ASIGNATURA:
1. INTRODUCCIN
Durante la etapa reproductiva, las hembras de las especies presentan ciclos estrales. stos
comprenden una serie de eventos ovricos, endocrinos y conductuales recurrentes que
tienen la finalidad de que ocurra la ovulacin, el apareamiento y la gestacin. Un ciclo
estral inicia con el momento de receptibilidad sexual o estro y concluye con el siguiente
estro. Si despus de la cpula se logra la fertilidad los ciclos estrales se ven interrumpidos
por un anestro fisiolgico (Galina y Valencia, 2008). Un mtodo diagnstico para
reconocer las fases del ciclo estral es la citologa vaginal. La influencia de las hormonas
ovricas sobre el epitelio vaginal ocasiona cambios citolgicos caractersticos que
permitan, en la mayora de los casos; determinar la etapa del ciclo estral en la que se
encuentra la hembra, por lo que es un procedimiento ampliamente utilizado en medicina
veterinaria sobre todo en la perra. En la citologa de vagina encontramos clulas epiteliales
de las diferentes capas del epitelio estratificado plano no queratinizado, a veces clulas
endocervicales, de reserva, y en ocasiones clulas endometriales as como clulas no
epiteliales como son eritrocitos, neotrfilos, eosinfilos, macrfagos y espermatozoides
entre otros. Las clulas que forman el epitelio vaginal estratificado plano sin queratina de
la membrana basal hacia la superficie son las siguientes: basales o germinales, intermedias,
superficiales y anucleadas o escamas (De Arger, 2001). El mtodo de la citologa vaginal
para la determinacin de la ovulacin es un mtodo simple, rpido y relativamente
econmico, adems de muy difundido. La exactitud del mtodo es relativa y tiene fallas
(Sorribas, 2011).
El presente informe rene, describe, compara y discute con las informaciones existentes y
los resultados, mtodos de la prctica realizada sobre el uso de la metodologa diagnstica
citologa vaginal en las perras, para observar el estado de la fase del ciclo estral de la perra
que es influida por las hormonas sexuales.
2. OBJETIVOS
3. REVISIN BIBLIOGRFICA
Las mltiples actividades de las clulas, los tejidos y los rganos del cuerpo estn
coordinadas mediante la interaccin de diversos tipos de mensajeros qumicos:
neurotransmisores (liberados por los axones terminales de las neuronas en las uniones
sinpticas), hormonas endocrinas (producidas por glndulas o por clulas especializadas
que las secretan a la sangre circulante y que fluyen en la funcin de clulas diana),
hormonas neuroendocrinas (secretadas por las neuronas hacia la sangre), hormonas
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Estudiante de Fisiologa Veterinaria II; Medicina Veterinaria Sede Marangani; UNSAAC
Marangani; 20 de Julio de 2017
crishuaHC@gmail.com
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paracrinas (secretadas por clulas hacia el lquido extracelular), hormonas autocrinas
(producidas por clulas y que pasan al lquido extracelular desde que acta sobre si misma
clula) y citosinas (pptido secretado por las clulas hacia el lquido extracelular y que
puede funcionar como hormona autocrina, paracrina o endocrina) (Hall, 2012). El sistema
endocrino ha evolucionado para permitir la coordinacin y regulacin de los procesos
fisiolgicos a travs de mensajeros qumicos llamados hormonas. Es un sistema formado
por glndulas de secrecin interna (glndulas endocrinas) y clulas endocrinas diseminadas
en el seno de rganos o tejidos. La funcin de este sistema, junto con el nervioso, es
provocar cambios en los procesos fisiolgicos y qumicos que ayuden a mantener la
homeostasis (figura 10) (Klein, 2014; Instituto de Ciencias y Humanidades, 2008).
Un tejido blanco dado por lo general tienen capacidad de respuesta a varias hormonas.
Estas hormonas pueden antagonizarse entre s, o funcionar juntas para producir efectos
aditivos o complementarios. Los trmino que se usan para describir las interacciones
hormonales son sinrgico, permisivo y antagonista. Cuando dos o ms hormonas funcionan
juntas para producir un resultado particular, se dice que sus efectos son sinrgicos (por
ejemplo, la capacidad de las glndulas mamarias para producir leche y secretarla durante la
lactancia exige la accin sinrgica de las hormonas estrgeno, cortisol, prolactina y
oxitocina). Se dice que hormona tiene un efecto permisivo sobre la accin de una segunda
cuando aumenta la capacidad de respuesta de un rgano blanco a la segunda hormona (por
ejemplo, la exposicin previa del tero a estradiol estrgeno induce la formacin de
protenas receptoras para progesterona, lo que mejora la respuesta del tero cuando queda
expuesto de modo subsiguiente a progesterona). Efectos antagnicos, cuando en algunas
circunstancias, las acciones de una hormona antagonizan lo efectos de otra (por ejemplo
durante el embarazo la lactacin queda inhibida porque la concentracin alta de estrgeno
en la sangre inhibe la secrecin de prolactina y la accin de la misma). La concentracin de
hormonas en la sangre refleja principalmente el ndice de secrecin por las glndulas
endocrinas. Los efectos de las hormonas dependen mucho de la concentracin. Solo se
producen respuestas tisulares normales cuando las hormonas estn presentes dentro de su
rango de concentracin normal o fisiolgica (Ira, 2011).
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Una vez liberado de las clulas sealizadoras, el mensajero qumico se mueve a travs de
del lquido extracelular hasta las clulas diana. Los mensajeros qumicos se transportan de
acuerdo a su naturaleza hidrofbica-hidroflica. Las hidroflicas se disuelven fcilmente en
soluciones acuosas y pueden as moverse desde una clula sealizadora hasta la clula
diana disueltas en los lquidos extracelulares como la sangre. Sin embargo, los hidrfobos
se unen a las protenas transportadoras presentes en la sangre. Cuando un mensajero
qumico alcanza la clula diana, se une a una protena denominada receptor. La mayora de
los receptores se unen slo a un mensajero qumico especfico o a un tipo de mensajero
qumico denominado ligando para ese receptor, y no pueden unirse a otras. Cuando el
ligando se une a su receptor ste experimenta un cambio de conformacin. ste cambio en
el receptor enva una seal a la clula diana. Los ligandos hidrofbicos atraviesan la
membrana de la clula diana y se une a receptores intracelulares. Los ligando hidroflicos
no atraviesan la membrana de la clula diana, pero se une a receptores transmembrana
(Moyes y Schulte, 2007).
Las funciones de los testculos y los ovarios son reguladas por las hormonas
gonadotrpicas secretadas por la adenohipfisis. Las hormonas gonadotrpicas estimulan
las gnadas para que secrete sus hormonas esteroides sexuales, y estas hormonas
esteroides, a su vez, tienen un efecto inhibidor sobre la secrecin de las hormonas
gonadotrpicas. La adenohipfisis produce y secreta dos hormonas gonadotrpicas: la
hormona estimulante de los folculos (FSH) y la hormona luteinizante (LH). Las hormonas
gonadotrpicas tiene tres efectos principales sobre las gnadas: 1) estimulacin de la
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espermatognesis o la ovognesis (formacin del espermatozoide o del vulo); 2)
estimulacin de la secrecin de hormonas gonadales, y 3) mantenimiento de la estructura
de las gnadas. La secrecin de la LH y de la FSH por la adenohipfisis es estimulada por
una hormona que produce el hipotlamo y que se secreta hacia los vasos hipotlamo-
hipofisiario portales, dichas hormonas liberadoras en ocasiones recibe el nombre de
hormonas liberadora de hormona luteinizante (LHRH), a menudo conocida como hormona
liberadora de gonadotropina (GnRH). Sin embargo, las gnadas secretan productos que
ejercen un efecto de retroalimentacin negativa sobre la secrecin de gonadotropinas. Esta
retroalimentacin es ejercida en gran parte por los estrgenos sexuales. Los efectos de la
retroalimentacin negativa de los esteroides ocurren por medio de dos mecanismos;
inhibicin de la secrecin de GnRH por el hipotlamo, e inhibicin de la respuesta de la
hipfisis a una determinada cantidad de GnRH. Adems de las hormonas esteroides, los
testculos y los ovarios secretan una hormona polipeptdica denominada inhibina, la cual
es secretada por las clulas de Sertoli en machos y por clulas de la granulosa de los
folculos ovricos en las hembras. Esta hormona inhibe especficamente la secrecin de
FSH por la adenohipfisis sin afectar la secrecin de LH. La secrecin de gonadotropinas y
esteroides sexuales en las hembras adultas, muestra variaciones cclicas. Asimismo,
durante una fase del ciclo femenino poco antes de la ovulacin, el estrgeno ejerce un
efecto de retroalimentacin positiva sobre la secrecin de LH (figura 2) (Ira, 2011).
El aparato reproductor femenino est sujeto a grandes cambios peridicos, a diferencia del
aparato reproductor masculino. La actividad cclica femenina se manifiesta a microscpico,
macroscpico y del comportamiento. Estos diferentes estados de morfologa, funcin y
apariencia se relacionan con el ciclo del estro. El estro est influenciado por las hormonas
trpicas adenohipofisarias bajo la concentracin de estrgenos y progesterona. Bajo la
influencia de la progesterona el epitelio en porcin craneal de la vagina consta
aproximadamente de 3 capas y aumenta hasta diez capas hacia lado caudal. Bajo la
influencia de estrgenos, el grado de la proliferacin celular epitelial se incrementa por
toda la vagina y el epitelio se engruesa2. Se divide en cinco etapas continuas: proestro,
estro, metaestro, diestro y anestro. La vagina, como los ovarios y el tero, sufren cambios
temporales que coinciden con las etapas del estro (Banks, 1995; Dellman, 1993).
Figura 3: Concentraciones hormonales de sangre que vara durante todo el estro. Anestro
prolongado exclusivo en caninos3 (Banks, 1995).
2
Respuesta a la primera pregunta del cuestionario
3
Respuesta a la tercera pregunta del cuestionario
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Figura 4: Fases del ciclo estral, cambios endocrinos y morfolgicos asociados a ellas. P4-
progesterona, E2-estradiol, FSH- hormona folculo estimulante3, PGF2 -prostaglandina
(Galina y Valencia, 2008).
Figura 5: Endocrinologa del ciclo estral de la perra, prolactina se eleva al inicio del
diestro y llega a sus niveles mximos a la mitad de ese periodo3 (Pramo y Balczar,
2007).
Las modificaciones celulares cclicas que ocurren en el epitelio vaginal de la perra son de
utilidad clnica e importante para estimar el momento del estro y del cruzamiento. El
conocimiento de las modificaciones celulares mediantes el mtodo del frotis vaginal
(citologa vaginal) es usado universalmente (Dellman, 1993). La citologa vaginal se utiliza
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en la mayora de las especies como un diagnstico de enfermedades vaginales, uterinas, o
bien para detectar etapas de ciclo estral o preez. La influencia de las hormonas ovricas
sobre el epitelio vaginal ocasiona cambios citolgicos caractersticos que permiten, en la
mayora de los casos, determinar la etapa del ciclo estral en la que se encuentra la hembra,
por lo que este mtodo es ampliamente utilizado en medicina veterinaria, sobre todo en
perra4. En la citologa vaginal encontramos clulas epiteliales de las diferentes capas del
epitelio estatificado plano no queratinizado, a veces clulas endocervicales, de reserva, en
ocasiones clulas endometriales as como clulas no epiteliales como son eritrocitos,
neutrfilos, eosinfilos, macrfagos, y espermatozoides (De Arger, 2001). La mucosa
vaginal est recubierta por un epitelio escamoso estratificado, el cual vara su grosor en las
distintas fases del ciclo estral de la perra. El epitelio vaginal se describen en tres zonas: la
zona profunda, corresponde a la capa basal, que presenta clulas cbicas de 15 a 20 m de
dimetro con grandes ncleos y citoplasma basfilo. Por encima de estos se encuentran las
clulas parabasales que son similares aunque ms cilndricas, midiendo aproximadamente
30 m. La zona intermedia se compone de clulas poligonales llamadas clulas
intermedias, con ncleos redondos y a menudo retrados, de aspecto vesicular con
cromatina finamente granular. El citoplasma de estas clulas, que suelen medir entre 35 y
40 a 60 m, muestra basfila moderada. La zona externa, presenta varias capas de clulas
muy aplanadas que llegan a medir 90 m de dimetro, con pequeos ncleos picnticos y
citoplasma eosinfilo. Son clulas descamativas (Eduardo, 2006).
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Respuesta a la segunda pregunta del cuestionario
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concentracin de progesterona en sangre. Anestro, presenta clulas parabasales e
intermedias pequeas (Eduardo, 2006; Lajara, 2010; Pramo y Balczar, 2007).
Figura 6: Porcentajes celulares para cada etapa del ciclo en un seguimiento de la citologa
vaginal de la perra (Pichardo et al).
Despus de la tincin del frotis vaginal (citologa vaginal) los posibles clulas que
aparecen son: las clulas basales, son las precursoras de las clulas parabasales
caractersticas del periodo de anestro. Muy rara vez puede observarse en un estudio
citolgico. Se aprecian como clulas casi redondas, pequeas, uniformes con poco
citoplasma basoflico. Las clulas parabasales, son las clulas ms pequeas que se
encuentran de manera rutinaria en un hisopado vaginal. Son de forma redondeada con
ncleo grande y una relacin ncleo-citoplasma alta. Son clulas de tamao uniforme que
se observan en los periodos de proestro temprano, diestro y anestro. Las clulas
intermedias, son clulas parabasales intermedias con tamao mayor (muchas veces al
doble) al de las clulas parabasales. Presentan un aumento en el tamao del citoplasma ms
no del ncleo por lo que la relacin ncleo-citoplasma es baja. El citoplasma puede
tornarse de un azul grisceo plido con ligeras irregularidades por la keratinizacin
temprana. ste proceso se hace ms evidente a medida que se acerca el periodo estral.
Tambin se le conoce como clulas transicionales o superficiales intermedias, predomina
la mitad del proestro. Las clulas superficiales, son clulas grandes con un ncleo
pequeo que se ha reducido de tamao (pigntico) y a medida que siguen madurando lo
pierden por completo. El citoplasma es amplio con muchas irregularidades doblece o
bordes angulares. En su estado maduro presenta ausencia total del ncleo (llamado clulas
anucleadas) y es el estado ms tardo de las clulas epiteliales vaginales. Son
caractersticas del proestro tardo y todo el estro que es cuando la vagina se encuentra
bajo la influencia del pico estrognico. Las clulas anucleadas conocidas como escamas,
son clulas sin ncleo, de borde angulosos e irregulares que marca el final del proceso del
estro (Lajara, 2010; Eduardo, 2006).
4. MATERIALES
4.1. Materiales biolgicos
- Canes en sus diferentes etapas de su ciclo estral
4.3. Reactivos
- Azul de metileno
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5. PROCEDIMIENTOS
Pasos
Paso 1: Se sujet el animal encima de la mesa en
posicin ventrodorsal (parado).
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6. RESULTADOS Y DISCUSIN
6.1. Resultados
82 clulas superficiales
7 clulas anucleadas
En porcentajes:
89 100%
82 x x 92,13%
89 100%
7 x x 7,87%
De ellos:
92% son clulas superficiales
6.2. Discusiones
La tabla 2 muestra una imagen citolgica obtenida a partir del frotis vaginal de una perra y
se encuentran numerosas clulas superficiales y escasas clulas anucleadas. Segn las
caractersticas de la cuantificacin de clulas en un solo campo del microscopio se han
obtenido un 92% de clulas superficiales y 8% de clulas anucleadas. El porcentaje de
clulas superficiales evidencia el estado del estro de la perra, situacin que menciona
Eduardo (2006) y Lajara (2010), que en el estro se encuentra las clulas superficiales
nucleadas y anucleadas alcanzando ms del 80% y en algunos casos al 100 %, de ellos ms
del 90% de las clulas que exfolian durante el estro son las clulas superficiales. En el
resultado de la cuantificacin el porcentaje de clulas superficiales se encuentra dentro del
rango de estas clulas en el estro, la cual posibilita una cierta veracidad de que la perra se
encuentre en el estro. Los factores que influyen sobre el epitelio vaginal ocasionando
cambios citolgicos caractersticos del estro son las hormonas ovricas (estrgeno y
progesterona), que a su vez son influidas por hormonas gonadotrpicas (LH y FSH)
secretadas por la adenohipfisis (Eduardo, 2006; Banks, 1995). En el estro la progesterona
alcanza niveles superiores al basal antes de que ocurra la onda del LH. As que durante el
estro ocurre un descenso progresivo del estradiol y aumento paulatino de la progesterona
(figura 3) (Eduardo, 2006). Sin embargo, el descenso de la concentracin del estrgeno en
la sangre a causa de la disminucin del estmulo de la LH y ausencia de tecas foleculares
con clulas granulosas que sintetizan el estrgeno, provocan la disminucin de la
proliferacin de las clulas epiteliales (no hay mitosis). Producto de este proceso el epitelio
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vaginal se encuentra en el pico de estratificacin, y como hay descenso del estrgeno las
clulas basales (influidas por estrgeno, hormona esteroide que activa a los genes de las
clulas epiteliales provocando la divisin celular) no proliferan, producindose una parada
de la estratificacin del epitelio. La falta de la proliferacin celular lleva a una disminucin
de la capa celular que en el caso del estro empieza a exfoliarse intensamente a causa de la
muerte celular por el alejamiento de la membrana basal distancindose del soporte vascular
y nutricio. Las clulas superficiales y anucleadas caracterstico del estro al distanciarse del
soporte vascular sufren cambios morfolgicos, agrandndose con formas irregulares
angulosas, los ncleos celulares sufren cambios que reflejan el proceso de muerte, esto
comienza a disminuir su tamao, se vuelven ms picnticos para luego desintegrarse dando
como resultado una clula anucleada (Ira, 2011; Eduardo, 2006; Banks, 1995).
7. CONCLUSIONES
8. RECOMENDACIONES
9. BIBLIOGRAFA
Bacha, W., & Bacha, L. (2001). Atlas color de Histologa veterinaria. Argentina: Editorial
Inter-mdica.
Banks, W. (1995). Histologa veterinaria aplicada. Mxico: Manual moderno; Segunda
edicin .
De Arger, N. (2001). Citologa diagnstica veterinaria. Bogot- Mxico: El manual
moderno.
Dellman, D. (1993). Histologa veterinaria . Zaragosa : Editorial Acriba.
Eduardo, P. (2006). Veterinaria Cuyana. Universidad Catlica de Cuyo - Argentina, 1(1),
15-21.
Galina, C., & Valencia, J. (2008). Reproduccin de animales domsticos . Mxico :
Editorial Limusa; Tercera edicin.
Hall, J. (2012). Guyton y Hall Tratado de Fisiologa mdica . Madrid, Espaa : Elsevier;
Duodcima edicin .
12
Humanidades, I. d. (2008). Anatoma y fisiologa humana. Lima: Lumbreras editores;
Segunda edicin .
Ira, S. (2011). Fisiologia Humana. Mxico: McGRAW-HILL Interamericana Editores; 12
va edicin .
Klein, B. (2014). Cunningham Fisiologia Veterinaria. Barcelona, Espaa : Elsevier
Espaa; 5ta edicin .
Lajara, J. (24 de 05 de 2010). Vvetpraxis. Recuperado el 17 de 07 de 2017, de
http://laboratoriosanisidro.blogspot.com/:
http://www.vetpraxis.net/2010/05/24/citologia-vaginal-la-herramienta-poderosa/
Moyes, C., & Schulte, P. (2007). Principios de Fisiologa animal. Madrid, Espaa:
Pearson educacin.
Pramo, R., & Balczar, J. (2007). Manual de prcticas en manejo reproductivo de perros.
Mxico: Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Pichardo, H., Reyes, F., & Surez, C. (s.f.). http://cicloestralrataperro. Recuperado el 17
de 07 de 2017, de slideshare.
Sorribas, C. (2011). Manejo reproductivo en caninos . Argentina : Purina ProPlan.
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10. ANEXOS
Figura 11: Secuencias del correcto hisopado de la vagina en las perras. El hisopo contacta
la pared caudas dorsal de la vagina (Lajara, 2010).
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Figura 12: Visin general de la sealizacin celular (Moyes y Schulte, 2007).
a) b)
Figura 14: Imagen citolgica del a) proestro y b) estro. A) Clulas epiteliales parabasales
e intermedias presencia de eritrocitos y algunos neutrfilos. B) Clulas epiteliales
superficiales no presentan ncleo y algunas clulas con ncleo picntico (Lajara, 2010).
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c) d)
Figura 15: Imagen citolgica del c) diestro y el d) anestro. C) Clulas epiteliales
parabasales e intermedias, las clulas presentan bordes redondeados, ncleo visible,
presencia de eritrocitos y clulas epiteliales con neutrfilos en su interior. D) presencia de
clulas parabasales e intermedias, pueden encontrarse neutrfilos y eritrocitos en
cantidades limitadas (Lajara, 2010; Bacha y Bacha, 2001).
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