PRACTICA TINCIN DE MICROORGANISMOS

I. INTRODUCCION

Una de las caractersticas ms importante de las bacterias es su morfologa, definida

por el tamao, la forma, el arreglo y la estructura. Existen bacterias en forma
redondeada denominadas cocos, en forma cilndrica, denominadas bacilos y una
tercera morfologa como son las que tienen forma de espirales, denominadas
espirilos. A su vez cada categora puede subclasificarse con base a diferentes
arreglos. Estas caractersticas pueden determinarse examinando muestras al
microscopio. Las clulas no teidas son prcticamente transparentes, pero pueden
observarse al microscopio de luz haciendo preparaciones entre lmina y laminilla o
con microscopios especiales como por ejemplo: de contraste de fases o de campo
oscuro.
Cuando se dispone de un microscopio de luz, se pueden teir las bacterias para
facilitar su visualizacin. Si se tie una muestra del cultivo extendida y fijada en una
lmina portaobjeto con un colorante dado, las clulas adquirirn el color del colorante
aadido y podr observarse la forma, tamao y el arreglo de las mismas. Este tipo
de coloracin se conoce con el nombre de coloracin simple.

II. OBJETIVOS

- Conocer el mecanismo bsico y ventajas de una tincin.

- Aprender conceptos bsicos relacionados a:
- Proceso de preparacin de un frotis
- Tincin Gram
- Tincin cido-Resistente
- Tincin de Esporas
- Tincin de Cpsula (negativa).
- Identificar caractersticas en las bacterias en estudio en base a las
diferentes tinciones.

III. MARCO TEORICO

TINCIN

TINTE CARGA DESCRIPCIN EJEMPLO

Bsicos Catinica La porcin del cromgeno tiene carga positiva Azul de metileno
y poseen gran afinidad por los compuestos Cristal Violeta
celulares negativos. Estos tintes son los ms Carbolfucsina
utilizados debido a que las bacterias tienen una
superficie con carga negativa.
Acdicos Annica La porcin del cromgeno es negativa y tiene Safranina
gran afinidad por los componentes celulares
positivos. Las sales de sodio, potasio, calcio o
amoniaco de cidos con color son ionizados
para producir un cromgeno con carga
negativa.
 TIPOS DE TINCIONES

SIMPLE DIFERENCIAL ESPECIFICA

- Tamao, - Separar y clasificar - Para identificar
arreglo y forma. los estructuras:
- Un solo tinte microorganismos - Ejemplos:
- Directa (Tie observados de Tincin de
bacteria) acuerdo a sus flagelos,
- Negativa (tie caractersticas. cpsulas y
el fondo pero - Ms de un tinte esporas.
no a la - Ejemplos: Tincin
bacteria). Gram y cido
resistente.

TINCIN GRAM

- Tinte primario- Cristal Violeta (CV), tie la bacteria color violeta.

- Agente mordante- Yodo, forma un complejo insoluble con CV. Ayuda a
adherir el tinte a la clula. Ayuda a resistir la decoloracin.
- Agente decolorizante- alcohol etlico al 95%, sirve como solvente de lpidos
y agente deshidratante de protenas. Remueve el cristal violeta.
- Contratinte- Safranina, tie de rojo la bacteria.

MEMBRANA EXTERNA DE LAS GRAM

- Es soluble en solventes orgnicos como el alcohol

- La capa de peptidoglicano es demasiado delgada como para retener el
complejo cristal violeta/yodo que se form
- Por lo que va perdindose el color azul-violeta.

LAS GRAM + NO TIENEN SU CAPA SUSCEPTIBLE A LA ACCIN DE

SOLVENTES ORGNICOS
- Se deshidratan los poros y se cierran
- Retenindose el complejo cristal violeta/yodo y por consiguiente el color
azul-violeta.

IV. MATERIALES Y METODO

- Microscopio compuesto
- Porta-objetos y laminillas de cubre-objetos
- Pizeta
- Gotero
- Mechero de alcohol
- Colorantes para tincin de Gram (Lugol, mezcla alcohol-acetona, mezclar de
alcohol-ter agua corriente)
- Aceite de inmersin
- Sarro dental (cultivo bacterianos)
- Asa microbiolgica
- Recipiente de plstico para las tinciones
- Papel seda
- Plumn indeleble.
V. PROCEDIEMIENTO

- Marcar un portaobjetos con el nombre del microorganismo a observar. Cada

equipo deber hacer obligatoriamente 5 preparaciones.
- Elaborar preparaciones fijas de las bacterias a observar.
- Aadir 1 o 2 gotas de cristal violeta a la preparacin, hasta que se cubra por
completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.
- Una vez transcurrido el tiempo, lavar la preparacin con la pizeta sobre el
recipiente de plstico para tinciones.
- Agregar 1 o 2 gotas de solucin lugol a la preparacin y dejar actuar 1 minuto.
- Transcurrido el tiempo, lavar.
- Con cuidado, aadir gota a gota el alcohol acetona lavando la preparacin
durante 10 segundos.
- Aadir el colorante de contraste, safranina (1 o 2 gotas) y dejar actuar durante
30 segundos. Lavar con la pizeta.
- Dejar secar al aire y observar al microscopio, empezando con el objetivo de
menor aumento para ubicar las bacterias, luego con el objetivo de mediano
aumento y finalmente con el objetivo de emersin (enfocar a 10 y 40X)

Este procedimiento se esquematiza en la siguiente figura:

VI. RESULTADO

Mycobacterium tuberculosis , muestra de esputo positivo con tincin de Ziehl - Neelsen

Bacterium erysipelatos, muestra.

Neisseria gonorrhoeae, gonorrea , muestra.

 Staphylococcus aureus, organismo de la pus, muestra

Diplococcus pneumoniae,neumona crup, muestra.

Escherichia coli, bactera del colon, posiblemente patgena, muestra.

Neisseria meningitidis (intracelular). Meningitis epidmica, muestra.

Brucella abortus, provoca abortos en ganado (mal de Bang), muestra.