PRACTICA 1 QUIMICA : RECONOCIMIENTO PROTEINAS

Proteinas 1:
En este prctico realizamos una practica que consista en el reconocimiento de protenas
a distintas muestras como ser leche, gelatina, clara de huevo y aspartamo.
La idea de este prctico es mediante dos mtodos
diferentes el Biuret y Xantoproteico, extraer de las muestras las protenas para as poder
identificar su naturaleza proteica.

Objetivos:

-Extraer la casena de la leche y reconocer su naturaleza proteica.

-Utilizar misma tcnica para reconocer la naturaleza proteica de otras muestras.

Materiales: Reactivos utilizados:

Vaso de Bohemia Leche descremada en polvo
Varilla de vidrio Gelatina
Mechero Clara de huevo
Soporte Edulcorante
Tela metlica Acido etanoico 2.0M
Gradilla NaOH al 10%
Tubo de ensayo CuSO4 al 1%
Termmetro cido ntrico concentrado
Papel de filtro Agua

Qu se pretende identificar con el ensayo de biuret?

El reactivo de Biuret se pretende utilizar para la determinacin o identificacion de

protenas, pptidos que presenten enlaces pepiticos(2 o mas) en una muestra .

Qu criterio se utiliza para determinar si el mismo resulta positivo o negativo?

En este caso utilizamos Hidrxido de sodio y Tartrato de Sodio de Potasio.El Hidrxido

de sodio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que
tenga lugar.
El criterio para determina si la muestra de estudio resulta positiva o negativa ,se debe a
que el reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa
cuando se combina con polipptidos de cadena corta.por lo cual si la solucin final nos da
una coloracin violeta , se refiere a que se ha detectado una presencia de protenas o
mejor dicho de enlaces peptidicos.

Qu se pretende identificar con el ensayo de la reaccin xantoproteica?

se pretende utilizar para determinar la presencia o no de protenas en una muestra.

Esta reaccin se debe a la presencia de un grupo fenilo en la molcula proteica. Los
complejos de la molcula proteica que son de importancia en esta reaccin son la tirosina
y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el
laboratorio. La reaccion xantoproteica a su vez se puede considerar como una sustitucion
electrofilica aromtica .. de los residuos de tirosina de las proteinas por el acido nitrico que
reacciona.
Qu criterio se utliza para determinar si el mismo resulta positivo o negativo?

La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de

grupos aromticos, especialmente en presencia de tirosina, dando un compuesto
coloreado amarillo a pH acido. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali,
se torna color amarillo oscuro a naranja.

Cmo se lleva a cabo la reaccin de Biuret?

La Prueba de Biuret es un ensayo general para las protenas. Cuando una protena
reacciona con el cobre (II) sulfato (azul), la prueba positiva es la formacin de un complejo
de color violeta.

ampliacion del resultado de la reaccion de biuret

La prueba de biuret funciona para cualquier compuesto que contenga dos o ms de los
siguientes grupos:

Cmo se lleva a cabo la reaccin xantoproteica ?

se representa la produccin de un producto de color amarillo en la adicin de cido

ntrico.realizado en un ensayo para detectar la presencia de tirosina y triptfano en una
protena.

Cmo se lleva a cabo esta prctica?

Para la extraccin de la casena de la leche:

Comenzamos por colocar una punta de esptula de leche en polvo y la agregamos 50
mililitros de agua para luego calentarla hasta aproximadamente 40 grados ,agitando
siempre con una varilla de vidrio.
Luego le agregamos Acido Etanoico 2.0M hasta la coagulacion total.
Continuamos por extraer dicho solido del suero mediante la filtracin. despus lo fuimos
secando y por ultimo lo dividimos en dos partes iguales (a ojo).y los colocamos cada uno
en un tubo de ensayo.

A continuacin, en el tubo 1 , practicamos el ensayo de Biuret: este consiste en agregar 20

gotas de NaOH al 10% y luego agregamos 2 gotas de CuSO4al 1%.
En el otro tubo ,tubo 2 , realizamos el ensayo Xantoproteico, que consiste en agregarle al
solido 10gotas de HNO3 concentrado
 tubo 1

tubo 2

Luego de realizada la reaccin de Biuret la muestra se torno violeta, por lo que podemos
decir que existen enlaces pepiticos y por lo tanto protenas en la muestra y dicha protena
es la casena.

En el ensayo de Xantoproteico podemos persivir un color amarillento ,por lo que nos

muestra que la existen protenas en la muestra ya que el color amarillo es representativo de
los restos aromaticos como la Tirosina y la Fenilalanina.

Luego realizamos una solucin de clara de huevo y agua ,(con el fin de que de para todas
las practicas) ,y se realizo la misma tcnica pasada para la bsqueda de presencia de
protenas .
En el tubo 1 se practico la reaccin de biuret y en el tubo 2 , se practico la xantoproteica :
 tubo 1

tubo 2

Por las indicaciones nombradas en la practica anterior con la casena , podemos ver que
ambas dieron positivas y por lo tanto podemos deducir que ambas muestras presentan
protenas protenas .la protena ubicada en la clara de huevo es la ovoalbumina .

Luego realizamos nuevamente el procedimiento para la gelatina ,calentndola antes de

efectuar la practica y agitndola con una varilla de vidrio .
En el tubo 1 se practico la reaccin de biuret y en el tubo 2 , se practico la xantoproteica :
 tubo 1

tubo 2

En este caso , el ensayo de biuret dio positivo por la coloracin violeta por lo cual fueron
localizadas protenas a partir de esta reaccin .pero en el caso del xantoproteico , se dio
una coloracin casi incolora por lo que no tiene restos aromticos.

Por ltimo se realizo una solucin de edulcorante(aspartamo) en agua y la separamos en

dos tubos de ensayo para realizarles las reacciones previamente mencionados.
En el tubo 1 se practico la reaccion de biuret y en el tubo 2 , se practico la xantoproteica :
 tubo 1

tubo 2

En la ultima practica ,con edulcorante , se dio un resultado negativo ya que son las dos
muestras casi incoloras.

Datos obtenidos:

muestra Biuret Xantoproteica

Casena positivo positivo

Ovoalbmina positivo positivo

Gelatina positivo negativo

Aspartamo negativo negativo

Errores sistemticos y asistemticos de la practica tenidos en cuenta son:

En el transcurso de toda la practica , las mediciones fueron a ojo y con un gotero ,por lo que
no fue utilizado una pipeta graduada . Esto trae con sigo errores ya que la medida exacta de
reactivo por ejemplo fue tomada con un error mnimo para todos los casos y as con las
muestras .
Tambien por la limpieza de los tubos de ensayo , ya que a pesar de que los tubos fueron
previamente limpiados , podran haber tenido algn residuo de alguna practica pasada .
Otro factor del error a tener en cuenta es a la temperatura que llevamos la gelatina por
ejemplo , que capas que no le alcanzo para realizarse completamente sus enlaces quimicos
.
Otro factor pudo haber sido el estado de los reactivos o muestras ,como la leche por ejemplo
que pudo haber estado en un mal estado para ser realizada la practica o tambin con los
otros .

Protenas 2: Dilisis

En esta segunda parte del prctico de protenas, estudiaremos la dilisis. realizamos la

experiencia a partir de un dializador, una solucin con protenas (gelatina) y sales (NaCl)
.primero se testeo el agua que utilizamos en la dialisi para la existencia de proteinas y dio
negativo . por lo que proseguimos a poner la solucion de gelatina y el NaCl dentro del
dializador . luego de unos 10 a 15 minutos , realizamos diferentes de la solucion externa del
dialisis como interna .A partir de el ensayo de biuret para ver si existen proteinas en la
smuestras y la otra deAgNO3 para la existencia de sales dentro y fuera .

El objetivo es demostrar que en una dilisis, mientras que las sales pueden pasar
libremente por la membrana, las protenas quedan dentro.

Materiales y Sustancias :

Dializador
Vaso de Bohemia
Gelatina en solucin
AgNO3 (Nitrato de Plata)
NaOH al 10%
CuSO4 al 1 %

Qu se pretende identificar con el ensayo de biuret?

El reactivo de Biuret se pretende utilizar para la determinacin o identificacion de protenas,

pptidos que presenten enlaces pepiticos(2 o mas) en una muestra .

Qu criterio se utiliza para determinar si el mismo resulta positivo o negativo?

En este caso utilizamos Hidrxido de sodio y Tartrato de Sodio de Potasio.El Hidrxido de
sodio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que
tenga lugar.
El criterio para determina si la muestra de estudio resulta positiva o negativa ,se debe a que
el reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando
se combina con polipptidos de cadena corta.por lo cual si la solucin final nos da una
coloracin violeta , se refiere a que se ha detectado una presencia de protenas o mejor
dicho de enlaces peptidicos.

Para qu es necesario el Nitrato de Plata en este prctico?

Como dijimos con antes, la solucin que se coloca en el instrumento tiene, adems de
protenas, sales y el nitrato de plata diriamos que es un determinador de sales en una
solucion .
El cloruro de plata es un slido blanco, y su formacin determina que el ensayo sea
positivo o negativo

En agua, tanto el nitrato de plata como el cloruro de sodio de disocian de la siguiente manera:

Reaccin:

AgNO3 (Ag +) + (NO3-) (ac)

Catin Plata Anin Nitrato

NaCl (Na+) + ( Cl -) (ac)

Catin Sodio Anin Cloruro

luego:

(Ag+) (ac) + (Cl-) (ac) AgCl (s)

Procedimiento de la practica :

Colocamos una solucin dentro del dializador (gelatina y NaCl) y, tomando dos pequeas
muestras, la testeamos en busca de sales y protenas (realizamos prctica con AgNO3 y
ensayo de Biuret, ambos de los cuales fueron positivos. Luego, colocamos el instrumento
dentro de un vaso de Bohemia con agua, y luego de un tiempo , se tomo pruebas de biuret
y AgNO3 dentro y fuera del dializador .
Imagen ilustrativa de lo realizado en clase , los puntos azules son las proteinas y las rojas
las sales .

Qu obtuvimos?

las prubas finales que obtuvimos luego de realizarles los siguientes ensayos (biuret y NaCl)
a la muesra del agua , dieron positivas para la sales dentro del agua fuera del sializador pero
el de Biuret result negativo, lo cual demuestra que las protenas no atravesaron la
membrana del instrumento ,esto es dado pr el gran tamao de las proteinas.

muestra AgNO3 biuret

interior positivo no relaizada
interior no realizada positivo
exterior positivo no relaizada
exterior no relaizada negativo

Errores en la practica:

Los errores que pudimnos haber tenido fueron de presicion de medida de los reactivos y
sustancias ,ya que no utilizamos medidas exactas para la realizacion de la practica.
El dializador fue hecho por alumnos pasados en la institucion por lo que no son
dializadores tecnicamente buenos para realizar la tarea (aunque igual funcione).
La cantidad de agua que fue aplicada en el recipiente pudo haber sido demasiada en
comparacion a la solucion de gelatina y NaCl.