Biofortificao de Ferro e Zinco

Andriele Wairich

Aproximadamente 49 nutrientes so essenciais para atender as necessidades

metablicas dos seres humanos, os quais podem ser supridos atravs de uma dieta
adequada (White e Broadley, 2005). Alguns elementos minerais so requeridos em
grandes quantidades, enquanto outros, como por exemplo ferro (Fe), zinco (Zn), cobre
(Cu), iodo (I) e selnio (Se), so requeridos em pequenas quantidades, pois elevadas
concentraes podem ser prejudiciais aos sistemas vivos (White e Broadley, 2009; Welch
e Graham, 2004; Grusak e Cakmak, 2005).
De forma geral, esses elementos minerais entram na cadeia alimentar atravs das
plantas. No entanto, populaes que apresentam uma dieta composta principalmente por
cereais e gros, tpico de populaes mais pobres e que habitam pases em
desenvolvimento, cuja dieta baseada no consumo de trigo, milho, arroz, cevada e sorgo,
que juntos correspondem a aproximadamente 700 milhes de hectares e, coletivamente
fornecem aproximadamente 40% da energia e base proteica consumida (Dunwell, 2014).
Durante a Conferncia de Copenhague, realizada em 2008, o tema deficincia
de micronutrientes foi citado como o 5 maior desafio global com relao sade humana
(www.copenhagenconsensus.com). As deficincias de Zn e Fe configuram-se como as
mais comuns entre as deficincias por micronutrientes e juntas afetam mais da metade da
populao mundial (WHO, 2002), visto que mais de 60% da populao mundial sofre
com a deficincia de Fe e aproximadamente 30% da populao apresenta deficincia de
Zn (Rawat et al. 2013).
Deficincias de Fe e Zn resultam no comprometimento do crescimento,
desenvolvimento fsico e motor de crianas, prejuzos ao sistema imune, cansao,
irritabilidade, fraqueza, perda de cabelo, esterilidade, anemia por deficincia de Fe e,
podem causar a morte em casos mais extremos (Rawat et al. 2013). Ambas as deficincias
afetam principalmente mulheres, gestantes, recm-nascidos e crianas em idade escolar
(Bouis, 2003). Um aumento no consumo de alimentos com maior concentrao de
nutrientes poderia amenizar o quadro de m nutrio mineral (White e Broadley, 2005).
Devido as propriedades fsico qumicas o Fe encontra-se envolvido em muitas
reaes de oxido-reduo no corpo humano, alm de atuar como cofator em inmeras
reaes enzimticas. Da mesma forma, o Zn tambm um micronutriente essencial pois
est associado regulao da expresso gnica, manuteno da integridade estrutural das
protenas alm de atuar como cofator em mais de 300 reaes enzimticas (Rawat et al.
2013)
Intervenes vem sendo propostas e desenvolvidas objetivando amenizar o
problema da deficincia mineral, como por exemplo, a diversificao da dieta atravs da
introduo do consumo de carne, vegetais, peixes e frutas, suplementao pela ingesto
de micronutrientes na forma de sachs ou barras e fortificao dos alimentos pela adio
de nutrientes minerais aos alimentos j processados. No entanto a efetividade de tais
intervenes, quando considerado um perodo maior de tempo depende de contnuos
investimentos, infraestrutura adequada e boa logstica de distribuio (Gmez-Galera et
al. 2010, White e Broadley, 2009, Sperotto et al. 2012), alm de hbitos culturais,
religiosos ou regionais que so um fator limitante adicional.
Alternativamente, uma soluo mais eficiente, sustentvel e economicamente
vivel o aumento das concentraes naturais disponveis dos nutrientes nas partes
comestveis das plantas antes da colheita. Essa estratgia denominada biofortificao
(Graham et al. 2000) e explora a capacidade fisiolgica das plantas em acumular os
nutrientes desejados/necessrios (Mayer et al. 2008). A obteno de gentipos
biofortificados pode ocorrer atravs de intervenes agronmicas ou via
seleo/engenharia gentica (White e Broadley, 2005).
Entretanto, dois principais desafios surgem quando do emprego da
biofotificao: (i) o desenvolvimento gentipos que apresentem um aumento nas
concentraes dos elementos minerais essenciais nas partes comestveis mas que, ao
mesmo tempo excluam os elementos txicos que apresentam propriedades qumicas
similares, pois os transportadores de ctions divalentes, no geral, apresentam baixa
especificidade para o substrato; e, (ii) evitar o sequestro dos nutrientes nas partes no
comestveis das plantas (p. ex. nas folhas de arroz) (Palmgren et al. 2008; Alloway, 2008).
Muitas vezes as baixas concentraes de minerais nas partes comestveis das
plantas ocorrem em consequncia de essas serem cultivadas em solos com baixa
disponibilidade de elementos minerais (Welch e Graham, 2002). Dentre as intervenes
agronmicas que podem ser empregadas objetivando-se a biofortificao, destaca-se a
fertilizao mineral que se baseia no suprimento fertilizantes contendo micronutrientes
essenciais. No entanto essa abordagem proporciona um aumento na concentrao mineral
das folhas e um maior rendimento, porm nem sempre atinge o objetivo de aumentar as
concentraes dos elementos essenciais nas sementes ou frutos (Graham et al. 2001).
Alm disso, essa alternativa apresenta restries com relao ao mtodo de aplicao,
composio do solo, mobilidade do nutriente na planta (Zhu et al. 2007), ineficincia
da fertilizao em consequncia da adsoro de minerais as partculas do solo ou a
converso destas formas insolveis, aos custos contnuos associados a tcnica e aos
danos ambientais associados a contnua aplicao de fertilizantes (Sperotto et al. 2012).
Assim, esta estratgia tem apresentado sucesso para alguns minerais, no entanto essa taxa
de sucesso varia de acordo com a localizao geogrfica (Zhu et al. 2007).
A biofortificao gentica emprega abordagens de melhoramento clssicas
objetivando caracterizar e explorar a variao gentica existente em uma espcie com
relao ao contedo mineral. Tambm pode fazer uso de ferramentas moleculares para a
descoberta de novos genes, desenvolvimento de marcadores moleculares que, permitam
a seleo assistida por marcadores e a clonagem de genes para o desenvolvimento de
organismos geneticamente modificados. Dessa forma, a biofortificao gentica confere
uma soluo estvel para o problema de deficincia de nutrientes, fazendo uso da
variabilidade gentica que ocorre dentro de uma espcie ou interespcies para o
desenvolvimento de variedades que apresentam maior concentrao de determinado
nutriente mineral (Velu et al. 2014).
Trs principais estratgias podem ser aplicadas objetivando-se o
desenvolvimento de gentipos com um maior contedo de nutrientes, bem como
favorecer a absoro destes pelo sistema digestrio: (i) reduzir a concentrao das
substncias anti-nutrientes que so metablitos produzidos pelos plantas, como cido
ftico e polifenis que prejudicam a absoro de Fe e Zn pelo instetino; (ii) aumentar as
concentraes de compostos que favoream a absoro dos nutrientes de interesse e, (iii)
aumentar a concentrao do nutriente na parte comestvel da cultura (Murgia et al. 2012).
Aqui sero apresentadas algumas abordagens realizadas at o momento para
biofortificar culturas de interesse econmico, como arroz (Oryza sativa L.), trigo
(Triticum spp.), mandioca (Manihot esculenta), cevada (Hordeum vulgare), feijo
(Phaseolus vulgaris) com Fe e Zn atravs do emprego de tcnicas baseadas no
melhoramento convencional ou engenharia gentica.

Intervenes agronmicas - fertilizao mineral

Evidncias demonstram que melhoras no crescimento, rendimento e
concentrao de Zn nos gros so alcanadas atravs do emprego de fertilizantes que
contenham Zn em sua formulao para inmeras culturas, inclusive arroz e trigo (Fageria
et al. 2011; Chattha et al. 2017). No entanto, de conhecimento que a solubilidade e a
disponibilidade do Zn no solo so restritas por inmeros fatores, incluindo a presena de
CaCO3, pH alcalino, elevadas concentraes de fsforo (P) no solo, baixo teor de matria
orgnica, bem como elevadas concentraes de xidos de Fe e alumnio (Al)
(Weerasuriya et al. 1993; Alloway, 2008; Cakmak, 2008). Alm disso, a interao com
outros macro e micronutrientes presentes no solo, temperatura e propriedades biolgicas
do solo tambm podem influenciar a disponibilidade do Zn no solo (Fageria et al, 2012;
Hafeez et al, 2013; Atiqueur-Rehman et al, 2014).
Aplicaes de nitrognio (N) e P podem tambm influenciar de maneira
considervel as concentraes de Zn nos gros de arroz, isso porque a aplicao de N
durante o estdio de enchimento de gro promove uma maior absoro e remobilizao
do Zn (Kutman et al. 2012; Khan et al. 2015). Chattha et al. (2017) avaliando trs
cultivares de trigo e cinco diferentes mtodos de aplicao de Zn (no solo, foliar e
solo+foliar), demonstrou um aumento na concentrao de Zn nos gros das variedades
analisadas, apresentando esta concentrao valor igual a 33 mg/kg quando as plantas
foram cultivadas sem nenhuma aplicao de Zn e concentrao equivalente a 63 mg/kg
quando as plantas foram cultivadas com aplicao de Zn no solo e foliar e, quando do
emprego de ambas as formas de fertilizao, observou-se tambm um decrscimo
significativo no contedo de cido ftico (Chattha et al. 2017). Como consequncia da
alta mobilidade do Zn, fertilizantes como o ZnSO4 podem aumentar o rendimento de
leguminosas e cereais em solos com deficincia de Zn bem como aumentar o contedo
de Zn nos gros (White e Broadley, 2005).
Alm disso, foi demonstrado que um melhor suprimento de N proporciona um
aumento significativo nas concentraes de Fe e Zn em todas as fraes do gro de
cultivares de trigo. E, quando da ocorrncia de um melhor suprimento de N combinado
com a aplicao foliar de Zn obtm-se melhores resultados com relao ao aumento da
concentrao de Zn e Fe no gro como um todo, especialmente no endosperma e no
embrio (Kutman et al. 2011).
No entanto embora conceitualmente simples, a fertilizao pode ser uma
abordagem bastante complicada, devido a ineficincia provocada pela adsoro dos
minerais s partculas do solo ou a converso dessas partculas a formas insolveis, em
funo do elevado custo financeiro associado a compra dos fertilizantes bem como as
aplicaes regulares necessrias, e com relao aos danos ambientais associados com o
excessivo uso dos fertilizantes (Sperotto et al. 2012).
 Em contraste ao Zn, o Fe apresenta baixa mobilidade no solo em funo do Fe(II)
na forma de FeSO4 rapidamente se ligar as partculas do solo e ser convertido a Fe(III).
Assim, os fertilizantes com Fe apresentam pouco impacto sobre os nveis de Fe nas
plantas (Frossard et al. 2000). Uma abordagem alternativa que pode ser adotada a
suplementao de Fe atravs de aplicaes foliares que fornecem melhoras no
crescimento, reduo dos sintomas de clorose, tpico da deficincia de Fe, e rendimento
quando do cultivo de plantas de sorgo em solos deficientes em Fe alm de aumentar as
concentraes finais de Fe no tecido (Zhang et al. 2009). No entanto, devido a necessidade
de inmeras aplicaes ao longo de uma estao de cultivo essa estratgia torna-se
economicamente impraticvel quando empregada em grande escala (Sperotto et al. 2012).
Alm disso, grandes quantidades do metal, quando aplicadas sobre o solo podem limitar
o crescimento das plantas e afetar outros organismos que compem a microbiota do solo
(Frossard et al. 2000).

Suplementao Mineral
Essa estratgia confia na ingesto oral dos micronutrientes na forma de barras
ou sachs. Vem sendo utilizada no caso de deficincia crnica de determinado
micronutriente (Rawat et al. 2013). O Fe um dos minerais mais difceis de ser realizada
a suplementao. Assim, nas formas de fumarato ferroso, sulfato ferroso e gluconato
ferroso so as melhores absorvidas (Rawat et al. 2013). Compostos de ferro como FeSO4
so muito solveis e apresentam elevada biodisponibilidade, no entanto so altamente
impalatveis alm de proporcionar alterao da cor e do sabor dos alimentos. Compostos
que apresentam uma menor solubilidade, tais como o ferro elementar, so muito pouco
absorvidos pelo intestino humano (Hurrel e Egli, 2010). De maneira similar, o Zn tambm
pode ser suprido na forma de gluconato de zinco, sulfato de zinco ou acetato de zinco
(Rawat et al. 2013).
Porm alguns fatores limitam o sucesso dessa estratgia. A maioria das pessoas
que apresentam deficincia nutricional no tem acesso as estratgias de suplementao
(Bhullar e Gruissem, 2013). Outra limitao com relao ao suprimento dos minerais,
isso porque os compostos apresentam uma estabilidade limitada quando misturados com
os alimentos (Allen, 2003). Alm disso, a absoro da suplementao oral pelo nosso
organismo ir depender diretamente do tipo de comida ingerida (Subbulakshmi e Naik,
1999).
Melhoramento convencional

O melhoramento convencional vinha tradicionalmente sendo utilizado para

melhorar qualidades relacionadas ao rendimento, estatura de plantas, resistncia a
doenas, qualidade e caractersticas associadas a moagem do gro (Gregorio et al. 2000).
No entanto, a seleo de linhagens (de arroz ou trigo, p. ex.) com maiores concentraes
de micronutrientes (Fe e Zn) no gro no havia sido tratada como prioridade pelos
melhoristas (Graham e Welch, 1996). Entretanto, aps o reconhecimento pela WHO que
as deficincias de Fe e Zn so as mais comuns entre a populao mundial (White e
Broadley, 2009) uma maior ateno vem sendo dispensada para os aspectos nutricionais.
Diante deste cenrio, o melhoramento de plantas cultivadas visando um aumento
nos nveis de substncias promotoras como o ascorbato e a cistena, os quais atuam
aumentando a biodisponibilidade dos micronutrientes, ou a reduo do contedo dos
metablitos que atuam como anti-nutrientes, como o cido ftico e polifenis, nas partes
comestveis das plantas tem ganhado destaque nos ltimos quinze anos (Bhullar e
Gruissem, 2013).
Organizaes internacionais objetivando a biofortificao de variedades atravs
do melhoramento ou prticas agronmicas como o HarvestPlus
(http://www.harvestplus.org/) esto presentes nas mais diversas partes do mundo. Essas
organizaes atuam na distribuio de variedades com maiores contedos de Fe, como
por exemplo, na distribuio de feijo na Repblica do Congo e variedades de milheto na
ndia. Outro consrcio internacional que se destaca nesse setor o AgroSalud
(www.agrosalud.org), que atua na produo e distribuio de variedades de arroz e feijo
com maiores teores de Zn e Fe para a Amrica Latina e Caribe.
Para a maioria das espcies cultivadas, existe variabilidade gentica significativa
para o carter contedo de nutrientes, o que permite que os programas de melhoramento
utilizem dessa variao gentica para aumentarem os nveis de nutrientes nas culturas ou
introduzir novos alelos (Zhu et al. 2007). Assim, objetivando o desenvolvimento de novas
variedades com um maior contedo mineral nos gros, os melhoristas devem realizar um
screening nos acessos depositados nos bancos de germoplasma para determinarem essa
variabilidade gentica e, se a mesma ocorre em nvel suficiente para melhorar
determinado carter (Velu et al. 2014).
Para diferentes variedades de milho (Zea mays), trigo, arroz, feijo, mandioca e
milheto (Pennisetum glaucum) uma ampla variao genotpica ocorre quando avaliado a
concentrao de Fe nos gros (White e Broadley, 2005). Esses valores variam de 10-63,
27-73, 6-24, 34-90, 4-49 e 31,2 a 74,7 mg/kg de peso seco, respectivamente, o que permite
que programas de melhoramento possam explorar tal variabilidade para produzir novas
variedades com maior contedo de Fe nas partes comestveis (Murgia et al. 2012).
Quando da realizao de um screening em germoplasmas de trigo e seus
relativos silvestres, uma significativa variabilidade gentica pode ser observada para as
concentraes de Fe e Zn nos gros (Cakmak et al. 2000). Estimativas realizadas em
gentipos de trigo adaptados ao Paquisto e norte da ndia, objetivando o
desenvolvimento de novas variedades com maiores concentraes de Fe e Zn em gros
de trigo, indicam para a possibilidade de aumento nos nveis de Zn em 25 e 10 mg/kg,
respectivamente, acima da mdia dos gentipos cultivados atualmente nesses pases.
Tambm se observou variabilidade gentica promissora para os nveis de Fe, no entanto
devido baixa disponibilidade desse micronutriente tem-se uma maior dificuldade para
o melhoramento deste carter (Velu et al. 2014). Alm disso, evidencias indicam que as
concentraes de Fe e Zn em gros de trigo apresentam herana quantitativa e, econtram-
se positivamente correlacionadas em cereais (Trethowan et al. 2005, White e Broadley,
2005). Um estudo de mapeamento de loci de caracteres quantitativos (QTLs) para o
contedo de Fe e Zn nos gros de uma populao de linhagens recombinante endogmica
de trigo diploide, permitiu a identificao de trs QTLs nos cromossomos 2 e 7 (Tiwari
et al. 2009). Peleg et al. (2009) tambm reportou trs principais QTLs para esses mesmos
caracteres uma populao de linhagens recombinante endogmica obtida do cruzamento
entre T. durum x T. dicoccoides, sendo que o QTL mapeado no cromossomo 7A no estudo
desenvolvido por Tiwari et al. (2009) foi confirmado.
Com relao a cultura do arroz, o gentipo IR68144 foi originalmente
desenvolvido para maior rendimento e resistncia a doenas, no entanto observou-se uma
maior concentrao de Fe (aproximadamente 21mg/Kg para o gro marrom) e Zn. Aps
15 minutos de processamento desse gro e, obteno do gro polido (branco), esse
gentipo ainda apresenta aproximadamente 80% a mais de Fe que as variedades
tradicionais (Gregorio et al. 2000). Anlises de QTLs associados ao acmulo de Fe nos
gros de arroz em cruzamentos envolvendo diferentes gentipos duas espcies do gnero
Oryza, mostram que esses QTLs explicam de 6 a 30% da variao fenotpica e se
encontram amplamente distribudos ao longo dos doze cromossomos (Sperotto et al.
2012).
Quando se realiza uma comparao com outros cereais, observa-se que as
concentraes de Fe nos gros de arroz apresenta uma menor amplitude, variando essa de
6 a 22 mg/kg, enquanto que para gros de milho essa concentrao pode variar de 10 a
160 mg/kg e de 15 a 360 para gros de trigo (Gomez-Galera et al. 2010).
No entanto, a estratgia baseada no melhoramento para obter variedades
biofortificadas apenas ter sucesso se essas variedades apresentarem aceitao para
cultivo e, se as pores comestveis dessas variedades no apresentarem alteraes com
relao ao paladar. Alm disso, essas variedades devem ser aceitas pelos produtores e
consumidores e, os micronutrientes incorporados precisam ser absorvidos pelo intestino
humano (Bouis, 2003).
Quando do desenvolvimento de uma nova variedade, e baseado na variabilidade
do contedo mineral de uma determinada espcie, de curto a mdio prazo, o aumento
esperado na concentrao de Fe e Zn, respectivamente, nas novas variedades de 6 e 22
mg/kg para arroz, 23 e 24 mg/kg para trigo e 60 e 20 mg/kg para feijo (Mayer et al.
2008). Embora alguns estudos sugiram a existncia de um potencial significativo quando
da anlise de germoplasmas de arroz para melhorar a concentrao de micronutrientes
nas sementes, a biofortificao de Fe baseada no melhoramento convencional no
apresenta taxa de sucesso significativa, isso porque atualmente as variedades de arroz
mais cultivadas apresentam um contedo de Fe de aproximadamente 2 g/g e, mesmo
aps anos de melhoramento tem-se alcanado um aumento de 2 a 3x essa concentrao,
o que ainda insuficiente para atingir o nvel de 14 g/g, recomendado pelo HarvestPlus.
No entanto quando da aplicao dessa estratgia em milheto e feijo, o melhoramento
tem sido capaz de desenvolver variedades com mais de 100 g/g de Fe (Bhullar e
Gruissem, 2013).
No caso de plantas propagadas vegetativamente, como por exemplo a mandioca
e batata, o emprego do melhoramento convencional torna-se ainda mais difcil. Isso
porque nessas espcies as linhagens e variedades j adaptadas so altamente heterozigotas
(Sautter et al. 2006).
Nas situaes em que o melhoramento convencional no pode auxiliar, a
engenharia gentica oferece perspectivas para, de uma maneira eficiente, melhorar a
qualidade nutricional das sementes ou partes comestveis para nveis de significncia
dietria.

Engenharia Gentica

Ferro e Zn no podem ser produzidos pelas clulas, o que torna mais complexo
as estratgias adotadas para aumentar o contedo desses minerais nas plantas. Alm disso,
tambm deve-se considerar o fato de que a absoro do Fe no intestino reduzida pela
ao dos anti-nutrientes, como o caso do fitato, composto que atua no armazenamento
de fsforo (P) nas sementes (Sautter et al. 2006).
Apesar da ocorrncia de significativa variao gentica para as concentraes de
fitato nos gros de arroz (Glahn et al. 2002), trigo (Welch et al. 2005), cevada (Dai et al.
2007), milheto (Abdalla et al. 1998), aveia (Lolas et al. 1976), triticale (Feil e Fossati
1997) e sorgo (Reddy et al. 2005) as tentativas realizadas para reduzir os nveis de cido
ftico nos gros, via melhoramento convencional foram limitadas. No entanto, como
alternativa para reduzir o contedo de cido ftico nos gros tem sido a manipulao da
via biossinttica do cido ftico (Rawat et al. 2013).
A degradao do fitato ocorre naturalmente durante a germinao das sementes,
pela ao de fitases, uma classe de fosfatases que liberam um P a partir do cido ftico
(IP6) (Bohn, 2008). Assim, o desenvolvimento de plantas que apresentam uma maior
atividade de fitases pode resultar em uma maior biodisponibilidade de minerais (Velu et
al. 2014). Gentipos de trigo na ndia melhorados apresentaram de 3.4 a 5.9x maior
expresso de fitases, o que indica que um aumento no nvel de expresso de fitases pode,
portanto, ser uma boa alternativa para aumentar o nvel de nutrientes disponveis nos
gros (Lopez et al. 2003).
Recentemente, mutantes de milho lpa (low phytic acid) foram transformados
com o gene de ferritina de soja sob o controle de um promotor endosperma especfico e,
o resultado obtido foi um aumento tanto da concentrao quanto da disponibilidade de Fe
nos gros das linhagens transformadas (Goto et al. 1999). Aspergillus niger phytase
quando expressa sozinha sob o controle do promotor GluB-1, ou quando expressa em
conjunto com o gene que codifica uma ferritina de soja, permitiu que plantas de milho
apresentassem um aumento de 3x no contedo de Fe biodisponvel nos gros transgnicos
(Aluru et al. 2011)
 O emprego da engenharia gentica objetivando aumentar o contedo mineral nos
gros atravs da super expresso de protenas que armazenam on metlicos como a
lactoferritina e a ferritina tem ganho destaque nos ltimos anos. Ferritina uma protena
capaz de armazenar at 4500 tomos de Fe. Essa protena composta por 24 subunidades
(Thiel e Briat 2004). Um evento de transformao foi realizado no qual o gene de ferritina
de soja sob controle do promotor de glutelina (GluB-1 protena de armazenamento) foi
introduzido em arroz. O resultado observado foi um aumento de trs vezes no contedo
de Fe no gro quando comparado com linhagens no transformadas. E, quando da
introduo de ferritina de soja sob controle de um forte promotor endosperma especfico
(globulina) um aumento em 30% nos nveis de Fe no gro foi observado (Goto et al.
1999).
A maior parte do contedo mineral presente nos gros encontra-se associada
camada de aleurona e ao embrio, pores dos gros essas que so removidas durante o
processamento para a maior parte das culturas. Diante deste cenrio, uma abordagem a
ser realizada objetivando um aumento nos nveis de Fe e Zn nas pores comestveis do
gro aumentar o sequestro dos minerais para a poro do endosperma do gro.
A identificao e caracterizao das protenas que atuam como transportadoras
de ons metlicos e que esto envolvidas na absoro desses minerais a partir da rizosfera,
bem como no transporte das razes para a parte area vem h tempos ocorrendo (Mori
1999, Colangelo e Guerinot 2006, Curie et al. 2009, Grennan 2009, Palmer e Guerinot
2009, Puig e Pearrubia 2009, Conn e Gilliham 2010). No entanto, pouco ainda se sabe
sobre os transportadores que atuam na distribuio dos metais nas diversas partes que
compem o gro.
Aps o isolamento da camada de aleurona, das clulas de transferncia,
endosperma e embrio de um gro de cevada em desenvolvimento, Tauris et al. (2009)
avaliou a expresso de vrios transportadores de Zn. Aps a realizao de um
microarranjo, observou-se que Heavy Metal ATPases (HMA), Zinc-regulated Iron-
regulated Protein (ZIP), Cation Diffusion Facilitator (CDF), Natural resistance-associated
macrophage proteins (Nramp), Vacuolar Iron Transporter 1 (VIT1), Cation Exchanger
(CAX), Yellow Stripe Like (YSL), Metallothioneins (MT), Nicotinamine Synthase
(NAS) e Nicotinamine Amino Transferase (NAAT) foram altamente expressas nas
clulas de transferncia. Diante desses resultados, o grupo props que o Zn se complexado
com NA ou cido muginico (MA), entra no floema e ento armazenado nos vacolos
atravs dos transportadores CDF, VIT1, ZIP1 e CAX. A famlia de transportadores YSL
e ZIP possivelmente esto envolvidos no transporte de Zn-NA para o apoplasto. Uma
forte semelhana foi observada quando da anlise do perfil de expresso da camada de
aleurona e do embrio. HMA8, ZIP e CDF apresentaram expresso em ambos os tecidos.
Assim, foi proposto que o transportador Nramp3 medeia o efluxo de Zn da camada de
aleurona, enquanto que ZIF1, CAX1a, VIT1_2, NAS9 e NAATB controlam o movimento
para a camada de aleurona, tecido esse onde o Zn armazenado nos vacolos (Tauris et
al. 2009). Um padro similar foi proposto para o transporte de Fe no gro em
desenvolvimento (Borg et al. 2009).
Estudos realizados em arroz, demonstram que a super expresso de ferritina no
produz um aumento na concentrao de Fe nas sementes das plantas transformadas, no
entanto os sintomas de deficincia de Fe foram identificados atravs da clorose foliar
visvel nas plantas transformadas, o que indica que a super expresso da ferritina sozinha
produz um aumento da sensibilidade deficincia de Fe. Objetivando um aumento nas
concentraes de Fe em sementes de arroz atravs de um aumento na absoro e
transporte do complexo Fe-MA, Masuda et al. (2013) introduziu o gene ferritina de soja
(SoyferH2) controlado por dois promotores endosperma especfico, em associao com
os genes associados com a biossntese de nicotianamina (NA) e cido deossimuginico
de cevada HvNAS1, HvNAAT-A e HvNAAT-B e o gene que codifica uma cido muginico
sintase (IDS3) para aumentar a produo de cido muginico em plantas de arroz. Aps
a obteno de 102 linhagens transgnicas e, cultivo dessas em dois diferentes tipos de
solo, observou-se um aumento na concentrao de Fe em gros polidos (avaliados em T3)
de 4 e 2.5x se comparado com linhagens no transgnicas crescidas em solo normal e
alcalino, respectivamente. Esses resultados indicam que a introduo concomitante do
gene de ferritina e de genes associados biossntese de cido muginico, principalmente
IDS3, efetivamente aumentam o nvel de Fe nos gros de arroz sem causar um aumento
na sensibilidade quando as plantas so crescidas sob condies de limitao de Fe, como
por exemplo solos com pH elevado ou terras no alagadas destinadas ao cultivo do arroz.
Outro estudo realizado objetivando a biofortificao de gros de arroz com Fe e
Zn baseou-se na introduo de mltiplos genes envolvidos na homeostase desses
nutrientes e em trs abordagens transgnicas. A primeira abordagem considerou o
aumento nos nveis de Fe nas sementes de arroz pela expresso do gene que codifica
ferritina sobre o controle de um promotor endosperma especfico, isso porque o
endosperma o tecido que, no gro de arroz, acumula uma alta concentrao de amido e,
torna-se a parte consumida aps o processamento do gro. A segunda abordagem
envolveu um aumento no transporte de Fe no interior da planta, por aumentar a expresso
dos genes NAS. Isso porque NA atua quelando ctions metlicos, como Fe(II) e Zn(II) e,
biossintetizado a partir de S-adenosil metionina via NAS (Higuchi et al. 1999) e, todas
as plantas utilizam NA para realizar o transporte interno de Fe e Zn. Enquanto que a
terceira abordagem focou no sequestro de Fe para o interior do endosperma pela
expresso do transportador de Fe(II)-NA, OsYSL2, sob o controle de um promotor
endosperma especfico. Aps o cultivo das linhagens transformadas observou-se que
sementes T2 e T3, polidas, apresentaram um aumento na concentrao de Fe de 6 e 4x,
respectivamente, quando comparado com sementes no transformadas cultivadas sob as
mesmas condies. Alm disso, quando sementes T3 foram cultivadas em condies de
campo, observou-se um aumento de 1.6x no nvel de Zn. Esse estudo, corroborando com
o apresentado anteriormente, demonstra que a introduo de mltiplos genes envolvidos
com a homeostase de nutrientes a estratgia mais efetiva para a biofortificao de
micronutrientes (Masuda et al. 2012).

Perspectivas

No h dvidas que atualmente a m nutrio mineral um problema de sade

pblica em nvel mundial. Auxiliando as estratgias de interveno agronmicas
convencionais, fertilizao mineral e suplementao que apresentam grandes limitaes,
a biofortificao das pores comestveis ganha cada vez mais destaque, seja atravs do
melhoramento convencional ou atravs de intervenes genticas. No entanto, para que
cada vez mais o objetivo do desenvolvimento de novas variedades enriquecidas
nutricionalmente seja alcanado, um completo entendimento das vias de biossntese e
fisiolgicas associadas absoro, transporte e distribuio desses minerais nas plantas
torna-se indispensvel.

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