LAPORAN INOKULASI BAKTERI

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

JURUSAN FARMASI
POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKKES MAKASSAR

LAPORAN INOKULASI BAKTERI

OLEH :
KELOMPOK 4
KELAS REGULER A.

SITI ANIAH HARDIATY

SRY REZKY AMALIAH
SUPARMIN ROMI
TUTI ERNAWATI
VERA FEBRIANTI
YANTI SARI SYAM

JURUSAN FARMASI
POLITEKNIKKE SEHATAN KEMENKKES MAKASSAR
2011/2012

BAB I
PENDAHULUAN

I.1. LATAR BELAKANG

Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimana memperoleh suatu biakan yang murni,
tetapi juga bagaimana memelihara serta mencegah pencemaran dari luar. Inokulasi dimaksudkan untuk
menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan populasi mikroba yang murni. Inokulasi adalah
pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian
yang sangat tinggi. Media untuk membiakkan bakteri haruslah steril sebelum digunakan. Pencemaran
terutama berasal dari udara yang mengandung banyak mikroorganisme. Pemindahan biakan mikroba
yang dibiakkan harus sangat hati-hati dan mematuhi prosedur laboratorium agar tidak terjadi
kontaminasi. Oleh karena itu, diperlukan teknik-teknik dalam pembiakan mikroorganisme yang disebut
dengan teknik inokulasi biakan.
Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari
lingkungan sehingga diperoleh kultur atau biakan murni. ada beberapa cara umum yang dapat dilakukan
dengan cara goresan(steak plate), cara taburan atau tuang(pour plate), serta mikromanipulator(the
micromanipulator methods). (lim,2001). Secar alami, bakteri di alam ditemukan dalam populasi
campuran. Hanya dalam keadaan tertentu saja populasi ini ditemukan dalam keadan tertentu saja
populasiini ditemukan dalam keadaan murni . Untuk dapat mempelajari sifat biakan, morfologi, dan sifat
faalinya, maka organisme yang akan diteliti harus dapat dipisahkan. Ini berarti bahwa haruys ada biakan
murni yang hanya mengandung satu jenis bakteri saja.
Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan pengenceran dengan menggunakan bahan cair atau
padat. Pada mulanya digunakan gelatin sebagai bahan pemadat. Teknik untuk memperoleh biakan
murni ada 3 cara, yaitu: teknik penggoresan agar, teknik agar tuang, teknik agar sebar.
Teknik inokulasi merupakan suatu pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium
yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Dengan demikian akan diperoleh biakan
mikroorganisme yang dapat digunakan untuk pembelajaran mikrobiologi. Pada praktikum ini akan
dilakukan teknik inokulasi biakan mikroorganisme pada medium steril untuk mempelajari mikrobiologi
dengan satu kultur murni saja.
Identifikasi biakan mikroorganisme seringkali memerlukan pemindahan ke biakan segar tanpa terjadi
pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan dengan teknik aseptik untuk mempertahankan
kemurnian biakan selama pemindahan berulang kali. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan
cair atau padat. Kekeruhan dalam kaldu menunjukkan terjadinya pertumbuhan mikroorganisme. Bila
mikroorganisme menumpuk pada dasar tabung maka akan membentuk sedimen, sedangkan pada
permukaan kaldu pertumbuhannya terlihat sebagai pelikel.
Selain dalam media cair, mikroorganisme juga memperlihatkan pertumbuhan dengan ciri tertentu dalam
biakan padat seperti agar miring atau lempengan agar. Agar miring lazimnya digunakan untuk
menyimpan biakan murni sedangkan agar lempengan lazimnya digunakan untuk memurnikan
mikroorganisme.

I.2 RUMUSAN MASALAH

* Bagaimana cara mengisolasi dan melihat mikroorganisme disekitar kita dan bagaimana cara
menginokulasi mikroorganisme yang murni dan melihat morfologinya ?

I.3 TUJUAN PRAKTIKUM

* Untuk mengetahui dan memahami cara menginokulasi mikroorganisme.
* Untuk mengamati hasil peremajaan mikroorganisme.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari
medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangattinggi. Untuk melakukan
penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agarsemua alat yang ada dalam hubungannya
dengan medium agar tetap steril, hal ini agarmenghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1998).
Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri
(inokulasi) yaitu :
1. Menyiapkan ruangan
Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan
dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataanserum vaksin dan sebagainya.
Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca (encast ) udara yang lewat dalam kotak tersebut
dilewatkan saringan melalui suatu jalanagar tekena sinar ultraviolet (Pelczar, 1986).
2. Pemindahan dengan dengan pipet
Cara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil1 ml contoh yang
akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni (Pelczar, 1986).
3. Pemindahan dengan kawat inokulasi
kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .ujungnya boleh lurus jugaboleh berupa kolongan yang
diametrnya 1-3mm. Dalam melakukuan penanaman bakterikawat ini terlebih dahulu dipijarkan
sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyalaapi saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan
lagi dalam nyala (Pelczar, 1986).

Teknik Inokulasi
Ada beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murni mikroorganisme yaitu :
Metode gores
Teknik ini lebih menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapi memerlukan
ketrampilan-ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang sempurna akan
menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam
cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis goresan akan terdapat sel-sel
yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni.
Cara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila dilakukan dengan baik
teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya terkadang berbeda pada masing-masing
laboratorium tapi tujuannya sama yaiitu untuk membuat goresan sebanyak mungkin pada lempeng
medium pembiakan. Ada beberapa teknik dalam metode goresan, yakni :
a. Goresan T c. Goresan radian

b. Goresan kuadran d. Goresan sinambung

Metode tebar
Flowchart: Connector: ...............
.......
.............Setetes inokolum diletakan dalam sebuah medium agar nutrien dalam cawan petridish dan
dengan menggunakan batang kaca yang bengkok dan steril. Inokulasi itu disebarkan dalam medium
batang yang sama dapat digunakan dapat menginokulasikan pinggan kedua untuk dapat menjamin
penyebaran bakteri yang merata dengan baik. Pada beberapa pinggan akan muncul koloni koloni yang
terpisah-pisah.

Metode tuang
Isolasi menggunakan media cair dengan cara pengenceran. Dasar melakukan pengenceran adalah
penurunan jumlah mikroorganisme sehingga pada suatu saat hanya ditemukan satu sel di dalam tabung
(Winarni, 1997).
Metode tusuk
Metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya
terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media (Winarni, 1997).

Perbedaan Inokulasi Jamur dan Bakteri

1. Inokulasi jamur menggunakan jarum ose bentuk batang. Hifa yang berbentuk seperti benang mudah
diambil dengan jarum ose batang dan mudah sekali tumbuh di dalam suatu media.
2. Inokulasi bakteri menggunakan jarum ose bentuk bulat. Pada ujung jarum ose yang berbentuk bulat,
bakteri akan dapat terambil dalam jumlah yang relatif banyak (Rohimat, 2002).

Teknik Isolasi Dan Pemurnian

Teknik isolasi mikroba untuk memisahkan dan mengidentifikasi, jenis mikroba dari biakan dapat
diklasifikasikan berdasarkan sifat pertumbuhan yang nampak pada media.
* Metode penanaman pada agar
Pada metode penanaman pada agar, jika sedikit saja sel diletakkan dalam medium agar, maka tiap sel
akan tumbuh menjadi koloni yang terpisah. Jika suspensi sel cukup diencerkan, koloni akan terpisah
dengan baik, sehingga masing-masing memiliki kemungkinan tinggi untuk diturunkan menjadi sel
tunggal. Namun untuk membuat yang demikian, penting untuk mengambil satu tipe koloni yang
diinginkan, memasukkan ke dalam air dan menanamnya kembali ke agar. Dengan mengulangi prosedur
ini beberapa kali menjamin untuk memperoleh biakan murni.
* Metode Pengenceran
Metode yang sedikit dapat dipercaya adalah pengenceran. Suspensi diencerkan seri dan contoh masing-
masing pengenceran ditanam pada agar. Jika hanya sedikit contoh dari pengenceran tertentu
menunjukkan pertumbuhan, diperkirakan bahwa beberapa dari biakan tadi dimulai dari sel tunggal.
Metode ini tidak digunakan kecuali jika penanaman pada agar tidak dimungkinkan karena beberapa
alasan. Gambaran yang tidak diinginkan dari metode ini adalah bahwa metode ini hanya dapat
digunakan untuk isolasi tipe organisme yang dominan dalam populasi campuran.

Terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu:

1. Isolasi Pada Agar Cawan
Prinsip pada metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh
individu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. setiap koloni yang terpisah yang tampak
pada cawan tersebut setelah diinkubasi berasaldaris atu sel tunggal. Terdapat beberapa cara dalam
metode isolasi pada agar cawan,yaitu: metode gores kuadran dan metode agar cawan tuang. Bila
metode gores kuadran dilakukan dengan baik akan menghasilkan terisolasinya mikroorganisme, dimana
setiap koloni berasaldari satu sel.
2. Isolasi Pada Medium Cair
Metode isolasi pada medium cair dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar cawan
(medium padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. Metode ini juga perlu dilakukan
pengenceran dengan beberapa serial pengenceran. Semakin tinggi pengenceran peluang untuk
mendapatkan satu sel semakin besar.
3. Isolasi Sel Tunggal
Metode isolasi sel tunggal dilakukan untuk mengisolasi sel mikroorganisme berukuran besar yang tidak
dapat diisolasi dengan metode agar cawan/medium cair. Sel mikroorganisme dilihat dengan
menggunakan perbesaran sekitar 100 kali. Kemudian sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan
pipet kapiler yang sangat halus ataupun micromanipulator, yang dilakukan secara aseptis.

Macam-Macam Media
Ada beberapa macam media yang digunakan untuk inokulasi yaitu :
1.Mixed culture: berisi dua atau lebih spesies mikroorganisme

2. Plate culture: media padat dalam petridish

3. Slant culture : media padat dalam tabung reaksi

4. http://htmlimg1.scribdassets.com/2fbmexn668ch47i/images/6-91c5d21770.jpgStap culture : media

padat dalam tabung reaksi, tetapi penanamannya dengan carapenusukan.

5. Liquid culture : media cair dalam tabung reaksi.

6. Shake culture: media cair dalam tabung reaksi yang penanamannya dikocok.
Cara menyelidiki Piaraan Murni
Dalam keadaan sebenarnya ( di alam bebas ) boleh dikatakan tidak ada bakteri yang hidup sendiri
terlepas dari spesies lainnya. Kerapkali bakteri patogen kedapatan bersama-sama bakteri saproba.
Untuk menyendirikan suatu spesies ada dikenal beberapa cara, yaitu :
1. Dengan pengenceran
http://htmlimg1.scribdassets.com/2fbmexn668ch47i/images/6-91c5d21770.jpgSuatu sampel dari suatu
suspensi yang berupa campuran bermacam-macam spesies diencerkan dalam suatu tabung tersendiri.
Dari enceran ini kemudian diambil sampel 1 ml untuk diencerkan lebih lanjut. Jika dari pengenceran
yang ketiga ini diambil 0,1 ml untuk disebarkan pada suatu koloni tumbuh dalam medium tersebut,
tetapi mungkin juga kita hanya memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang demikian ini kita
memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang demikian ini kita memperoleh satu koloni murni. Kalau
kita belum yakin, bahwa koloni tunggal yang kita peroleh itu murni, kita dapat mengulang pengenceran
dengan menggunakan koloni ini sebagai sampel (Waluyo, 2005).

2. Dengan Penuangan
Robert koch ( 1943-905 ) mempunyai metode yang lain, yaitu dengan mengambil sedikit sampel
campuran bakteri yang sudah diencerkan, dan sampel ini kemudian disebarluaskan di dalam suatu
medium dari kaldu dan gelatin encer. Dengan demikian diperoleh hanyalah suatu piaraan adukan.
Setelah medium itu mengental, maka selang beberapa jam kemudian nampaklah koloni koloni yang
masing masing dapat dianggap murni. Dengan mengulang pekerjaan seperti di atas, maka akhirnya
akan diperoleh piaraan murni yang lebih terjamin (Waluyo, 2005).
3. Dengan Penggesekan
Metode ini sekarang banyak digunakan, karena tidak begitu memakan waktu, hanya sayang, dengan
cara ini maka bakteri anaerob tidak dapat tumbuh. Jika ujung kawat inokulasi dibengkokan, kemudian
ujung kawat inokulasi itu setelah disentuhkan suatu koloni lalu digesekkan pada permukaan medium
padat, maka beberapa waktu kemudian (kurang lebih 12 jam) akan nampaklah koloni-koloni yang
letaknya tersebar di permukaan medium. Jika diadakan pemindahan sampel dari suatu koloni yang
letaknya terpencil,maka akan diperoleh suatu piaraan murni (Waluyo, 2005).
4. Dengan Mengucilkan Satu Sel ( Single Cell Isolation )
Mikropipet adalah alat yang dapat memungut satu bakteri dari sekian banyak, dengan tiada ikut
sertanya bakteri lain. Mikropipet ditempatkan pada tangan tangan suatu mikromanipulator. Dengan
mikropipet dibuat beberapa tetesan bergantung pada suatu kaca penutup. Pekerjaan ini dilakuan di
bawah obyektif mikroskop. Jika tampak suatu tetesan hanya mengandung satu bakteri, maka dengan
lain mikropipet, tetesan tersebut dipindahkan ke medium encer dengan maksud supaya bakteri tersebut
berkembang biak dulu. Kemudian dari sini dapat diperoleh piaraan murni. Meode ini sangat
memerlukan kesabaran, lagipula mikromanipulator sangat mahal (Waluyo, 2005).
5. Dengan Inokulasi Hewan
Metode ini didasarkan atas suatu kenyataan, bahwa tidak semua bakteri dapat tumbuh di dalam tubuh
seekor hewan. Misal kita ambil dahak dari seseorang yang disangka menderita tbc. Jika dahak ini
disuntikkan ke dalam tubuh tikus putih, maka bakteri bakteri aprobe yang ikut serta itu tidak akan
bertahan, sehingga kemudian kita peroleh semata mata hasil tbc saja. Piaraan pneumococcus murni
dapat diperoleh dengan jalan demikian juga. Bakteri yang ketinggalan dalam tubuh tikus yang sakit atau
mati akhirnya dapat dipindahkan ke dalam medium yang sesuai. Inokulasi dapat dilakukan di dalam kulit
( intracutaneous ), dapat di bawah kulit ( subcutaneous), dapat di dalam otot ( intramuscular), dapat di
rongga tubuh atau lain-lain tempat lagi (Waluyo, 2005).

Teknik Aseptik
Sebelum benar-benar dilakukan proses kultur mikroorganisme, pertama kali kita harus
mempertimbangkan bagaimana agar tidak terjadi kontaminasi. Mikroorganisme ada dimana-mana.
Karena ukurannya yang sangat kecil, mereka mudah lepas dalam udara dan permukaan. Maka dari itu,
kita harus mensterilisasikan medium kultur secepatnya setelah preparasi untuk pemindahan
mikroorganisme siap dikontaminasikan, ini biasanya terbunuh. Bagaimanapun, itu sama pentingnya
untuk tindakan pencegahan sampai penanganan berikutnya mediun kultur harus tetap steril. Demikian
materi yang lain yang akan kontak juga harus tetap terjaga kesterilannya (Cappuccino, 1983).
Teknik yang digunakan dalam pencegahan kontaminasi hingga kultur manipulasidan media kultur steril
disebut teknik aseptik. Keunggulan itu dibutuhkan keberhasilan dalam laboratorium mikrobiologi, dan
salah satu cara belajar dengan pendamping mikrobilogi. Kontaminasi udara paling sering menjadi
masalah karena udara selalu kontak dengan partikel debu dan umumnya banyak komunitas
mikroorganisme didalamnya.Ketika wadah dibuka maka segera ditangani agar tidak terkontaminasi
dengan udara sekitar. Transfer aseptik pada kultur dari salah satu medium ke medium yang lain harus
lihai dengan loop inokulasi atau jarum harus disterilkan oleh pembakaran pada nyala api.
Dalampertumbuhan kultur dibutuhkan tempat yang mudah dipindahkan ke permukaan agar
datar,dimana pertumbuhan suatu koloni berasal dari pertumbuhan dan pembelahan sel tunggal
(Cappuccino, 1983)

Gambar 2. Teknik Aseptik

Teknik Pembiakan
Pembiakan adalah proses perbanyakan organisme melalui penyediaan kondisi lingkungan yang sesuai.
Mikroorganisme yang sedang tumbuh membuat replica dirinya, membutuhkan adanya elemen-elemen
dalam komposisi kimia mereka. Nutrisi harus menyediakan elemen ini dalam bentuk yang mudah
dimetabolisme. Faktor-faktor yang harus dikontrol selama pertumbuhan meliputi nutrisi, pH,
temperature, aerasi, konsentrasi garam dan kekuatan ionic medium.
Teknik pembiakan dilakukan berdasarkan tujuan melakukan pembiakan mikroorganisme. Umumnya tiga
situasi dapat ditemukan yaitu :

1. Memperbanyak atau menumbuhkan spesies tertentu

2. Menentukan jumlah dan tipe organism yang ada pada sample
3. Mengisolasi organisme tertentu dari sumber alami.
Untuk memperbanyak spesies tertentu harus disiapkan media yang mengandung bahan dan kondisi
yang sesuai untuk pertumbuhan spesies tersebut. Untuk hal ini cukup dibutuhkan satu jenis media
tetapi bersifat selektif dan kaya nutrient sehingga pertumbuhan akan berjalan baik.
Teknik Penggoresan Agar
Agar miring
Pembuatan agar miring tidak boleh menyentuh tutup tabung saat dimiringkan. Agar ini mempunyai
permukaan luas sehingga sering digunakan untuk menumbuhkan atau menyimpan biakan murni.
Beberapa teknik goresan yang biasa digunakan adalah goresan T, goresan kuadran, goresan radix dan
goresan sinambung.
Agar tegak
Tabung yang berisi agar dibiarkan tegak hingga beku. Agar tegak ini digunakan untuk membiakkan
bakteri dengan cara tusuk.

Identifikasi
Setelah diperoleh koloni yang terpisah, dapat dilakukan berbagai uji biokimia. Uji biokimiadidasarkan
pada berbagai hasil metabolisme yang disebabkan oleh daya kerja enzim. Jarang sekali dapat
ditentukan suatu genus berdasarkan sifat morfologi atau biakan saja. Karena uji biokimia memerlukan
berbagai media, maka dari koloni yang terpisah perlu dibuat dahulu biakan harian dari koloni tersebut.
Cara membuat preparat basah
1. Kaca obyek dibersihkan dengan kapas yang diberi alkohol
2. Pindahkan dua mata ose suspensi biakan ke kaca objek. Untuk preparat biasa digunakan kaca
obyek biasa.
3. Tutuplah dengan kaca penutup
4. Periksa dengan pembesaran 10x atau 40x

BAB III
METODE KERJA

III.1 ALAT DAN BAHAN

A. Alat-alat yang digunakan
a. Autoklaf g. Lampu spiritus
b. Cawan petri k. Korek api
c. Tabung reaksi l. Spoit
d. Rak tabung m. Tissue roll
e. Ose bulat dan Ose lurus n. Kapas
B. Bahan-bahan yang digunakan
a. Medium NA e. Bakteri bisul
b. Medium PDA g. Jamur panu
c. Medium PW

III. 2 CARA KERJA

1. Metode Gores (Streak Plate Method) pada Media Agar Miring
a. Media agar miring yang telah disterilkan diletakkan pada telapak tangan kiri
b. Dipanaskan jarum ose pada nyala api lampu spiritus hingga membara
c. Dibuka sumbat kapas pada biakan induk dengan jari manis dan kelingking
d. Disumbat kapas pada biakan induk ditutup
e. Disumbat kapas media agar miring yang akan diinokulasi mikroorganisme dibuka dengan cara yang
sama dengan langkah
f. Kemudian ujung jarum ose yang sudah mengandung mikroorganisme digeserkan dengan hati-hati
di atas permukaan agar, dimulai dari dasar tabung secara zig-zag menuju ke bagian atas tabung.
g. Disumbat kapas ditutup secepatnya pada media yang telah diinokulasi
h. Dipanaskan ujung jarum ose kembali sampai membara untuk memusnahkan mikroorganisme yang
masih menempel.
i. Disimpan biakan yang baru diinokulasi dalam inkubator
j. Diamati,digambar dan diberi keterangan pertumbuhan koloni bakteri.

2. Metode Gores (Streak Plate Method) pada Media Agar Datar

a. Media dalam tabung reaksi diletakkan pada telapak tangan kiri.
b. Dipanaskan jarum ose pada nyala api lampu spiritus hingga membara
c. Dibuka sumbat kapas pada biakan induk dengan jari manis dan kelingking.
d. Disumbat kapas pada biakan induk ditutup
e. Dipanaskan pinggiran cawan petri untuk proses sterilisasi cawan petri
f. Dibuka sedikit tutup cawan petri dengan tetap melakukannya di dekat api bunsen.
g. Digeserkan ujung jarum ose yang sudah mengandung mikroorganismedengan hati-hati di atas
permukaan agar, dimulai dari atas permukaan secara zig-zag menuju ke bagian bawah (goresan T dan
kuadran).
h. Ditutup secepatnya pada media cawan petri yang telah diinokulasi.dipanaskan ujung jarum ose
kembali sampai membara untuk memusnahkan mikroorganisme yang masih menempel.
i. Disimpan biakan yang baru diinokulasi dalam inkubator
j. Diamati,digambar dan diberi keterangan pertumbuhan koloni bakteri.

3. Metode taburan (Pour Plate Method)

a. Dicairkan medium bakteri di atas penagas air dan didinginkan sampai suhu 50C.Dituangkan ke
dalam cawan petri secara aseptic dan dibiarkan sampai padat.Diencerkan susupensi bahan yang
mengandung mikroorganisme seencer mungkin dan diteteskan secara aseptic
b. Diratakan dengan digoyang seperti angka delapan
c. Ditutup cawan petri dan diberi label, kemudian diinkubasi dalam keadaan terbalik dalam incubator
selama 24-48 jam masa inkubasi.

Cara pemindahan suspensi biakan

1. Goyangkan tabung sehingga bakteri tercampur merata dalam suspensi
2. Pijarkan ose sampai merah
3. Buka tutup tabung dan panaskan tabung di atas api
4. Setelah ose dingin kembai, ambil 1 mata ose suspensi bakteri.
5. Panaskan mulut tabung sebelum menutup tabung
6. Tutup kembali tabung dan letakkan kembali pada tempatnya
7. Letakkan ose yang berisi suspensi biakan di atas kaca objek
8. Pijarkan ose setiap kali mengambil suspensi biakan.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Rounded Rectangle: Nama Media : Media Nutrien Agar
Motede Inakulasi : Agar Tegak
Nama Bakteri/Jamur : Bakteri Bisul (staphylococcus aureus)
Jumlah Koloni Yang Tumbuh : Tidak Bisa Untuk Dihitung.
Gambar Hasil Pengamatan :

Sebelum sesudahIV.1 HASIL PENGAMATAN

Rounded Rectangle: Nama Media : Media Potato Dextrosa agar

Motede Inakulasi : cawang gores
Nama Bakteri/Jamur : jamur panu
Jumlah Koloni Yang Tumbuh : Tidak Bisa Untuk Dihitung.
Gambar Hasil Pengamatan :

IV.2 PEMBAHASAN
Untuk penggunaan metode gores dengan medium agar miring, mula-mula disiapkan media biakan induk
dari jenis mikroorganisme bakteri bisul dan jamur panu. Biakan induk berada di tabung reaksi yang berisi
media agar miring yang berwarna kuning, Pada medium biakan induk, koloni tampak berupa sebaran/
suspensi putih pada permukaan atas media. Disediakan tiga buah tabung reaksi berisi medium agar
padat. Medium agar miring berwarna kekuningan berfungsi sebagai tempat menggoreskan jamur dan
tempat pertumbuhan koloni jamur. Jarum ose dipanaskan hingga membara berfungsi untuk
mensterilsasi jarum sebelum digunakan dari mikroorganisme lain, sumbat kapas tabung reaksi yang
berisi isolate biakan induk dibuka, kemudian bibir tabung di panaskan berfungsi untuk mensterilisasi
tabung dan biakan dari mikroorganisme lain. Setelah itu, jarum ose dimasukan pada medium biakan
induk,jarum ose bentuk bulat untuk inokulasi bakteri. Pengambilan inokulum dengan dengan
menggoreskan ujung bulat jarum ke media biakan induk, memungkinkan bakteri dapat terambil banyak.
Mulut tabung reaksi yang berisi isolate biakan induk dipanaskan kembali, berfungsi untuk mensterilisasi
tabung dan biakan dari mokroorganisme lain. Kemudian segera di tutup dengan sumbat kapas lemak
bertujuan agar keadaan mikroorganisme di dalam tabung reaksi tetap steril, apabila ada kontaminan
yang akan masuk, maka dapat terserap dengan sumbat kapas tanpa dapat mempengaruhi
mikroorganisme yang akan di biakan, (Anonim:2008)
Teknik inokulasi pada media miring
Setiap perlakuan diusahakan dilakukan secara aseptis ( di dekat api Bunsen) berfungsi agar saat
inokulasi, bahan serta alat gelas yang digunakan tetap steril. Inokulum digoreskan di permukaan media
agar miring di dalam tabung reaksi yang telah di sediakan menggunakan metode gores mulai dari
samping arah zig-zag. Arah zig-zag. Arah zigzag di gunakan supaya memungkinkan koloni terbentuk
tersebar merata dan tampak jelas serta tidak bertumpuk dari koloni yang akan terbentuk.Panaskan
sekeliling mulut tabung dan segera di tutup dengan sumbat kapas berfungsi untuk mensterilisasi tabung
reaksi dan biakan dari mikroorganisme lain. Inokulum disimpan dalam incubator agar medium dapat
tumbuh pada wadah yang steril dengzn menyeting suhu 370 C sebagai suhu opimum bakteri untuk
tumbuh, kemudian di amati dan di foto bentuk koloni yang terbentuk setelah di inkubasi selama 2x24
jam, Medium yang digunakan adalah larutan nutrient agar yang sebelumnya dipanaskan agar bisa
membentuk medium miring yang didinginkan hingga memadat dengan memiringkan tabung reaksi
sehingga memebentuk agar miring dan berwarna kuning muda. Medium agar miring adalah medium
yang dibuat dalam tabung reaksi yang diletakan miring pada waktu pendinginan. (Pelczar,m.1986)
Keuntungan media agar miring ini adalah luas permukaan yang kecil sehingga peluang kontaminasi
rendah dan dapat memperluas bidang untuk digunakan strain murni (indukan murni). Sedangkan
kerugiannya hanya memuat sedikit mikroorganisme. Media agar untuk bakteri digunakan media NA
(Nutrien agar) karena yang komposisinya ekstrak daging sapi didalamnya mengandung protein,
karbohidrat, vitamin dan sedikit lemak juga terdapat adanya beberapa factor pertumbuhan yang tidak
mampu mensintesis mikroorganisme, (Waluyo,L,2005)
Medium NA berfungsi untuk membiakan berbagai macam mikroorganisme serta kultur bakteri. Pada
praktikum ini kita mempelajari bagaimana melakukan teknik inokulasi biakan mikroorganisme pada
medium steril sehingga bisa mendefinisikan bahwa teknik inokulasi adalah pekerjaan memindahkan
bakteri dari medium lama kemedium baru dengan tingkat ketelitian sangat tinggi dan dituntut untuk
bwekera secara aseptic yaitu bebas dari pengaruh kontaminan mikroorganisme yang lain. Teknik aseptic
dilakukan dengan penyediaan alat-alat kerja yang steril dan bekerja didekat api Bunsen agar terhindar
dari kontaminan udara.pada waktu inokulasi jarum yang digunakan untuk meindahkan mikroba harus
dipijarkan diatas api segera sebelum dan sesudah melakukan pemindahan. Pemanasan ini
menghjancurkan semua bentuk kehidupan yang ada pada permukaan jarum atau alat pemindahan,
setelah di inokulasi biakan bakteri disimpan dan diinkubasi dalam lingkungan yang sesuai untuk
petumbuhan, (Dwidjoseputro,D.1988)

BAB V
PENUTUP

V.1 KESIMPULAN
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan maka dapat diperoleh kesimpulan bahwa teknik inokulasi
merupakan teknik pemindahan bakteri ke dalam media dengan perlakuan khusus untuk
mempertahankan kemurnian biakan bakteri. Teknik inokulasi dapat dilakukan dengan metode gores
pada agar datar dan metode gores pada agar miring.proses inokulasi harus benar-benar aseptic atau
steril agar tidak terjadi kontaminasi oleh organism lain. Pada hasil pengamatan metode gores agar
miring terlihat adanya garis zig-zag putih menyebar yang menandakan koloni bakteri tumbuh begitu
juga pada cawang tuang dan gores.

V.2 SARAN
Dalam percobaan kali ini praktikan sangat mengharapkan petunjuk dari para asisten, agar dapat berhati
hati dalam melakukan praktikum mengingat bahan percobaan yang mengandung mikroba yang bisa
saja mengkontaminasi praktikan.

DAFTAR PUSTAKA

Pakadang, Sesilia R. 2012. Buku Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi. Jurasan Farmasi Politeknik
Kesehatan Kemenkes Makassar : Makassar.
Anonymous. 2007.http://www.scrib.com/doc/ 15546953 Morfologi Koloni Bakteri
Anonim, http://www.scribd.com/teknik-inokulasi-mikroorganisme/d/18656107

APORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI AIR (BDI 206)

PEMBUATAN MEDIA
Disusun Oleh :
Widi Indra Kesuma ( Npm. 1114111058)
Jurusan Budidaya Periaran/Perikanan
Fakultas Pertanian
Universitas Lampung
2012

Abstrak
Sebuah praktikum telah selesai dilakukan di Laboratorium Perikanan Unila. Tujuann praktikum ini adalah
agar mahasiswa perikanan UNILA yang mengikuti matakuliah mikrobiologi air mampu mengisolasi dan
menginokulasi Bakteri dari lingkungannya. Dalam isolasi Bakteri merupakan kegiatan memisahkan
bakterin dari lingkungannya di alam. Pemisahan tersebut telah disediakan dalam media agar yang telah
dipersiapkan. Dalam isolasi ini dipergunakan sampel air sumur. Setelah melakukan isolasi maka
dilakukan inokulasi Bakteri. Inokulasi merupakan kegiatan penanaman Bakteri dalam media agar. Dalam
praktikum ini juga dilakukan pemurnian Bakteri. Dalam pemurnian tersebut daiakukan teknik gores
dalam penanamannya. Dalam melakukan inokulasi dan pemurnian Bakteri, media agar yang benar akan
mempengaruhi hasil yang didapatkan. Selain itu teknik yang dilakukan harus tepat. Dari hasil praktikum
didapatkan hasil Bakteri yang telah siap diwarnai dan diamati.

Kata kunci :
inokulasi, isolasi, pemurnian, Bakteri, media.
A. PENDAHULUAN
Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimana memperoleh suatu biakan yang murni,
tetapi juga bagaimana memelihara serta mencegah pencemaran dari luar. Inokulasi dimaksudkan untuk
menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan populasi mikroba yang murni. Inokulasi adalah
pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian
yang sangat tinggi. Media untuk membiakkan bakteri haruslah steril sebelum digunakan. Pencemaran
terutama berasal dari udara yang mengandung banyak mikroorganisme. Pemindahan biakan mikroba
yang dibiakkan harus sangat hati-hati dan mematuhi prosedur laboratorium agar tidak terjadi
kontaminasi. Oleh karena itu, diperlukan teknik-teknik dalam pembiakan mikroorganisme yang disebut
dengan teknik inokulasi biakan.
Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari
lingkungan sehingga diperoleh kultur atau biakan murni. ada beberapa cara umum yang dapat dilakukan
dengan cara goresan(steak plate), cara taburan atau tuang(pour plate), serta mikromanipulator(the
micromanipulator methods). (lim,2001). Secar alami, bakteri di alam ditemukan dalam populasi
campuran. Hanya dalam keadaan tertentu saja populasi ini ditemukan dalam keadan tertentu saja
populasiini ditemukan dalam keadaan murni . Untuk dapat mempelajari sifat biakan, morfologi, dan sifat
faalinya, maka organisme yang akan diteliti harus dapat dipisahkan. Ini berarti bahwa haruys ada biakan
murni yang hanya mengandung satu jenis bakteri saja.
Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan pengenceran dengan menggunakan bahan cair atau
padat. Pada mulanya digunakan gelatin sebagai bahan pemadat. Teknik untuk memperoleh biakan
murni ada 3 cara, yaitu: teknik penggoresan agar, teknik agar tuang, teknik agar sebar.
Teknik inokulasi merupakan suatu pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium
yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Dengan demikian akan diperoleh biakan
mikroorganisme yang dapat digunakan untuk pembelajaran mikrobiologi. Pada praktikum ini akan
dilakukan teknik inokulasi biakan mikroorganisme pada medium steril untuk mempelajari mikrobiologi
dengan satu kultur murni saja.
Identifikasi biakan mikroorganisme seringkali memerlukan pemindahan ke biakan segar tanpa terjadi
pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan dengan teknik aseptik untuk mempertahankan
kemurnian biakan selama pemindahan berulang kali. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan
cair atau padat. Kekeruhan dalam kaldu menunjukkan terjadinya pertumbuhan mikroorganisme. Bila
mikroorganisme menumpuk pada dasar tabung maka akan membentuk sedimen, sedangkan pada
permukaan kaldu pertumbuhannya terlihat sebagai pelikel.
Selain dalam media cair, mikroorganisme juga memperlihatkan pertumbuhan dengan ciri tertentu dalam
biakan padat seperti agar miring atau lempengan agar. Agar miring lazimnya digunakan untuk
menyimpan biakan murni sedangkan agar lempengan lazimnya digunakan untuk memurnikan
mikroorganisme.
Media untuk membiakkan bakteri haruslah steril sebelum digunakan. Pencemaran terutama berasal dari
udara yang mengandung banyak mikroorganisme. Pemindahan biakan mikroba yang dibiakkan harus
sangat hati-hati dan mematuhi prosedur laboratorium agar tidak terjadi kontaminasi. Pada praktikum ini
akan dilakukan teknik inokulasi biakan mikroorganisme pada medium steril untuk mempelajari
mikrobiologi dengan satu kultur murni saja. Diharapkan dengan percobaan ini,mahasiswa mampu
mengisolasi dan menginokulasi bakteri dari lingkungannya di alam.

B. TINJAUAN PUSTAKA

1. Inokulasi Bakteri
Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari
medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan
penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya
dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1998).
Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri (inokulasi)
yaitu :
1. Menyiapkan ruangan
Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan
dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataan serum vaksin dan sebagainya.
Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca (encast) udara yang lewat dalam kotak tersebut
dilewatkan saringan melalui suatu jalan agar tekena sinar ultraviolet (Pelezar, 1986).
2. Pemindahan dengan dengan pipet
Cara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil 1 ml contoh yang
akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni (Pelezar, 1986).
3. Pemindahan dengan kawat inokulasi
Ujung kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .ujungnya boleh lurus juga boleh berupa
kolongan yang diametrnya 1-3mm. Dalam melakukuan penanaman bakteri kawat ini terlebih dahulu
dipijarkan sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyala api saja setelah dingin kembali kawat itu
disentuhkan lagi dalam nyala (Pelezar, 1986).

2. Media
Beberapa macam media yang digunakan untuk inokulasi yaitu :
1. Mixed culture : berisi dua atau lebih spesies mikroorganisme.
2. Plate culture: media padat dalam petridish.
3. Slant culture : media padat dalam tabung reaksi.
4. Stap culture : media padat dalam tabung reaksi, tetapi penanamannya dengan cara penusukan.
5. Liquid culture : media cair dalam tabung reaksi.
6. Shake culture: media cair dalam tabung reaksi yang penanamannya dikocok, (Gupte, 1990).

3. Teknik inokulasi
Ada beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murnimikroorganisme yaitu :
a. Metode gores
Teknik ini lebih menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapimemerlukan
ketrampilan-ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yangsempurna akan
menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaanmedia agar nutrien dalam
cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antaragaris-garis goresan akan terdapat sel-sel
yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuhmenjadi koloni (Winarni, 1997).Cara penggarisan dilakukan
pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Biladilakukan dengan baik teknik inilah yang paling
praktis. Dalam pengerjaannya terkadangberbeda pada masing-masing laboratorium tapi tujuannya sama
yaiitu untuk membuatgoresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan (Kus Irianto, 2006).
Ada beberapa teknik dalam metode goresan, yakni :
b. Goresan T
c. Goresan kuadranc.
d. Goresan Radiand.
e. Goresan Sinambung
2.3.2 Metode tebar
Setetes inokolum diletakan dalam sebuah medium agar nutrien dalam cawanpetridish dan dengan
menggunakan batang kaca yang bengkok dan steril. Inokulasi itudisebarkan dalam medium batang yang
sama dapat digunakan dapat menginokulasikanpinggan kedua untuk dapat menjamin penyebaran
bakteri yang merata dengan baik. Padabeberapa pinggan akan muncul koloni koloni yang terpisah-pisah
(Winarni, 1997).
Winarni, D. 1997. Diktat Teknik Fermentasi. Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS :Surabaya.
2.3.3 Metode tuang
Isolasi menggunakan media cair dengan cara pengenceran. Dasar melakukanpengenceran adalah
penurunan jumlah mikroorganisme sehingga pada suatu saat hanyaditemukan satu sel di dalam tabung
(Winarni, 1997).

2.3.4 Metode tusuk

Metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya
terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media (Winarni,1997)

4. Pemurnian Bakteri

Isolasi merupakan cara untuk memisahkan ataumemindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya,
sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Kultur murni ialah kulturyang sel-sel mikrobanya
berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Kultur murni atau biakan murni sangat berguna didalam
mikrobiologi, yaitu untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme, termasuk penelaahan ciri-
ciri kultural, morfologis, fisiologis, maupun serologis, memerlukan suatu popolasi yang terdiri dari satu
macam mikroorganisme saja. Untuk beberapa bakteri yang yang ada dan tersebar dimana sangat
membantu dalam hal biokimia dan biofisika lingkungan. Biokimia (masalah nutrient) lingkungan ada
karena berkatadanya kultur medium, dan semua itu tergantung dari bakteri particular itu (sebagaimana
sebagai particular investigator) bermacam sumber dan jenis dari kultur media akan berkembang
dengan adanya perbedaan maksud dan. kultur media sebagai tempat untuk teknik isolasi
dan pemeliharaan kultur murni dari bakteri dan juga digunakan untuk mengidentifikasi bakterimenurut
biokimia dan biofisika yang ada. Selsel bakteri mempunyai muatan yang agak negatif bila pH
lingkungannya mendekati netral. Muatan negatif dari sel bakteri akan bergabung dengan muatan positif
dari ion zat warna misalnya methylen blue, sehingga selnya akan berwarna. Perbedaan muatan inilah
yang menyebabkan adanya ikatan atau gabungan antara zat warnadan sel bakteri. Ada beberapa
metode yang digunakan untukmengisolasi bakteri, fungi, dan khamir dengan menggunakan metode
gores, metode tuang, metode sebar, metode pengenceran serta micromanipulator. Dua diantaranya
yang paling sering digunakan adalah tekhnik cawan tuang dan cawan gores. Kedua metode ini
didasarkan pada prinsip yang sama yaitu mengencerkan organisme sedemikian rupa sehingga individu
spesies individu spesies dapat dipisahkan dari lainnya,(Pelczar, 1986).

C. MATERI DAN METODE

Praktikum ini dilakukan pada pukul 10.00 WIB di laboratorium Budidaya Perairan Fakultas Pertanian
Universitas Lampung pada tanggal 09 Oktober 2012. Sedangkan alat yang digunakan pada praktikum ini
adalah jarum ose, cawan petri, tabung reaksi, kapas, bunsen, spreader, dan mikropipet, air sumur, air
kolam, air tambak, air PDAM, air kolam lele, air laut, air aquarium dan media agar.

Praktikum ini melalui beberapa tahap yaitu inokulasi dan pemurnia Bakteri air tawar dan inokulasi dan
pemurnian Bakteri air laut. Adapun prosedur kerja praktikum ini sebagai berikut :
1. Inokulasi dan isolasi bakteri air tawar
a. Ambil 25 l sampel air tawar (air sumur, air kolam, air PDAM, air kolam lele, dan media agar.)
menggunakan mikropipet, teteskan pada permukaan media agar lempeng (TSA) lalu ratakan
dengan spreader. Saat meratakan, media harus selalu didekatkan dengan Bunsen yang menyala agar
steril.
b. Beri label (nama, sumber sampel, tanggal).
c. Inkubasi secara terbalik pada suhu 30oC selama 24 jam.
d. Setelah 24 jam amati koloni yang tumbuh pada permukaan agar lempeng dan cari koloni-koloni
yang memiliki morfologi berbeda.
e. Ambil koloni tersebut menggunakan ose, dan gores pada permukaan agar lempeng lain yang telah
dibagi menjadi beberapa bagian. Gores secara zig-zag pada setiap bagian agar lempeng secara merata.
f. Inkubasi pada suhu 30oC selama 24 jam.
g. Koloni yang telah murni kemudian ditanam pada media agar miring dengan menggunakan ose
dengan cara goresan.
h. Kemudian inkubasi kembali selama 24 jam.

2. Inokulasi dan isolasi bakteri air laut.

i. Ambil 25 l sampel air laut (air laut dan air air tambak) menggunakan mikropipet, teteskan pada
permukaan media agar lempeng (zobell 2216E) lalu ratakan dengan spreader. Saat meratakan, media
harus selalu didekatkan dengan Bunsen yang menyala agar steril.
j. Beri label (nama, sumber sampel, tanggal).
k. Inkubasi secara terbalik pada suhu 30oC selama 24 jam.
l. Setelah 24 jam amati koloni yang tumbuh pada permukaan agar lempeng dan cari koloni-koloni
yang memiliki morfologi berbeda.
m. Ambil koloni tersebut menggunakan ose, dan gores pada permukaan agar lempeng lain yang telah
dibagi menjadi beberapa bagian. Gores secara zig-zag pada setiap bagian agar lempeng secara merata.
n. Inkubasi pada suhu 30oC selama 24 jam.
o. Koloni yang telah murni kemudian ditanam pada media agar miring dengan menggunakan ose
dengan cara goresan.
p. Kemudian inkubasi kembali selama 24 jam.

D. HASIL DAN PEMBAHASAN

Dari praktikum yang telah dilakukan, praktikum ini menggunakan teknik metode gores dan metode
tusuk. Metode gores lebih menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapi
memerlukan ketrampilan-ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang sempurna akan
menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam
cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis goresan akan terdapat sel-sel
yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni (Winarni, 1997).Cara penggarisan dilakukan
pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila dilakukan dengan baik teknik inilah yang paling
praktis. Dalam pengerjaannya terkadang berbeda pada masing-masing laboratorium tapi tujuannya
sama yaitu untuk membuat goresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan (Kus Irianto,
2006). Sedangkan metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum
ose yang didalamnya terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media (Winarni,1997).
Metode tersebut harus dilakukan dengan hati-hati dan harus tetap steril agar hasil yang didapatkan
tidak terkontaminasi dari luar.

Dari hasil pengamatan didapat bahwa pada semua media agar telah terdapat banyak koloni Bakteri.
Koloni-koloni Bakteri tersebut tersebar sesuai dengan goresan yang dibuat. Bakteri yang dihasilkan
membentuk koloni dan tersebar merata dikarenakan saat isolasi menggunakan sprider untuk meratakan
sampel yang digunakan. Pada sampel air tawar digunakan media dari TSA dikarenakan media TSA
merupakan media yang cocok bagi jenis Bakteri apapun, sedangkan sampel air laut digunakan media
Zobell 2016E. dikarenakan media zobell sangat cocok untuk perkambangbiakan Bakteri air laut.

Dalam metode streak plate, memiliki kekurangan yaitu pelaksanaannya cukup sulit untuk dilakukan.
Keran itu kita harus berhati-hati dalam menggoreskan ose ke media. Metode ini hanya untuk Bakteri
aerob. Tetapi metode ini memiliki kelebihan yaitu koloni yang dihasilkan adalah single koloni. Yaitu satu
koloni hanya satu spesies saja. Selain itu kontaminan mudah dibedakan. Karena dalam metode ini
digunakan metode goresan dengan pola tertentu.

Dalam metode pour plate, metode ini mempunyai kekurangan yaitu Bakteri lain mudah tumbuh dan
terbentuk menumpuk dengan lain jenis. Selain itu kontaminan sulit dibedakan karena cairan dituang
secara homogen. Sedangkan kelebihan yaitu mudah dilakukan. Dan juga karena dikocok secara
homogeny maka Bakteri aerob dan anaerob dapat hidup.

Pada metode surface plate, kekurangan nya sulit dilakukan, selain itu kontaminan sulit dibedakan karena
sampel diratakan. Sedangkan kelebihannya yaitu dapat memisahkan Bakteri aerob dan Bakteri yang
lainnya.

Sumber sumpel yang digunakan dalam praktikum ini adalah sebagai berikut :
a. Air laut
b. Air tambak
c. Air kolam
d. Air kolam ikan lele
e. Air sumur
f. Air aquarium
g. Air PDAM
E. KESIMPULAN DAN SARAN
Adapun kesimpulan yang dapat diberikan adalah sebagai berikut:
1. inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru
dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi.
2. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada
dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi
3. Pembuatan media disesuaikan dengan kebutuhan nutrein mikroba untuk tumbuh
4. Sampel air tawar menggunakan media TSA, sedangkan sampel air laut menggunakan media Zobell
2216E.
5. Pada hasil pengamatan metode gores agar miring terlihat adanya garis zig-zag putih menyebar yang
menandakan koloni bakteri biakan tumbuh.

Adapun saran yang dapat diberikan adalah sebagai berikut :

1. Upayakan terlebuh dahulu kebersihan dan sterilisasi parktikan sebelum melakaukan praktikum agar
tidak terjadi kontaminasi
2. Fasilitas yang ada di laboratorium mohon di tambah untuk menunjang pelaksanaan praktikum.
3. Lebih efektif lagi antar asisten dan praktikan dalam melakukan praktikum.

DAFTAR PUSTAKA
Dwidjoseputro, D. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan : Malang.
Gupte, Satish. 1990. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Binarupa Aksara.
Indah. 2012. http://indah-lesatri.blogspot.com/2012/07/bakteri.html. Diakses pada 17 Oktober 2012.
Pelezar, M.1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi I. Erlangga : Jakarta.
Waluyo, L. 2005. Mikrobiologi Umum. MM Press: Malang.
Winarni, D. 1997. Diktat Teknik Fermentasi. Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS : Surabaya.