Prueba Descripcin Resultado

Es un medio diferencial que permite distinguir entre Positivo

enterobacterias que hidrolizan lactosa y las que no lo Negativo
hacen. Sin crecimiento

La hidrlisis de la lactosa produce cidos orgnicos

Agar y las colonias que la hidrolizan adquieren un color
rojo.
MacConkey
Las colonias lactosas negativas permanecen
incoloras aunque el medio tira a amarillo por la
subida de pH que origina la utilizacin de las
protenas (peptona) del medio

Se inoculan placas del medio y se incuban a 37 oC

Medio de cultivo enriquecido con la adiccin de Hemolisis alfa
sangre. Las hemolisinas son enzimas que lisan los Hemolisis beta
hematies. Las bacterias que producen estas enzimas Hemolisis gamma
Agar sangre presentan un halo transparente alrededor de las Sin crecimiento
colonias a consecuencia de la lisis de los hematies. Sin resultados

Se siembre por agotamiento en estra en placas de

agar sangre y se incuba
Beta Esta enzima hidoliza la lactosa originando glucosa y Positivo
galactosa Negativo
galactosidasa
Se aade un sustrato artificial ortocitrofenial
galactsido (ONPG) que hidrolizado por la -
galatosidasa originandose en color amarillo
La catalasa es una enzima que proteje a las clulas Positivo
frente al perxido de hidrgeno producido en el Negativo
metabolismo del oxgeno. Cataliza la formacin de
agua y oxgeno a partir del perxido de hidrgeno.

Es util para distinguir Streptococcus (negativa) de

Catalasa Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa)
de Bacillus (positiva)

La actividad catalasa se detecta aadiendo unas gotas

de perxido de hidrgeno sobre las colonias en placa
que no sea de agar sangre (dara falsos positivos). La
produccin de burbujas indica la presencia del
enzima.
Citrato Es uno de los test del IMVIC usado para diferenciar Positivo
enterobacterias. el crecimiento consume el cido y Negativo
 como consecuencia se produce un incremento de pH
en el medio y el indicador tira de verde a azul.

El citrato es la nica fuente de carbono y se realiza

sembrando la bacteria en la superficie de un agar de
Simmon's inclinando el tubo
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la Positivo
bibrina del plasma. Los Staphylococcus aureus Negativo
patgenos dan una reaccin postiva y los no
Coagulasa patgenos negativa

Se aade una suspensin densa de bacterias a un tubo

pequea con plasma y se incuba a 37 oC. Se observa
la coagulacin a las 4 y 24 h sin sacarlos de la estufa.
Contraste El microscopio de contraste de fases es un sistema Bacilos
en el que se acenta la diferencia del ndice de Cocos
de fases refraccin entre las clulas y el medio
incrementando as el contraste en clulas
translcidas sin uso de colorantes.
Los aminacidos al perder el grupo carboxilo Positivo
convierten en aminas que incrementan el pH del Negativo
medio y el indicador (prpura del bromocresol) vira
Descarboxilasa a violeta. Las descarboxilasas son tiles en la
de aminocidos diferenciacin de enterobacterias.

Las bacterias se inoculan en medios complejos que

contienen lisina, ornitina o arginina al 1% y un
indicador de pH (prpura de bromocresol)
Algunas bacterias excretan nucleasas que Positivo
despolimerizan el DNA Negativo

DNasa Se hace una estra gruesa una placa conteniendo

DNA. Se revela despus de incubar con HCL 0,1 N
que precipita el DNA no hidrolizado.
Las Endosporas son formadas por Bacillus y Positivo
Clostridium. Son Formas de resistencia, Negativo
metabolicamnete inactivas que resisten la alta
Esporas temperatura, la desecacin y la radiacin.
(calentamiento)
Las endosporas pueden sobrevivir al calentamiento y
originan nuevas formas vegetativas en un medio de
cultivo.

Se inocula un tubo de caldo con una suspensin

sospechosa de contener endosporas.
 Se calienta a 80 oC durante 10 min.

Se enfra y se incuba a temperatura adecuada.

Fenilalanina Las desaminasas catalizan la prdida de NH3 en un Positivo
aminocido originando un cido carboxlico Negativo

desaminasa Se incolulan tubos inclinados conteniendo un medio

complejo y fenilalanina. Despus de la incubacin se
aade una solucin de cloruro frrico.
Las bacterias anaerobias o anaerobicas facultativas a Acido
menudo fermentan carbohidratos a cidos orgnicos Acido + gas
y gas (H2 o CO2). Estos pueden detectarse Negativo
incluyendo en el medio un indicador de pH y una Sin cido
campana Durham. Se pueden ensayar diferentes
Fermentacin azcares como sustrato para diferenciar especies
sobre todo bacterias entricas.
de azucares
Se inocula la bacteria en un medio conteniendo una
pequea cantidad de peptona, un indicador de pH y
una fuente de carbono fermentable al 1-2 % y se
coloca dentro de los tubos una campana Durham.
La tincin de Gram es la ms importante de las Bacilos Gram-
tinciones diferenciales. Las clulas Gram positivas negativos
retienen el cristal violeta cuando se tratan con Bacilos Gram-
etanol mientras que las gram negativas no lo tienen positivos
y se tien entonces del color rojo de la safranina. Cocos Gram-
Gram positivosCocos
Diferencias en la estructura de la pared son las Gram-negativos
responsables de este comportamiento.

Se tie con cristal violeta

Se trata con lugol como mordiente

Se decolora con etanol 96o

Se aade safranina como colorante de contraste

La esculina contiene un carbohidrato unido a un Positivo
compuesto aromtico. Este test se usa a menudo Negativo
para distinguir especies de Streptococcus.
Hidrlisis
de Esculina Se crecen las bacterias en un medio complejo que
contiene 0,01 % de esculina y un 0,05 de citrato
frrico.
La mayora de los polmeros son demasiado Positivo
grandes para ser transportados dentro de las clulas. Negativo
 Las bacterias excretan enzimas extracelulares que
hidrolizan esos polmeros transportando al interior
de la clula en monmeros que les sirven para
Hidrlisis crecer.
de gelatina La produccin de proteasas es evaluada por
incorporacin de una protena (gelatina o casena)
en un medio slido en placa. La placa se inunda con
cido que precipita la proteina no hidrolizada.
Algunas bacterias excretan lipasas extracelulares Positivo
que pueden hidrolizar lpidos grandes en sustratos Negativo
de bajo peso molecular que son trasportados al
Hidrlisis interior de la clula para ser utilizados en el
de lpidos crecimiento.

Una emulsin de lpidos y un indicador llamado

Spirit Blue se incorporan en un medio slido
complejo.
Los polisacaridos, como el almidn son demasiados Positivo
largos para ser transportados al interior de la clula. Negativo
Los microorganismos excretan amilasas que
Hidrlisis hidrolizan esos polmeros hasta oligo o
del almidon monosacridos que pueden usarse como sustratos
para crecer.

La hidrlisis de almidn es analizada en medios

conteniendo almidn en placa. Despus de incubar
se inundan las placas con lugol que al unirse con el
almidn intacto forma un complejo prpura.
El hipurato es un compuesto orgnico aromtico Positivo
que puede ser hidrolizado enzimticamente Negativo
originando benzoato y glicina. Este test se usa a
Hidrlisis menudo para diferenciar especies de Streptococcus.
del hipurato Una suspensin de bacterias se aade a una
solucin de hipurato y se incuba 2 horas. En ese
momento se aade la nihidrina.
Uno de los test del IMVIC utilizado para diferenciar Positivo
enterobacterias. Negativo

Indol Existen bacterias que producen triptofanasa que

convierte el triptfano en indol

La bacteria se crece en medios que contienen

triptfano (caldo de triptoma). La presencia de indol
se ensaya aadiendo dimetilaminobenzaldehdo.
 Inhibicin El KCN inhibe la cadena de transporte de electrones Sensible
unindose a los citocromos impidiendo el Resistente
por KCN crecimiento microbiano. Sin embargo, algunas
bacterias no son inactivadas y pueden nacer.

Las bacterias se inoculan en caldo de peptona que

contiene cianuro potsico.
La movilidad de las bacterias es consecuencia de la Movil
presencia de flagelos. El movimiento puede Inmovil
observarse en preparacin en fresco con el
microscopio de contraste de fase

Motilidad Para ver la movilidad se realiza una preparacin en

fresco que se observa en contraste de fases.

La movilidad debe distinguirse del movimiento

Browniano debido a las corrientes en la preparacin.
En condiciones aerobias las bacterias pueden oxidar Fermentativo
la glucosa hasta CO2 gas. El oxgeno es el aceptor Oxidativo
final de e- en el metabolismo respiratorio. en Negativo
condiciones anaerobicas en ausencia de un aceptor
de e- como nitrato, las bacterias slo pueden utilizar
O-F la glucosa por va fermentativa. En este test se evala
la capacidad de las bacterias para oxidar y/o
(oxidacin
fermentar produciendo cido que se detecta gracias
-fermentacin)
al azul de bromotinol (indicador de pH) Es til en la
distincin de pseudomonas y enterobacterias.

Se inoculan tubos de medio con asas de punta recta.

Uno de los tubos se recubre con aceite de parafina
para aislarlo del oxgeno (tubo de fermentacin) y
otro no (tubo de oxidacin)
La presencia de citocromo C oxidasa en la cadena de Positivo
trasporte de e- puede detectarse utilizando un aceptor Negativo
de e- artificial p-fenilendiamina. Este test se usa para
Oxidasa diferenciar pseudomonas (positivo) de
enterobacterias (negativo)

Se impregnan discos de papel con

parafenilandiamina y se coloca en un cultivo
creciendo en placas de agar nutritivo.
Produccin Muchas bacterias producen sulfuro de hidrgeno a Positivo
partir de aminocidos azufrados (cistena o Negativo
de sulfhdrico metionina) o tiosulfato.

La fermentacin de sulfhdrico puede ser detectada

 incluyendo hierro reducido en el medio para formar
un precipitado negro de FeS

Se inocula un medio de agar nutritivo conteniendo

tiosulfato metionina y sulfato ferroso.
Algunas bacteris pueden usar nitratos como aceptor Positivo
final de e- en la respiracin. el nitrato puede ser Negativo
reducido a nitrito o en un paso ms a gases (xidos
de nitrgeno). Las enterobacterias y pseudomonas
son usualmente positivos.
Reduccin Las bacterias se inoculan en medios conteniendo
de nitrato nitrato potsico. El nitrito procedente de la reduccin
de clulas puede detectarse aadiendo
alfanalfilamina y cido sulfanlico produciendose un
color rojo. Se puede saber si el nitrato puede haberse
reducido a ms que a nitritos produciendose gas. Si
al aadir zinc en polvo no hay color rojo es que no
hay nitrato porque se ha reducido a gas
(desnitrificacin)
Es uno de los test del IMVIC para bacterias entricas. Positivo
Algunas vias fermentativas originan cidos Negativo
orgnicos mientras otras originan productos que son
Rojo de neutros.
metilo Las bacterias se crecen en caldo de glucosapeptona.
Si se fermenta el azcar el pH baja por debajo de 4.3.

Se aade rojo de metilo como indicar que es rojo a

pH <4.3. y amarillo a pH >4.3.
Este medio se usa para determinar el efecto del Aerobio
oxgeno sobre el crecimiento microbiano. Un tubo Anaerobio
con medio semislido contiene tioglicolato para Facultativo
Tioglicolato reducir el potencial redox del medio. As slo hay Microaerobio
oxgeno en la superficie y no en el resto del tubo. Un
indicador redox, resazurina, indica si hay oxgeno
(rojo) o no (incoloro).

El tubo es inoculado con un asa de punta y se incuba

hasta que se produce su crecimiento.
Ureasa Este enzima hidroliza la urea (H2N-CO-NH2) y Positivo
origina amonio lo que producir un incremento del Negativo
pH que puede detectarse con un indicador.

Las bacterias se inoculan en un medio con glucosa-

 peptona y urea al 2%. Como indicador de pH se
utiliza rojo fenol
Utilizacin La mayora, pero no todas las bacterias pueden Positivo
crecer en medios simples con una nica fuente de Negativo
Fuentes de carbono. Este mtodo permite ensayar tal habilidad
Carbono y la capacidad para utilizar sustratos especficos.

Las bacterias se inoculan en medios simples

conteniendo diferentes sustratos orgnicos como
fuentes de cargono y energa.
Voges- Uno de los test del IMVIC para enterobacterias es el Positivo
Voges Proskauer. Las especies que llevan a caso Negativo
Proskauer fermentacin a butanodiol de la glucosa acumulan
acetona en el medio.

Las bacterias se inoculan en caldo glucosa-peptona.

Las especies que llevan a cabo la fermentacin
butanodilica de la glucosa aumentean acetona en el
medio.

Se aade alfanaftol en medio alcalino (KOH). La

acetoina se convierte en diacetilo que reacciona
formandose un color rojo