ESTUDIO FITOQUMICO DE Ruta graveolens (ruda)

PHYTOCHEMICAL STUDY OF Ruta graveolens (ruda)

Alvia Saldarriaga C., Camones Vargas F., Lpez Moreno M., Silva Zevallos N.

Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumica, Universidad Inca Garcilaso de

la Vega, Lima, Per

Resumen.

Se utilizaron las hojas secas de Ruta graveolens (ruda) que luego de ser secadas
a 45C, se realiz la extraccin por el mtodo de maceracin por una semana, de
ah se obtuvo el extracto seco, el cual nos sirvi para realizar el tamizaje fitoqumico
en el cual dio positivo en la prueba para flavonoides, taninos, cumarinas y tambin
se realizaron pruebas especficas para la identificacin de saponinas y compuestos
fenlicos usando las fracciones obtenidas en la prueba de fraccionamiento.

Como resultado se obtuvo la presencia de flavonoides, alcaloides, cumarinas y

fenoles en el tamizaje fitoqumico, y la comparacin positiva durante la
cromatografa con un estndar de rutina y de quinona, lo que demuestra que Ruta
graveolens posee como principal metabolito secundario a los flavonoides.

Abstract.

The dried leaves of Ruta graveolens (ruda) were used, which after being dried at
45C, extraction by the maceration method was carried out for a week, from which
the dried extract was obtained, which served to perform the phytochemical
screening in Which tested positive for flavonoids, tannins, coumarins and also
specific tests were performed for the identification of saponins and phenolic
compounds using the fractions obtained in the fractionation test.

As a result, the presence of flavonoids, alkaloids, coumarins and phenols in

phytochemical screening was obtained, and a positive comparison was made during
routine and quinone chromatography, demonstrating that Ruta graveolens is the
main metabolite secondary to flavonoids.
Introduccin.

Las plantas superiores sintetizan una gran variedad de sustancias qumicas durante
su crecimiento y desarrollo, dichas sustancias son denominadas metabolitos
secundarios, entre ellos se encuentran los alcaloides, terpenos y compuestos
fenlicos, estos poseen propiedades teraputicas de gran beneficio al ser humano.

En uno de estos compuestos estn los flavonoides, los cuales representan uno de
los ms importantes a su abundante presencia en algunas plantas, como lo es en
la ruda (Ruta graveolens), el cual recibe el nombre de rutina.

En el siguiente artculo se llevar a cabo el estudio fitoqumico as como los

procesos que intervienen en la obtencin de la rutina como principio activo de Ruta
graveolens tales como la preparacin de la muestra, extraccin, tamizaje,
fraccionamiento y elucidacin.

Mtodos y Desarrollo Experimental.

Material vegetal:

Se adquiri un aproximado de 400 g. de ruda (Ruta graveolens) en el mercado

Unicachi, en el distrito de Comas. Con la planta se realiz una desinfeccin solo de
las hojas, sumergindolas en hipoclorito de sodio 10 ppm por 10 minutos.

Luego se llev a secado a la estufa a una temperatura de 45C durante una

semana. Una vez deshidratada la muestra se tom el peso y se trituro tomndole
nuevamente el peso.

1) Mtodo de extraccin.

Se utiliz la tcnica de maceracin utilizando un frasco color mbar de

aproximadamente 1 litro. Se coloc el material triturado y se le agrego
aproximadamente 500mL de etanol de 96, con el objetivo de cubrirlo
completamente, se macero por una semana a temperatura ambiente.

Al pasar el tiempo de extraccin se llev a filtracin y luego se llev al

Rotavapor para su concentracin, al terminar este proceso se tom el peso
en una placa Petri que fue llevada a la estufa a una temperatura de 100C
grados para su posterior secado.
2) Marcha Fitoqumica.

Para este procedimiento se utiliz 1 gramo del extracto seco disuelto con
etanol de 96 se coloc en diferentes tubos ensayos y se agreg de 3 a 5
gotas del respectivo reactivo para la identificacin del metabolito.

TABLA 01: Marcha Fitoqumica del extracto seco de Ruta graveolens (No
cuantitativo)

Reconocimiento de Reactivo
Tubo 01 Carbohidratos R. de Molish
Tubo 02 Carbohidratos R. de Benedict
Tubo 03 Protenas Ninhidrina
Tubo 04 Lpidos Sudan III
Tubo 05 Fenoles FeCl3
Tubo 06 Cumarinas NaOH
Tubo 07 Taninos FeCl3
Tubo 08 Flavonoides R. de Shinoda
Tubo 09 Quinonas R. de Borntrager
Tubo 10 Alcaloides R. de Dragendorff
Tubo 11 Saponinas Prueba de espuma

TABLA 02: Reconocimiento de la Marcha Fitoqumica.

Reactivo - Metabolito Forma de Reconocimiento

Cloruro Frrico (FeCl3) - Fenoles Azul Verde - Violeta
Hidrxido de sodio (NaOH) - Cumarinas Amarillo
Cloruro Frrico (FeCl3) - Taninos Azul - Verde
R. de Shinoda - Flavonoides Rojo plido Amarillo
R. de Borntrager - Quinonas Rojo oscuro
R. de Dragendorff - Alcaloides pp rojo naranja
Prueba de espuma - Saponinas Espuma estable
3) Marcha de Solubilidad.

Para realizar la marcha de solubilidad al igual que el procedimiento anterior

se utiliz 1 gramo del extracto seco junto con 1mL de etanol de 96 y se
coloc en 6 tubos de ensayo diferentes, a cada tubo se le agrego 1mL del
solvente respectivamente.

TABLA 03: Marcha de Solubilidad del extracto seco de Ruta graveolens (No
cuantitativo)

Solvente
Tubo 01 Metanol
Tubo 02 Etanol
Tubo 03 Cloroformo
Tubo 04 ter de Petrleo
Tubo 05 Hexano
Tubo 06 Acetato de etilo

4) Tcnica de Cromatografa en Placa Fina.

Para la CCF se utilizaron placas de silicagel que fue la fase estacionaria, y

como fase mvil se utiliz diclorometano y metanol en proporcin de 7 a 3.

Se utilizaron 6 placas y en cada una se sembr unas 5 gotas de las muestras

del procedimiento anterior, las placas ya sembradas se colocaron en un
recipiente junto con la fase mvil y se esper su corrida.

5) Fraccionamiento.
Del extracto seco, se sac 1g de muestra a la cual agregamos 5 mL de
cloroformo (hasta completar los 20mL), luego esto se vierte en una pera de
decantacin agregndole 20mL de agua. Al obtener la fase clorofrmica esta
se lleva a evaporacin y se le agrega 10mL de metanol (hasta completar los
20mL), se vierte a la pera de decantacin agregndole 20mL de hexano, se
mezcla y se deja reposar.
De la fase acuosa perteneciente a la primera pera de decantacin, se le
agrega 20mL de acetato de etilo, se mezcla y se deja reposar.
6) Saponinas.
Prueba de espuma.

Para este procedimiento se utiliz una pequea porcin del extracto y

se le agrego 3mL de agua destilada, luego se realiza una agitacin
dinmica durante 1 minuto.

Prueba de Lieberman-Burchard

En esta prueba se utiliz una pequea porcin del extracto

agregndole 1mL de Anhdrido Actico y 1mL de cloroformo (agitar),
luego se le agrega 1 gota de cido sulfrico.

7) Prueba de Reconocimiento para Flavonoides y Comparacin con

estndar de rutina.
Se utiliz 1g de muestra del extracto seco y se diluyo en 1mL de etanol, esto
se realiz en dos tubos de ensayo diferentes y a cada uno se le agrego los
siguientes reactivos.
a) Tubo 01: Una pequea porcin de magnesio metlico junto con 3
gotas de HCl concentrado.
b) Tubo 02: Solucin de FeCl3

Luego de la primera parte de la prueba, se realiz la cromatografa en placa

fina, sembrado el extracto seco diluido en 1mL de etanol y la muestra
estndar de rutina, como fase estacionaria se utiliz silicagel y como fase
mvil se utilizaron los siguientes reactivos.

a) Butanol, agua y cido actico en proporcin de 25:25:2 mL

b) Diclorometano y metanol en proporcin de 3:1 mL
8) Prueba de Cromatografa para la Comparacin con Quinonas
En esta prueba se realiz la tcnica de cromatografa en placa fina, utilizando
para el sembrado el extracto seco diluido en 1mL de etanol y una muestra
estndar de cochinilla, como fase estacionaria se utiliz silicagel y como fase
mvil Butanol, agua y cido actico en proporcin de 25:25:2 mL.
Resultados:

Los resultados obtenidos fueron los siguientes

1) Peso de la muestra.
Peso inicial de la muestra en general: 366 gramos
Peso de la droga vegetal despus del secado: 70 gramos
Peso del extracto seco: 5.28 gramos

2) Marcha Fitoqumico:
Se observ de acuerdo a la marcha fitoqumica que la planta contiene
metabolitos secundarios los cuales fueron los siguientes:
TABLA 04: Tamizaje fitoqumico del extracto de hojas de Ruta graveolens.

Metabolitos Reactivo Resultado

Carbohidratos R. de Molish (-)

R. de Benedict (-)
Aminocidos/Protenas
Ninhidrina (-)

Lpidos Sudan III (-)

Compuestos Fenlicos FeCl3 (+++)
Cumarinas NaOH (+++)
Flavonoides R. de Shinoda (+++)
Quinonas R. de Borntrager (-)
Alcaloides R. de Dragendorff (++)
Saponinas Prueba de espuma (-)

(+++) = Cantidad abundante (++) = Cantidad moderada (-) = No hay presencia

3) Marcha de Solubilidad:
Se observ de acuerdo a la marcha solubilidad que la muestra o extracto
seco es ms soluble en:
TABLA 05: Solvente Resultado Marcha de
solubilidad del (++) extracto de las
Metanol
hojas de Ruta graveolens.
Etanol (++)

Cloroformo (+++)

ter de Petrleo (+)

Hexano (+++)

Acetato de etilo (+)

(+++) = Muy soluble (+) = Poco soluble (++) = Soluble

4) Prueba de Cromatografa en Capa Fina (CCF).

En esta prueba se obtuvieron los Rf de 4 placas cromatogrficas, que son el
extracto etanlico de Ruta graveolens junto con metanol, etanol, cloroformo
y hexano:
Rf del extracto de ruda con etanol:
Distancia total: 5cm
Distancia recorrida: 1.5cm
Rf: 1.5 / 5 = 0.3
Rf del extracto de ruda con metanol:
Distancia total: 5cm
Distancia recorrida: 1.7cm
Rf: 1.7 / 5 = 0.34
Rf del extracto de ruda con cloroformo:
Distancia total: 5cm
Distancias recorrida: 3.8cm
Rf: 3.8 / 5 = 0.76
Rf del extracto de ruda con hexano:
 Distancia total: 5cm
Distancia recorrida: 4.2cm
Rf: 4.2 / 5 = 0.84
5) Prueba de Fraccionamiento.
En la prueba de fraccionamiento, se obtuvieron 5 fracciones, las cuales son
las siguientes:
TABLA 06: Fracciones obtenidas en la prueba.

Fracciones
Fraccin etanolica
Fraccin clorofrmica
Fraccin acuosa
Fraccin de hexano

6) Prueba de saponinas.
En la prueba de espuma durante la agitacin no hubo formacin de
espuma.
En la de Lieberman Burchard dio positivo observando una
coloracin verde.
7) Prueba de Reconocimiento para Flavonoides y Comparacin con
estndar de rutina.
Los resultados obtenidos fueron los siguientes:
La reaccin con magnesio metlico (Mg) y HCl dio positivo al cambiar
a color amarillo
La reaccin con FeCl3 dio positivo al cambiar a color azul oscuro.
En la prueba de cromatografa en placa fina dio positivo al compararse
con el estndar de rutina.
 FOTO 01: Placa de comparacin de rutina

8) Prueba de Cromatografa para la Comparacin con Quinonas

Los resultados obtenidos, fueron positivos al compararse las corridas del
extracto seco con las del estndar de cochinilla.

FOTO 02: Placa de comparacin con cochinilla

Discusin:

Se determin que el extracto etanlico de las hojas de Ruta graveolens (ruda)

segn (Naveda Gonzlez, 2010) presenta alcaloides, flavonoides, aceites
esenciales, cumarinas, triterpenos, saponinas, esteroides y saponinas. Como se
aprecia en la tabla 1 de los resultados, dio positivo en identificacin alcaloides,
flavonoides, taninos, fenoles y cumarinas. La deteccin de saponinas dio negativo
en la prueba de espuma, mientras que en la prueba de Lieberman Burchard dio
positivo, esto podra deberse a un mal procedimiento realizado por el manipulador
o alguna contaminacin o mala preparacin del reactivo.
En la prueba de solubilidad, como se ve en la tabla 02, dio como los reactivos ms
solubles al cloroformo y hexano, seguidos por el etanol y metanol, esto quiere decir
que extracto seco de Ruta graveolens, posee metabolitos secundarios que son
solubles en solventes polares y medianamente polares, a comparacin del acetato
de etilo y ter de petrleo, ya que ambos son no polares. Esta misma explicacin
es la razn por la cual el hexano y el cloroformo tienen el mayor Rf en la prueba de
cromatografa.

En la prueba final de comparacin a travs del mtodo de cromatografa en placa

fina, dio positiva la prueba con el estndar de rutina y con el estndar de quinona,
a pesar que con este ltimo dio negativo en el tamizaje fitoqumico, esto debido a
la preparacin del reactivo para su identificacin.

Conclusiones:

1. El extracto seco de Ruta graveolens posee como metabolitos secundarios

flavonoides, fenoles, taninos y alcaloides.
2. Los metabolitos secundarios de Ruta graveolens son solubles en solventes
polares y medianamente polares.
3. Como principal flavonoide tiene a la rutina.

Referencias.
1) C.B. Castaeda, M.R. Manrique, V.L. Ibaez. Estudio fitoqumico y
farmacolgico de plantas con efecto hipoglucemiante.2002.p.31-42.
2) Meccia Gina, Rojas Luis B., Usubillaga Alfredo. Estudio del aceite esencial
de la Ruta graveolens que crece en el Estado Mrida en Venezuela.2088;
50(1):7-9.
3) Gabriela Fernanda Naveda Gonzales. Establecimiento de un Proceso de
Obtencin de extracto de ruda (Ruta graveolens), con alto contenido de
Polifenoles. Escuela Politcnica Nacional, Quito. 2010.

Anexo 01.
Espectro UV/VIS. De un estndar de rutina (353 y 254 nm).