UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES

ESCUELA DE INGENIERA EN CIENCIAS AGRCOLAS
PROGRAMA DE INGENIERA AGRONMICA

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

UNIDAD ACADMICA PROGRAMA DE INGENIERA AGRONMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AGRCOLA
PRACTICA 11
UNIDAD TEMTICA Los nematodos Fitoparsitos
PRACTICA PRESENTACIN LAB Nematodos Fitoparsitos
INTRODUCCIN

Los nematodos pertenecen al reino Animalia. Su apariencia es semejante a

gusanos pero taxonmicamente distintos a los gusanos verdaderos. Se
encuentran prcticamente en todos los hbitats, la mayor parte viven libremente
en agua dulce o salada o en el suelo y se alimentan de microorganismos, plantas
y animales.
Comprenden uno de los grupos ms ricos en especies del reino animal y en
trminos de biomasa, constituyen uno de los grupos ms numerosos, pues
pueden encontrarse hasta 20 000 000 de individuos por metro cuadrado de suelo.
Los nematodos tienen gran impacto en la economa mundial, ya que son
parsitos de cultivos productores de alimento como cereales, leguminosas,
pltano , yuca, coco, papa, remolacha, caa, ame adems cultivos destinados a
la obtencin de fibra, madera, as como plantas ornamentales, igualmente son
considerados parsitos de vertebrados, de ah su importancia en medicina y
veterinaria.
Los nematodos fitoparsitos presenta un tamao que oscila entre los 300 a 1000
micrometros, y algunos pueden llegar a 4 milimetros de longitud por 15-35
micrometros de ancho, se caracterizan por ser hialinos, no segmentados, su
cuerpo est cubierto por una cutcula con estras algunas veces, poseen un
sistemas digestivo constituido por boca, esfago, intestino, recto y ano. Algunas
especies muestran dimorfismo sexual muy marcado (machos y hembras con
formas diferentes). Las hermbras adultas adquieren forma de pera, redonda o
arriodana. Una de las caractersticas que identifican a un nematodo fitoparsitos
es la presencia de un estilete, el cual es una estructura protactil (que puede
extenderse hacia afuera) y hueca a manera de aguja hipodrmica, que le permite
al nematodo penetrar la raz, asi como perforar las celulas vegetales y extraer
nutrientes.
Las infecciones por nematodos en plantas producen sntomas en races, asi como
en partes areas. Las races pueden presentar lesiones, nudos o agallas,
ramificacin excesiva, cuando las lesiones van acompaadas por
microorganismos patgenos (hongos, bacterias) el resultado es la pudricin de la
raz. Los sntomas en la raz generalmente van acompaados de sntomas en las
partes areas reflejados como menos crecimiento, coloracin amarilla del follaje,
reduccin del rendimiento y mala calidad de los productos.
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Algunas especies de nematodos invaden las partes areas de las plantas en lugar
de las races, causando lesiones necrticas, distorsin de hojas y tallos,
desarrollo anormal de partes florales.

OBJETIVOS

Conocer los diferentes mtodos de aislamiento de nematodos fitoparasitos

Identificar gneros nematodos Fitoparsitos asociados a tejido vegetal
enfermo.

COMPETENCIA RESULTADO DE APRENDIZAJE

Conoce las metodologas de extraccin Aplica la metodologa de extraccin.
de nematodos y las principales Identifica gneros de nematodos con
caractersticas que permiten diferenciar ayuda de claves taxonmicas
los gneros.
MATERIALES Y EQUIPOS

Mtodo de licuado, centrifugacin y Flotacin en azcar

Tamices de 710, 250, 106 y 38 m
Licuadora
Centrifuga
Frasco lavador
Cajas de Petri
Tejido vegetal enfermo (Races)
Suelo
Portaobjetos
Capilares
Estereoscopio
Microscopio

Mtodo de Embudo de Baerman

Tejido vegetal enfermo (Races)
Suelo
Embudo
Papel filtro
Balde
Cajas de petri

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Portaobjetos
Capilares
Estereoscopio
Microscopio

ACTIVIDADES - PROCEDIMIENTO

Extraccin De Nematodos Por El Mtodo De Licuado, Centrifugacin Y

Flotacin En Azcar

1. Las races se lavaran y picaran y posteriormente se pesaran 30 g

2. Muestras de Suelo: Las muestras de suelo luego de ser pesadas sern

pasadas directamente a los tamices.
1. Muestras de Races: Verter las races (Cada muestra por separado si trata
de diferentes cultivos o tratamientos que se quieran evaluar) en un vaso de
licuadora, licuar tres veces por 10 s con intervalos de este mismo tiempo
entre un licuado y otro.
2. Pasar las muestras de races y suelo (cada muestra por separado) por
tamices ubicados en orden: 710, 250, 106 y 38 m, lavando con abundante
agua proveniente del grifo, de manera que los nematodos pasaran del
tamiz mayor al de menor tamao de poro.
3. Verter finalmente los residuos de lavado que quedaron en el tamiz de 38
m a tubos de centrifuga con ayuda de un embudo.
4. Centrifugar a 3.800 rpm durante 5 min. Una vez cumplido el tiempo,
eliminar el sobrenadante de los tubos.

5. Al precipitado se agregar una solucin de azcar al 50% y nuevamente se

llevar a centrifugar en las mismas condiciones anteriores.
6. Una vez cumplido este proceso recuperar el sobrenadante donde quedaran
flotando los nematodos. Verter el sobrenadante en el tamiz de 38 m para
realizar el lavado de azcar a los nematodos, los cuales se colectaran en
una caja de Petri
7. Identificar los nematodos tomando alcuotas de 20 L a partir de diferentes
puntos de la caja Petri, colocar sobre un portaobjetos y observar con la
ayuda de un microscopio compuesto de luz

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II. Extraccin De Nematodo Por Mtodo De Embudo De Baermann

Races
Recolectar suelo de un cultivo, aproximadamente 300 gramos.
Preparar un embudo (12-15 centmetros de dimetro) y unir una manguera
en el punto de salida, sellar con una pinza colocada en el extremo.
Colocar el embudo en un soporte. Dentro del embudo colocar un papel
filtro y posteriormente llenarlo con agua.
Colocar la muestra de suelo en un vaso de precipitado, seguidamente
sellar con un trozo de tela, y sujetarla con una liga.
Invertir el vaso de precipitado sobre el embudo, de manera que quede
sumergido en el agua y se deja reposar durante toda la noche o varias
horas.
Los nematodos vivos se mueven activamente y migran a travs de la tela y
papel poroso, llegando hasta la parte final de la manguera. Mas del 90% de
los nematodos vivos se recuperan en los primeros 5-8 mililitros de agua.
Colocar la muestra en una caja de petri.
Hacer conteo de nematodos con ayuda del estereoscopio.
Tomar una gota con ayuda de un capilar, colocar en un porta objeto,
observar a travs del microscopio y con ayuda de claves taxonmicas
identificar los nematodos presentes.

Races
Cortar el material (races en trozos) con ayuda de un cuchillo.
Colocar el tejido en el embudo de Baermann como se describi
anteriormente.
Dejar reposar durante toda la noche
Recoger la muestra en una caja de petri estancada en el extremo de la
manguera
Realizar conteo de nematodos con ayuda del estereoscopio
Tomar una gota con ayuda de un capilar, colocar en un portaobjeto,
observar a travs del microscopio y con ayuda de claves taxonmicas
identificar los nematodos presentes.

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CRITERIOS PARA LA EVALUACIN DE ASIGNATURAS DE LABORATORIO

la nota de cada practica de laboratorio ,segn lo determine el docente el da de la
prctica, podr salir de:

Solamente el informe: 100%

Informe y Quiz: 50 y 50%

Informe, ms pre-informe: 80 y 20% respectivamente

Solamente Quiz : 100%

1. Preinforme y/o quiz: Para la revisin de los conceptos previos se evaluar con
el pre informe o un quiz, este ltimo se realizar antes de iniciar la prctica o al
finalizar la experiencia. El pre informe se presenta al iniciar cada experiencia, es
un documento escrito a mano que se elabora teniendo en cuenta la informacin
suministrada en el manual de laboratorio. En el pre informe el equipo de trabajo
refleja lo que va a ser su actividad en la prctica del da. A continuacin se
presenta el formato para la elaboracin del pre-informe:

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