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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PROFESOR:

INTEGRANTES:

2017
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE INGENIERA QUMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

I. INTRODUCCION

El trabajo de laboratorio implica el adoptar una actitud muy cuidadosa y


responsable para poder actuar de manera correcta dentro del mismo, es
importante considerar ciertas reglas concretas.
Antes de comenzar a realizar cualquier prctica en un laboratorio ya sea en
universidades, industrias o cualquier otro entorno que disponga de
instrumentos para realizacin de experimentos es necesario conocer de ante
mano los protocolos y las normas de seguridad, tanto para evitar accidentes o
saber actuar ante cualquier eventualidad que se presente; esto con el fin de
garantizar el bienestar de todo el personal del laboratorio.

Tambin, es importante identificar todos los materiales que se emplean en la


prctica y su correcto uso para que todas las observaciones e informaciones
obtenidas a travs del experimento sean confiables y correspondan a un
exitoso resultado. Por lo
anterior, el objetivo de esta prctica consiste en aprender y aplicar todas las
normas bsicas de seguridad; conocer los materiales y equipos del laboratorio,
saber en qu momento y cmo utilizarlos.

II. OBJETIVOS

El Conocer las normas de seguridad, polticas de trabajo y el manejo


adecuado de sustancias txicas y desechos peligrosos en un laboratorio
para evitar riesgos y accidentes dentro del laboratorio.
Reconocer todas las metodologas para la desinfeccin y esterilizacin
de los materiales y equipos que sern usados en las prcticas de
laboratorio.
Identificar con totalidad los materiales y equipos del laboratorio de
microbiologa con el fin de desarrollar de la mejor manera las prcticas
de laboratorio.

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III. MARCO TERICO

A. BIOSEGURIDAD

El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar


materiales infecciosos en el medio ambiente del laboratorio donde son
manipulados o conservados.

El objetivo de la contencin es reducir o eliminar la exposicin de quienes trabajan


en laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes
potencialmente peligrosos.

La contencin primaria, proteccin del personal y del medio ambiente inmediato


del laboratorio de la exposicin a agentes infecciosos, es provista tanto mediante
buenas tcnicas microbiolgicas como a travs del uso de equipos de seguridad
adecuados. El uso de vacunas puede brindar un mayor nivel de proteccin del
personal.

La contencin secundaria, proteccin del medio ambiente externo al laboratorio


de la exposicin a materiales infecciosos, se logra a travs de una combinacin
del diseo de la instalacin y prcticas operativas. Por lo tanto, los tres elementos
de contencin incluyen prcticas y tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad y
el diseo de la instalacin.

PRCTICAS Y TCNICAS DE LABORATORIO.

El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las


prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar.

Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente


infectados deben conocer los riesgos potenciales, y tambin deben estar
capacitados y ser expertos en las prcticas y tcnicas requeridas para manipular
dichos materiales en forma segura.

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El director o la persona a cargo del laboratorio es responsable de brindar u


organizar la capacitacin adecuada del personal. Cada laboratorio est obligado a
desarrollar o adoptar un manual de operaciones o de bioseguridad que identifique
los riesgos que se encontrarn o puedan producirse, y que especifique las
prcticas y procedimientos destinados a minimizar o eliminar las exposiciones a
estos riesgos. Se debe alertar al personal acerca de los riesgos especiales y se le
debe exigir que lea y cumpla las prcticas y procedimientos requeridos.

Cuando las prcticas de laboratorio estndar no son suficientes para controlar los
riesgos asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular,
quizs sea necesario aplicar medidas adicionales. El director del laboratorio es
responsable de seleccionar prcticas de seguridad adicionales, que deben guardar
relacin con los riesgos relacionados con el agente o procedimiento.

Equipos de Seguridad (Barreras Primarias). Los equipos de seguridad incluyen


gabinetes de seguridad biolgica (BSCs), recipientes cerrados, y otros controles
de ingeniera destinados a eliminar o minimizar las exposiciones a materiales
biolgicos peligrosos.

El gabinete de seguridad biolgica (BSC) es el dispositivo principal utilizado


para proporcionar contencin de salpicaduras o aerosoles infecciosos generados
por diversos procedimientos microbiolgicos. Las clases de gabinetes de
seguridad biolgica son (Clase I, II, III) utilizados en laboratorios microbiolgicos.

Los gabinetes de seguridad biolgica Clase I y Clase II de frente abierto son


barreras primarias que ofrecen niveles significativos de proteccin del personal de
laboratorio y del medio ambiente cuando se los utiliza en combinacin con buenas
tcnicas microbiolgicas.

El gabinete de seguridad biolgica Clase II tambin brinda proteccin contra la


contaminacin externa de los materiales (por ejemplo, cultivos celulares, stocks
microbiolgicos) que se manipulan dentro del gabinete. El gabinete de seguridad
biolgica Clase III estanco al gas ofrece el mayor nivel de proteccin posible para
el personal y el medio ambiente.

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Un ejemplo de otra barrera primaria es la cubeta centrfuga de seguridad, un


recipiente cerrado destinado a prevenir la liberacin de aerosoles durante el
centrifugado.

Para minimizar este riesgo, se deben utilizar controles de contencin tales como
BSCs o cubetas centrfugas cuando deban manipularse agentes infecciosos que
puedan transmitirse a travs de la exposicin a aerosol.

Los equipos de seguridad tambin incluyen elementos de proteccin personal,


tales como guantes, ambos, delantales, cobertores de zapatos, botas,
respiradores, mscaras faciales, anteojos de seguridad o antiparras.

Los equipos de proteccin personal se utilizan en general en combinacin con


gabinetes de seguridad biolgica y otros dispositivos que contienen los agentes,
animales o materiales que se manipulan. En algunas situaciones en las cuales
resulta poco prctico trabajar en gabinetes de seguridad biolgica, los equipos de
proteccin personal pueden formar la barrera primaria entre el personal y los
materiales infecciosos.

CLASIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS INFECCIOSOS POR GRUPOS


DE RIESGO

Grupo de riesgo 1(riesgo individual y poblacional escaso o nulo.

Nivel de Bioseguridad 1. Las prcticas, los equipos de seguridad, el diseo y la


construccin de la instalacin del Nivel de Bioseguridad 1 son adecuados para
laboratorios destinados a la educacin o capacitacin secundaria o universitaria, y
para otros laboratorios en los cuales se trabaja con cepas definidas y
caracterizadas de microorganismos viables que no se conocen como generadores
sistemticos de enfermedades en humanos adultos sanos.

El Bacillus subtilis, Naegleria gruberi, el virus de la hepatitis canina infecciosa, y


los organismos exentos conformes a las NHI Recombinant DNA Guidelines

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(Normas de ADN Recombinante de NIH) son representativos de los


microorganismos que cumplen con estos criterios.

Muchos agentes no comnmente asociados con procesos de enfermedades en


humanos son, no obstante, patgenos oportunistas y pueden causar infeccin en
individuos jvenes, ancianos, inmunodeficientes o inmunodeprimidos.

Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)

Nivel de Bioseguridad 2. Las prcticas, los equipos, el diseo y la construccin


de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios
educativos, de diagnstico, clnicos u otros laboratorios donde se trabaja con un
amplio espectro de agentes de riesgo moderado que se encuentran presentes en
la comunidad y que estn asociados con enfermedad humana de variada
gravedad.

Con buenas tcnicas microbiolgicas, estos agentes se pueden utilizar en forma


segura en actividades realizadas en una mesa de trabajo, siempre que el potencial
de que se produzcan salpicaduras o aerosoles sea bajo.

El virus de la Hepatitis B, el HIV, SalmonelaS, Toxoplasma spp. Bordettela


Pertussis son representativos de los microorganismos asignados a este nivel de
contencin.

El Nivel de Bioseguridad 2 es adecuado cuando se trabaja con sangre derivada de


humanos, fluidos corporales, tejidos o lneas de clulas primarias humanas donde
puede desconocerse la presencia de un agente infeccioso. (El personal de
laboratorio que trabaja con materiales derivados de humanos debe consultar
el Estndar de Patgenos de Transmisin por Sangre precauciones especficas
requeridas).

Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn
relacionados con exposiciones accidentales de membranas mucosas o
percutneas, o ingestin de materiales infecciosos. Debe tenerse especial

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precaucin con agujas o instrumentos cortantes contaminados. Si bien no se ha


demostrado que los organismos que se manipulan de rutina en el Nivel de
Bioseguridad 2 sean transmisibles a travs de la va de aerosoles, los
procedimientos con potencial de producir aerosoles o grandes salpicaduras -que
pueden incrementar el riesgo de exposicin de dicho personal- deben llevarse a
cabo en equipos de contencin primaria o en dispositivos tales como un BSC o
cubetas centrfugas de seguridad. Se deben utilizar las dems barreras primarias
que correspondan, tales como mscaras contra salpicaduras, proteccin facial,
delantales y guantes. Se debe contar con barreras secundarias, tales como piletas
para lavado de manos e instalaciones de descontaminacin de desechos a fin de
reducir la contaminacin potencial del medio ambiente. Son considerados agentes
patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que
tienen pocas probabilidades de entraar un riesgo grave para el personal de
laboratorio, la poblacin, el ganado o el medio ambiente. La exposicin en el
laboratorio puede provocar una infeccin grave, pero existen medidas preventivas
y teraputicas eficaces y el riesgo de propagacin es limitado.

Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)

Nivel de Bioseguridad 3. Las prcticas, equipos de seguridad y el diseo y la


construccin de las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a
instalaciones clnicas, de produccin, investigacin, educacin o diagnstico,
donde se trabaja con agentes exticos o indgenos con potencial de transmisin
respiratoria, y que pueden provocar una infeccin grave y potencialmente letal.
Mycobacterium tuberculosis, Neisseria Meningitidis, Virus Influenza, Brucellas,
Virus de la encefalitis de St. Louis, Coxiella burnetii son representativos de los
microorganismos asignados a este nivel. Son definidos como agentes patgenos
que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves. Existen medidas
preventivas y teraputicas eficaces.

Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn asociados
a la auto inoculacin, ingestin y exposicin a aerosoles infecciosos. Al manipular
agentes del Nivel de Bioseguridad 3 se pone mayor nfasis en las barreras
primarias y secundarias para proteger al personal en reas contiguas, a la

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comunidad y al medio ambiente de la exposicin a aerosoles potencialmente


infecciosos. Por ejemplo, todas las manipulaciones de laboratorio se deben llevar
a cabo en un BSC u otros equipos cerrados, tales como cmaras de generacin
de aerosoles estancas al gas.

Las barreras secundarias para este nivel incluyen el acceso controlado al


laboratorio y requisitos de ventilacin que minimizan la liberacin de aerosoles
infecciosos desde el laboratorio.

Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)

Nivel de Bioseguridad 4. Las prcticas, equipos de seguridad, diseo y la


construccin de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo
con agentes peligrosos o txicos que representan un alto riesgo individual de
enfermedades que ponen en peligro la vida, que pueden transmitirse a travs de
aerosoles y para las cuales no existen vacunas o terapias disponibles. Los
agentes con una relacin antignica cercana o idntica a los agentes de los
Niveles de Bioseguridad 4 deben manejarse conforme a las recomendaciones de
este nivel.

Cuando se han obtenido datos suficientes, el trabajo con estos agentes puede
continuarse a este nivel o a un nivel inferior. Los virus como Marburg o la fiebre
hemorrgica Congo-Crimeana se manipulan al Nivel de Bioseguridad 4. Agentes
patgenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los
animales y que se transmiten fcilmente de un individuo a otro, directa o
indirectamente.

Normalmente no existen medidas preventivas y teraputicas eficaces.

Los riesgos principales para el personal que trabaja con agentes del Nivel de
Bioseguridad 4 son la exposicin respiratoria a aerosoles infecciosos, la
exposicin de membranas mucosas o piel lastimada a gotitas infecciosas y la auto
inoculacin.

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Todas las manipulaciones de materiales de diagnstico potencialmente


infecciosos, cepas puras y animales infectados en forma natural o experimental,
implican un alto riesgo de exposicin e infeccin para el personal de laboratorio, la
comunidad y el medio ambiente.

El aislamiento completo del personal de laboratorio de los materiales infecciosos


en aerosol se logra principalmente trabajando en un BSC Clase III o en un traje de
cuerpo entero, con provisin de aire y presin positiva. Por lo general, la
instalacin del Nivel de Bioseguridad 4 es un edificio separado o una zona
totalmente aislada con sistemas de gestin de desechos y requisitos de ventilacin
especializados y complejos para prevenir la liberacin de agentes viables al medio
ambiente.

B. DESINFECCION Y AGENTES DESINFECTANTES


La desinfeccin consiste en la destruccin selectiva de los organismos que causan
enfermedades. No todos los organismos se destruyen durante el proceso, punto
en el que radica la principal diferencia entre la desinfeccin y la esterilizacin,
proceso que conduce a la destruccin de la totalidad de los organismos. En el
campo de las aguas residuales, las tres categoras de organismos entricos de
origen humano de mayores consecuencias en la produccin de enfermedades son
las bacterias, los virus y los quistes amebianos. Las enfermedades bacterianas
tpicas transmitidas por el agua son: el tifus, el clera, el paratifus y la disentera
bacilar, mientras que las enfermedades causadas por los virus incluyen, entre
otras, la poliomielitis y la hepatitis infecciosa)

DESINFECTANTE

Producto qumico cuyo uso conlleva la destruccin de microorganismos patgenos


y la inactivacin de virus presentes en tejidos vivos.

Se destinan a destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la accin o ejercer un


control de otro tipo sobre cualquier organismo nocivo. Carecen de actividad
selectiva ya que eliminan todo tipo de grmenes. Su espectro de actuacin, tiempo
de inicio de activacin, tiempo de actividad, efecto residual, toxicidad, capacidad
de penetracin y posibles materiales o circunstancias que los inactiven pueden
variar de un producto a otro.

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Los antispticos son eficaces si cumplen la condicin de reducir el nmero de


colonias de microorganismos a menos de 100.000 colonias por gramo de tejido en
menos de 5 minutos y, en al menos, cuatro tipos de cepas bacterianas. La
actividad de los antispticos puede inhibirse por la existencia de materias
orgnicas como sangre o tejidos desvitalizados y, determinadas soluciones
antispticas pueden contaminarse a travs del aire o por contacto directo. Segn
la FDA, un desinfectante de alto nivel es un compuesto sinttico que depositado
sobre material vivo o inerte y alterando lo menos posible el sustrato donde residen,
destruye en 10-15 minutos todos los grmenes patgenos, tales como bacterias,
hongos y virus, excluyendo el virus de la Hepatitis B.

NIVELES DE DESINFECCION

Desinfectantes de bajo nivel. No son capaces de destruir en un periodo


breve de tiempo esporas bacterianas, micobacterias y todos los hongos y/o
virus no lipdicos o de pequeo tamao. El tiempo de contacto mnimo para
una desinfeccin de bajo nivel es de 10 minutos.

Desinfectantes de nivel intermedio. No eliminan necesariamente las


esporas bacterianas, pero inactivan bacterias vegetativas. El tiempo de
contacto mnimo para una desinfeccin de nivel intermedio con estos
desinfectantes es de 10 minutos.

Desinfectantes de alto nivel. Inactivan todas las formas vegetativas de los


microorganismos, pero no destruyen toda forma de vida microbiana, puesto
que no siempre eliminan todas las esporas. La mayora requieren un tiempo
de unos 20 minutos para ejercer una accin desinfectante de alto nivel;
algunos precisan para destruir las esporas bacterianas un tiempo de
contacto prolongado (entre 6 y 10 horas, segn el desinfectante). La
limpieza inicial del objeto es fundamental para que la desinfeccin sea
eficaz, ya que muchos desinfectantes pierden total o parcialmente su
actividad en presencia de materia orgnica.

CRITERIOS EN LA ELECCION DE UN DESINFECTANTE

Un desinfectante ideal debe aproximarse a las siguientes propiedades:

Ser fcil de usar.

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Que no necesite proteccin especial


Nula toxicidad
Capacidad de limpieza
Olor agradable
Que no oxide ni altere el material
Que sea respetuoso con el medio ambiente y el medio laboral

DESINFECTANTES MS USADOS EN EL LABORATORIO

cido peracetico
Agua oxigenada
Alcohol etlico
Alcohol isoproplico
Aldehdos
Formaldehido
Glutaraldehido
Hipoclorito de sodio

C. ESTERILIZACIN
La esterilizacin del material de laboratorio es un proceso que permite eliminar la
carga microbiana patgena y no patgena, includas las esporas, de productos e
instrumentos que lo requieran como el instrumental mdico o los medios de
cultivo. Para que sea eficaz debe realizarse sobre materiales limpios y respetando
los parmetros y procedimientos definidos para cada mtodo.

Para decidir si un objeto debe esterilizarse o es suficiente con una desinfeccin


pueden consultarse los criterios de clasificacin del Dr. E. H. Spaulding,
ampliamente aceptados por la FDA y los profesionales mdicos, epidemilogos y
microbilogos. Segn esta clasificacin, los objetos considerados crticos deben
esterilizarse, los semi-criticos deben someterse a una desinfeccin de alto nivel
y los no-crticos deben limpiarse y someterse a una desinfeccin de bajo nivel.
La esterilizacin puede conseguirse usando calor, productos qumicos y radiacin.

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El mtodo que elegir depender del material a esterilizar y del equipo e


instalaciones disponibles. Con los objetos de acero inoxidable y de vidrio podemos
usar cualquier mtodo, pero en el caso de los materiales plsticos debemos tener
en cuenta su composicin para evitar deformaciones e incluso la destruccin del
material.

IV. MATEIALES Y EQUIPOS

Estufa de incubacin
Es una cmara de temperatura
controlada para cultivo de
microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de


los microorganismos a su
temperatura ptima de crecimiento
(generalmente 35-37).

Frigorfico o cmaras refrigeradas


Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como
microorganismos.

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Generalmente estn a una temperatura fija de 4C.

Congeladores
Se utilizan para la conservacin de reactivos y microorganismos a temperaturas
inferiores a 0C, llegando a -80C (los ms frecuentes son -20, -40 y -80).

Contador de colonias: Es un aparato que


mediante la iluminacin de la placa y una lupa, nos
permite observar con mayor nitidez las colonias y
por tanto facilita su recuento.

Placas de Petri: recipientes para la preparacin de medios de cultivo slidos

Autoclave
Es el equipo ms utilizado.
Es un procedimiento de esterilizacin mediante calor hmedo. Se realiza en al
autoclave durante 15 20 min, segn el volumen, a 115C 121C, segn la
naturaleza del material que se desee esterilizar.

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MATERIALES DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

El material utilizado en un laboratorio de Microbiologa es muy variado y depende


Fundamentalmente de las lneas de trabajo a las que est dedicado;
evidentemente, no se precisa el mismo equipamiento en un centro de
investigacin con un alto grado de especializacin que en un laboratorio de
Bacteriologa Clnica.

Material de uso corriente:

Material de vidrio o plstico que se usa para contener o medir: aqu se incluyen
tubos de ensayo, vasos de precipitado, matraces, embudos, probetas, pipetas,
dosificadores, etc., todo ello de distintos tamaos y capacidades. Tambin
incluimos las placas de Petri, los portaobjetos y cubreobjetos, cmaras de
recuento, cestillos y cubetas para efectuar tinciones, jarras para incubar en
anaerobiosis, etc.

Material de siembra: constituido principalmente por asas y filamentos de platino,


asas de Drigalski y pipetas estriles.

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Material para toma de muestras e inoculaciones: escobillones estriles, tubos y


frascos estriles, jeringas y agujas, trcares, cnulas, catteres y material de
diseccin.

Material ptico:

Microscopios: en su distintas versiones (campo claro, campo oscuro,


contraste de fases, fluorescencia).
Lupa estereoscpica: permite observar colonias bajo distintas condiciones
de iluminacin.

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Otro tipo de material y aparatos:

Agitadores y homogeneizadores.
Centrfugas.
Balanzas.
Liofilizadores.
pHmetros.
Espectrofotmetros.
Destiladores, etc.

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Identificar los materiales y equipos que se tiene en el laboratorio de


microbiologa

MATERIALES

Placa Petri

Es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta de la misma


forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda
colocar encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte
de la coleccin conocida como material de vidrio. Se utiliza

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en Microbiologa para cultivar clulas, observar la germinacin de las semillas


o examinar el comportamiento de pequeos animales.

Tubo de ensayo

Es parte del material de vidrio de un laboratorio


de qumica. Consiste en un pequeo tubo cilndrico
de vidrio con un extremo abierto (que puede poseer
una tapa) y el otro cerrado y redondeado, que se
utiliza en los laboratorios para contener pequeas
muestras lquidas o slidas, aunque pueden tener
otras fases, como realizar reacciones qumicas en
pequea escala, estn disponibles en una multitud de tamaos, comnmente
de 1 a 2 cm de ancho y de 5 a 20 cm de largo.

Gradilla

Es una herramienta que forma parte del material de laboratorio (principalmente


en laboratorios de biologa molecular, gentica y qumica) y es utilizada para
sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo . Su principal funcin
es facilitar el manejo de los tubos de ensayo. Normalmente es utilizado para
sostener y almacenar este material. ste se encuentra hecho de madera,
plstico o metal; pero las ms comunes son las de madera
Probeta
Es un instrumento volumtrico que consiste en un cilindro
graduado de vidrio que permite contener lquidos y sirve para
medir volmenes de forma aproximada.
Est formado por un tubo generalmente transparente de unos
centmetros de dimetro y tiene una graduacin desde 5 ml
hasta el mximo de la probeta, indicando distintos volmenes.
En la parte inferior est cerrado y posee una base que sirve
de apoyo, mientras que la superior est abierta (permite
introducir el lquido a medir) y suele tener un pico (permite
verter el lquido medido). Generalmente miden volmenes de
25 o 50 ml, pero existen probetas de distintos tamaos;
incluso algunas que pueden medir un volumen hasta de 2000 ml.

Asa bacteriolgica o asa de platino

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Es un instrumento de laboratorio tipo pinza que


consta de una base que puede estar hecha
de platino, acero, aluminio y un filamento que
puede ser de nicromo, tungsteno o platino que
termina o en un arito de 5 mm o en punta.
Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen
que contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo
tambin llamada solucin madre al medio de cultivo (slido o lquido) o de un
medio a otro (resiembra). Tambin sirve para la realizacin de frotis.

Frascos

Los frascos de fondo plano Se utilizan para la


preparacin de determinadas disoluciones,
fabricndose de diferentes tamaos, debiendo ser
termorresistentes por si se requiere someterlos a la
accin del calor. En el trabajo microbiolgico se
utilizan regularmente para la preparacin del
antgeno de cardiolipina, utilizado en las pruebas
serolgicas VDRL.

Pipetas
Tubos cilndricos delgados terminados en punta, graduados al dcimo o al
centsimo de mI. Se emplean en la medicin de pequeas cantidades de lquidos.
Pueden ser

-Serolgicas: son terminales y con capacidad de 0.1 a 25 ml.

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-Volumtricas: se reconocen por presentar una dilatacin bulbosa central con unas
marcas de aforamiento conocida, en el extremo proximal angosto de la pipeta, se
les llama tambin pipetas de bola, las medidas ms conocidas son de 10, 25, 50 y
100 ml.

-Pipetas Pasteur: Confeccionados de varillas de vidrio de dimetro de 4 x


20mm de 30 40cm de longitud. La calidad de vidrio debe facilitar
reblandamientos a la accin directa de la llama del mechero, para conseguir
por estiramiento la capilaridad deseada. Se emplea para la toma de pequeos
inculos de siembra.

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Vasos de precipitado

Un vaso de precipitados es un recipiente cilndrico de vidrio borosilicado fino que


se utiliza sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar lquidos. Son
cilndricos con un fondo plano; se les encuentra de varias capacidades, desde 1 ml
hasta de varios litros. Normalmente son de vidrio, de metal o de un plstico en
especial y son aqullos cuyo objetivo es contener gases o lquidos.
Tienen componentes de tefln u otros materiales resistentes a la corrosin. Suelen
estar graduados, pero esta graduacin es
inexacta por la misma naturaleza del artefacto;
su forma regular facilita que pequeas
variaciones en la temperatura o incluso en el
vertido pasen desapercibidas en la graduacin.
Es recomendable no utilizarlo para medir
volmenes de sustancias, ya que es un material
que se somete a cambios bruscos de
temperatura, lo que lo descalibra y en
consecuencia nos entrega una medida errnea de
la sustancia

EQUIPOS

El microscopio

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Es aquel instrumento diseado especialmente para


poder apreciar elementos muy pequeos que resultan
imperceptibles para la visin humana.
El tipo de microscopio ms comn que se creo fue el
ptico, el cual consiste en una o varias lentes las
cuales permiten obtener una imagen aumentada del
objeto y que funciona gracias a la refraccin. Algunos
otros tipos son: microscopio simple, compuesto, de
fluorescencia, de luz polarizada, con focal electrnico
de transmisin, electrnico de barrido, de iones de
campo, de sonda de barrido, de fuerza atmica, de
efecto tnel, virtual y antimateria.
Incubadora
Es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos
microbiolgicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura,
la humedad y otras condiciones en grado ptimo, tales como el contenido
de dixido de carbono (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior. Las
incubadoras son esenciales para una gran cantidad de trabajos experimentales
en biologa celular, la microbiologa y en biologa molecular y se utilizan para
cultivos celulares, tanto bacterianos como de clulas eucariotas.

Las incubadoras son tambin utilizadas en la


industria de cra de aves de corral para que
acten como un sustituto de las gallinas en el
proceso de incubacin de los huevos
fecundados. Esto se traduce a menudo en tasas
de eclosin muy altas debido a la capacidad de
controlar la temperatura y la humedad. Varias
marcas de incubadoras estn disponibles en el
mercado para los ganaderos.

Horno de laboratorio

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Es un tipo de horno comnmente usado


para deshidratar reactivos de laboratorio o
secar instrumentos. El horno aumenta su
temperatura gradualmente conforme pase
el tiempo as como tambin sea su
programacin, cuando la temperatura sea
la ptima y se estabilice, el trmico
mantendr la temperatura; si esta
desciende volver a activar las
resistencias para obtener la temperatura
programada; posee un tablero de control
que muestra el punto de regulacin y la
temperatura real dentro del horno, est
montada al frente para su fcil lectura, aunque algunos modelos anteriores no
lo tienen, estos cuentan con una perilla graduada la cual regula temperatura
del horno.

Balanza analtica
Es una clase de balanza de laboratorio diseada para medir pequeas masas,
en un principio de un rango menor del miligramo (y que hoy da, las digitales,
llegan hasta la diezmilsima de gramo: 0,0001 g o 0,1 mg). Los platillos de
medicin de una balanza analtica estn dentro de una caja transparente
provista de puertas para que no se acumule el polvo y para evitar que cualquier
corriente de aire en la habitacin afecte al funcionamiento de la balanza

Contador de colonias

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Es un instrumento utilizado para contar


colonias de bacterias o de
otros microorganismos que crecen en
una placa de agar. Los contadores ms
recientes intentan contar las colonias por
va electrnica, mediante la identificacin
de reas individuales de oscuridad y luz,
de acuerdo a los umbrales definidos por
el usuario, contando los puntos en los que
se aprecia contraste, o de modo
automtico mediante registro electrnico
tras presionar con cualquier tipo de marcador.

Autoclave de laboratorio

Es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando


vapor de agua a alta presin y temperatura, evitando con las altas presiones
que el agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura. El fundamento del
autoclave es que coagula las protenas de los microorganismos debido a la
presin y temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunas
formas a celulares, tal como los priones, que pueden soportar las temperaturas
de autoclave.

Las autoclaves funcionan permitiendo la


entrada o generacin de vapor de agua
pero restringiendo su salida, hasta obtener
una presin interna de 103 kPa, lo cual
provoca que el vapor alcance una
temperatura de 121 grados centgrados. Un
tiempo tpico de esterilizacin a esta
temperatura y presin es de 15-20 minutos.
Las autoclaves ms modernas permiten
realizar procesos a mayores temperaturas y
presiones, con ciclos estndares a 134 C a
200 kPa durante 5 min para esterilizar
material metlico; llegando incluso a realizar ciclos de vaco para acelerar el
secado del material esterilizado.

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Medio de cultivo
Consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso
pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer crecer, el medio requerir
unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de
polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden
encontrarse en estado slido, semislido o lquido.
El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin,
multiplicacin. Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen
los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.

Bao Mara

Este equipo se utiliza para el calentamiento


indirecto, por conveccin trmica del medio
y de sustancia, se basa en un mtodo
empleado para conferir la temperatura
uniforme a una sustancia liquida o slida,
sumergiendo el recipiente que lo contiene
en otro mayor con agua que se lleva hasta
la ebullicin.

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Tambin es utilizado para realizar pruebas serolgicas y


procedimietosde incubacion, agitacion, inactivacion,biomedicos, farmamaceutic
os.

Por lo general, se utilizan con agua, pero tambin se puede trabajar con aceite.
Los rangos de temperatura en los cuales normalmente son utilizados estan
entre temperatura ambiente (20-22C) y los 60C. Tambin se pueden
seleccionar temperaturas de 100C.

2. Revisar las normas de seguridad que se deben considerar en el


laboratorio de microbiologa.

Normas de seguridad en el laboratorio de microbiologa

- Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros


objetos personales en el lugar que se les indique para tal fin.

- Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe


permanecer completamente cerrada.

- Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al


finalizar la sesin prctica.

- Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades
programadas, antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar
materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes.

- Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando


fsicamente cmodo.

- Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela


antideslizante en las reas de laboratorio.

- Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podran ser fuente de


contaminacin (por ejemplo joyas).

- Recoger el cabello largo.

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- Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar slo lo


indispensable.

- No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,


aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn
rea del laboratorio.

- Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de


iniciar las actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda,
dirjase al profesor.

- Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos


personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la
realizacin del trabajo prctico.

- Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe


dejar ste desatendido.

- Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.),


limpios y de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la
actividad. Reporte cualquier dao de los mismos al profesor.

- Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos


para tal fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri
en las ollas de desecho, etc.

- No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las


etiquetas de los mismos y estar seguro de cmo emplearlo.

- No devolver sustancias a sus envases originales.

- Emplear la propipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido


pipetear con la boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de
algodn para reducir la contaminacin de estos dispositivos de pipeteo.

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- Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar


a cabo experimentos no autorizados.

- Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de


material contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser
catalogado como menor.

- Reducir al mnimo la formacin de aerosoles durante la realizacin de


cualquier trabajo prctico.

- Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar


la inoculacin accidental y la generacin de aerosoles durante su
manipulacin y desecho.

- Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

Riesgos biolgicos

El Riesgo Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una


actividad prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de
cultivos de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones
muy elevadas y pueden llegar a provocar una infeccin si no son
manipulados adecuadamente. Para que se produzca un accidente por un
agente biolgico deben estar presente bsicamente 4 elementos: un

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husped susceptible, un agente infeccioso, una concentracin suficiente de


ste y una ruta de transmisin adecuada; siendo este ltimo punto el que
mejor se puede controlar en el laboratorio.

VI. DISCUSION

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Para un laboratorio de Microbiologa:

Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar


microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos y de seguridad
propios de un laboratorio de Microbiologa.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos
presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para
evitar contaminaciones que den lugar a resultados errneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucin por su potencial
patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes
adecuados que deben ser esterilizados posteriormente.
Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura
comn sin haber sido esterilizado previamente.
El laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en
caso de vertidos:
Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido
con solucin desinfectante (alcohol 70%, desinfectante fenlico diluido, etc.).
Aclarar con agua los restos de desinfectante.
En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metlicas, limpiar
posteriomente para evitar el efecto corrosivo.
En caso de derramamientos de material peligroso o formacin de aerosoles: evitar
inspiraciones de esos aerosoles, esperar 30 minutos hasta que las partculas se
hayan depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros tiles protectores.
En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y
posteriormente cubrir con papel humedecido con desinfectante. Dejar durante 15
minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua.
En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel
humedecido y posteriormente aclarar, cuando sea necesario.
Los laboratorios debern disponer de los aparatos e instrumental necesario para el
correcto desarrollo de su actividad.

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Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de


Microbiologa que implique la monitorizacin de los medios e instrumentos, con el
fin de asegurar la adecuada realizacin de los aislamientos, identificacin y
caracterizacin de los patgenos y la realizacin precisa de las pruebas de
sensibilidad a los antimicrobianos como referencia teraputica. El sistema de la
calidad deber contemplar la existencia de registros de formacin de personal.
Es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de proteccin
personal en el manejo de equipos y aparatos.
Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la
reproducibilidad de los resultados de las pruebas diagnsticas.
El laboratorio deber estar bajo la direccin y responsabilidad de un facultativo con
la especialidad correspondiente, legalmente capacitado para realizar aqullas
determinaciones que el laboratorio tenga autorizadas.
El personal tcnico y sanitario del laboratorio deber disponer la titulacin
adecuada para las funciones que desarrolla de conformidad con la legislacin
vigente.

Para un laboratorio normal:

En un laboratorio se utiliza una amplia variedad de instrumentos o herramientas


que, en su conjunto, se denominan material de laboratorio. Pueden clasificarse
segn el material que los constituye:

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Michael Faraday, fsico y qumico del siglo XIX, en su laboratorio

De metal: agarradera, aro, doble nuez, esptula, gradilla, balanza de


platillos, mecheros, pie universal, pinzas de laboratorio, pinza de mohr, pinza
metlica, sacabocado, tela metlica, trpode y cucharilla

De vidrio: agitador, ampolla de decantacin, baln de destilacin, baln


gibbson, bureta, cristalizador, embudo, kitasato, matraz, erlenmeyer, matraz
aforado, pipeta (que puede ser de dos tipos: graduada o volumtrica), placa de
Petri, probeta, retorta, serpentina, tubo de ensayo, tubo refrigerante, varilla de
vidrio, vaso de precipitados, vidrio de reloj, etc.

De plstico: pinza de plstico, piseta (o frasco lavador), probeta, propi peta

De porcelana: crisol, mortero con pistilo, cpsula de porcelana, tringulo de


arcilla, embudo bchner, etc.

De madera: gradillas, pinza de madera

De goma: mangueras, perilla

Instrumentos electrnicos: microscopio, cronmetro

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VII. RECOMENDACIONES

a. Los materiales deben ser resistentes para soportar los golpes, las
inclemencias del tiempo y de agresiones medio ambientales.

b. Las seales se deben instalar preferentemente a una altura y en una


posicin apropiadas en relacin al ngulo visual, teniendo en cuenta
posibles obstculos que se puedan presentar en el laboratorio.

c. El lugar de emplazamiento debe estar iluminado, ser accesible y visible


para realizar los experimentos.

VIII. CONCLUSIONES

a. Se debe tener en cuenta todas las medidas de seguridad en el


laboratorio de microbiologa.

b. Se reconoci la utilidad de los diferentes materiales y equipos de


laboratorio.

c. Se identific los mtodos de esterilizacin y desinfeccin.

IX. REFERENCIA

a. NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO


DE BIOLOGA. [Consultada el 27 de Julio 2009]
b. Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Ginebra: OMS; 2005

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c. http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/L
abMicro/practica1.html?fref=gc
d. http://quercuslab.es/blog/esterilizacion-del-material-de-laboratorio/?
fref=gc
e. http://salud.mendoza.gov.ar/manual-de-bioseguridad-para-
establecimientos-de-salud-capitulo-18-bioseguridad-en-laboratorios-de-
microbiologia/?fref=gc
f. http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/L
abMicro/practica1.html

X. ANEXOS

Una incorrecta manipulacin microbiolgica de la carne de ternera provoc la


intoxicacin de Miranda (Espaa)

El informe mdico de la Consejera de Sanidad de la Junta determina que


una carne de ternera manipulada de forma inadecuada provoc vmitos,
fiebre y diarrea a las personas que la consumieron en la residencia mixta
Francisco Hurtado de Miranda de Ebro (Burgos). As se ha presentado en el
informe mdico que confirma que fue una intoxicacin alimentaria la que
provoc el fallecimiento de dos personas mayores con pluripatologas
previas y diversos sntomas en otras 26 el pasado 9 de julio en este centro
pblico.

El alimento que caus la intoxicacin fue una carne de ternera manipulada de


forma inadecuada triturada para una dieta trmix, que no fue refrigerada
inmediatamente despus de ser cocinada. Por lo tanto, tal y como se sospech
tras los estudios iniciales, la carne fue contaminada por 'clostridium prefringens', lo
que provoc vmitos, fiebre y diarrea a las personas que la consumieron.

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Clostridium perfringens (causante)

En este sentido, desde la Junta afirman en una nota de prensa que, para evitar
este tipo de situaciones, especialmente en tiempo de calor, es necesario recordar
algunas recomendaciones para la manipulacin de los alimentos con el fin de
evitar accidentes microbiolgicos que pueden derivar en percances en la salud de
los consumidores.
Entre ellos, se deben adquirir alimentos con origen conocido; cocinar
correctamente los alimentos; consumir inmediatamente despus de ser cocinados;
conservar a temperaturas seguras; evitar el contacto entre alimentos crudos y
cocinados; mantener los alimentos fuera del alcance de insectos, roedores y
animales de compaa; utilizar exclusivamente agua potable, y no consumir
alimentos perecederos que estn expuestos a temperatura ambiente.

Segn los anlisis efectuados por la Consejera, ha provocado el pasado da 9 la


intoxicacin de 26 residentes, y la muerte de dos ancianos que tenan
pluripatologas previas.

Ejemplo de anlisis microbiolgico en la hamburguesa

La carne fue contaminada por esta bacteria anaerbica que provoc vmitos,
fiebre y diarrea a las personas que la consumieron.
Produce toxinas que pueden causar enfermedades como la enteritis necrtica o
la gangrena gaseosa.
En la gangrena gaseosa, el clostridio provoca destruccin en los tejidos infectados
si persiste. Esto es provocado por la liberacin de exoenzimas especficos que

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atacan a las molculas constituyentes de los tejidos de animales: fosfolipasas,


hemolisinas, colagenasas, proteasas.., que provocan la putrefaccin del tejido
acompaada de una produccin de gas, y de ah su nombre ("gaseosa").
Actualmente el tratamiento con antitoxinas, antibiticos y profilaxis quirrgica es
muy efectivo lo cual reduce muy significativamente los casos de amputacin y de
muerte. Sin embargo en casos extremos es necesario amputar para salvar la vida
del paciente.

Gangrena gaseosa
En caso de la gastroenteritis empieza entre 6 y 24 horas despus de haber
consumido alimentos contaminados. Los sntomas ms frecuentes son diarrea
acuosa y retortijones abdominales. Aunque habitualmente es leve, la infeccin
tambin causa dolor abdominal, distensin abdominal por gases, diarrea grave,
deshidratacin y una importante disminucin de la presin arterial (choque).
Normalmente, los sntomas duran unas 24 horas.

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Sntomas como la diarrea en gastroenteritis

Diagnstico y tratamiento

El mdico suele sospechar el diagnstico cuando ha tenido lugar un brote local de


la enfermedad. El diagnstico se confirma analizando los alimentos contaminados
o las heces de las personas afectadas en busca de Clostridium perfringens.

Para prevenir la infeccin, las sobras de carne cocinada deben guardarse


enseguida en el frigorfico y estar bien recalentadas antes de servirlas. A la
persona afectada se le administran lquidos y se le recomienda descanso. No se
administran antibiticos.

Segn el informe entre las que consumieron esta carne que haba sido triturada se
encuentran los dos ancianos fallecidos que, segn coment la consejera de
Familia e Igualdad de Oportunidades, Milagros Marcos, tenan pluripatologas
previas muy complicadas.
La Consejera de Sanidad ha recordado que para evitar las intoxicaciones
alimentarias, especialmente en tiempo de calor, hay que seguir las
recomendaciones especiales en la manipulacin de los alimentos, como que sean
cocinados correctamente, consumirlos inmediatamente despus de ser cocinados
o conservarlos a temperaturas seguras. Evitar el contacto entre alimentos crudos y
cocinados, mantenerlos fuera del alcance los insectos, roedores y animales de
compaa, y utilizar exclusivamente agua potable en su elaboracin son otras
recomendaciones que ha hecho la Consejera de Sanidad.
Con esto se demuestra lo importante de la seguridad del anlisis microbiolgico en
las industrias alimentarias y su relevancia en el impacto social como parte de la
responsabilidad social.

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Cuestionario
1. Qu es la bioseguridad, de cuntos niveles consta y qu caractersticas
posee cada uno de estos niveles?

La bioseguridad es un conjunto de normas, medidas y protocolos que son


aplicados en mltiples procedimientos realizados en investigaciones cientficas y
trabajos docentes con el objetivo de contribuir a la prevencin de riesgos o
infecciones derivadas de la exposicin a agentes potencialmente infecciosos o con
cargas significativas de riesgo biolgico, qumico y/ fsicos, como por ejemplo el
manejo de residuos especiales, almacenamiento de reactivos y uso de barreras
protectoras entre otros.

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2. Mencione las diferencias entre un laboratorio de microbiologa y un


laboratorio convencional.

LABORATORIO CONVENCIONAL LABORATORIO MICROBIOLOGICO


Es el rea de uso exclusivo para los Es un lugar convenientemente
docentes, en l se guardan, clasifican habilitado donde se puede habilitar,
y ordenan materiales. Tambin se manejar y examinar
ordenan y clasifican las diferentes microorganismos. Este tipo de
sustancias y reactivos que se trabajo debe ser llevado a cabo con
emplean en el desarrollo de las una buena tcnica asptica y por
prcticas. Mesas de trabajo o reas tanto se requiere un ambiente limpio
de experimentacin. Para producir y ordenado. Cuando manejamos
cualquier experimento es de vital cualquier tipo de muestra debemos
importancia que los materiales, evitar que microorganismos ajenos a
equipos y mesas de trabajo a utilizar nuestros cultivos y presentes en el
estn perfectamente limpios. ambiente se introduzcan en ellos
contaminndolos, o que los
microorganismos de la muestra nos
contaminen a nosotros. Por ello se

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debe trabajar en condiciones de


estabilidad.

3. Cules son los riesgos y problemticas en el grupo que se tendrn al no


seguir las indicaciones recomendadas?

En el trabajo de laboratorio es fundamental la seguridad e integridad fsica de las


personas involucradas; por ello, no podr realizarse ninguna prctica o actividad
experimental si el ejecutante no cuenta con los elementos de proteccin
indispensables para su desarrollo o no cumple con las disposiciones normativas
aplicables, para lo cual se debern cumplir siempre las siguientes reglas.

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