ASIGNATURA: BIOQUIMICA GENERAL

DOCENTE: LEON TORRES, CARLOS

CICLO: III

PRCTICA DE LABORATORIO N: 01

"CARACTERIZACION FISICO-QUIMICA DE LAS PROTEINAS"

ALUMNO: MUDARRA SARE, Josu

TRUJILLO PER
2017
I. INTRODUCCIN

Las protenas son un grupo de biomolculas caracterizados por su gran

variedad estructural y enorme diversidad de funciones biolgicas. Las
protenas de cada ser vivo, animal o vegetal son especficas ya que estn
codificadas por su genoma. A pesar de que desempean la misma funcin,
las protenas presentan ligeras variaciones estructurales en las diferentes
especies. Qumicamente pueden diferenciarse en protenas simples,
constituidas nicamente por aminocidos y protenas complejas que
contienen material adicional como carbohidratos, lpidos o cidos nucleicos.

Las protenas pueden variar sus caractersticas de solubilidad mediante

alteraciones en el medio acuoso en el que se hallen disueltas. Cuando una
protena se disuelve en agua, las fuerzas hidroflicas, electrostticas y los
puentes de hidrgeno, participan positivamente, aportando un mayor grado
de solubilidad entre ms efectivas sean estas interacciones. Sin embargo
factores fsicos como el calor, radiaciones, variaciones en los valores de pH
y la presencia de solventes que afecten estas interacciones, pueden producir
serias alteraciones en la solubilidad. Algunas veces pueden ocurrir cambios
en la estructura nativa de la protena y se considera que en estas condiciones
la protena se ha desnaturalizado. El fenmeno fsico observado en este
caso, es la formacin de un cogulo o proceso de coagulacin.

Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven

por tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta reaccin
la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que se
debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse
los aminocidos.

El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un

medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptdicos formando
un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentracin de protenas.

La presente experiencia prctica tiene como finalidad:

- Demostrar las caractersticas fsico-qumicas de las protenas.
- Comprobar la desnaturalizacin y coagulacin de protenas.
- Realizar ensayos de precipitacin de protenas al mezclarlas con sales
de metales pesados, o con reactivos acdicos.
- Verificar la importancia de la reaccin de Biuret para el reconocimiento
de protenas.
II. MATERIALES

1. Material biolgico:
- Ovoalbmina 1/10 y 1/3
- Casena 1%
- Solucin de proteasa

2. Material y equipo de laboratorio:

- Gradilla para tubos.
- 8 tubos de ensayo 13x100mm
- 2 Pipetas de 1 mL
- 2 Pipetas de 2 mL
- 2 Pipetas de 5 mL
- 1 Pipeta de 10 mL
- Bao mara a 37C y a temperatura de ebullicin.
- Piceta con agua destilada

3. Reactivos y soluciones:
- Hidrxido de Sodio (NaOH al 20%)
- Sulfato de Cobre (CuSO4 al 5%)
- Acetato de Plomo (CH3COO)2Pb al 10%
- cido tricloroactico (ATCA al 10%)
- Hidrxido de Bario Ba(OH)2 al 5%
- Ninhidrina al 0.25%
III. PROCEDIMIENTO

A) RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS: REACCION DE BIURET

1. Rotular 4 tubos de ensayo 13x100 mm con las letras A, B, C y D y

agregar a cada uno:
COMPONENTES Y TUBOS
PROCESOS A B C D
Ovoalbmina 3 mL 3 mL --- ---
Casena 1% --- --- 1 mL ---
Solucin de --- --- 1 mL 1 mL
proteasa
Agua destilada --- --- 1.5 2.5 mL
NaOH 20% 1 mL 1 mL --- ---
CuSO4 5% 0.5 mL --- --- ---
(CH3COO)2Pb 10% --- 0.5 mL --- ---

2. Mezclar el tubo A y mantenerlo reposando a temperatura ambiente.

3. Mezclar e incubar a Bao mara slo los tubos C y D a 37C durante
30 minutos.
4. Luego agregar:

Ninhidrina 0.25% --- --- 1 mL 1 mL

5. Finalmente llevar a temperatura de ebullicin los tubos B, C y D.

6. Observar las reacciones producidas y anotar los resultados.
 Tubos: D C B A

B) PRECIPITACION DE PROTEINAS

1. Rotular 4 tubos de ensayo 13x100 mm con las letras A, B, C y D y

agregar a cada uno:

COMPONENTES Y TUBOS
PROCESOS A B C D
Ovoalbmina 1/10 3 mL 3 mL 3 mL ---
Ovoalbmina 1/3 --- --- --- 3 mL
cido tricloroactico 1 mL --- --- ---
10%
Ba(OH)2 5% --- 20 gotas --- ---
HgCl2 1% --- --- 1 mL ---
Agua destilada --- --- --- 1 mL

2. Llevar el tubo D a temperatura de ebullicin de 5 a 15 minutos.

3. Observar las reacciones y anotar los resultados.
Tubo A Tubo B

Tubo C Tubo D
 TUBOS: A B C D

IV. RESULTADOS

A) RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

CARACTERISTICAS TUBOS
A B C D
COLOR INICIAL Celeste Transparente Transparente Transparente
COLOR FINAL Lila Plomo Grosella Transparente

B) PRECIPITACION DE PROTEINAS

CARACTERISTICAS TUBOS
A B C D
SOLUBILIDAD Si No Si Si
PRECIPITACIN No Si No No
V. DISCUSION

Luego de realizada la reaccin de Biuret la muestra se torn violeta, por

lo que podemos decir que existen enlaces pepiticos y por lo tanto protenas
en la muestra y dicha protena es la casena.

- Observamos que la primera reaccin fue positiva en los tubos con la solucin
de ovoalbmina, por este motivo tom una coloracin violeta indicando la
presencia de enlaces peptdicos, al contrario en la solucin solamente con el
agua destilada tom una coloracin celeste debido a que adopt el color del
sulfato de cobre, por lo tanto fue una reaccin negativa. Esta reaccin es
positiva mientras haya dos o ms enlaces peptdicos.

- La coloracin de la primera reaccin fue de un color violeta, lo que me indica

que existe presencia de protenas, por ende estoy de acuerdo con lo que cita
Mora (2007).

- El color de la segunda reaccin fue de celeste, no de violeta; lo que me indica

que en esta reaccin no hay presencia de protenas, pptidos cortos u otros
compuestos con dos o ms enlaces peptdicos, por tal estoy de acuerdo con
lo que menciona Mora (2007).
(Mora, 2007) Reaccin de Biuret:

Es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros

compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de
composicin desconocida. Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y
sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio
(KNaC4H4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en
presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con
polipptidos de cadena corta. El hidrxido de potasio no participa en la
reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga
lugar.

- Se observaron varias reacciones que la clara del huevo tiene protenas que
la conforman, esta protena es la ovoalbmina.
La ovoalbmina tiene protenas con azufre en su composicin, esto se pudo
identificar mediante la reaccin de la solucin de la clara del huevo con el
hidrxido de sodio y el acetato de plomo, el cual forma sulfuro de plomo con
el azufre presente en algunos aminocidos (cistena y metionina) de la
ovoalbmina.
 - Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua
soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de
cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al ser
tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.

- La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su

desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena
la desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria

VI. CONCLUSONES

- Se demostr las caractersticas fsico-qumicas de las protenas.

- Comprobamos la desnaturalizacin y coagulacin de protenas.
- Realizamos ensayos de precipitacin de protenas al mezclarlas con
sales de metales pesados, y con reactivos acdicos.
- Verificamos la importancia de la reaccin de Biuret para el
reconocimiento de protenas.
- .Se evidenci el carcter proteico de la casena ya que en la reaccin
de Biuret solo reaccionan proteinas y peptidos, y no aminoacidos.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

- http://santiynicoquimica.blogspot.pe/2012/06/practica-1-quimica-
reconocimiento.html
- http://www.monografias.com/trabajos93/reconocimiento-
proteinas/reconocimiento-proteinas.shtml
- http://www.csi-
csif.es/andalucia/modules/mod_ense/revista/pdf/Numero_21/ALMUDENA_
MORENO_2.pdf

- Mora, S. Q. (2007). Manual de experimentos de laboratorio para

Bioquimica. Costa Rica: EUNED.

-
VIII. CUESTIONARIO

1. Indicar las reacciones qumicas que se producen en la formacin del

complejo Biuret-proteina de color violeta.
2. Qu otras molculas pueden dar la reaccin de Biuret?

- Gelatina
- Suero sanguneo
- Leche de soya
- Leche en polvo diluida
- Mayonesa
- Emulsiones alimentarias
- Cremas

3. Mencionar otros mtodos que tambin permiten reconocer y/o

determinar protenas

- Reaccin xantoproteica
- Reaccin de Millon
- Ensayo de Molish
- Reaccin con formaldehido

4. Cules son los niveles de organizacin de la estructura proteica y

sus enlaces correspondientes?

Las protenas estn constituidas por largas cadenas polipeptdicas, en

donde los aminocidos estn ubicados en una secuencia determinada y
esto corresponde a una estructura primaria de una protena.

La estructura secundaria se refiere a la extensin en que un polipptido

o cadena posee una estructura helicoidal. Una espiral diestra o -hlice
se estabiliza mediante la presencia de enlaces hidrgeno entre los grupos
carbonilo e imido de los enlaces peptdicos.

La estructura terciaria se refiere al modo como la cadena polipeptdica

se curva para formar la estructura estrechamente plegada y compacta de
las protenas globulares, la estabilizacin de esta estructura se atribuye a
las diferentes reactividades asociadas a los grupos R de los residuos
aminoacdicos tales como: interacciones electrostticas enlaces
hidrgenos, interacciones hidrofbicas, unin dislfuro.

La estructura cuaternaria pone de manifiesto cmo se disponen en el

espacio las cadenas, por ejemplo: la enzima fosforilasa contiene dos
subunidades idnticas que por separado son catalticamente inactivas,
pero cuando se unen para formar un dmero, constituyen la enzima activa.
5. Qu se entiende como estructura nativa y desnaturalizacin de la
protena?

Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el

disolvente, se dice que presenta una estructura nativa. Se llama
desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de
orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena
polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura
tridimensional fija.

Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el

disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la
precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa,
la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de
los puentes de hidrgeno facilitarn la agregacin intermolecular y
provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del
fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la protena
se encuentra desnaturalizada.

6. Qu efectos fsico-qumicos provocan la desnaturalizacin de las

protenas?

1. Cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena:

aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin
2. Una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos
hidrofbicos del interior aparecen en la superficie
3. Prdida de las propiedades biolgicas

7. Mencionar agentes fsico-qumicos desnaturalizantes de las

protenas y sus mecanismos de accin.

- PRECIPITACIN POR SOLVENTES ORGNICOS

- PRECIPITACIN DE PROTENAS POR FOMACION DE SALES
INSOLUBLE
- EFECTO DE LA TEMPERATURA
- PRECIPITACIN O SEPARACION POR PUNTO ISOELECTRICO
- ELECTROFORESIS