ESTERILIZAO DE AR EM BIOPROCESSO

Desenvolvimento de
bioprocessos aerados

Superfcie x Submerso

Esterilizao de grandes
volumes de ar

compressor

Ar contaminado Ar esterilizado
Profa. Eliana Moss Alhadeff
 ESTERILIZAO DE AR EM BIOPROCESSO

3 Por que grandes volumes de ar ?

Baixo percentual de oxignio no ar (21 % v/v);

Baixa solubilidade do oxignio em meios lquidos;

Elevado custo para utilizao de oxignio puro.

Requerimento de grandes vazes de ar:

0,8 Q/V 1,2 vvm (laboratrio)
0,3 Q/V 0,5 vvm (industrial)
 ESTERILIZAO DE AR EM BIOPROCESSO
3 Contaminantes provenientes do ar
Ocorrncia varivel e dependente :
do clima;
da localizao geogrfica;
do tipo de vegetao;
da umidade relativa do ar;
da poca do ano, etc.;

Microrganismos comumente encontrados no ar:

esporos e forma vegetativa de Bacillus subtilis,
B. cereus, B. megatherium;
bolores (fragmento de miclio), e
leveduras.

Quantidade : 103 a 104 microrganismos/m3 de ar

Quantificao de fungos no ar da cidade de Porto Alegre, Brasil

Fonte : Mezzari e col. (2002)

Fonte : Mezzari e col. (2002)
 Avaliao da quantidade de microrganismos que
seria introduzida em um biorreator em uma fbrica
de penicilina de pequeno porte

VL = 60 m3
Qmo = 30.000 cl/min
Q/V = 0,5 vvm
N = 103 clulas/m3 Nmo (5 dias) = 2,16 . 108 clulas
tF = 5 dias

Mtodos para a esterilizao do ar

1. Calor
2. Radiaes
3. Borbulhamento atravs de desinfetante
4. Filtrao
 Mtodos para a esterilizao do ar
1.1. Calor Seco :
Esporos bacterianos : 165 oC por 2 h
Esterilizao do ar pelo calor seco contendo esporos de Bacillus
globigii, para destruio superior a 99,9999 %.

Temperatura (oC) Tempo de permanncia (s)

218 24
246 10
274 5
300 3

Desvantagens : Alto consumo de energia, custos de equipamentos,

instalao e manuteno, necessidade de resfriamento do ar
esterilizado.
 Mtodos para a esterilizao do ar
1.2. Aquecimento direto

Desvantagens : mistura do ar com gases de combusto,

necessidade de resfriamento do ar esterilizado e custos
energticos elevados.

Aplicao : sada de ar de recinto, onde se trabalha

principalmente com microrganismos patognicos.

1.3. Aquecimento indireto

Vantagem : no h mistura do ar com gases de combusto.

Desvantagens : necessidade de resfriamento do ar esterilizado

e custos energticos elevados.
 Mtodos para a esterilizao do ar
1.4. Aquecimento eltrico
Desvantagens : custos energticos elevados e necessidade de
resfriamento do ar esterilizado.

Aplicao : bioprocesso em escala piloto ou de laboratrio.

 Mtodos para a esterilizao do ar
1.5. Aquecimento por compresso

Desvantagens : alto consumo de energia (10 a 12 Kgf/cm2 para

se atingir 300oC), necessidade de resfriamento do ar esterilizado.

2. Radiaes ionizantes (ultra violeta)

Desvantagens : baixo poder de penetrao, tempos grandes
de exposio, dutos transparentes e de grande comprimento e
custo elevado de equipamento.

Aplicao : esterilizao de ar ambiente.

 Mtodos para a esterilizao do ar
3. Borbulhamento atravs de desinfetante

Desvantagens : arraste do desinfetante para o biorreator,

tamanho do equipamento e processo seletivo por se tratar de
desinfeco.

4. Filtrao

4.1. Em carvo ativo (reteno por adsoro)

Desvantagens : tamanho do equipamento, arraste de partculas
para o biorreator, elevada perda de carga.
 Mtodos para a esterilizao do ar

4. Filtrao

4.2. Em material fibroso (l de vidro, l de rocha e algodo)

Caractersticas :
df = 3 a 19 m;
Interstcios >>> df;
reteno mecnica e outros mecanismos;
Compactao deve promover pequena perda
de carga e no possibilitar o aparecimento de
caminhos preferenciais;
Deve ser esterilizado por calor seco (circulao
de ar aquecido), para no umedecer as fibras.

Aplicao : Bioprocessos.
 Mtodos para a esterilizao do ar

4. Filtrao

4.2. Em material fibroso (l de vidro, l de rocha e

algodo)
 Mtodos para a esterilizao do ar
4. Filtrao

4.3. Em placas porosas (polilcool de vinila (PVA),

acetato de celulose, poliuretanas)
Caractersticas :
Placas de 1 cm de espessura e dimetros variando de 5 at 110 cm.
Alta eficincia de remoo de partculas e pequena perda de
carga.

Aplicao : Capelas de fluxo laminar e bioprocessos.

 Mtodos para a esterilizao do ar
Aplicao : Capelas de fluxo laminar.

Filtro HEPA :
High Efficiency Particulate
Air, placas de acetato de
celulose com eficincia de
99,97 % na remoo de
partculas de dimetro mdio
0,3 m.
 Mtodos para a esterilizao do ar
4. Filtrao

4.4. Filtros de vela ou cartucho (politetrafluoretileno

(PTFE - teflon))

Caractersticas :
Funcionam como filtros
absolutos; poros de 0,2 a 0,45
m; Cobrem uma ampla faixa
de vazes de ar; Pequenas
dimenses e de fcil
instalao.

Aplicao : Bioprocessos.
 AMOSTRADORES DE AR
2. Shipe : (1) Orifcio crtico
1. Impinger : (1) Entrada de ar,
(Entrada de ar), (2) Sada de
(2) Sada de ar (bomba de
ar (bomba de vcuo).
vcuo).
 AMOSTRADORES DE AR
b. Amostrador de Papel de Filtro.
3. Filtrao

a. Amostrador de algodo.

c. Amostradores de orifcio.
 Espcies representativas Bacterianas (vegetativas e
esporuladas) encontradas no ar (Aiba & Humphrey)

Espcies Largura Comprimento

(m) (m)
Aerobacter aerogenes 1,0 1,5 1,0 2,5
Bacillus cereus 1,3 - 2,0 8,1 25,8
Bacillus licheniformes 0,5 0,7 1,8 3,3
Bacillus megaterium 0,9 2,1 2,0 - 10,0
Bacillus mycoides 0,6 1,6 1,6 13,6
Bacillus subtilis 0,5 1,1 1,6 4,8
Micrococcus aureus 0,5 1,0 0,5 1,0
Proteus vulgaris 0,5 1,0 1,0 - 3,0
Esporos
Bacillus megaterium 0,6 1,2 0,9 1,7
Bacillus mycoides 0,8 1,2 0,8 1,8
Bacillus subtilis 0,5 1,0 0,9 1,8
Mecanismos:
Interceptao direta
Impacto por inrcia
Difuso
Captura por foras eletrostticas
Captura por fora gravitacional
diffusional fiber
deposition
streamlines (air moving
trajectory)
inertial
impaction

direct capture by charge on the fiber

interception electrostatic surface
forces
 Estudos (Humphrey) de cargas eletrostticas de esporos de
Bacillus substilis em ar indicaram que:

1. Cerca de 70% tem carga positiva;

2. 15% apresentaram carga negativa;

3. 15% so neutros.

Mecanismo de captura por fora gravitacional podem ser

despresados porque:

z As partculas slidas so extremamente pequenas na faixa

de 1, e

As foras gravitacionais e de carga no apresentam

contribuies significantes em relao eficincia de
captura total promovida pelos mecanismos de: impacto
por inrcia, interceptao direta e reteno por difuso.
 Mecanismos de Reteno em Filtros de Camada
Fibrosa Mecanismos
mais
importantes

Impacto por
inrcia;
Interceptao
direta;
Difuso.

Considerando que :
1. Efeito de extremidade desprezvel.
2. Escoamento laminar.
3. Todo aerosol que toque a superfcie da fibra ser retido.
Mecanismos de Reteno em Filtros de Camada Fibrosa

Impacto por
inrcia;
Interceptao
direta;
Difuso.

Considerando que :
1. Efeito de extremidade desprezvel.
2. Escoamento laminar.
3. Todo aerosol que toque a superfcie da fibra ser retido.
FIG. 6.2 Cross-section of flow patterns around a single cylindrical fiber of diameter df, with air flow lines having
width b, and a particle of diameter dp intercepted by the fiber. Laminar air flow is assumed around the fiber cross-
section. Broken flow lines indicates the flow patter of particle. [Adopted from S. Aiba, A.E. Humphrey and N.F.
Millis. Air Sterilization. In Biochemical Engineering, 2nd Ed., Academic Press, Inc., New York (1973) 280].
 Mecanismos de Reteno
em Filtros de Camada Fibrosa
A) Reteno por Impacto de inrcia.
A partcula dotada de massa

C P d P2 vo
I=
18 d f

I : parmetro de Inrcia (adimensional)

C : fator de correo de Cunningham (slip flow)
P : densidade da partcula
dP : dimetro da partcula 18
vo : velocidade do ar d f
: viscosidade do ar vo = 16
df : dimetro da fibra C P d P2
 Mecanismos de Reteno
em Filtros de Camada Fibrosa
A) Reteno por Impacto de inrcia.
I < 1/16, no h coleta por Impacto por Inrcia;
I = 1/16, vo vC, comea a haver influncia do
mecanismo, onde vC denominada velocidade crtica.
I > 0,5 Mecanismo passa
a ser importante
I < 0,5 Indica que o
vC mecanismo de reteno
df
por impacto no
(cm/s) importante

18
d f
vC = 16
dP C P d P2
(micra)
 VC = (constante) (df/dp2)

FIG. 6.4 Critical velocity of air, Vc, as a function of particle diameter dp, using different diameters df of single fibers.
Air at 20 oC and particle density p = 1 g/cm3. [Adopted from S. Aiba, A.E. Humphrey and N.F. Millis. Air
Sterilization. In Biochemical Engineering, 2nd Ed., Academic Press, Inc., New York (1973) 281].
 Mecanismos de Reteno
em Filtros de Camada Fibrosa
Eficincia de Coleta por Impacto de inrcia.
Equao de Wong e Johnstone :
Validade : 0,8 < I < 2,0
I = 0,075 I 1, 2
Re <1
dP
R= < 0,2
df
B) Reteno por Interceptao
A massa da partcula desprezvel

dP Onde R = Parmetro de Interceptao

R= O mecanismo de coleta por interceptao
df
direta preponderante sempre que I < 0,5 e
b dP/2, onde b a distncia entre a linha de
corrente e a fibra e Re < 1 .
 Mecanismos de Reteno
em Filtros de Camada Fibrosa
Eficincia de Coleta por Interceptao.
dP
E = 0,7 R 2
e R=
df
Onde R = Parmetro de Interceptao

C) Reteno por Difuso : A massa da partcula desprezvel

Eficincia de Coleta por Difuso
Equao de Friedlander

2
D = 1,3 Pe 3
+ 0,7 R 2

Validade : R < 1; Re = dfv/ < 1; Pe = dfv/D ; I < 0,5.

 Mecanismos de Reteno em Filtros de Camada
Fibrosa
Eficincia Global de Coleta : x vS

1,125 d f
vC =
C P d P2

Difuso
Impacto por Inrcia

Interceptao vC vS
Mecanismos de Reteno em Filtros de Camada Fibrosa
Eficincia Global de Coleta : x vS

Corroborao experimental: esporos de Bacillus

subtilis, em filtro de l de vidro impregnada com
furfural (df = 16 m, dP = 0,6 m, espessura do
filtro 3 mm).

Humphrey &
Gaden
(1955)
 Teoria da penetrao Logartmica
Frao de Esporos
retida em cada 1 Velocidade do ar : constante
camada

(Log N/No) 0,1

0,01

0,001

0,0001

Humphrey 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

& Gaden
(1955) Espessura (x)
 Reteno de esporos de
Dados B. subtilis atravs de
experimentais
onde efeitos de fibra de vidro com
extremidade e
perda radial velocidade de 15 ft/s
interferem,
apresentando
(460,25 cm/s).
desvios em
relao ao
modelo terico.

Model
o
terico
 Teoria da penetrao Logartmica

Penetrao (1 - ) em funo da espessura (x) da

camada filtrante, para diferentes velocidades do ar (vS).

Esporos de B. subtilis,
em filtro de l de
vidro impregnada de
furfural (df = 16 m).

Humphrey & Gaden (1955)

 Teoria da penetrao Logartmica
Para Velocidade do ar constante, temos que :

dN dN
= kN , logo = kdx
dx N

Integrando :

No N0 k
ln =kx ou log = x
N N 2,3

 Teoria da penetrao Logartmica
Definindo x90 :
Espessura de camada filtrante que retm 90 %
dos contaminantes.

100 k
log = x90
10 2,3

2,3
x90 =
k
Assim tem-se que :
k 1
=
2,3 x90
 Material Df Micro- var x90
(m) organismo (cm/s) (cm)
L de vidro 16 Bacillus subtilis 3 4
(esporos)
Valores de 15 9

x90 para a 30 11,5

remoo e 150 1,5

micro- 300 0,4

organismos 18,5 Serratia 3,9 3,1
para marcescens
diferentes Fibra de vidro 8,5 Escherichia coli 3 0,4
meios 15 0,6
filtrantes 30 0,7
(Humphrey, 150 0,8
1960; 300 1,1
Rivierre,
Norite Bacillus cereus 1,4 1,7
1977) (15-30 mesh) (esporos)
6,4 1,5

Carvo ativado Bacillus cereus 18 1,7

(4-8 mesh) (esporos)
28,5 8,7
 Teoria da penetrao Logartmica

Substituindo x90 na equao que descreve a teoria

da penetrao logartmica tem-se que:

N0
x = x90 Log
N

Se vS no for constante, tem-se que k varia com VS
semelhana do que ocorre com a eficincia mdia
de coleta de ar :

Log k

Log vS
 Teoria da penetrao Logartmica
A curva que representa a variao de x90 com a
velocidade do ar vS passa por um mximo:

Log x90

Log vS
 Teoria da penetrao Logartmica
A curva que representa a variao de x90 com a
velocidade do ar vS passa por um mximo. Filtro de
l de vidro impregnada com furfural ( df = 16 m).
Aerossol Bacillus subtilis.

Humphrey &
Gaden
(1956)
 Teoria da penetrao Logartmica
Sobrepondo os perfis de x90 versus vS e o de versus vS

Log x90

Log vS