Practica4:Bacteriasgrampositivasdeimportanciaclnica

Dra.RosauraCaronEstrada

Cocosgrampositivosdeimportanciaclnica(algoritmosmnimosdeidentificacin)

CatalasapositivaMicrococcusspp.(Bacitracinasensible)

Staphylococcusspp.(Bacitracinaresistente)

CatalasanegativaStreptococcusspp.

Enterococcusspp.

DiferenciacindelasespeciesmsfrecuentesdelgneroStaphylococcus(Caractersticas
entincinGram:cocosgrampositivosagrupados,diplococosottradas)

CoagulasaPositiva(S.aureus)

NegativaNovobiocinaResistente(S.saprophyticus)

Sensible(otrosSCN)

Pruebadelacatalasa:
Lacatalasaesunaenzimaquedescomponeelperxidodehidrogenoenoxigenoyagua.La
pruebaserealizacolocandosobreunportaobjetosunagotadeperxidodehidrogenoysele
agregaconansaunacoloniaaisladadelabacteriaenestudio.
Positiva(aparicindeburbujaspordesprendimientodeoxigeno)Negativa(sincambio)

PruebadelaBacitracina:
LaBacitracinaesunantibiticocapazdeinhibireldesarrollodeciertosmicroorganismos(ej.
Micrococcus,algunosestreptococos.Sobreagarsangresesiembraelmicroorganismosen
estudioysecolocaundiscoconBacitracinayseincubaa37C24hs.
Positiva:halodeinhibicinalrededordeldisco(Microorganismosensible)

Pruebadelacoagulasa:
Lacoagulasaesunaenzima,conactividadsemejantealaprotrombina,capazdetransformar
fibringenoenfibrina,provocandolaformacindeuncoagulovisible.Aunamuestrade
plasmaseleagregaunacoloniadelabacteriaenestudioyseincubaa37C2hs.
Positiva:formacindecoagulo.Negativa:sinevidenciasdecoagulacin.

PruebadelaNovobiocina:
LanovobiocinaesunantibiticoqueinhibeeldesarrollodeS.aureusyS.epidermidis.Enagar
MullerHintonsesiembraelmicroorganismoenestudio,seleagregaeldiscodeantibiticoy
seincubaa37C24hs.
Sensible:halodeinhibicin>16mm.Resistente:halodeinhibicin<o=6mm.

DiferenciacindeCocosgrampositivoscatalasanegativa(CaractersticasentincinGram:
diplococosycadenas)

EstreptococosS.pneumoniae

S.pyogenes(grupoA)

S.agalactiae(grupoB)

EstreptococoshemoliticosCyG

S.bovis

S.grupoviridans

EnterococosE.faecium

E.faecalis

Otrasespecies

Capacidaddehemolisis

Gammahemolisis:unmicroorganismoesgammahemolticocuandonoproducehemolisis,por
lotantonopresentahaloalrededordesucolonia.

Betahemolisis:unmicroorganismoesbetahemolticocuandoproducerupturatotaldelos
glbulosrojos,porlotantopresentanunhalodehemolisistransparentealrededordesu
colonia.

Alfahemolisis:unmicroorganismoesalfahemolticocuandoproducehemolisistotalyporlo
tantopresentaunhaloverdealrededordesucolonia.

Diferenciacinlosestreptococosbetahemolticos

Pyr Bacitracina ClNa6,5% CAMP Aglutinacin

S.pyogenes + S GrupoA
S.agalactiae R V + GrupoB
Estreptococosbeta R GrupoCogrupoG
hemolticosgrupo
cyG:
Enterococcus + R + GrupoD
faecalis

Diferenciacindeestreptococosalfahemolticos

Optoquina Solubilidadenbilis
S.pneumoniae S +
S.grupoviridans R

DiferenciacinentreListeriamonocytogenes,EnterococcusfaecalisyS.agalactiae
(microorganismosbetahemolticosagentesdemeningitisneonatal)

Gram Catalasa ClNa6,5% Bilisesculina

L.monocytogenes Bacilos + + +
E.faecalis Cocos + +
S.agactiae cocos v

IdentificacindeArcanobacteriumhaemolyticum

Bacilogrampositivo,catalasa:negativa,urea:negativa,pruebadeCAMPinvertida

PruebadeCAMP
LosestreptococosdelgrupoB(S.agalactiae)producenunaprotenadifusible(factorCAMP)
queaumentalabetahemlisisdeStaphylococcusaureus.Serealizaestriandouncultivode
losestreptococoshemolticosenformaperpendicularaunaestradeunestafilococo
hemolticoenagarsangre.Seincuba1824horasa37C.
Interpretacindelosresultados:Lapruebapositivaseevidenciaporlapresenciadeunazona
depotenciacindelahemlisisenformadepuntasdeflechaenellugardondesecontactan
lasdosestras.
PruebadeCAMPinvertida:Arcanobacteriumhaemolyticumproduceunaprotenaqueinhibe
lahemolisisproducidaporelestafilococohemoltico.

PruebadeBilisEsculina:
Sebasaenlacapacidaddeciertasbacteriasdehidrolizarlaesculinaenpresenciadebilis.La
hidrolisisdelaesculinadaunproductoquereaccionaconhierroparadaruncomplejonegro.
Positiva:ennegrecimientodelmedio.Alas2448hs.Negativo:mediosincambio

Desarrolloencaldohipersalado:
AlgunosmicroorganismostienenlacapacidaddedesarrollarenaltasconcentracionesdeClNa.
Positivo:turbidezdelcaldoconClNa6,5%,luegode2448%.Negativo:caldolmpido

PruebadesensibilidadaOptoquina:
LaoptoquinaalaconcentracinutilizadainhibeeldesarrollodeS.pneumoniae,entoncesse
siembraelmicroorganismoaestudiarenagarsangre,seagregaeldiscodeoptoquinayse
incubaa37C24hs.
Positiva:halodeinhibicindeldesarrollo>14mm.Negativo:sinhaloohalo<o=14mm.

Pruebadesolubilidadenbilis:
Seutilizan2tubosdeensayo,cadaunoconunasuspensindelmicroorganismoaestudiaren
caldo,enunodelostubosseagregadeoxicolatodesodioyenelotrosolucinfisiolgica.
Positiva(solubilidadenbilis):tubocondeoxicolatolmpidoluegode510minutosde
incubacinytuboconsolucinfisiolgicaTurbio.
Negativa:ambostubossincambio

PruebadehidrlisisdePyr.
Sebasaenlaactividaddeunaenzima,sobreunsustratocromognico.
Positiva:colorrojoorosaintenso.Negativo:amarillo,naranjaorosadoplido.

Identificacinserolgica(pruebasdeaglutinacin:
Laspruebasdeaglutinacindepartculasdeltexsonlasmsutilizadas.Consisteenenfrentar
unasuspensindelmicroorganismoapartculasdeltexconjugadasconanticuerposgrupo
especficosycuandolareaccinespositivaseobtieneaglutinacinvisible.Identificalas
bacteriassegnsusantgenosdesuperficie.
Positiva:aglutinacinvisible.Negativa:noseobservaaglutinacin

Cocosybacilosgrampositivosmasfrecuentesenmuestrasclnicas(cuadrosclnicosmas
frecuentes)

Staphylococcusaureus:infeccionesdepielypartesblandas(ej.Celulitis,Miositis),infeccinde
heridasquirrgicasytraumticas,sndromedepielescaldada,sndromedeshocktoxico,
diarrea,artritis,osteomielitis,meningitis,otitis,sinusitis,neumona,infeccionesoculares,
infeccionesasociadasacuerposextraos.

Staphylococcusepidermidis:bacteriemiaasociadaacatteryprtesisarticulares,endocarditis,
infeccindeheridaquirrgica,infeccinenpacientesdializados.

Staphylococcussaprophyticus:IUenmujeressexualmenteactivas,uretritisnogonococcicay
prostatitisenhombres,infeccindeheridaquirrgica.
Streptococcuspyogenes(grupoA):faringitis,otitis,sinusitis,abscesosamigdalinosy
periamigdalinos,fascitisnecrotizante,bacteriemia,fiebrereumtica,glomerulonefritis
postestreptococcica.

Streptococcusagalactiae(grupoB):sepsisymeningitisneonatal,infeccionesrelacionadasal
parto(ej.Endometritis,IU,sepsis,infeccindeheridadecesrea),infeccionesnorelacionadas
alpartoenpacientesaososoIC(bacteriemia,endocarditis,neumona,ulcerapordecbito)

EstreptococosbetahemolticosgrupoCyG:faringitis,sepsispuerperalyneonatal,infecciones
cutneas,neumona,glomerulonefritispostestreptococcica.

Streptococcuspneumoniae:neumona,otitis,sinusitis,conjuntivitis,meningitis,PBE,
endocarditis,bacteriemia.

Streptococcusgrupoviridans:endocarditis,abscesosderganosprofundos(cerebrales,
pulmonares,abdominales),bacteriemiaenpacientesneutropnicos,meningitis,caries.

Enterococcusspp.:IU,infeccionesintrabdominales,bacteriemia,endocarditis,infeccinde
heridas(quirrgicas,traumticas,ulceraspordecbito,piediabtico),sepsisymeningitis
neonatal.

Listeriamonocytogenes:meningoencefalitisysepsisneonatal,meningoencefalitisysepsisen
ancianosypacientesIC,sepsisyabortosarepeticinenembarazadas,

Arcanobacteriumhaemolyticum:faringitisenadultosjvenes,abscesosretrofarngeos,
Infeccindetejidosblandos,infeccionesmixtasdeheridasportraumatismos,otrasinfecciones
menosfrecuentes:osteomielitis,endocarditis.

Cuestionario:

1) QupruebabioqumicapermitedividiralgeneroStaphylococcusen2grandes
grupos?Expliquebrevemente.
2) Cmopuedenclasificarseloscocosgrampositivossegnsuhemolisisenagarsangre?
Mencioneejemplosdecadauno.
3) Enqueconsistelaidentificacinserolgica?
4) Unaniade5dasdevida,comienzaconfiebre,rechazodelalimento,vmitos,
irritabilidadytrastornosdelsueo.Tienecomoantecedentesrupturaprematurade
membrana.Seletomanhemocultivo,urocultivoycultivodeLCR.Elurocultivoresulto
negativo,mientrasqueenloshemocultivosseobservarondiplococosgrampositivosy
elcultivodeLCR,desarrollaroncoloniasbetahemolticasenagarsangre.
aCulessusospechadiagnosticayqumicroorganismospuedenestarinvolucrados?
bCmopodradiferenciarlosmediantepruebasbioqumicas?
5) Unpacientehospitalizado,concatterperifrico,comienzaconfiebre,escalofros,
hipotensinypresentasignosdeinflamacinenelsitiodeinsercindelcatter.Ante
lasospechadeinfeccinasociadaacatter,setomanhemocultivosyseremueveel
catterparacultivo.Enelgramdeloshemocultivosseobservancocosgrampositivos
agrupadosydesarrollodecoloniasnohemolticassimilaresenelagarsangredel
cultivodepuntadecatteryenelagarsangredelrepiquedelhemocultivo.
 aQugrmenespodranestarimplicados?
bCmopodradiferenciarlosporpruebasbioqumicas?
6) Unamujerde30aosconsultapordisuria,poliuria,dolorlumbaryardoralorinar.
AntelasospechadeIU,selesolicitaurocultivo.Elexamendeorinapresenta
abundantereaccininflamatoriayalas24hs,elcultivopresentadesarrollodecocos
grampositivosenrecuentosignificativo.
aQumicroorganismospodranestarinvolucrados?
bCmopodradiferenciarlosyconfirmarsuidentificacin?
7) Unpacientede18aosqueserealizauntatuajeensubrazoderecho,24hsdespus
empiezaconfiebreycelulitisenlazona,querpidamenteevolucionaafascitis
necrotizante.Seletomaunamuestraporpuncinaspiracinyenelgramseobservan
cocosgrampositivos.Enelcultivodelapuncindesarrollancoloniasbetahemolticas
enagarsangre.
aEnquemicroorganismossospecha?
bCmopodradiferenciarloseidentificarlos?
8) Unpacientede4aospresentafiebrealta,dolordegargantayrash,entoncessele
tomaunamuestradehisopadodefaucesparacultivo.Alas24hs,enelagarsangrese
observadesarrollodecoloniasbetahemoltica.
aCulessudiagnosticoyquemicroorganismospuedenestarimplicados?
bCmolosidentificara?
9) Unpacientede80aospresentatosproductiva,dolordepecho,dificultad
respiratoria,fiebreelevada,escalofros,fatigayprdidadelapetito.Entoncessele
solicitaradiografadetrax,cultivodeesputoyhemocultivo.Alas24hs,elpaciente
presentagrandeteriorogeneralysedecidehospitalizarloytomarleunnuevo
hemocultivo.Elcultivodeesputo,alas24hspresentodesarrollodecoloniasalfa
hemolticasenAS,mientrasqueelprimerhemocultivoresultonegativo.Luegode
24hspositivisael2hemocultivoyenelgramseobservadiplococosgrampositivos.
aCulessonlosdiagnsticosposiblesdelcuadrorespiratorio?
bQugrmenespuedenestarinvolucrados?
cCmopodradiferenciarloseidentificarlos?
dPorquelpacienteempeorasucuadrogeneral?