ARTIGO/ARTICLE Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 40(1):56-59, jan-fev, 2007

Caractersticas de Vibrio parahaemolyticus isolados

de mexilhes (Perna perna) comercializados
em Niteri, Rio de Janeiro
Characteristics of Vibrio parahaemolyticus isolated from mussels
(Perna perna) commercialized at Niteri, Rio de Janeiro
Christiane Soares Pereira1, Cristina de Albuquerque Possas2,
Clio Mauro Viana3 e Dlia dos Prazeres Rodrigues1

RESUMO
O ecossistema marinho o habitat natural de bactrias como Vibrio parahaemolyticus, um importante patgeno causador de
gastrenterite humana associada ao consumo de alimentos marinhos. Na presente investigao, foi avaliada a presena de
V. parahaemolyticus a partir de 86 amostras de mexilhes in natura e pr-cozidos. Vibrio parahaemolyticus foi isolado a partir de 11,6%
dos mexilhes in natura e pr-cozidos avaliados. Todas as cepas avaliadas demonstraram-se urease positivas e 28,5% Kanagawa
positivas sugerindo um potencial patognico para o homem. Houve a predominncia do sorotipo O10:K52 e a identificao da
cepa emergente O3:K6. Esses resultados apontam para a relevncia epidemiolgica de V. parahaemolyticus em casos de gastrenterite
humana aps consumo de mexilhes sem cozimento adequado (100oC/15min). Alm disso, importante alertar as autoridades de
Vigilncia Sanitria no Brasil quanto a sua presena na cadeia alimentar e seus riscos para a Sade Pblica.
Palavras-chaves: Vibrio parahaemolyticus. Kanagawa. Sorotipos. Mexilhes.

ABSTRACT
The marine ecosystem is the natural habitat of bacteria like Vibrio parahaemolyticus, an important pathogen that cause human
gastroenteritis associated with seafood consumption. In the present investigation, the presence of V. parahaemolyticus in
86 in natura and precooked mussel samples was evaluated. Vibrio parahaemolyticus was isolated from 11.6% of the in natura
and precooked mussels. All strains tested were urease-positive and 28.5% were Kanagawa-positive, which suggests that they
have pathogenic potential for humans. There was predominance of the O10:K52 serotype and the emerging O3:K6 strain was
identified. These results show the epidemiological relevance of V. parahaemolyticus in cases of human gastroenteritis following
mussel consumption without adequately cooking them (100C/15min). Moreover, it is important to alert the Brazilian Sanitary
Surveillance authorities regarding their presence in the food chain and their public health risks.
Key-words: Vibrio parahaemolyticus. Kanagawa. Serotypes. Mussels.

O cultivo comercial de mexilhes uma prtica que tem
crescido em todas as regies litorneas do Brasil, devido s
riquezas dos recursos naturais do ecossistema aqutico. Os
mexilhes so animais micrfagos que se alimentam de partculas
e microrganismos em suspenso na gua. O processo de filtrao
desses moluscos bivalves permite a reteno e acmulo de
poluentes e bactrias patognicas ao homem18.
Vibrio parahaemolyticus uma das principais espcies
do gnero Vibrio tendo sido reconhecido como um patgeno
relevante distribudo nas regies costeiras de clima temperado
e tropical em todo o mundo11. A capacidade do microrganismo
em causar manifestaes gastrentricas sob a forma de surtos ou
casos espordicos associados ingesto de pescado e moluscos
bivalves sem coco ou insuficientemente cozidos aumenta

1. Laboratrio de Enterobactrias, Departamento de Bacteriologia, Instituto Oswaldo Cruz, Fundao Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ. 2. Escola Nacional de Sade Pblica
Srgio Arouca, Fundao Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ. 3. Laboratrio de Microbiologia de Alimentos, Faculdade de Veterinria, Universidade Federal Fluminense, Rio de
Janeiro, RJ.
Endereo para correspondncia: Dra Christiane Soares Pereira. Laboratrio de Enterobactrias/Depto Bacteriologia/IOC/FIOCRUZ. Av. Brasil 4365, sala 320, Manguinhos,
21045-900 Rio de Janeiro, RJ.
e-mail: chrisspm@ioc.fiocruz.br
Recebido para publicao em 29/12/2005
Aceito em 17/1/2007

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sua relevncia para a Vigilncia Sanitria de Alimentos e Sade
Pblica1 12.
Em nosso meio, diversos estudos revelaram a incidncia de
V. parahaemolyticus no ambiente aqutico, particularmente
salino e tambm a partir de alimentos de origem marinha. Nestes,
confirmada a assertiva quanto freqncia de isolamento desse
microrganismo, mais elevada nos meses de vero, tanto nas zonas
temperadas como nas tropicais, sugerindo uma caracterstica de
sazonalidade10.
A presena de duas hemolisinas termoestveis denominadas
thermostable direct hemolysin (TDH) e thermostable
related hemolysin (TRH), alm de uma hemolisina termolbil
denominada thermolabile hemolysin(TLH) so consideradas como
os principais fatores de virulncia. Sua caracterizao permite
discriminar TDH entre cepas patognicas e no-patognicas,
atravs da reao de beta hemlise nos eritrcitos humanos em perodo de 18 a 24 horas. As colnias suspeitas (5 a 10) foram
teste fenotpico designado teste de Kanagawa. Por outro lado, a
capacidade de hidrolisar uria, apresentada por algumas cepas
tem sugerido uma forte associao com a presena de TRH.
A presena desses fatores de virulncia geralmente ocorre em
cepas oriundas de achados clnicos, enquanto naquelas isoladas
de ambiente ou alimentos marinhos so apontados resultados
negativos ou com percentuais oscilantes de at 1% no teste de
Kanagawa e hidrlise de uria4 5 15.
Tendo em vista, o reconhecimento da relevncia epidemiolgica
de tais microrganismos, autctones no ambiente marinho, a
viabilidade destes no pescado, o hbito alimentar de consumo
de mexilhes insuficientemente cozidos, representa risco para a
populao consumidora. Deste modo, objetivou-se na presente
investigao avaliar sua presena em mexilhes in natura e
pr-cozidos coletados de uma Estao Experimental de Cultivo
no Rio de Janeiro, caracterizar os sorovares circulantes de
V. parahaemolyticus e verificar seu potencial patognico da
bactria atravs do teste de Kanagawa e produo de urease.
MATERIAL E MTODOS
Foram realizadas coletas quinzenais de mexilhes (Perna
perna) e analisadas um total de 86 amostras, sendo 43 in natura
(animal ntegro no interior valvar) e 43 pr-cozidas (submetido ao
processo de aquecimento em vapor dgua por aproximadamente
3 minutos para retirada das valvas e subseqente comercializao
da parte comestvel), no perodo de janeiro a dezembro do ano
2000. Os mexilhes foram coletados por pescadores da Estao
Experimental de Cultivo situada em Jurujuba no municpio de
Niteri (RJ). As amostras, segundo informaes dos profissionais,
foram coletadas em 19 pontos de coleta distintos localizados na
Baa de Guanabara.
As amostras de mexilhes (in natura e pr-cozidos) foram
devidamente acondicionadas em embalagem de polietileno a qual
utilizada para comercializao, identificadas e colocadas em
recipiente de isolamento trmico, transportadas temperatura de
6-10oC. Estas foram, em seqncia, processadas no Laboratrio
de Enterobactrias, Depto. Bacteriologia, Instituto Oswaldo Cruz,
Pereira, CS cols
FIOCRUZ, onde as anlises microbiolgicas foram realizadas,
dentro de um prazo que no ultrapassou duas horas.
O procedimento utilizado nos dois grupos de amostras esteve
representado inicialmente pela pesagem de 25g de mexilhes
in natura (parte carnea e lquido intervalvar) e tomada como
amostra 25g de mexilhes pr-cozidos. O procedimento a seguir
foi comum para os dois grupos de amostras, nos quais foi efetuada
uma diluio (10:1) em soluo salina de Butterfield (225mL)
e homogeneizao em Warning-Blender (8,000rpm) por um
minuto. Desta, duas alquotas de 1mL do homogeinato foram
semeadas em gua Peptonada Alcalina (APA) acrescida de 1%
de cloreto de sdio (NaCl) e APA com 3% de NaCl incubados a
37oC por 18- 24 horas3.
Aps esse perodo, procedeu-se o isolamento em gar TCBS
(Tiossulfato Citrato Bile Sacarose), incubado a 37oC por um
repicadas para meios de triagem (Kligler Iron Agar e Lysine Iron
Agar) e Agar nutriente acrescido de 1% de NaCl. Aps a seleo
das cepas citocromo-oxidase positivas, foram realizados testes
bioqumicos, baseados na resistncia ao agente vibriosttico
O/129 (2,4 diamino-6,7 diisopropil-pteridina), produo de
ONPG (D nitrofenil, E-D galactosidase) produo de acetona
em meio Voges Proskauer, fermentao da glicose, sacarose,
arabinose e manose e utilizao de aminocidos (lisina e
ornitina descarboxilase e arginina dehidrolase) a fim de obter a
identificao conclusiva das cepas isoladas3.
A caracterizao antignica, para identificao do sorotipo,
foi realizada em placa de vidro para observao da aglutinao
das cepas frente aos soros poli e monovalentes (Denka Seiken Co.
Ltda, Tkio, Japo). Em seqncia foram avaliadas a produo de
urease em meio Agar Uria de Christensen (Oxoid) e hemlise
total em Agar Wagatsuma, designado teste de Kanagawa visando
conhecer seu potencial de patogenicidade3.
RESULTADOS E DISCUSSO
Do total geral de 86 amostras de mexilhes (Perna perna)
analisados, a presena de Vibrio parahaemolyticus foi detectada
em 10 (11,6%) amostras in natura e pr-cozidas isoladas a
partir do APA 1% (NaCl), perfazendo o total de 17 cepas das quais
11 (64,7%) a partir das amostras in natura e 6 (35,3%) cepas a
partir dos espcimes pr-cozidos. Comparativamente, o APA 1%
(NaCl) apresentou resultados mais significativos no isolamento
de V. parahaemolyticus, uma vez que no foi isolada nenhuma
cepa do microrganismo a partir do APA 3% (NaCl).
A caracterizao antignica das cepas avaliadas permitiu
a classificao em 10 sorotipos diferentes assim distribudos:
O10:K52 (3) O9:K56 (2), O10:KUN (2), O1:K25 (1) , O2:K3 (1),
O2:K30 (1) , O3:K6 (1), O5:KUN (1), O8:K15 (1), e O8:K60 (1).
Entre estes sorotipos destaca-se O3:K6, isolado primariamente
em surto na ndia em 1996 e desde ento reconhecido como
uma cepa emergente capaz de produzir surtos pandmicos em
diversas regies do mundo. O sorotipo O1:K25 tambm apresenta
relevncia, pois tem sido reconhecido por causar surtos de
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gastrenterite associado ao consumo de alimentos marinhos interessante assinalar que as cepas caracterizadas
e considerado um sorotipo fortemente associado ao clone antigenicamente, apenas os sorotipos O3:K6, O8:K15, O9:K56
O3:K64 5 14. e O10:K52 apresentaram resultado positivo frente ao teste de
Os sorotipos mais comumente identificados no Brasil nas Kanagawa. Destas, O3:K6 e O10:K52 so reconhecidas como
duas ltimas dcadas foram O2:K28, O3:K5, O10:K52, O5:K17 e importantes causadoras de gastrenterite em diversas regies
O4:K1210. O primeiro relato de identificao do sorotipo O3:K6 do mundo. Tal fato mostra a relevncia quanto a sua deteco,
em nosso meio ocorreu em 199716, isolada de pescado, contudo, dado o reconhecimento quanto ao elevado poder de virulncia
desde este perodo no h nenhum registro desse sorotipo para o homem, aps ingesto de alimentos marinhos crus ou
envolvido em surto humano no Brasil. insuficientemente cozidos. Deve ainda ser acrescido que tais
A habilidade de hidrolisar uria mencionada como indicador resultados confirmam a necessidade do uso de mtodos mais
da presena do gene trh, um importante fator de virulncia de sensveis baseados em tcnicas moleculares que fornecem dados
cepas V. parahaemolyticus patognicas. No presente estudo, valiosos para a ampliao dos conhecimentos sobre a circulao
todas as cepas avaliadas apresentaram positividade meio agar desse patgeno em nosso meio15.
uria de Christensen. Embora essa caracterstica seja considerada Outrossim, destaca-se a relevncia quanto ao efeito da
como um indicativo de patogenicidade, h controvrsias a esse temperatura de pr-cozimento dos mexilhes a qual demonstrou
respeito, estudos moleculares revelaram que o gene da urease efetividade na reduo da carga microbiana do alimento
no influencia diretamente na expresso gnica de TRH15. in natura. Esta assertiva tem por base a verificao quanto um
Em funo da sua relevncia epidemiolgica, 14 cepas menor percentual de isolamento de Vibrio parahaemolyticus a
de V. parahaemolyticus isoladas foram analisadas quanto ao partir das amostras pr-cozidas. Outro aspecto interessante foi
potencial patognico atravs do fenmeno de Kanagawa (KP). observao de que todas as cepas isoladas aps o processamento
Os resultados apontaram 4 (28,5%) cepas KP positivas sendo tecnolgico de pr-coco apresentaram resultados negativos
que destas, 3 originaram-se dos mexilhes in natura e apenas no teste de Kanagawa. Esses confirmam a importncia do pr-
uma dos mexilhes pr-cozidos (Tabela 1). Entretanto, as cepas cozimento de mexilhes na reduo da carga microbiana inicial
KP negativas apontaram 10 (71,5%) cepas KP negativas. Embora presente no alimento. Tais resultados so reforados por estudos
seja reconhecido que o uso desta metodologia possa resultar prvios que apontam que este procedimento tende a minimizar os
em falhas quanto presena de falsos negativos, sendo apontada riscos da contaminao do produto. Aps a pr-coco importante
como critrios mais susceptveis, diferentes mtodos moleculares, manter o produto armazenado a temperatura inferior a -18oC7 13.
os resultados obtidos mostram-se altamente relevantes tendo
Os resultados obtidos na presente investigao reforam
em vista os reduzidos percentuais relatados particularmente em
a relevncia acerca dos riscos do consumo de mexilhes sem
pases do hemisfrio norte, reforados por estudos recentes que
demonstraram que amostras Kanagawa negativas podem no estar cozimento efetivo (1000C/15min) que podem resultar em
completamente isentas de patogenicidade6 8. diferentes nosologias, entre as quais, manifestaes gastrintestinais
provocadas particularmente por microrganismos do gnero
Tabela 1- Freqncia e distribuio dos sorotipos de Vibrio Vibrio. A desinformao a respeito desses riscos para a sade
parahaemolyticus isoladas de mexilhes in natura e pr-cozidos de humana, em especial indivduos portadores de doenas crnico-
acordo com teste de Kanagawa.
degenerativas aumenta a importncia de ofertar a populao
Teste de Amostra APA 1% (NaCl) alimentos seguros sob o ponto de vista da Sade Pblica2 9 17.
Kanagawa no in natura sorotipo pr-cozidos sorotipo Para o consumo de mexilhes pr-cozidos, a populao
7 1 O9:K56 - deve obedecer algumas regras bsicas como a conservao
KP + 12 1 O5:KUN 1 O8:K15
do produto sob refrigerao (4 oC) em ambiente limpo e
sanitizado, seguido da etapa de cozimento temperatura de
40 1 O10:KUN -
100oC por aproximadamente 15 minutos a fim de inativar
46 1 O3:K6 - possveis microrganismos remanescentes das etapas anteriores.
KP - 12 1 O9:K56 importante que o consumidor seja alertado quanto importncia
15 1 O10:KUN - do cumprimento das regras bsicas de higiene durante todas as
fases de manipulao e preparo do alimento que previnem a
23 - 1 02:K3
contaminao cruzada ou recontaminao do alimento pronto
24 1 O1:K25 - para consumo7 13.
25 1 O2:K30 - A anlise microbiolgica dos mexilhes in natura e pr-
37 1 O10:K52 1 O10:K52 cozidos revelou a incidncia de Vibrio parahaemolyticus neste
43 1 O8:K60 - tipo de alimento, o que constitui srios riscos para o homem.
Portanto, assinala-se necessidade urgente de adoo de
46 1 O10:K52 -
medidas corretivas e preventivas baseadas nas Boas Prticas de
KP=Kanagawa phenomenon. Manufatura, bem como a importncia da maior participao
APA= gua peptonada alcalina. institucional das Vigilncias Sanitria e Epidemiolgica no
NaCl= cloreto de sdio. processo de aprimoramento tecnolgico na cadeia de produo

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de alimentos. Essas medidas, se adotadas em conjunto, podem
auxiliar na melhor qualidade dos mexilhes oferecidos ao
mercado consumidor e na diminuio dos riscos de ocorrncia
de Doenas de Transmisso Alimentar veiculadas, particularmente
por alimentos de origem marinha.
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