BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis

Jenis rancangan penelitian yang digunakan pada penelitian ini adalah

analitik

3.2 Desain Penelitian

Penelitian analitik ini menggunakan desain accidental sampling yaitu

sampel yang diambil dari responden atau kasus yang kebetulan ada di suatu

tempat atau keadaan tertentu (Notoatmodjo. 2010).

3.3 Tempat Dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan digedung NRC laboratorium terpadu universitas

muhammadiyah semarang pada bulan juli 2017.

3.4 Variabel Penelitian

3.4.1 Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah larutan metanol dan formalin

yang digunakan untuk fiksasi

3.4.2 Variabel Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah morfologi sel-sel pada kualitas

hasil pewarnaan sudan black B (SBB).

3.5 Defenisi Operasional

Variabel yang digunakan dalam penelitian ini dapat didefinisikan sebagai berikut:

17
 18

Tabel 3.2 Definisi Operasional

Variabel Definisi Operasional Skala

Kualitas pewarnaan Menggunakan fiksasi metanol dinyatakan baik Nominal

SBB menggunakan jika seri granulosit terwarnai coklat kehitaman
fiksasi metanol dan warna eritrosit warna merah, preparat tidak
terkupas, warna tidak pudar.
Dinyatakan buruk jika seri granulosit tidak
terwarnai, preparat terkupas, warna pudar .

Kualitas pewarnaan Menggunakan fiksasi formalin dinyatakan baik

SBB menggunakan jika seri granulosit terwarnai coklat kehitaman Nominal
fiksasi formalin dan warna eritrosit warna merah, preparat tidak
terkupas, warna tidak pudar.
Dinyatakan buruk jika seri granulosit tidak
terwarnai, preparat terkupas, warna pudar .

3.6 Obyek Penelitian/ Populasi Dan Sampel

Objek penelitian ini adalah seseorang yang mempunyai penyakit leukemia

kemudian diambil sampel sumsum tulang di RSUP. Dr. Kariadi Semarang.

3.7 Alat Dan Bahan

3.7.1 Alat

Alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu mikroskop, chamber, tabung

reaksi, rak tabung, objek glass, tissue, pipet tetes, oil emersi, pensil, label, cawang

petri, gunting, penjepit, pipet volume, pipet ukur, labu ukur, kertas saring.

3.7.2 Bahan

Bahan yang digunakan adalah sumsum tulang, phenol, ethanol 70%,

Na2HPO4, 2H2O, aquadest, sudan black B, uap formalin, metanol, dan safranin

1%.

3.8 Prosedur Penelitian

3.8.1 Persiapan Sampel Penderita Leukemia

 19

Pada penelitian ini Sampel diambil sebanyak 2 orang penderita leukemia

di RSUP. Dr. Kariadi Semarang kemudian didalam 1 sampel masing-masing

dibuat 8 preparat spreed (4 preparat yang difiksasi dengan metanol dan 4 preparat

difiksasi menggunakan formalin sebagai kontrol).

3.8.2 Fiksasi

Sampel preparat yang sudah kering dalam suhu ruangan segera dilakukan

fiksasi selama 15 menit menggunakan metanol dan fiksasi formalin 5 sampai 10

menit. Sampel A sebanyak 8 preparat yang difiksasi menggunakan metanol

sebanyak 4 preparat, dan 4 preparat difiksasi menggunakan formalin sebagai

kontrol. Dilakukan perlakuan yang sama pada sampel B.

3.8.3 Pembuatan Reagen

3.8.3.1 Pembuatan Reagen

Pembuatan reagen digunakan tiga macam larutan yaitu larutan A

menggunakan phenol, ethanol. Larutan B : Na2HPO4 . 2H2O, aquadest. Larutan

C : sudan black b, ethanol 70 %.

3.8.3.2 Pembuatan Larutan

Pembuatan larutan kerja yaitu Larutan A + B dicampurkan dengan

perbandingan (1 : 1), ditambahkan larutan C, 3 bagian, kemudian dicampuran ini

harus netral atau sedikit alkalis.

3.8.4 Pewarnaan SBB

 20

Sampel preparat A, B, yang sudah difiksasi diambil menggunakan penjepit

kemudian dilakukan pewarnaan dengan cara dicuci dengan aquadest, setelah

kering masing-masing preparat direndam dengan larutan kerja didalam petri

tertutup selama 30 menit. Kemudian sisa cat dibuang, preparat direndam

menggunakan alkohol 70% selama 2 menit sambil digoyang-goyang, selanjutnya

preparat dicuci dengan air mengalir, kemudian preparat dilakukan counter stain

dengan safranin 1% selama 10-30 detik dan dicuci dengan air mengalir,

dikeringkan (tidak dimounting). kemudian preparat sumsum tulang diamati

dibawa mikroskop.

3.9 Alur Penelitian

 21

Pasien Leukemia di RSUP. Dr. Kariadi Semarang

Sumsum Tulang

Preparat

Fiksasi Metanol Fiksasi Formalin

Pewarnaan SBB

Hasil

Skema 3.3 alur penelitian

3.10 Teknik Pengumpulan Dan Analisis Data

 22

3.10.1 Pengumpulan Data

Jenis data yang digunakan pada penelitian ini adalah data primer. Data

yang dikumpulkan secara langsung oleh peneliti pada sumsum tulang penderita

leukemia di RSUP. Dr. Kariadi Semarang.

3.10.2 Analisis Data

1. Pengolahan Data

a. Pengeditan Data

Langkah yang dilakukan peneliti untuk mengecek kembali data

kelengkapan data yang diperlukan dalam penelitian

b. Pengkodean Data

Pemberian code angka pada variabel untuk mempermudah analisis data

sebelum di prossesing pada aplikasi komputer

c. Memproses Data

Setelah semua data dikumpulkan kemuadian diproses menggunakan

aplikasi pada komputer untuk dianalisis

d. Pembersihan Data

Pembersihan data dilakukan bertujuan untuk mengoreksi apakah terjadi

kesalahan atau out of range sehingga dapat diperbaiki dini waktu.

2. Teknik Analisis Data

Analisis data yang digunakan pada penelitian ini adalah chi square karena
variabel bebas dan varibel terikat berskala kategorik.