Anteproyecto de Sulfato de Quinina

Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

Anteproyecto de porcentaje de pureza de sulfato de quinina por
espectrofluorometra mediante comparacin con un estndar.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio Pgina 1 de 29

28 de febrero 2017 numero: L-402
OBJETIVO
Determinar el porcentaje de pureza del sulfato de quinina por espectrofluorometra

mediante comparacin con un estndar.
HIPTESIS
El Sulfato de Quinina es el sulfato de un alcaloide obtenido de la corteza de las

especies de Cinchona. Contiene no menos de 99,0 por ciento y no ms de 101,0
por ciento de sales de alcaloides totales, calculado como (20 24 2 2 )2 2 4
22 , con respecto a la sustancia anhidra. Segn la USP 31 ed.
MARCO TERICO
FUNDAMENTO DE LA TCNICA
La fluorescencia es un proceso de fotoluminiscencia en el que los tomos o
molculas son excitados por absorcin de radiacin electromagntica. Las
especies excitadas se relajan posteriormente hacia el estado basal, cediendo el
exceso de energa en forma de fotones. Una de las caractersticas ms
interesantes de la fluorescencia molecular es su sensibilidad inherente, la cual es
comnmente de uno a tres rdenes de magnitud mejor que la de la espectroscopia
de absorcin. De hecho, se han detectado molculas sencillas de especies
seleccionadas por espectroscopia de fluorescencia en condiciones controladas.
Otra ventaja de los mtodos fluorescentes es su amplio intervalo de concentracin
lineal, el cual es significativamente mayor que en la espectroscopia de absorcin.
Sin embargo, los mtodos fluorescentes son mucho menos aplicables que los
mtodos de absorcin debido al bajo nmero de sistemas qumicos que muestran
fluorescencia apreciable. La fluorescencia tambin est sujeta a muchas ms
interferencias ambientales que los mtodos de absorcin.
La luz es una forma de energa radiante electromagntica, es decir, la energa se
propaga mediante la combinacin de campos elctricos y magnticos sin algn
material de soporte lo que le permite desplazarse en el vaco, es una porcin
visible de dicha energa radiante por lo que se considera un fenmeno
electromagntico, por lo tanto est constituida por partculas electromagnticas
denominadas fotones, un fotn es denominado tambin cantidad de energa que
posee una pequea cantidad de materia que no puede ser medida.
La luz se caracterstica por desplazarse en lnea recta con movimiento ondulatorio
a una velocidad constante, aunque cuando pasa de un medio menos denso
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.

(aire, por ejemplo) a otro transparente de mayor densidad, como el agua, vidrio o
plstico, su velocidad disminuye. Estos cambios de velocidad son importantes
pues producen una de las caractersticas de la luz la refraccin. La luz que se
origina de una fuente emisora se desplaza o irradia en todas direcciones. De tal
forma que su energa se dispersa a medida que se aleja de su punto de origen;
por lo tanto, la energa luminosa que incide sobre una superficie situada a cierta
distancia ser menor que la que incide sobre la misma superficie, pero situada
ms cerca de la fuente emisora. Este hecho se percibe como un cambio en la
luminosidad.
Tambin la luz es reflejada, esto sucede en las superficies de los objetos no
transparentes reflejan o rebotan la luz. Es absorbida si el objeto es opaco (no
transparente), la luz no reflejada en su superficie es absorbida por el objeto y
desaparece y es Transmitida si el objeto es transparente, la mayor parte del haz
luminoso lo atraviesa y contina su desplazamiento a travs del mismo.
Debido a que la luz se propaga en forma de ondas presenta ciertas propiedades
como longitud de onda esta es la distancia que existe entre dos crestas o dos
valles sucesivos de la onda luminosa. Las longitudes de onda de la luz son muy
pequeas: Generalmente se miden en nanmetros (nm) o en angstroms ().
Mientras que amplitud de onda es la distancia que existe entre la parte superior e
inferior de la onda, La amplitud de onda le confiere a un rayo luminoso, la
intensidad luminosa o brillantez sin modificar el color, esto significa que si un haz
luminoso de un color determinado es ms intenso o ms brillante que otro del
mismo color es porque la amplitud de onda del primero es mayor que la del
segundo. Cada ciclo de la onda se repite en intervalos separados por una longitud
de onda, al nmero de estos ciclos que ocurren cada segundo se le llama
frecuencia Se mide en rpm (oscilaciones por minuto), rps (oscilaciones por
segundo o Hertz).
La velocidad de un rayo de luz, en un medio depende de su longitud de onda. Los
rayos luminosos de ondas cortas pierden ms velocidad que aquellos de ondas
largas; un rayo de luz azul se desplaza ms lentamente que un rayo de luz roja,
esto significa que el ndice de refraccin de un cuerpo transparente vara con la
longitud de onda del rayo luminoso que lo atraviese. Por lo tanto, segn la ley de
Snell, los diversos colores de la luz son refractados y desviados en distinto grado.
Esta propiedad por la que las ondas luminosas de diferente longitud, integrantes
de un haz de luz blanca, se desplazan a diferente velocidad en un cuerpo
transparente y experimentan desviaciones en su recorrido en diferentes grados de
desviacin se denomina dispersin o descomposicin de la luz. Dispersin de un
haz de luz blanca, al atravesar un prisma, en rayos luminosos de diferentes
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.

longitudes de onda. El ejemplo ms evidente es el que se produce cuando un haz

de luz blanca incide en la superficie de un prisma. Las diferentes longitudes de
onda de los rayos hacen que estos se refracten y dispersen en ngulos distintos
ocasionando que por la superficie opuesta del prisma emerjan los rayos luminosos
de distintos colores.
Imagen 1: Dispersin de un haz de luz blanca, al atravesar un prisma, en

rayos luminosos de diferentes longitudes de onda.
La luz visible y UV forma parte del espectro electromagntico. El espectro

electromagntico est conformado por ondas con diferentes longitudes de onda, o
frecuencias. Las partes en las que est dividido el espectro electromagntico son
(de mayor a menor longitud de onda).
Absorcin y emisin de la luz (fluorescencia y fosforescencia)

La luz de ciertas longitudes de onda puede ser selectivamente absorbida por una
substancia de acuerdo a su estructura molecular. La absorcin de la energa de la
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.

luz ocurre cuando un fotn incidente promueve la transicin de un electrn de un

estado de menor a mayor energa. Las molculas con electrones en compuestos
aromticos usualmente absorben luz cerca del UV (150400 nm) o en la zona del
visible (400750 nm). Los electrones excitados eventualmente pierden esta
energa ganada y por un proceso de radiacin regresan a su estado inicial. La
radiacin emitida por una molcula, o un tomo, despus de que ha absorbido
energa para colocarse en un estado excitado, es convenientemente definida
como luminiscencia. sta se divide formalmente en dos categoras, fluorescencia y
fosforescencia, dependiendo de la naturaleza del estado excitado. Todos los
mtodos espectrofotomtricos se basan en dos leyes que combinadas se conocen
como la ley de Lambert y Beer.
La ley de Lambert y Beer
Establece que la fraccin de luz absorbida por un medio transparente es
independiente de la intensidad de luz incidente, y cada capa sucesiva del medio
absorbe una fraccin igual de la luz pasando a travs de l. Lo cual puede ser
expresado como: log (I0/I) = kL donde, I0 es la intensidad de la luz incidente, I es la
intensidad de la luz transmitida, L es la longitud por donde pasa la luz en la celda
del espectrofotmetro y k es la constante del medio. La ley de Beer dice, la
cantidad de luz absorbida es proporcional al nmero de molculas del cromforo a
travs del cual pasa la luz. Lo cual indica que: k = c donde c es la concentracin y
es el coeficiente molar de absorcin, una caracterstica propia del cromforo.
es igual a la absorcin de una solucin molar en una celda de 1 cm. Retomado la
ecuacin de Lambert, obtenemos que: log (I0/I) = cL UV Espectro de luz blanca
Infrarrojo Espectro visible 6 Si consideramos que el trmino log(I0/I) es conocido
como absorbancia y en algunas ocasiones en algunas ocasiones el paso de la luz
a travs de la celda es descrito en trminos de transmitancia (T = I/I 0), tenemos
que: A= log(1/T) = cl
De acuerdo a la ley de Lambert y Beer, la absorbancia debe de ser linealmente
proporcional a la concentracin del cromforo. La absorbancia de un soluto
depende linealmente de su concentracin. La longitud de onda y la fuerza de
absorbancia de una molcula no solo dependen de su naturaleza qumica sino
tambin del ambiente molecular de sus cromforos.
Naturaleza qumica de los estados excitados y relajados
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El estado electrnico de una molcula est referido a las propiedades de todos los
electrones en todos sus orbitales. La funcin de onda de un estado electrnico es
una combinacin de las funciones de onda de cada uno de los electrones en cada
uno de los orbitales de la molcula de la cual forman parte. La forma en que una
molcula absorbe radiacin electromagntica es por medio de un proceso
mecnico cuntico, donde una molcula es transformada de un estado basal a un
estado excitado. La energa del fotn de luz absorbido corresponde a la diferencia
de energa entre los dos estados. En la luz del ultravioleta y el espectro visible
(200-800 nm), corresponden energas de 143 a 35.8 kcal mol-1. En los tomos la
absorcin involucra la promocin de un electrn de una capa orbital externa hacia
un orbital vaco de mayor energa. En molculas, un electrn es promovido del
mayor orbital molecular ocupado (HOMO, highest occupied molecular orbital), al
menor orbital molecular desocupado (LUMO, lowest unoccupied molecular orbital).
Cuando un electrn en una molcula es movido de un orbital a otro, cambia el
estado de la molcula y entonces es importante considerar los estados de la
molcula involucrados en lugar de considerar solamente los orbitales involucrados
en la promocin del electrn. Una molcula en un estado excitado es mejor
referida como una nueva entidad, solo remotamente relacionada a la misma
molcula en estado basal. Un estado excitado tendr una distribucin electrnica
completamente diferente del estado basal, una nueva geometra, y ms que eso,
podr reaccionar qumicamente de forma diferente del estado basal, que es el
estado normal o de menor energa. Existe slo un estado basal para una molcula
dada. Sin embargo, hay diversos estados excitados posibles an para molculas
muy simples, y la naturaleza exacta de los cuales depende de los tipos de
orbitales involucrados. Los estados electrnicos de las molculas electrnicas se
pueden agrupar en dos grandes categoras: estados singlete y triplete. En los
estados excitados singlete, un electrn en un orbital excitado est apareado (spin
opuesto) a un segundo electrn en un orbital en el estado basal, dicho de otra
forma, todos los electrones en la molcula tienen sus spin apareados. En
consecuencia, el regreso al estado basal es permitido por el spin y ocurre
rpidamente por emisin de un fotn. Este es el caso de la fluorescencia, y las
velocidades de emisin de sta son tpicamente de 108 s-1, por lo que la vida
media de la fluorescencia es cercana a 10 ns. 7 Los estados excitados triplet son
aquellos en los cuales un par de electrones tienen sus spines desapareados, esto
es, el electrn en el orbital excitado tiene la misma orientacin que un electrn en
el estado basal. La fosforescencia es la emisin de luz de estados excitados
triplet. La transicin al estado basal es impedida y las velocidades de emisin son
lentas (103 100 s-1), tal que la vida media de la fosforescencia es tpicamente de
milisegundos a segundos. Aunque la naturaleza exacta de los estados excitados
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muestra una gran variabilidad dependiente de parmetros especficos para una

molcula dada
Imagen2: Un diagrama de Jablonski mostrando la excitacin de una molcula A hasta

su estado excitado singlete (1) seguido por un cruce intersistema hasta el estado triplete
(3A) que se relaja hasta el estado fundamental por fosforescencia si no llega al cruce
intersistema y se relaja se llama fluorescencia
Fluorescencia y estructura
La mayora de los compuestos que contienen anillos aromticos proporcionan
emisin fluorescente. Ciertos compuestos carbonlicos alifticos y alicclicos y
estructuras de dobles enlaces tambin lo hacen. Sin embargo, su nmero es
pequeo en comparacin con el nmero de compuestos fluorescentes que
contienen anillos aromticos.
La mayora de los hidrocarburos aromticos no sustituidos fluorescen con una
emisin fluorescente creciente con el nmero de anillos y con su grado de
condensacin. Los anillos heterocclicos ms sencillos (piridina, furano, pirrol,...)
no fluorescen (imagen 3) pero las estructuras de anillos fusionados con ms de
dos anillos (quinolina, isoquinolina, indol) lo hacen con frecuencia
Imagen 3: compuestos que fluorescen

(izquierda) y los que no fluorescen (derecha)
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Fluorforos
Los fluorforos son molculas fluorescentes que tienen un espectro de absorcin
y emisin bien definidos; existe una diferencia entre los picos de absorcin y
emisin de un fluorforo (Stokes shift); la intensidad de su fluorescencia emitida
vara con la longitud de excitacin, pero no vara la distribucin de su espectro.
Entre los ms utilizados se pueden encontrar molculas orgnicas simples y
protenas fluorescentes.
CARACTERSTICAS INSTRUMENTALES
Fluormetro
Un fluormetro ideal debera de cumplir con las siguientes caractersticas:
1. La fuente de la luz debe de producir una salida de fotones constantes a todas
las longitudes de onda.
2. El monocromador debe de pasar fotones de todas las longitudes de onda con
la misma eficiencia.
3. La eficiencia del monocromador debe de ser independiente de la polarizacin.
4. El detector (tubo fotomultiplicador) debe de detectar los fotones de todas las
longitudes de onda con la misma eficiencia.
Desafortunadamente estos elementos ideales no existen, por lo cual se debe de
realizar una seleccin adecuada y hacer las correcciones pertinentes de la
respuesta no ideal.
Los componentes principales de cualquier fluormetro son: la fuente de luz, el
selector de onda, la celda para la muestra, un segundo selector de onda para
aislar la fluorescencia emitida y el detector. En la imagen 4 se muestra un
esquema general de un fluormetro.
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Imagen 4: esquema general de un fluorimetro
Caractersticas:
La fuente de luz
Los fotones correspondientes a la fluorescencia que pasan a travs del
monocromador de emisin son slo una pequea fraccin del total de la
intensidad. Por lo tanto es necesario el uso de una fuente que tenga una salida
relativamente alta. La mayora de los fluormetros tienen una lmpara de arco de
xenn de alta presin como fuente de excitacin ya que produce un espectro
continuo de alta intensidad que va de 200-1000 nm. Estas lmparas emiten luz
como resultado de la recombinacin de electrones con tomos ionizados de
xenn. Estos iones son generados por la colisin de los tomos de xenn con los
electrones que fluyen a travs del arco. La salida, que dependiente de la longitud
de onda de las lmparas de xenn, es la mayor razn para la distorsin del
espectro de excitacin de los componentes los cuales absorben en el ultravioleta.
El gas en las lmparas de xenn se encuentra bajo alta presin (aproximadamente
10 atm) por lo que siempre, al manejar este tipo de lmparas, se deben de usarse
lentes de seguridad. La envoltura de cuarzo no debe de ser tocada, si lo es, debe
de limpiarse con algn solvente como etanol ya que los residuos de las huellas
digitales se quemarn, quedando una mancha en la cobertura de cuarzo
provocando un posible fallo de la lmpara. Por supuesto la lmpara nunca debe de
ser observada directamente cuando est encendida, ya que puede daar la retina
o la crnea. Las lmparas de xenn tienen una vida til aproximada de 2000
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horas. Otras lmparas que tambin se pueden utilizar son las de mercurio de alta
presin, las de arco de xenn-mercurio, las de mercurio de baja presin y otra
fuente de luz como el lser. Las lmparas de mercurio de alta presin tienen
intensidades mayores que las de xenn pero la intensidad est concentrada en
lneas. Estas lmparas son tiles si las lneas de mercurio son aptas para las
longitudes de onda de excitacin del fluorforo. Las lmparas de arco de xenn-
mercurio tienen mayores intensidades que las de xenn en el ultravioleta y la
presencia de xenn ayuda a ensanchar el espectro de salida. Las lmparas de
mercurio de baja presin producen una lnea de mercurio muy afilada la cual es
til para calibrar. Las fuentes de luz antes mencionadas se usan para estados
estables o iluminacin continua, lo cual implica que no pueden ser usadas en
pulsos o amplitud modulada para mediciones resueltas en tiempo. Las lmparas
de arco usadas para mediciones de tiempos de vida de fase modulada usan
moduladores de luz externos. Finalmente, los laser (Ligth Amplification by
Stimulated Emission of Radiation) se utilizan desde los aos 70 como fuentes de
excitacin para medidas de fotoluminiscencia. Los laser sintonizables de
colorante, tienen un inters particular, ya que utilizan como sistema de bombeo, un
lser de nitrgeno pulsante o un lser de Nd: YAG. La mayora de los fluormetros
comerciales utilizan lmparas (ya descritas) como fuentes, por ser menos caras y
menos complicadas en su uso. Sin embargo, las fuentes de laser ofrecen
importantes ventajas en determinados casos, por ejemplo, cuando las muestras
son muy pequeas como en cromatografa con microcolumnas y en electroforesis
capilar donde la cantidad de muestra es de uno o menor; en los sensores de
control remoto, como en la deteccin fluorimtrica de radicales hidroxilo en la
atmsfera o de clorofila en seres vivos acuticos, donde la naturaleza colimada de
los haces de laser es vital; o cuando se requiere una radiacin de excitacin
altamente monocromtica para minimizar los efectos de las interferencias
fluorescentes
Componentes de excitacin de la muestra

La luz emitida por la fuente de excitacin es colectada con espejos y enfocada a
travs de lentes en un haz de luz. La longitud de onda de excitacin apropiada se
determina de un espectro de absorcin y se selecciona usando filtros o
monocromadores. La excitacin por un doble monocromador es ventajosa cuando
se est trabajando con muestras que tienen un alto grado de dispersin, como
suspensiones celulares, miscelas, o preparaciones de membranas. Esto reduce
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dramticamente el desvo de luz que pasa a travs del monocromador y cae en la

muestra. El uso de un doble monocromador resulta en un descenso en la luz de
salida y por lo tanto se puede necesitar una fuente ms potente.
Selectores de longitud de onda
Hay un gran nmero de monocromadores disponibles comercialmente que
pueden ser usados para aislar una lnea particular de una fuente de luz. Adems
de seleccionar la longitud de onda para la mxima transmisin, tambin se debe
de considerar la mitad del ancho de banda que define el rango de longitudes de
onda que se transmitir. La intensidad de la luz transmitida ser reducida tanto,
como el ancho de la banda. La longitud de onda de excitacin, o longitud de onda
de fluorescencia, de la luz es usualmente seleccionada a travs de un
monocromador. La intensidad de luz que pasa a travs de monocromador es
aproximadamente proporcional al cuadrado del ancho de la hendidura. Las
especificaciones de un monocromador incluyen, la dispersin y los niveles de
desviacin de la luz. Cuando se selecciona un monocromador para fluorimetra, se
busca niveles bajos de desviacin de luz para evitar problemas debidos a la
dispersin. Se elige un monocromador de alta eficiencia para maximizar la
habilidad de detectar bajos niveles de luz. La resolucin normalmente tiene una
importancia secundaria ya que el espectro de emisin raramente tiene picos con
anchos menores de 5 nm. La eficiencia de la transmisin de un monocromador de
rejilla est en funcin de la longitud de onda. La eficiencia puede ser maximizada
eligiendo el ngulo de brillo (blaze angle), el cual es determinado por la forma y
ngulo de la herramienta usada para generar la rejilla. La eficiencia de la
transmisin de los monocromadores de rejilla est en funcin de la longitud de
onda. Generalmente, se elige un monocromador de excitacin con una alta
eficiencia en el ultravioleta y uno de emisin con alta eficiencia en el espectro
visible. Una caracterstica importante de los monocromadores de rejilla es que la
eficiencia de la transmisin depende de la polarizacin de la luz. El espectro de
emisin de una muestra puede modificar la eficiencia segn la longitud de onda y
alterado en forma, dependiendo de las condiciones de polarizacin elegidas para
correr el espectro de emisin. Consideremos un espectro de emisin corrido con
cualquier tipo de rejilla, pero a travs de una polarizacin orientada horizontal o
verticalmente figura 20. El espectro corrido con una polarizacin vertical aparenta
cambiar a longitudes de onda relativas ms cortas a aquellas con polarizacin
horizontal. Esto es debido a que la eficiencia de transmisin para luz polarizada
verticalmente es mayor a longitudes de onda menores. Este cambio de espectro
podra ser observado independientemente de la muestra, y de si la emisin fue
polarizada o no. Es muy importante comparar solamente aquellos resultados que
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hayan sido corridos en condiciones idnticas, incluyendo la orientacin del

polarizador.
Calibracin de los monocromadores
Para la calibracin se utiliza una lmpara de baja presin de mercurio que tiene la
forma de un pequeo cilindro de 5 mm de dimetro y se ajusta en el contenedor
de la celda mediante un bloque que tiene la forma de la celda. Este contenedor
tiene un pequeo agujero que permite que una pequea cantidad de luz entre al
monocromador de emisin. Es importante atenuar la luz para evitar que el tubo
fotomultiplicador o los amplificadores se daen. Las medidas de las longitudes de
onda son comparadas con valores conocidos y si es que existen desviaciones
constantes, se recalibra hasta que coincidan. En caso de que la escala de
longitudes de onda no sea linear, el monocromador debe de ser enviado al
fabricante para que sea realineado.
Filtros pticos
La mayor fuente de error en las mediciones de fluorescencia es la interferencia
debida a la dispersin y desviacin de la luz. Para minimizar este problema se
usan filtros pticos adems de los monocromadores. Para ilustrar la utilidad de los
filtros considera un filtro en la ruta de la luz de excitacin (Figura 21). Un filtro
como A puede remover la desviacin de la luz a la longitud de onda de
observacin previa a su llegada y dispersin de la muestra. De esta forma uno
puede bloquear la desviacin de la luz que pas por el monocromador de
excitacin. De manera alternativa, uno puede emplear filtros para eliminar la
dispersin de la luz previa a su llegada al monocromador de emisin. Cualquiera
de los filtros B o C puede llevar a cabo esta tarea. El filtro B no distorsionar el
espectro de emisin, mientras que el filtro C atenuar selectivamente el lado corto
de la longitud de onda de la emisin.
Compartimiento de la muestra
Las celdas utilizadas en fluorimetra tienen las cuatro caras lisas, ya que en la
mayora de los instrumentos los fotones son detectados en un ngulo de 90 con
respecto al haz de incidencia. La geometra de 90 es usada para minimizar
cualquier interferencia en la deteccin de la luz fluorescente. En la mayora de los
casos las celdas estn elaboradas de silica fusionada (cuarzo) pero si la longitud
de onda de excitacin y fluorescencia se encuentra sobre 300 nm se pueden
utilizar celdas de plstico. Los procesos de desactivacin de son usualmente
dependientes de altas temperaturas por lo tanto el contenedor de la celda debe de
ser termoestable. Los fotones de la fluorescencia son colectados con lentes y
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enfocados a un selector de longitud de onda. Un contenedor de muestras que

pueda llevar cuatro celdas en una torre rotatoria es ventajoso. De esta manera
otras muestras y soluciones blanco pueden ser mantenidas a la misma
temperatura.
Detectores
Para el anlisis de fluorescencia, han sido utilizados diferentes tipos de detectores.
Casi todos los fluormetros usan tubos fotomultiplicadores (TFM). Los TFM son
considerados los mejores como fuente de corriente, la cual es proporcional a la
intensidad de la luz. Un TFM consiste de un fotoctodo y una serie de electrodos
(dynodes) los cuales son etapas de amplificacin. El fotoctodo es una delgada
capa de metal que se encuentra por el lado interno de la ventana. Los fotones
incidentes causan que los electrones sean lanzados de la superficie. El fotoctodo
y los electrodos permanecen a un potencial negativo, pero mientras para el
fotoctodo es alto, tpicamente de 1000 a 2000 V, para los electrodos disminuyen
hacia cero a lo largo de la cadena, por lo tanto cada electrodo tiene una carga
positiva mayor que su predecesor. El potencial del fotoctodo al primer electrodo
generalmente est a un voltaje constante (50-200 V). Son estas diferencias de
potencial las que causan la salida del fotoelectrn y que sea acelerado hacia el
primer electrodo, una vez que ste colisiona provoca la salida de 5-20 electrones
ms, dependiendo de la diferencia de voltaje al electrodo. Este proceso contina a
travs de la cadena de electrodos hasta que una corriente llega al nodo. El
tamao del pulso depende de del voltaje aplicado al TFM.
Contador de fotones contra deteccin anloga de fluorescencia
Los tubos fotomultiplicadores pueden ser operados en modo anlogo o en
contador de fotones, En el modo de contador de fotones los pulsos del nodo
individual debidos a cada fotn son detectados y contados, como resultado, el
sistema de deteccin es operado en los lmites tericos de sensibilidad. Adems
de incrementar la sensibilidad, la estabilidad de los sistemas de deteccin pueden
incrementarse, esta es la razn por la que los TFM son operados a alto voltaje.
Pequeos cambios en este voltaje no produce cambios significativos en la
eficiencia con la que cada fotn es contado, por esta razn, la deteccin por
contadores de fotones es frecuentemente usada cuando los niveles de la seal
son bajos y cuando es necesario promediar longitudes de onda repetitivas para
incrementar la razn entre seal y ruido. Una desventaja de la deteccin por
contadores de fotones es que la ganancia de TFM no puede ser variada por
cambios en el voltaje aplicado. Otra desventaja es que el contador de fotones es el
limitado rango de intensidad sobre el cual la razn de conteo es lineal. Si dos
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pulsos llegan muy cercanos en tiempo al nodo, sern contados como un solo
pulso. Para eventos aleatorios, el conteo necesita ser aproximadamente 100
veces menor para evitar la llegada simultnea de dos fotones. Adems, la razn
entre la seal y el ruido se vuelve poco satisfactoria a conteos inferiores a 10,000
fotones por segundo. Este rango de intensidad limitada es una desventaja de la
deteccin por contador de fotones para mediciones en estado estable de
fluorescencia. En el modo anlogo los pulsos individuales son promediados La
corriente de cada pulso contribuye al promedio de la corriente en el nodo, y la
llegada simultnea de los pulsos no es un problema. Cuando se usa deteccin
anloga la ganancia del sistema de deteccin puede ser variada cambiando ya
sea la ganancia del amplificador o el voltaje en el TFM, como resultado un rango
ms amplio de los niveles de la seal pueden ser detectados sin preocupacin
sobre una respuesta no linear. La alta precisin de las mediciones anlogas
requiere amplificadores estables y fuentes de alto voltaje, lo cual actualmente no
es un gran problema. Las mediciones en contadores de fotones son menos
sensibles a estos factores.
Desviaciones de la ley de Lambert-Beer
La ley de Beer dice que la densidad ptica es directamente proporcional a la
concentracin de las especies que absorben. Sin embargo se dan desviaciones de
esta ley tanto por causas instrumentales como intrnsecas.
Dispersin de la luz
Existen dos fenmenos de dispersin, uno depende del tamao de la partcula de
soluto o cualquier material suspendido. Las muestras biolgicas son usualmente
turbias ya que las macromolculas u otros grandes agregados dispersan la luz.
Las densidades pticas resultantes de la dispersin de la luz son proporcionales a
1/4 (dispersin de Rayleigh), y puede por lo tanto ser reconocida fcilmente como
un fondo de absorcin el cual se incrementa rpidamente con la disminucin de la
longitud de onda. El segundo tipo de dispersin se conoce como la dispersin de
Raman. En este fenmeno, parte de la energa de excitacin de la luz es abstraida
por modos vibracionales de las molculas del solvente. En el caso del agua o
solventes hidroxlicos, las vibraciones ms dominantes que absorben esta energa
son los grupos OH, cuya energa de vibracin es observada a una longitud de
onda de 3300 cm-1. La seal de Raman de los solventes ser observada a una
longitud de onda que es 3300 cm-1 menor en energa que la longitud de onda de
excitacin. La longitud de onda de la dispersin de Raman (RA) puede ser
calculada como: RA-1= ex-1 - 0.00033.
Fluorescencia
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Si la densidad ptica de la muestra es alta, y si las especies que absorben son

fluorescentes la luz emitida puede alcanzar el detector. Este proceso resultar en
derivaciones de la ley de Beer. El efecto puede ser minimizado manteniendo la
distancia del detector de la muestra, y de ese modo disminuye la eficiencia con lo
cual la fluorescencia de emisin es colectada. AGREGADOS Si las especies que
absorben son slo parcialmente solubles entonces pueden formar agregados
cuando aumente su concentracin y el espectro de absorcin de los agregados
puede ser diferente del de los monmeros. Un ejemplo es el azul de bromofenol,
que a concentraciones alrededor de 10 mg/ml se observa una solucin roja,
mientras que la concentracin disminuye parece azul. Dependiendo de la longitud
de onda elegida para realizar la medicin, la desviacin puede ser positiva o
negativa.
FACTORES QUE AFECTAN LA DETERMINACIN
Compuestos fluorescentes de referencia
Los requerimientos para considerar a un compuesto como buena referencia son
muy estrictos, debe de tener un amplio espectro de fluorescencia, ser un slido
fcilmente purificable, ser soluble en agua, en algunos solventes orgnicos y
estables al aire y luz. El compuesto de referencia usado debe de absorber en la
misma regin del componente que est siendo estudiado y de manera anloga
debe de fluorescer como el compuesto estudiado. La quinina y sus derivados se
usan con mucha frecuencia, sin embargo hay regiones del espectro donde no son
tiles, ya que o no absorben o no fluorescen. El antraceno y la fluorescena
tambin se usados.
Medio
Tanto los gases como los lquidos como los slidos han sido usados para realizar
mediciones de fluorescencia. La presin de vapor limita el nmero de sistemas por
el cual la fluorescencia puede ser medida en la fase gaseosa. Cuando se trabaja
con la fase lquida, el medio ms comn, es importante mantener en mente que
los efectos causados por los solventes son muy variados y complejos. Algunos
solventes no son muy tiles para estudios de fluorescencia debido a que a sus
propiedades de apagado. Las mediciones de fluorescencia en la fase slida han
sido hechas con cristales, en pequeas esferas y en vidrios.
Impurezas e interferencia
Las impurezas en los solventes disminuyen la sensibilidad de los productos y a
que los mtodos fluorimtricos son muy sensibles se han descrito diferentes
Realiz. Revis Aprob
.

formas de purificar los solventes utilizados. Tambin son fciles de conseguir

comercialmente solventes fluoromtricos altamente puros. Adems de los
solventes, los reactivos grado qumico, adsorbentes, papel cromatogrfico, por
mencionar algunos, contienen impurezas que fluorescen. Cuantitativa y
cualitativamente, la fluorescencia ha sido aplicada a la separacin de mtodos
utilizando papel cromatogrfico, cromatografa de capa fina y sistemas con resinas
de intercambio inico. Los adsorbentes y resinas de intercambio inico no son
fluorescentes y no apagan la fluorescencia de los compuestos.
Apagado
La presencia de oxgeno puede causar un error serio por la oxidacin de la
muestra, y es crtica ya que tiene una tendencia a apagar la fluorescencia. La
fluorescencia del antraceno se reduce un 50% con oxgeno puro. El apagado
puede ser causado por otros solutos o por el solvente mismo.
Fotlisis
Debido a las longitudes de onda utilizadas para la excitacin de los fluorforos, se
relacionan complicaciones relacionadas a la fotodescomposicin. Ciertos pasos en
el diseo de los instrumentos puede limitar la fuente de error: un obturador, para
que la muestra solamente sea irradiada cuando las mediciones son hechas, una
fuente de baja intensidad acoplada con un mejor sistema de deteccin. Existen
algunos casos en los que la fotodescomposicin puede ser utilizada como una
ventaja.
Efecto de la temperatura
La intensidad de la fluorescencia usualmente caer con el aumento de la
temperatura ya que existen altas probabilidades de que la molcula excitada sea
desactivada. Los coeficientes de temperatura se encuentran usualmente en el
rango de 1 a 1.2 unidades relativas de fluorescencia por grado centgrado. Aunque
la instrumentacin de fluorescencia hace uso de fuentes de alta intensidad, el
calentamiento de la cmara de la muestra o de la muestra misma puede ocurrir.
La mayora de los instrumentos minimizan los efectos de la temperatura aislando
el contenedor de la muestra y utilizando un mecanismo obturador.
Adsorcin
Realiz. Revis Aprob

.

El efecto de adsorcin presenta serios problemas solamente cuando se trabaja

con soluciones muy diluidas. Diferentes superficies de vidrio adsorben quinina con
diferentes grados. La adsorcin no est limitada a los alcaloides como la quinina,
de hecho es comn en muchos compuestos orgnicos. Afortunadamente es
posible minimizar o eliminar la adsorcin, teniendo superficies mnimas de
contacto, dando un pretratamiento a la cristalera; Los solventes usados afectan
considerablemente en gran medida el fenmeno de adsorcin, los solventes
polares lo disminuyen.
Efecto de la geometra de la muestra
La aparente intensidad fluorescente y la distribucin del espectro pueden ser
dependientes de la densidad ptica de la muestra y de la geometra de la
iluminacin de la muestra. La intensidad de la fluorescencia es proporcional a la
concentracin nicamente dentro de cierto rango de densidades pticas.
Supongamos una celda de 1 x1 cm la cual es iluminada centralmente y observada
en el ngulo correcto. Asumamos que la densidad ptica es de 0.1 a la longitud de
onda de excitacin. Usando la definicin de densidad ptica (D.O = log (I0/I)) la
intensidad de la luz (I) en el centro de la celda es de 0.88 I0. Ya que la intensidad
de la fluorescencia observada es proporcional a la intensidad de la luz de
excitacin, el rendimiento aparente ser el 10 % menor que el observado para una
solucin infinitamente diluida. Este efecto es conocido como de filtro interior y
puede disminuir la intensidad de la excitacin al punto de observacin, o disminuir
la fluorescencia observada por la absorcin de esta fluorescencia. El efecto de
filtro interior es causado por uno o dos factores: absorcin de la fluorescencia de
emisin por una especie en solucin, o la absorcin de una fraccin significante de
la radiacin de excitacin por algunas especies en solucin. El efecto de filtro
interno especficamente no incluye aquellos procesos en los cuales disminuye la
tendencia de la molcula a emitir fluorescencia despus de que ha sido excitada;
este proceso afecta la eficiencia cuntica de la molcula y es referida como
apagado. Este efecto est manifestado de diferentes formas, pueden verse
alterados la excitacin y emisin de espectros, la curva de calibracin de
concentracin contra fluorescencia puede no ser linear a altas concentraciones.
En aquellos casos donde el fluorforo es responsable del efecto de filtro interno es
conveniente diluir la muestra para corregir la medicin. Una forma prctica de
evitar la posible existencia de este efecto es que la absorcin de la solucin no
exceda el 5% cuando se trabaja con el arreglo de ngulo correcto.
Efectos del solvente
Realiz. Revis Aprob

.

La polaridad del solvente y el ambiente local tienen profundos efectos en el

espectro de emisin de los fluorforos polares. Estos efectos son el origen del
cambio de Shift. Los espectros de emisin son medidos fcilmente y, como
resultado, hay numerosas publicaciones de espectros de emisin de fluorforos en
diferentes solventes, y cuando estn unidos a protenas, membranas y cidos
nucleicos. Un uso comn de los efectos del solvente es determinar la polaridad del
sitio de unin de la sonda en la macromolcula. Esto se realiza comparando los
espectros de emisin y/o la eficiencia cuntica del fluorforo cuando est unido a
la macromolcula y cuando est disuelto en solventes de diferente polaridad. La
emisin de los fluorforos generalmente ocurre a longitudes de onda mayores que
la absorcin. Esta prdida de energa se debe a una variedad de procesos
dinmicos que signe a la absorcin de la luz. Cuando un fluorforo es excitado, el
exceso de energa vibracional es rpidamente cedido al solvente. Si el fluorforo
es excitado a un estado singlet S2, rpidamente decae al estado S1 en 10-12 s
debido a la conversin interna. Los efectos del solvente cambian esta emisin a
niveles de energa an ms bajos debido a la estabilizacin del estado excitado
por las molculas polares del solvente. Tpicamente el fluorforo tiene un
momento dipolo ms grande en el estado excitado que en el estado basal.
Despus de la excitacin, los dipolos del solvente pueden reorientar o relajar
alrededor de, lo cual baja la energa del estado excitado. Como la polaridad del
solvente se incrementa, este efecto se hace mayor tambin, resultando en la
emisin a energas ms bajas o mayores longitudes de onda.
SULFATO DE QUININA
La exitacion maxima del sulfato de quinina es a 350nm y la maxima
fluorescencia es cerca de los 450nm. Por lo que este compuesto absorbe luz
ultravioleta y emite luz visible, La solucin fluorescente parece ser azul
En acido sulfurico 0,1 N el rendimiento cuntico de fluorescencia es de

aproximadamente 0.3 para la quinina. Significa que este alcaloide produce una
fluerescencia muy intensa en acido sulfurico. Sin embargo, la fluorescencia se
apaga notablemente, aunque el espectro de absorcin no es afectado. Este
ejemplo ilustra efecto que la condicin del disolvente puede ejercer sobre la
eficiencia de fluorescencia
Mtodo terico
Realiz. Revis Aprob
.

Determinar la cantidad disuelta de (20 24 2 2 )2 2 4 22 ) empleando

absorcin UV a la longitud de onda de mxima absorbancia, aproximadamente a
248nm, en porciones ltradas de la solucin en anlisis, diluidas apropiadamente
con Medio de Disolucin, en comparacin con una Solucin estndar que
contenga una concentracin conocida de ER Sulfato de Quinina USP en el mismo
Medio.
Mtodo propuesto
Preparacin de 400mL de disolucin cido sulfrico (2 4) 0.1N.
1- Agregar a un vaso de precipitado de 600 mL una pequea cantidad de

agua destilada (aproximadamente 50 mL).
2- Medir con una pipeta graduada de 2 ml 1/100 1.1 mL de 2 4 y verter el
contenido de la pipeta al vaso de precipitado de 600 mL lentamente por la
paredes del vaso de precipitado (Todo debe realizarse en la campana de
extraccin).
3- Adicionar agua destilada cuanto baste para llevar el volumen a 400mL.
4- Mezclar con agitacin magntica o manual con varilla de vidrio para
homogeneizar la disolucin.
5- Rotular el vaso de precipitado como disolucin de 2 4 0.1

Preparacin estndar sulfato de quinina 0.5
1- Pesar en una balanza analtica (Previamente limpiada y calibrada) la masa

real (12.5mg) del estndar de sulfato de quinina sobre un cuadro de papel
glassine (Previamente pesado y tarado para descartar su peso y se facilite
la exactitud al momento de pesar la muestra) utilizando una esptula.
2- Transferir el slido a un matraz volumtrico de 50mL (previamente lavado y
purgado con una mnima cantidad de disolucin 0.1N H2SO4 y ubicado
cerca de donde se pes la muestra) y adicionar con pipeta graduada de
10mL suficiente disolucin acida para disolver el estndar.
3- Una vez disuelto el estndar, adicionar con la misma pipeta suficiente
disolucin acida para acercar el volumen del matraz a la lnea de aforo,
posteriormente aforar con una pipeta de transferencia adicionando gota a
Realiz. Revis Aprob

.

gota la disolucin hasta que la curvatura del menisco quede a la misma

altura de la lnea de aforo del matraz.
4- Una vez aforado el matraz, cerrar e invertir el matraz de 2 a 3 veces para
5- Verter el contenido del matraz a un vaso de precipitado de 100mL
(previamente lavado y seco) y rotular como disolucin acida de estndar de
sulfato de quinina o con las iniciales DAESQ.
6- Con una pipeta volumtrica de 1mL (previamente lavada y purgada con
disolucin acida) tomar una alcuota del vaso de precipitado rotulado como
DAESQ y verter en un matraz volumtrico de 10mL (previamente lavado y
purgado con disolucin acida), adicionar con ayuda de la pipeta graduada
de 10mL disolucin acida hasta acercar el volumen a la lnea de aforo y
posteriormente aforar con una pipeta de transferencia (de uso exclusivo
para la disolucin del cido sulfrico) adicionando gota a gota la disolucin
hasta que la curvatura del menisco quede a la misma altura de la lnea de
aforo del matraz.
(previamente lavado y seco) y rotular como primera dilucin de la
disolucin acida de estndar de sulfato de quinina o con las iniciales 1
DAESQ.
disolucin acida). Tomar una alcuota del vaso de precipitado rotulado como
1 DAESQ y verter en un matraz volumtrico de 50mL (previamente
lavado y purgado con disolucin acida), adicionar con ayuda de la pipeta de
transferencia disolucin acida hasta acercar el volumen a la lnea de aforo y
posteriormente aforar adicionando gota a gota la disolucin hasta que la
curvatura del menisco quede a la misma altura de la lnea de aforo del
matraz.
(previamente lavado y seco) y rotular como concentracin de estndar final
o CEF.
Realiz. Revis Aprob
.


Preparacin muestra sulfato de quinina 0.5
1- Pesar en una balanza analtica (Previamente limpiada y calibrada) la masa

(12.5mg) de la muestra de sulfato de quinina sobre un cuadro de papel
glassine (Previamente pesado y tarado para descartar su peso y se facilite
la exactitud al momento de pesar la muestra) utilizando una esptula.
2- Transferir el slido a un matraz volumtrico de 50mL (previamente lavado y
purgado con una mnima cantidad de disolucin 0.1N H2SO4 y ubicado
cerca de donde se pes la muestra) y adicionar con pipeta graduada de
10mL suficiente disolucin acida para disolver el estndar.
3- Una vez disuelta la muestra, adicionar con la misma pipeta suficiente
disolucin acida para acercar el volumen del matraz a la lnea de aforo,
posteriormente aforar con una pipeta de transferencia adicionando gota a
gota la disolucin hasta que la curvatura del menisco quede a la misma
altura de la lnea de aforo del matraz.
(previamente lavado y seco) y rotular como disolucin acida de la muestra
de sulfato de quinina o con las iniciales DAMSQ.
disolucin acida) tomar una alcuota del vaso de precipitado rotulado como
DAMSQ y verter en un matraz volumtrico de 10mL (previamente lavado y
purgado con disolucin acida), adicionar con ayuda de la pipeta graduada
de 10mL disolucin acida hasta acercar el volumen a la lnea de aforo y
posteriormente aforar con una pipeta de transferencia (de uso exclusivo
para la disolucin del cido sulfrico) adicionando gota a gota la disolucin
hasta que la curvatura del menisco quede a la misma altura de la lnea de
aforo del matraz.
(previamente lavado y seco) y rotular como primera dilucin de la
disolucin acida de la muestra de sulfato de quinina o con las iniciales 1
DAMSQ.
Realiz. Revis Aprob
.


disolucin acida). Tomar una alcuota del vaso de precipitado rotulado como
1 DAMSQ y verter en un matraz volumtrico de 50mL (previamente
lavado y purgado con disolucin acida), adicionar con ayuda de la pipeta de
transferencia disolucin acida hasta acercar el volumen a la lnea de aforo y
posteriormente aforar adicionando gota a gota la disolucin hasta que la
curvatura del menisco quede a la misma altura de la lnea de aforo del
matraz.
(previamente lavado y seco) y rotular como concentracin de la muestra
final o CMF.
12- Repetir procedimiento por triplicado.
Medicin de intensidad de fluorescencia del estndar.
1- Colocar cerca del fluormetro el vaso de precipitado con la concentracin

del estndar final (CEF)
2- Conectar y encender el fluormetro y dejar sin uso durante 15 minutos, para
que la emisin de onda sea constante.
3- Preparar el blanco (una muestra pequea suficiente de disolucin de cido
sulfrico para llenar a 2/3 partes la celda de cuarzo).
4- Seleccionar en el panel del fluormetro a una longitud de onda de 450nm
(mximo valor de fluorescencia segn el Connors 2ed).
5- Purgar una celda (con longitud de 1cm) con la mnima cantidad posible del
blanco y posteriormente llenar la celda a 2/3 partes del total del volumen de
la celda (sujetndola de la parte superior) y colocar la celda dentro del
fluormetro lados, cerrar el compartimiento y oprimir el botn para calibrar.
Retirar y colocar a un lado.
6- Continuar con la lectura de la absorbancia del estndar.
7- En otra celda de igual longitud purgar con la mnima cantidad posible de la
muestra CEF y posteriormente llenar la celda a 2/3 partes del total del
volumen de la celda (sujetndola de la parte superior) y colocar la celda
dentro del fluorometro, cerrar el compartimiento y registrar el valor de
absorbancia mostrado en la pantalla del fluormetro.
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.

8- Retirar y desechar la muestra (tanto del estndar como el blanco) en un

envase de residuos.
Medicin de intensidad de fluorescencia de la muestra.
1- Colocar cerca del fluormetro el vaso de precipitado con la concentracin

de la muestra final (CMF)
2- Conectar y encender el fluormetro y dejar sin uso durante 15 minutos, para
que la emisin de onda sea constante.
3- Preparar el blanco (una muestra pequea suficiente de disolucin de cido
sulfrico para llenar a 2/3 partes la celda de cuarzo).
4- Seleccionar en el panel del fluormetro a una longitud de onda de 450nm
(mximo valor de fluorescencia segn el Connors 2ed).
5- Purgar una celda (con longitud de 1cm) con la mnima cantidad posible del
blanco y posteriormente llenar la celda a 2/3 partes del total del volumen de
la celda (sujetndola de la parte superior) y colocar la celda dentro del
fluormetro, cerrar el compartimiento y oprimir el botn para calibrar. Retirar
y colocar a un lado.
6- Continuar con la lectura de la absorbancia del estndar.
7- En otra celda de igual longitud purgar con la mnima cantidad posible de la
muestra CMF y posteriormente llenar la celda a 2/3 partes del total del
volumen de la celda (sujetndola de la parte superior) y colocar la celda
dentro del fluorometro, cerrar el compartimiento y registrar el valor de
absorbancia mostrado en la pantalla del fluormetro.
8- Retirar y desechar la muestra (tanto del estndar como el blanco) en un
envase de residuos.
Clculos:
Determinacin de la masa y volumen para la preparacin de 400mL de

disolucin de cido sulfrico 0.1N
Donde:
Peso molecular: 98.1g/mol
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.

Peso equivalente: 98/2 g/eq =49g/eq
Volumen: 0.4L
Normalidad: 0.1 eq/L
Densidad: 1.84g/mL
=

= (0.1 ) (0.4) (49 ) = 1.96 2 4

=

1.96
= = 1.06526 1.1 2 4
1.84
Determinacin de diluciones para obtener una aproximacin a la

concentracin 0.5 partiendo de una masa de 10mg de estndar de
sulfato de quinina.
10 1 1 1000
( )( )( )( ) = 0.4
50 10 50 1
Determinacin de masa exacta de estndar de sulfato de quinina para

obtener una concentracin de 0.5 .
10 50 1
(0.5 )( )( )( ) = 12.5
1 1 1000

Preparacin de estndar 0.5 partiendo de una masa de 12.5mg de
sulfato de quinina.
12.5 1 1 1000
( )( )( )( ) = 0.5
50 10 50 1
Realiz. Revis Aprob
.


Preparacin de muestra 0.5 partiendo de una masa de 12.5mg de sulfato
de quinina.
12.5 1 1 1000
( )( )( )( ) = 0.5
50 10 50 1
MATERIAL Y REACTIVOS
- Balanza analtica.
- 1/4 pliego de Papel glassine.
- Una Esptula.
- Un Vidrio de reloj
- 1 Pipeta graduada 10mL.
- 1 Pipeta de transferencia.
- 4 Pipetas volumtricas 1mL.
- 1 Pipetas volumtricas 2mL.
- 2 Matraces volumtricos 10mL.
- 3 Matraces volumtricos 50mL.
- 2 Vasos de precipitado 50mL.
- 4 Vasos de precipitados 100mL
- 1 Vaso de precipitados 600mL
- Un espectrofotmetro.
- 2 Celdas de cuarzo.
- Envase de desechos.
- Sulfato de quinina (materia prima)
- Agua
Propiedades de los reactivos
cido sulfrico 2 4
Aspecto: Lquido higroscpico incoloro, aceitoso e inodoro.

Peso molecular(g/mol): 98.1
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.

Punto de fusin():10
Punto de ebullicin(): 340
Densidad (g/mL): 1.8
Solubilidad: miscible en agua
Identificacin de riesgos
La sustancia es un oxidante fuerte y reacciona violentamente con
Materiales combustibles y reductores
Inhalacin: Corrosivo, sensacin de quemazn, dolor de garganta y tos.
Dificultad respiratoria. Jadeo.
Ingestin: Corrosivo, dolor abdominal, sensacin de quemazn, shock o
colapso.
Ojos: Corrosivo. Enrojecimiento, dolor y quemaduras profundas graves.
Piel: Corrosivo. Enrojecimiento, dolor, ampollas y quemaduras cutneas
graves.
Primeros auxilios
Inhalacin: Aire limpio, reposo. Posicin de semi-incorporado. Respiracin
artificial si estuviera indicada. Proporcionar asistencia mdica.
Ingestin: Enjuagar la boca. NO provocar el vmito. Proporcionar asistencia
mdica.
Ojos: Enjuagar con agua abundante durante varios minutos (quitar las
lentes de contacto si puede hacerse con facilidad), despus proporcionar
asistencia mdica.
Piel: Quitar las ropa contaminada, aclarar la piel con agua abundante o
ducharse. Proporcionar asistencia mdica.
Proteccin personal
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.

Ventilacin, extraccin localizada o proteccin respiratoria. Pantalla facial o

proteccin ocular combinada con proteccin respiratoria. No comer, ni
beber, ni fumar durante el trabajo.
Sulfato de quinina (20 24 2 2 )2 2 4 22
Aspecto: polvo blanco inodoro
Peso molecular(g/mol): 782.95
Punto de fusin(): -
Punto de ebullicin(): -
Densidad (g/L): 1.24
Solubilidad: soluble en agua
Identificacin de riesgos
En caso de incendio pueden formarse: Dixido de carbono (CO2) Monxido

de carbono xidos ntricos y xidos de azufre.
Primeros auxilios
Solicitar asistencia mdica, en caso de duda o si existen sntomas. En caso

de prdida de conocimiento acostar al afectado en posicin lateral de
seguridad y solicitar atencin mdica. Nunca dar algo por la boca a una
persona que este sin conocimiento. Cambiar la ropa sucia y mojada. No
dejar sin vigilancia la persona afectada.
En caso de inhalacin Llevar al accidentado al aire libre y mantenerlo

caliente y tranquilo. En caso de dificultades respiratorias o paro respiratorio,
administrar respiracin artificial. En caso de afeccin de las vas
respiratorias consultar al mdico.
Realiz. Revis Aprob

.

En caso de contacto con la piel, lvese inmediatamente con abundante

agua y jabn. Quitar inmediatamente ropa contaminada y mojada. En caso
de reacciones cutneas, consultar un mdico.
En caso de contacto con los ojos aclarar inmediatamente los ojos abiertos
bajo agua corriente durante 10 o 15 minutos y consultar al oftalmlogo.
Proteger el ojo ileso. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fcil.
Seguir aclarando.
En caso de ingestin enjuagar la boca con abundante agua (solo si la

persona est consciente) y solicitar inmediatamente atencin mdica. NO
provocar el vmito. No dar nada para beber o comer
Proteccin personal
Es necesaria ropa de proteccin para evitar el contacto directo con la piel
(adems de la ropa de trabajo normal).
Proteccin de ojos y cara: Gafas d seguridad
Proteccin de piel: Para la manipulacin de productos qumicos slo se
pueden utilizar guantes de proteccin identificados con el marcado CE y
el cdigo de cuatro dgitos relacionado.
Trabajar en una zona a ventilada
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.

Diagrama de flujo
Preparar las disoluciones cido sulfrico. Medir

1.1 mL 2 4 con una pipeta de 2m L 1/100 y
diluir en 400 mL de agua destilada
Encender el
fluormetro
Pesar 12.5 mg de estndar de Pesar 12.5 mg de la muestra

sulfato de quinina y diluir con de sulfato de quinina y diluir
2 4 0.1 N en un matraz con 2 4 0.1 N en un
volumtrico de 50 mL hasta el matraz volumtrico de 50 mL
aforo hasta el aforo
Tomar una alcuota de 1mL Tomar una alcuota de

de la disolucin y diluir en 1mL de la disolucin y
un matraz de 10 mL hasta el diluir en un matraz de 10
aforo mL hasta el aforo
Tomar una alcuota de 1mL Tomar una alcuota de 1mL

de la disolucin y diluir en de la disolucin y diluir en
un matraz de 50 mL hasta un matraz de 50 mL hasta el
el aforo aforo
Seleccionar ele fluormetro
una longitud de onda a 450
nm
Medir la absorcin Medir la absorcin de

Calibrar con el blanco
de la disolucin final la disolucin final de
de reactivos
del estndar
Realiz. Revis la muestra
Aprob
.

REFERENCIAS
- USP 36 Vol. 2 36. Revv. (USP36) 31. Ed. (NF31). Rockville, Md.: United States
Pharmacopeia Convention, c2013.
-Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Secretaria de salud. 2014. p. 2188-

2189. 11va edicin.
-The Merck Index. Laboratorios de investigacin Merck (Merck & CO., INC). 12
ed. U.S.A:1990.
-Skoog A, West D. Fundamentos de qumica analtica. 9ed. Cengage Learning

Editores: Mxico; 2015
-Martinez MT,Moctezuma CL. Metodos Fisico-Quimicos

(espectrofluorometria)[internet].[citado 24 FEB 2017]. Disponible en:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrofluorimetria.pdf
Realiz. Revis Aprob

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Anteproyecto de Sulfato de Quinina

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Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio Pgina 1 de 29

Determinar el porcentaje de pureza del sulfato de quinina por espectrofluorometra

El Sulfato de Quinina es el sulfato de un alcaloide obtenido de la corteza de las

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Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio Pgina 3 de 29

longitudes de onda. El ejemplo ms evidente es el que se produce cuando un haz

Imagen 1: Dispersin de un haz de luz blanca, al atravesar un prisma, en

La luz visible y UV forma parte del espectro electromagntico. El espectro

Absorcin y emisin de la luz (fluorescencia y fosforescencia)

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luz ocurre cuando un fotn incidente promueve la transicin de un electrn de un

Naturaleza qumica de los estados excitados y relajados

Realiz. Revis Aprob

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muestra una gran variabilidad dependiente de parmetros especficos para una

Imagen2: Un diagrama de Jablonski mostrando la excitacin de una molcula A hasta

Imagen 3: compuestos que fluorescen

Realiz. Revis Aprob

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Imagen 4: esquema general de un fluorimetro

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Componentes de excitacin de la muestra

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dramticamente el desvo de luz que pasa a travs del monocromador y cae en la

Realiz. Revis Aprob

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hayan sido corridos en condiciones idnticas, incluyendo la orientacin del

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enfocados a un selector de longitud de onda. Un contenedor de muestras que

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Si la densidad ptica de la muestra es alta, y si las especies que absorben son

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formas de purificar los solventes utilizados. Tambin son fciles de conseguir

Realiz. Revis Aprob

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El efecto de adsorcin presenta serios problemas solamente cuando se trabaja

Realiz. Revis Aprob

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La polaridad del solvente y el ambiente local tienen profundos efectos en el

En acido sulfurico 0,1 N el rendimiento cuntico de fluorescencia es de

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Determinar la cantidad disuelta de (20 24 2 2 )2 2 4 22 ) empleando

Preparacin de 400mL de disolucin cido sulfrico (2 4) 0.1N.

1- Agregar a un vaso de precipitado de 600 mL una pequea cantidad de

1- Pesar en una balanza analtica (Previamente limpiada y calibrada) la masa

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gota la disolucin hasta que la curvatura del menisco quede a la misma

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1- Pesar en una balanza analtica (Previamente limpiada y calibrada) la masa

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9- Con una pipeta volumtrica de 1mL (previamente lavada y purgada con

Medicin de intensidad de fluorescencia del estndar.

1- Colocar cerca del fluormetro el vaso de precipitado con la concentracin

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8- Retirar y desechar la muestra (tanto del estndar como el blanco) en un

Medicin de intensidad de fluorescencia de la muestra.