El contenido total de protenas en los alimentos est conformado por una mezcla
compleja de protenas. Estas existen en una combinacin con carbohidratos o lpidos,
que puede ser fsica o qumica. Actualmente todos los mtodos para determinar el
contenido protico total de los alimentos son de naturaleza emprica. Un mtodo
absoluto es el aislamiento y pesado directo de la protena pero dicho mtodo se utiliza
slo a veces en investigaciones bioqumicas debido a que es dificultoso y poco prctico
El resultado del anlisis es una buena aproximacin del contenido de protena cruda del
alimento ya que el nitrgeno tambin proviene de componentes no proteicos.
DIGESTIN
catalizadores
NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
TITULACIN
MATERIAL
J.P SELECTA suministra los equipos necesarios para la realizacin del procedimiento
por el mtodo Kjeldahl.
-1 Unidad Scrubber.
Cdigo 4001611
-1 Bomba de circulacin de agua.
Cdigo 4001612
-1 Aparato destilador Kjeldahl (Pro Nitro M, S o A).
Cdigos 4002627, 4002851, 4002430
- Material diverso de laboratorio
REACTIVOS
Reactivos preparados:
(Para determinacin de N)
PROCEDIMIENTO
REPARACIN DE LA MUESTRA
DIGESTIN
Algunos ejemplos:
Queso o carne:
Paso1: 150C / 30 Paso 2 : 270C / 30 Paso 3: 400C / 90
Cereales:
Paso1: 150C / 15 Paso 2 : 300C / 15 Paso 3: 400C / 60
Control Visual: El resultado es un lquido transparente ntido con coloracin azul claro,
verde o amarillo dependiendo del catalizador utilizado. No deben quedar restos negros
adheridos a la pared de tubo.
DILUCIN
Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a T ambiente. (Puede
forzarse sumergiendo los tubos, cautelosamente, en un poco de agua).
Aadir unos 25ml de agua destilada en cada tubo.
Aadir el agua despacio y moviendo el tubo sin dejar solidificar la muestra. Si es
necesario calentar ligeramente el tubo (por ej. introducindolo en el bloque digestor
todava caliente)
Dejar enfriar de nuevo hasta T ambiente.
Para evitar prdidas de nitrgeno y reacciones violentas no introducir el tubo todava
caliente al destilador.
DESTILACIN
Situar un Erlenmeyer de 250ml a la salida del refrigerante con 50ml de cido Brico
y unas gotas de indicador.
Programar una dosificacin de 50 a 75 ml de NaOH.
Introducir el tubo con la muestra en el destilador.
Destilar hasta recoger 250ml en el Erlenmeyer (50ml Brico + 200ml de destilado).
Control Visual: Una vez se ha aadido el NaOH, la muestra debe tomar una coloracin
azulada, de no ser as, aadir ms NaOH.
VALORACIN Y CLCULO
Valorar el destilado con HCl H2SO4 hasta el cambio de color. (punto final: pH
4.65)
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH3 = 2Moles de N en la muestra
Realizar el clculo:
mg N = N x V x 14
Donde:
Donde:
Almendras 5,18
Nueces 5,30
Nueces - cacahuetes 5,41
Gelatina 5,55
Soja 5,71
Cebada, avena, centeno 5.83
Trigo, harina entera 5,83
Harinas (no entera) 5,70
Arroz 5,95
Maz 6,25
Todos los otros alimentos 6,25
Salvado 6,31
Leche y lcteos 6,38
Preparar la muestra:
P1 (mg) = P0 x 0,212
P2 = N x V x 14
Donde:
Calculamos la recuperacin:
R(%) = P2 / P1 *100
0,05 20 ... 40 mg
0,1 40 ... 90 mg
Preparar la muestra:
Frmula: C8H9NO
Peso molecular: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg de Nitrgeno = 0.1035 * mg de Acetanilida
P1 (mg) = P0 x 0,1035
Digestin de la muestra:
Colocar la acetanilida en un tubo, aadir 10ml de cido sulfrico 98% y una tableta
de catalizador Kjeldahl.
Digerir a 400C durante 1h. (El resultado debe ser un lquido transparente con
coloracin azul.)
Dejar enfriar y aadir 25ml de agua destilada en cada tubo. Tomar precauciones para
evitar salpicaduras. La reaccin del agua sobre el cido sulfrico es violenta.
Destilar:
Donde:
Calculamos la recuperacin:
R(%) = P2 / P1 *100
FUENTES DE ERROR
En el proceso de digestin:
1.- La inclusin de nitrgeno no protico (aunque la cantidad de este nitrgeno suele ser
despreciable comparada con la del nitrgeno protico);
2.- La prdida de nitrgeno durante la digestin. El exceso de sulfato de sodio o potasio
que se aade al cido para elevar el punto de ebullicin, puede producir una
descomposicin por calor y por lo tanto prdida de nitrgeno. Por otro lado, el exceso
de catalizador (de cobre generalmente) tambin puede producir prdidas de nitrgeno
3.- La digestin incompleta de la muestra. Generalmente debida a falta de tiempo de
reaccin o falta de cido sulfrico.
Durante la destilacin: