se puede unir al centro activo del enzima impidiendo que lo haga el
sustrato. Es decir ambos, inhibidor y sustrato compiten por unirse al centro activo del
enzima.

Como consecuencia, aunque la velocidad mxima no se altera, para alcanzarla sera

necesario poner ms cantidad de sustrato en el medio de reaccin, lo que se refleja en

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 Tema 5. Enzimas

la correspondiente curva de Michaelis como un aparente aumento de la Km (la enzima

en presencia del inhibidor perdera afinidad por el sustrato).

La inhibicin competitiva se
considera reversible ya que puede
revertirse aadiendo ms sustrato.

I. Irreversible
I. No competitiva: Vmax , la Km aparente no vara
I. Acompetitiva: Vmax, Km
El inhibidor reacciona con la enzima en un punto
distinto al centro activo, no compite por l, pero
induce un cambio conformacional el el c. activo que
impide la formacin del producto, ya sea unindose con
el enzima o formando un complejo ESI inactivo. Se
considera irreversible puesto que a nivel regulatorio, la
inhibicin no cesa al aumentar la concentracin de
sustrato. Podemos considerar dos tipos:

No competitiva: Vmax , la Km aparente no vara

El inhibidor no competitivo puede combinarse tanto con la enzima libre
como con el complejo enzima-sustrato, en un lugar diferente al centro
activo de la enzima provocando un cambio conformacional.
Al no unirse al sitio activo, no se ve afectada la afinidad de la enzima por el sustrato y
en este caso la Km no se altera, aunque puede impedir la desintegracin del complejo
ESI para llegar al producto por lo que la Vmax disminuye, como puede observarse en
la representacin.

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 Tema 5. Enzimas

Acompetitiva: Vmax, Km
En este caso el inhibidor tampoco compite por el centro activo, unindose en una
regin diferente pero solo puede hacerlo al complejo ES ya formado, dando lugar a un
complejo ESI inactivo. Tanto la Vmax como la Km se alteran en la misma proporcin,
disminuyendo la primera y aparentemente tambin Km.
En realidad la afinidad es la misma pero al disminuir la
Vmax se necesita menos S para alcanzar la de la
Vmax.

Nota: Algunos textos

plantea la inhibicin irreversible cuando el enzima se une a
un veneno metablico a travs de un enlace covalente
inactivndolo irreversiblemente, o sea de forma definitiva,
este enfoque no es adecuado si consideramos la inhibicin como mecanismo regulatorio
(fisiolgico) ya que un veneno generara una situacin patolgica. Por ejemplo, la
penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan la pared bacteriana o el in cianuro que
acta sobre la citocromo oxidasa (enzima respiratorio), o con consecuencias
favorables; la aspirina (acetilsalicilato) inhibe la enzima que cataliza el primer paso en
la sntesis de prostaglandinas, que estn implicados en procesos como la produccin
del dolor.

o Alosterismo

o Enzimas cuaternarias (oligmeros)

o Centro activo + centros reguladores
o Conformaciones T (inactiva) y R (activa)
o Cooperacin entre protmeros
o Cintica sigmoidea
o En rutas tipo Freek-back

Las enzimas alostricas funcionan mediante la unin reversible no covalente de

compuestos regulatorios llamados moduladores. El modulador puede ser una activador
(modulacin positiva) o un inhibidor (modulador negativo) y ser el propio sustrato de la
reaccin o ser otra sustancia. Normalmente se trata de enzimas oligomricas (E4aria)
y normalmente el sito activo y el regulatorio se encuentran en distintas subunidades.
Son enzimas que presentan dos conformaciones diferentes, estables e
interconvertibles: una es la forma activa R que tiene una gran afinidad por el
sustrato y la otra es la forma inactiva T que presenta baja afinidad por el sustrato.

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 Tema 5. Enzimas

Estas enzimas poseen adems del centro activo, otro centro llamado centro regulador
o alostrico donde se puede unir el modulador o regulador alostrico que, puede ser
un activador o un inhibidor de la enzima. Si el centro regulador est vaco la enzima
acta a velocidad normal; si est ocupado por el regulador se producen cambios en la
conformacin y dependiendo de que sea activador o inhibidor adoptara una forma ms
o menos activa.
El paso de la forma inactiva a la forma activa se produce al fijarse en el centro
regulador un activador alostrico o modulador positivo. El paso de la forma activa a la
forma inactiva se produce al fijarse en el centro regulador un inhibidor alostrico o
modulador negativo.
Presentan efecto cooperativo entre la subunidades, es decir que si se activa o inhibe
una de ellas provoca el mismo efecto en las dems.
En las enzimas alostricas la cintica de las reacciones es diferente a la de las dems
enzimas, la grfica de la velocidad frente al sustrato es una curva sigmoidea en lugar
de hiperblica como ocurre en las dems enzimas.

Los enzimas alostricos desempean un papel

muy importante en la regulacin de las
reacciones metablicas, suelen actuar en puntos
estratgicos de las rutas metablicas como son:
la primera reaccin de una ruta metablica o los
puntos de ramificacin de una ruta metablica.
La capacidad regulatoria de estas enzimas, en
funcin de su Km es especialmente significativa.
El propio sustrato de la primera reaccin es el
que acta como activador alostrico, al unirse
con el enzima produce el cambio que da lugar a
la conformacin activa. Tambin el producto final
de la ruta metablica puede actuar como inhibidor
alostrico, produciendo la aparicin de la
conformacin inactiva. Este proceso se denomina
retroinhibicin (Freek-back ). Este proceso
supone un ahorro energtico para el organismo, ya
que el exceso de producto final inhibe su propia
sntesis en una etapa temprana de la misma.

16
 Tema 5. Enzimas

9. Nomenclatura y clasificacin de las enzimas

Muchas enzimas han sido designadas aadiendo

el sufijo -asa al nombre del sustrato, es decir, la
molcula sobre la cual ejerce su actividad
cataltica. Por ejemplo la ureasa cataliza la
hidrlisis de la urea, y la arginasa cataliza la
hidrlisis de la arginina (a urea y ornitina) o a la
reaccin que catalizan, ej. GAL3P deshidrogenasa.
No obstante existe una clasificacin sistemtica
de las enzimas que las divide en 6 grandes grupos,
cada uno de los cuales se divide a su vez en
subclases:
1: oxido-reductasas (reacciones de oxido-
reduccin)
2: Transferasas (transfieren grupos
funcionales)
3: Hidrolasas (reacciones de hidrlisis),
4: Liasas (reacciones de adicin a los dobles enlaces)
5: Isomerasas (reacciones de isomerizacin)
6: Ligasas (formacin de enlaces con consumo de ATP).

10. Mecanismos para aumentar la eficacia enzimtica

Los procesos metablicos se componen generalmente de reacciones encadenadas que

constituyen las rutas metablicas, para optimizar su rendimiento en lo referente al
tiempo y al espacio existen diversos mecanismos de los cuales destacamos los
siguientes:
Compartimentacin
Las enzimas se encuentran localizadas en los distintos orgnulos (compartimentos)
donde se llevan a cabo las reacciones propias de dichos orgnulos, esto aumenta su
concentracin en los lugares oportunos.

Complejos multienzimticos
Muchas enzimas presentan estructura 4aria formando
complejos donde cada protmero cataliza una reaccin de la
ruta, ahorrando tiempo y espacio. Por ejemplo la piruvato
deshidrogensa-descarboxilasa que permite descarboxilar,
deshidrogenar y activar el piruvato para dar Acetil~CoA e
incorporarlo al ciclo de Krebs.

17
 Tema 5. Enzimas

Isozimas
En ocasiones, existen variantes de un mismo enzima llamadas
isozimas que catalizando la misma reaccin, presentan
diferente Km, lo que hace que su velocidad enzimtica sea
diferente. Cada una se localiza en orgnulos y clulas donde se
precisa una determinada velocidad.

11. Las Vitaminas

Concepto:
Nutrientes orgnicos simples, de composicin variada, esenciales y necesarios en muy
bajas cantidades. El termino vitamina significa "aminas necesarias para la vida" fue
utilizado debido a que la primera que se describi, la B1 tena un grupo amino, hoy se
sigue utilizando aunque se sabe que no todas tienen grupos amino.
Son sintetizadas por vegetales y microorganismos pero no por la mayora de animales,
salvo algunas excepciones (aves sintetizan vitamina C), por ello tenemos que tomarlas
obligatoriamente en la dieta bien como tales vitaminas o en forma de provitaminas
(sustancias precursoras que en el organismo se transforman en vitaminas).

Propiedades: lbiles (luz, calor, oxidacin)

Se destruyen fcilmente por el calor, la luz, las variaciones de pH, el almacenamiento
prolongado, etc.

Funcin:
Reguladora (muchas son coenzimas o precursoras de coenzimas
Algunas actan como coenzimas o forman parte de ellas, y otras intervienen en
funciones especializadas, muy activas. Ej. complejo B: (reacciones de oxi.red.).
Tanto su dficit como su exceso originan trastornos metablicos ms o menos graves
para el organismo. Estas alteraciones pueden ser de tres tipos:
o Avitaminosis: Se produce por la ausencia total de una vitamina.
o Hipovitaminosis: Se origina por el dficit de alguna vitamina.
o Estas dos alteraciones dan lugar a las llamadas enfermedades carenciales, que
pueden resultar mortales.
o Hipervitaminosis: Se produce cuando hay exceso de alguna vitamina, en el caso
de las vitaminas liposolubles A y D puede resultar txico por su dificultad para
ser eliminadas.
Muchas tienen propiedades antioxidantes (A,E,C):
Se unen la los radicales libres producidos en el matabolismo celular (OH-, O-2, H2O2,
), evitando su accin oxidante sobre las molculas orgnicas, especialmente el ADN.

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 Tema 5. Enzimas

Clasificacin:
Atendiendo a su solubilidad se las divide en dos grupos:
o Liposolubles (lipdicas): Vit.( A, E, K, D)
Son de carcter lipdico y por lo tanto no son solubles en agua y s lo son en
disolventes orgnicos. Alguna como la A y D si se toman en exceso pueden resultar
toxicas, puesto que al no disolverse en agua no se eliminan por la orina. No actan
como coenzimas. Aqu se incluyen: el retinol (A), el calciferol (D), la filoquinona (K) y el
tocoferol (E).

o Hidrosolubles (peptdicas): Complejo B (Vit. B1,B2,B3,B4,B6,B8,B9,B12) y

vit C.
Son de naturaleza polar y por lo tanto solubles en agua, su exceso no resulta toxico ya
que se eliminan por la orina. Actan como coenzimas (ej. B1 , coenzima de
descarboxilsas en beta-oxidacin de ac. Grasos) o forman parte de ellos (ej. la B3 de
el coenzima NAD+ o la B3 del coenzima FAD, coenzimas de deshidrogenasas). Aqu se
incluyen: el cido ascrbico (C ) y el complejo vitamnico B que comprende varias la
tiamina (B1), la riboflavina (BC), la niacina o nicotinamida (B3), el cido pantotnico (B5),
la piridoxina (B6), la biotina (B8), el cido flico (B9) y la cianocobalamina (B12).

Cuestiones selectividad: ENZIMAS

1. Define el concepto de enzima, indicando la naturaleza de las mismas y su funcin biolgica. Qu parte
de una enzima es la encargada de interaccionar con el sustrato? (Jun 96)

2. Explica como calcularas el valor de Km para una enzima frente a un sustrato, si conoces la velocidad de
reaccin para distintas concentraciones de sustrato. Qu efecto tendra sobre la Km la presencia de un
inhibidor enzimtico reversible? Razona la respuesta. (Jun 97)

3. Qu factores fsico-qumicos del medio pueden modificar la actividad del enzima? Por qu razn
dichos factores modifican la actividad enzimtica? Razona la respuesta (Jun 97)

4. Qu entenderemos por velocidad de un proceso enzimtico? Qu efecto tiene sobre ella la variacin
de la concentracin de sustrato presente en el medio de reaccin? Qu relacin existe entre la Vmax y la
Km?

5. Indica de qu forma modifica la inhibicin enzimtica reversible la Vmax y la Km de una

enzima y representa el fenmeno mediante una grfica en la que figure la velocidad de
reaccin frente a la concentracin del sustrato. Razona la respuesta.

6. Dibuja la estructura terciaria de una enzima unida a su sustrato, sobre este dibujo indica
lo siguiente:
a) dnde actuara un inhibidor competitivo
b) Cul de los dos tiene un efecto reversible?
c) cmo conseguiras revertir el proceso inhibitorio? Razona las respuestas.

7. Define los siguientes conceptos referidos a enzimas:

Cofactor, Km, Catlisis, Velocidad del proceso enzimtico

8. En qu parte de la molcula del enzima acta una sustancia que produce una inhibicin reversible de
ste? De qu forma podramos revertir el proceso de inhibicin en este caso? Razona la respuesta

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 Tema 5. Enzimas

9. Define el concepto de cofactor enzimtico?Qu papel juega el cofactor en el proceso cataltico? Cita
algn ejemplo de cofactor enzimtico

10. Una determinada concentracin de enzima cataliza la conversin de un sustrato S en un producto P a

una velocidad mxima de 3 mM/min, en estas condiciones de ensayo qu incremento de valor tendr la
Vmax del proceso si duplicamos la concentracin del sustrato? Razona la respuesta

11. Cmo se define la velocidad de un proceso enzimtico? Qu efecto tiene sobre ella el incremento de
sustrato presente en el medio de reaccin? Razona la respuesta

12. Concepto de enzima. Visto

Comenta brevemente el papel de las enzimas en la clula.
En qu parte de la molcula enzimtica tiene lugar la transformacin del sustrato?

13. Considerando un proceso catalizado por una enzima contesta las siguientes cuestiones:
1. Define la velocidad de un proceso enzimtico: Visto
2. Define el concepto de Km: visto
3. Representa mediante una grfica como vara la velocidad del proceso con la adicin de
cantidades crecientes de sustrato. Razona la respuesta
4.
14. A un pH 7.5 una determinada enzima transforma, con rendimiento ptimo, una determinada
concentracin de sustrato S en un producto P. Si modificamos el pH hasta un valor de 6.4 qu le
ocurrira a la velocidad del proceso? qu le ocurrira al centro activo en estas condiciones de reaccin?
Razona la respuesta:

15. Explica brevemente el mecanismo de la inhibicin competitiva y no competitiva de una enzima,

indicando similitudes y diferencias entre ellos.

16. Un enzima ha perdido eficiencia cataltica en la transformacin de un sustrato S en un producto P al

estar sometida aquella a la accin de un inhibidor competitivo, bajo estas circunstancias de qu forma se
veran afectadas la Vmax y la Km de la enzima? cmo solucionaras el problema?. Razona tu respuesta.

17. Tenemos una enzima E que es capaz de transformar dos sustratos diferentes S1 y S2 en los
productos P1 y P2 respectivamente. Si los valores numricos de km para ambos procesos son de 1 y 2
respectivamente. de qu sustrato se obtendr una mayor cantidad de producto por unidad de tiempo?.
Considerar para ambas reacciones la misma cantidad de enzima y la misma concentracin de sustrato.

18. Elabora un texto coherente de no ms de 10 lneas en el que figuren las siguientes palabras: enzima,
protena, sustrato, centro activo, velocidad de reaccin.
Para un 7: Los enzimas son protenas globulares que presentan una conformacin espacial definitiva que les permite interaccionar
especficamente con el sustrato a nivel del centro activo. En consecuencia disminuye la energa de activacin necesaria lo que
determina un aumento de la velocidad de reaccin.
Para un 9: Las enzimas, en su mayora, son protenas globulares que basan su funcionalidad en la interaccin especfica a nivel
geomtrico con otra sustancia llamada sustrato. Dicho sustrato o reactivos del proceso qumico se unen especficamente a una
regin del enzima llamado centro activo. Esta interaccin tiene como consecuencia la disminucin de la energa de activacin
necesaria para el proceso, lo que se traduce en un aumento de la velocidad de reaccin sin necesidad de recurrir a un aumento de
la T.
Para un 10: ?
19. La velocidad de un proceso enzimtico est influenciada por la concentracin de sustrato? y por el pH
del medio?. Razona tus respuestas.

21. La constante de Michaelis (Km) da idea de la eficiencia con la que una enzima transforma un sustrato en
producto de qu manera podramos modificar la afinidad de una enzima por su sustrato (km)?. Razona la
respuesta.

22. En un determinado proceso enzimtico una concentracin de enzima E transforma un sustrato S en un

producto P alcanzndose una velocidad mxima (Vmax) de 35 mMol/min. Si en esta etapa del proceso
aadimos cierta cantidad de una sustancia S, reconocida por el centro activo de la enzima, pero no
transformable en producto, se observa que la V del proceso desciende un 50%. Representa grficamente el
fenmeno (velocidad del proceso frente a concentracin del sustrato) e indica por qu la adicin de S ha

20
 Tema 5. Enzimas

reducido la V. cmo haras en este caso para recuperar de nuevo el valor de la V sin retirar Sdel medio?.
Razona la respuesta

23. Comenta brevemente la naturaleza y la funcin de las enzimas, pon un ejemplo de una enzima concreta
con su correspondiente funcin. Visto
Cul es la razn por la cual una ligera variacin en el pH puede modificar la velocidad a la que una
determinada enzima transforma el sustrato en producto?. Visto

24. Define el concepto de enzima e indica su naturaleza qumica. Visto

Qu se entiende por centro activo de una enzima?. Regin que se une especficamente con el S
De qu esta compuesto el centro activo?. Aa de fijacin + aa catalticos + en ocasiones cofactores
Cmo se explica la elevada especificidad que, en general, presentan las enzimas por sus sustratos?.
Por qu una razn una ligera variacin del pH puede modificar la afinidad de una
enzima por su sustrato?.

25. Explica brevemente el mecanismo de la inhibicin competitiva y no competitiva

de una enzima, indicando similitudes y diferencias entre ellos.

26. A la vista de la grfica que aparece en la figura 2 Indica lo siguiente: Cul sera el valor numrico
aproximado de la KM? como se modificara la grfica en presencia de un Ic? Razona la respuesta.

27.- Cuando se representa la cintica de catlisis enzimtica de una enzima frente a un sustrato, en
diferentes condiciones de pH y la misma T de reaccin, se obtiene el resultado de la figura . Comenta el
resultado obtenido y razona el comportamiento de la enzima en el ensayo teniendo en cuenta los criterios
estructurales.

28. Se podra aumentar la velocidad de un determinado proceso enzimtico sin aumentar la cantidad de
enzima presente en la reaccin? Tiene un lmite este comportamiento enzimtico? RazonaNota: A T y
pH constantes
29. En un tubo de ensayo se lleva a cabo una reaccin enzimtica, y en un momento dado interesa parar la
reaccin qu procedimiento utilizaras para lograrlo de manera irreversible? Razona la respuesta y
representa la cintica del proceso ensayado utilizando un eje de coordenadas, en el que se represente la V
de reaccin frente a la concentracin de sustrato.

30.- Define Inhibicin competitiva y no competitiva, indicando en cada caso el efecto de cada una de ellas
sobre el proceso enzimtico. cmo invertiras una inhibicin competitiva?

31.- Define los siguientes conceptos referidos a enzimas: a) centro activo b) cofactor enzimtico. Indica la
naturaleza qumica de cada uno de ellos y comenta sus respectivos papeles en la reaccin enzimtica .

32.- Explica porque la modificacin de la estructura terciaria de una protena puede alterar la funcin de
esta. Cmo podras alterar la estructura terciaria de una protena?
33. Explica brevemente el mecanismo de la inhibicin competitiva y no competitiva de una enzima,
indicando similitudes y diferencias entre ellos.
33b. Elabora un texto coherente de no ms de 10 lneas en el que figuren las siguientes palabras: enzima,
protena, sustrato, centro activo, velocidad de reaccin.

34. Explica brevemente el mecanismo de la inhibicin competitiva y no competitiva de una enzima,

indicando similitudes y diferencias entre ellos.

35. Elabora un texto coherente de no ms de 10 lneas en el que figuren las siguientes palabras:
enzima, protena, sustrato, centro activo, velocidad de reaccin.

36. Inhibidores competitivos: cmo actan los IC. Sobre la enzima diana? Representa mediante una
grfica, la hipottica variacin de la velocidad de un proceso enzimtico en funcin de la concentracin
de sustrato en presencia y ausencia encada caso- de u un I competitivo. Razona la respuesta.

37. Determinada enzima cataliza un proceso a un pH ptimo de 8.0. Si en este proceso variamos el
valor de pH y lo ponemos a 6.4 qu le ocurrir a la velocidad del proceso? qu cambios tienen lugar en el
enzima al producirse la variacin de pH?

21
 Tema 5. Enzimas

38. En qu parte de un enzima acta un IC? Explica qu efecto tiene este tipo de I sobre la Vmax y la
Km. Representa el fenmeno mediante un grfico en el que figuren como variables la concentracin del
sustrato y la velocidad del proceso.
39. Defina un IC, explique el mecanismo inhibitorio e indique como corregira su efecto sobre el enzima.
Describa mediante un grfico.

40. Determinada enzima cataliza un proceso a un pH ptimo de 7.3 y una T de 37 C. Si en este

proceso variamos el valor de pH y lo ponemos a 6., manteniendo Cte la T qu le ocurrir a la velocidad
del proceso? Representa la variacin de velocidad, de dicho proceso en ambos casos, mediante un grfico
en el que figuren los valores de velocidad del proceso en funcin de la concentracin del sustrato presente
en la reaccin.

41. Explica mediante un dibujo el mecanismo de inhibicin enzimtica que tiene lugar en presencia de:
a) IC y b) INC. Razona en cada caso las consecuencias (efecto sobre la Km y Vmax.) de cada tipo de
inhibicin.

42. En la figura se representa la cintica de determinado proceso enzimtico. Si en un ensayo aparte se

reproduce el mismo ensayo pero introduciendo a) un IC b) un INC. Cmo sera e cada caso la grfica.
Representa la grfica indicando en cada caso la Vmax del ensayo.

43. A) Razona por qu la modificacin del entorno fsico-qumico de una protena en una clula puede
modificar su funcin. B) Mediante un dibujo o esquema, en el que se represente el centro activo, indica
cmo afectaran estas modificaciones a la actividad de una enzima en el reconocimiento y la transformacin
de su sustrato.

44. Texto de no ms de 10 lneas en que se relacionen de forma coherente los siguientes trminos:
Inhibicin competitiva centro activo velocidad mxima reversible

Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su actividad. La unin del
inhibidor puede ser reversible o irreversible. En la inhibicin reversible, el inhibidor se une temporalmente al
centro activo de la enzima impidiendo su normal funcionamiento. Si la inhibicin es competitiva, el inhibidor
es una molcula parecida al sustrato que compite con l para unirse al centro activo. Si se fija el inhibidor al
centro activo, la enzima queda bloqueada y el sustrato no puede fijarse hasta que el inhibidor se vaya. El
inhibidor competitivo slo puede unirse a la E, aumentando su Km; pero no puede unirse al complejo ES,
por ello, no afecta a la Vmx de la enzima. Esta respuesta debera completarse indicando que la inhibicin
es reversible ya que podemos alcanzar la velocidad mxima aumentando la concentracin de sustrato.

45. Texto de no ms de 10 lneas en el que se relacionen de manera coherente, dentro de un fenmeno

biolgico, los siguientes conceptos: enzima, centro activo, velocidad mxima, desnaturalizacin.

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 Tema 5. Enzimas

Prcticas:

3.- DIGESTION DE ALMIDON CON AMILASA SALIVAL

FUNDAMENTO
Sabemos que el almidn es una macromolcula, verdadera despensa de glucosa
en vegetales y de gran importancia en la dieta de los animales que nos alimentamos de
l. La degradacin del almidn tiene lugar por hidrlisis enzimtica en la que participa
una enzima que contiene la saliva y que se denomina amilasa o ptialina (otras enzimas
similares son producidas por el pncreas y actan en el intestino). La reaccin de
hidrlisis del almidn sera:
ALMIDN --- enzimas desramificadores + amilasa ----> MAL TOSA ---- maltasa ---->
GLUCOSA

PROCEDIMIENTO
1. Introducimos un poco de almidn en un tubo de ensayo.
2. Aadimos un poco de saliva (para conseguir saliva, inclinamos la cabeza y el
cuerpo hacia delante y pegamos la lengua al paladar).
3. Removemos con una varilla de vidrio para que se mezcle el almidn con la
saliva (podemos aadirle un poco de agua destilada para que se mezcle
mejor). No se podran mezclar tapando el tubo y agitando con suavidad?
4. Para agilizar el proceso, calentamos de pasada a la llama del mechero,
cuidando que no pase de 37C (para comprobar que la temperatura no es
mayor, nos acercamos el tubo al brazo). Se podra incubar con la
temperatura corporal? (manos, axila, ...)
5. Dejamos reposar el tubo de ensayo en la gradilla al menos 5 minutos,
agitndolo de vez en cuando.
6. Aadimos 1 ml de reactivo de Fehling A y 1 ml de Fehling B.

IMPORTANTE: EL REACTIVO FEHLING NOS PERMITE COMPROBAR QUE SE HA

PRODUCIDO LA HIDRLISIS, YA QUE EL ALMIDON NO PRESENTA PODER
REDUCTOR, PERO UNA VEZ SE HA PRODUCIDO LA HIDRLISIS, TENDREMOS
GLUCOSAS LIBRES QUE, COMO TODOS LOS MONOSACRIDOS, SI PRESENTAN
PODER REDUCTOR. EL COLOR SER, EN CONSECUENCIA, ROJO LADRIOLLO
(REACCIN POSITIVA).

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 Tema 5. Enzimas

7.-ACTIVIDAD ENZIMTICA: la catalasa

FUNDAMENTO
En esta prctica se trata de observar el efecto de diferentes factores sobre la
actividad enzimtica, pero tambin se hace nfasis en la aplicacin del mtodo
cientfico, tratando de emitir hiptesis para explicar lo observado y contrastando
estas hiptesis experimentalmente para demostrar su validez o invalidez.
El enzima elegido es la catalasa, que cataliza la descomposicin del perxido de
hidrgeno en agua y oxgeno:
catalasa
2 H 2O 2 ------- 2 H2O + O2
La funcin fisiolgica del enzima es eliminar el perxido de hidrgeno que se
forma durante procesos oxidativos del metabolismo, ya que este es un compuesto
altamente oxidante que puede producir daos celulares que van del envejecimiento
celular a la induccin de tumores (por daos en el DNA).
La catalasa es una protena con funcin enzimtica formada por cuatro
monmeros, cada uno de los cuales contiene alfa hlices y hojas beta (E 4aria).
Aunque la catalasa es un enzima amplsimamente distribuido entre los seres
vivos, la fuente elegida es la patata, por ser un material accesible, asequible, de fcil
conservacin y manipulacin y con un elevado contenido en este enzima.

Elaboraremos hiptesis sobre el efecto que tienen los

cambios de pH (con vinagre, HCl y NaOH) y la T :
cambios en la actividad o cese de la misma por
desnaturalizacin.

PROCEDIMIENTO

1. Mide el pH de las preparaciones de vinagre, HCl y NaOH con la ayuda de papel indicador.
2. Corta 6 cubos de patata (sin piel) de 0,5 cm de lado y se introducen en sendos tubos de ensayo
rotulados de la A a la F y con marcas de 2 y 4 ml.
3. Aade al tubo A 2 ml de agua.
4. Aade a los tubos B, C y D 2ml de vinagre, HCl y NaOH respectivamente y espera 5 minutos.
5. Aade al tubo E 2 ml de agua y ponlo a hervir al bao Mara durante 5 minutos.
6. Aade al tubo F 2 ml de agua e introdcelo en un bao de hielo durante al menos 10 minutos.
7. Transcurrido el tiempo de espera, elimina el lquido de todos los tubos con precaucin (recuerda
que ests trabajando con cidos y bases fuertes).
8. Mantn el tubo F en hielo.
9. En el caso de los tubos B, C y D realiza varios lavados con agua, empleando el frasco lavador,
para asegurarte de que eliminas todos los restos de cido o base.
10. Aade 2 ml de agua oxigenada a cada uno de los tubos, observa el resultado y completa la tabla:

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 Tema 5. Enzimas

Tratamient Resultado
Tubo Explicacin
o observado

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