Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional UNMSM | 2017

MARCHA FITOQUMICA Y SEPARACIN DE CONSTITUYENTES QUMICOS

DEL EXTRACTO HIDROALCLICO DE LAS HOJAS DE LA ESPECIE Origanum
vulgare L. organo
PHYCHOCHEMICAL MARKING AND SEPARATION OF CHEMICAL
CONSTITUENTS OF THE HYDROALCOLIC EXTRACT OF THE SPECIES
LEAVES Origanum vulgare L. "organo"
* 2 4
Acua Leiva R.1; Cndor Pariona M. ; Huillcahuaman Delgado G.3; Mendizbal Rojas J.
Laboratorio de la Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional, Facultad de Farmacia y
Bioqumica, UNMSM
Docente asesor: Gorriti Gutirrez A.5

RESUMEN
Origanum vulgare L. es una especie vegetal introducida que es ampliamente cultivada en el Per.
Qumicamente presenta aceites esenciales, flavonoides, taninos y compuestos terpnicos. Su uso se
encuentra extendido en la industria alimentaria y farmacutica debido a sus propiedades antispticas,
diurticas y antiespasmdicas. El presente trabajo tuvo como objetivos: Identificar los constituyentes
qumicos presentes en el extracto etanlico de Origanum vulgare L. a travs de una marcha fitoqumica y
separar los constituyentes qumicos mediante tcnicas cromatogrficas. La metodologa se bas en un
anlisis cualitativo donde se realizaron las principales reacciones para la presencia de carbohidratos (R.
de Molish y Antrona), flavonoides (R. con FeCl3, Shinoda y Rosenheim), esteroides y trterpenoides (R. de
Lieberman-Burchardat), alcaloides (R. de Draggendorf, Mayer, Bertrand y Sonnenschein), antraquinonas
(R. de Borntrager), antocianinas (R. de Rosenheim e hidroxilamina), saponinas, glucsidos (R. de vainilln
sulfrico) y taninos (R. con FeCl3, gelatina, K2Cr2O7, Pb(CH3COO)2, agua de cal, KCN, NaClO, K4[Fe(CN)6]
+ NH4OH y KMnO4). El anlisis cromatogrfico se llev a cabo con un estndar de cido glico (taninos)
y quercetina (flavonoides). Los resultados mostraron resultados positivos para la presencia de
carbohidratos, flavonoides, triterpenoides, alcaloides, azcares reductores, antraquinonas, saponinas,
glucsidos y taninos. En el anlisis cromatogrfico los Rf obtenidos para taninos y flavonoides fue 0.96
(M.P) y 0.98 (St.).

Palabras clave: Origanum vulgare L., aceites esenciales, marcha fitoqumica, cromatografa.
ABSTRACT
Origanum vulgare L. is an introduced plant species that is widely cultivated in Peru. Chemically it presents
essential oils, flavonoids, tannins and terpene compounds. Its use is widespread in the food and
pharmaceutical industry due to its antiseptic, diuretic and antispasmodic properties. The present work had as
objectives: To identify the chemical constituents present in the ethanolic extract of Origanum vulgare L. through
a phytochemical march and to separate the chemical constituents by means of chromatographic techniques.
The methodology was based on a qualitative analysis where the main reactions were performed for the
presence of carbohydrates (R. de Molish and Antrona), flavonoids (R. with FeCl3, Shinoda and Rosenheim),
steroids and trterpenoids (R. de Lieberman-Burchardat ), Alkaloids (Draggendorf, Mayer, Bertrand and
Sonnenschein), anthraquinones (Borntrager R.), anthocyanins (Rosenheim R. and hydroxylamine), saponins,
glucosides (sulfuric vanillin R.) and tannins FeCl3, gelatin, K2Cr2O7, Pb(CH3COO)2, lime water, KCN, NaClO,
K4[Fe(CN)6] + NH4OH and KMnO4). The chromatographic analysis was carried out with a standard of gallic
acid (tannins) and quercetin (flavonoids). The results showed positive results for the presence of
carbohydrates, flavonoids, triterpenoids, alkaloids, reducing sugars, anthraquinones, saponins, glycosides and
tannins. In the chromatographic analysis the Rf obtained for tannins and flavonoids was 0.96 (M.P) and 0.98
(St.).
Key words: Origanum vulgare L., essential oils, phytochemical gait, chromatography.

1,2,3,4
Alumnos de la E.A.P. Farmacia y Bioqumica UNMSM
5Profesor principal de la E.A.P. Farmacia y Bioqumica UNMSM
* correspondencia: rodrigo.acuna1@unmsm.edu.pe

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I.-INTRODUCCIN

El oregano es una hierba autoctona de los Existen diversos estudios sobre la

paises mediterraneos, tiene hojas del composicin qumica del organo, usando
tamao de una moneda, frecuentemente extractos acuosos y sus aceites esenciales.
muy rizadas, de un color verde claro y un Se han identificado flavonoides como la
sabor inconfundible, intenso y penetrante.1 apigenina y la luteolina, agliconas, alcoholes
alifticos, compuestos terpnicos, derivados
Origanum vulgare L. es una planta de la del fenilpropano, cidos coumrico, ferlico,
familia Laminaceae que crece silvestre en cafico, rhidroxibenzico y vainillnico. 4
europa y que fue introducida en el siglo XVI.
Es una planta herbcea o sufruticosa, tabla 1. Composicin qumica del
perenne, rizomatosa. Los tallos son erectos, organo
de unos 90 cm o ms, generalmente
ramificados en la parte superior,
pubescentes, hirsutos o vellosos, raramente
glabros. Las hojas, de 10-40(-50)x4- 25 mm,
son ovaladas, enteras o ligeramente
crenacio-serradas, glabras o pilosas,
punteado glandulosas y pecioladas. Flores
dispuestas en espiga de verticilastros de 5-
30 mm, ovoide, oblonga o prismtica,
formando en conjunto, una inflorescencia
corimbosa densa. Bracteas florales de 4-5
mm, diferentes a las hojas, casi dos veces
ms largas que el cliz, ovaladas u
oblongas, no apiculadas, pilosas o glabras,
sin glndulas o ligeramente punteado-
glandulosas, herbceas, generalmente de
color prpuraviolceo o grisceo. El cliz,
punteado de glndulas amarillas, con 5
dientes iguales, es piloso o glabro. La corola
de 4-7 mm, es bilabiada, con el labio
superior entero o escotado y el inferior
trilobulado, blanco o rojo-prpura. Androceo
formado por 4 estambres frtiles, con los Se considera espasmoltica, digestiva,
filamentos divergentes, didnamos. Florece carminativa, aperitiva, colertica,
desde julio hasta septiembre. 2 expectorante, antisptica de las vas
La recoleccin puede hacerse a partir del respiratorias, diurtica, tnica, sedante,
primer ao. El cultivo suele durar de 6 a 8 repelente. En uso externo es cicatrizante,
aos, aunque a partir del primer ao su analgsica, antisptica y antifngica
rendimiento disminuye. El rendimiento Debido a la capacidad antioxidante de los
oscila entre 90 y 120 Kg/ a de planta fresca, extractos acuosos del organo, se sugiere
generalmente 100 Kg de planta fresca se que stos pueden ser empleados como
reducen a 60 Kg de planta seca. A partir del sustituto de los antioxidantes sintticos. 5
cuarto ao, empieza a descender el
rendimiento, por lo cual no es aconsejable El presente trabajo tuvo como objetivos:
mantener la plantacin ms de cinco aos.3 Identificar los constituyentes qumicos
presentes en el extracto hidroalclico
de Origanum vulgare L. a travs de una
marcha fitoqumica
Separar los constituyentes qumicos
mediante tcnicas cromatogrficas

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II.- MATERIAL Y MTODOS

2.1.-Material y equipos maceracin y se utilizaron mltiples reactivos
Beaker (50 mL, 150mL, 400mL) para observar la presencia o usencia de
Pipetas de 1mL, 5mL constituyentes qumicos (ver tablas del 1-10)
Pipetas Pasteur
2.5.1. Anlisis cualitativo
Tubos de ensayo
Bagueta
Tabla N1: Reactivos para observar
Balanza presencia de carbohidratos
Bao mara CARBOHIDRATOS
Reaccin Procediendo Reaccin
2.2.-Reactivos positiva
Molish Molish 0.5mL de M.P. +V
gotas de reactivo Anillo violeta en
Antrona de Molish A + V interfase
Fehling gotas de reactivo
FeCl3 de Molish B
Antrona 0.5mL de M.P. +V Anillo verde
Gelatina
gotas de reactivo azulado en
Shidona de antrona interfase
Rosenheim
Bomtrager Tabla N2: Reactivos para observar
Lieberman-Burchardat presencia de flavonoides
Ninhidrina FLAVONOIDES
Reaccin Procediendo Reaccin
Dragenddorff positiva
Mayer 0.5mL de M.P. +III Coloracin
Bertrand FeCl3 gotas de reactivo verde
FeCl3
Sonnenschein
0.5mL de M.P.
Vainilln-Sulfrico Shinoda +mg de magnesio Coloracin rojo
Magnesio metlico metlico + III salmn
gotas de HCl cc
K2Cr2O7
0.5mL de M.P. +III
Pb(CH3COO)2 Rosenheim gotas de reactivo Precipitado rojo
Agua de cal de Rosenhein pardo
KCN 5%
Hipoclorito de sodio Tabla N3: Reactivos para observar
K4[Fe(CN)6] + NH4OH presencia de esteroides y triterponoides
KMnO4
PRUEBA DE LIEBERMAN-
BURCHARDAT
Agua destilada
Reaccin Procediendo Reaccin
positiva
2.3.-Material biolgico 0.5mL de M.P.
Hojas de Origanum vulgare L. Esteroides + X gotas de Coloracin
reactivo de verde o
"organo"
Lieberman- azulada
2.4.-ugar de ejecucin BurchardatA
Coloracin
Laboratorio de la Ctedra de Triterponoides + X gotas de pardo
Farmacognosia y Medicina anhdrido anaranjado
Tradicional, Facultad de Farmacia y actico y
Bioqumica, UNMSM gotas de
H2SO4
2.5.-Metodolga
Las marchas analticas, se realizaron con el
filtrado extrado por el mtodo de

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Tabla N4: Reactivos para observar Tabla N8: Reactivo para observar
presencia de alcaloides presencia de saponinas
ALCALOIDES SAPONINAS
Reaccin Procedimiento Reaccin Reaccin Procediendo Reaccin
positiva positiva
0.5mL de M.P. +III Saponina 0.5mL de M.P. + Espuma
Dragendorff gotas de reactivo de Precipitado gotas de agua por ms de
Dragendorff naranja destilada, agitar 1 min.
0.5mL de M.P. +III
Mayer gotas de reactivo de Precipitado Tabla N9: Reactivo para observar
Mayer blanco
presencia de glucsidos
0.5mL de M.P. +III Precipitado
Bertrand gotas de reactivo de blanco
Bertrand lechoso GLICSIDOS
0.5mL de M.P. +III Reaccin Procediendo Reaccin
Sonnenschein gotas de reactivo de Precipitado positiva
Sonnenschein verde 0.5mL de M.P. +V
azulado Vainilln- gotas de reactivo
sulfrico de vainilln- Anillo violceo
sulfrico A + V en la interface
gotas de reactivo
de vainilln-
Tabla N5: Reactivo para observar sulfrico B
presencia de azcares reductores
AZCARES REDUCTORES
Reaccin Procediendo Reaccin Tabla N10: Reactivo para observar
positiva presencia de taninos
Fehling 0.5mL de M.P. +V
gotas de reactivo de Precipitado rojo TANINOS
Fehling A + V gotas ladrillo Reaccin Procediendo Reaccin
de reactivo de positiva
Fehling B FeCl3 0.5mL de M.P. +III Coloracin
gotas de reactivo azul
FeCl3
Gelatina 0.5mL de M.P. +III Precipitado
gotas de reactivo blanco
Tabla N6: Reactivo para observar de gelatina lechoso
presencia de antraquinonas K2Cr2O7 0.5mL de M.P. + V Precipitado
gotas de K2Cr2O7 pardo
ANTRAQUINONAS
5%
Bomtrager 0.5mL de M.P. +III Coloracin
Pb(CH3COO)2 0.5mL de M.P. + V Precipitado
gotas de reactivo rojiza
gotas de blanco
de Bromtager
Pb(CH3COO)2 lechoso
Agua de cal 0.5mL de M.P. +III Precipitado
gotas de agua de amarillo
Tabla N7: Reactivos para observar cal plido
presencia de antocianinas KCN 5% 0.5mL de M.P. +IV Precipitado
gotas de KCN 5% amarillo
ANTOCIANINAS Hipoclorito 0.5mL de M.P. +V Coloracin
de sodio gotas de naranja
Reaccin Procediendo Reaccin
positiva hipoclorito de
sodio
Rosenhein 0.5mL de M.P. +III Precipitado
K4[Fe(CN)6] + 0.5mL de M.P. +III Coloracin
gotas de reactivo rojo pardo
NH4OH gotas de rojiza
Rosenhein
K4[Fe(CN)6] + III
Hidroxilamina 00.5mL de M.P. +III
gotas de NH4OH
gotas de reactivo de Precipitado
KMnO4 0.5mL de M.P. + V Precipitado
hidroxilamina rojiza
gotas de KMnO4 pardo

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2.5.2. Anlisis cromatogrfico

Sistema de solventes: acetato de etilo: Tabla N13: Resultados para observar
etanol (1:3) presencia de esteroides y triterponoides
Revelador: solucin etanlica de cloruro PRUEBA DE LIEBERMAN-
frrico BURCHARDAT
Soporte: slica gel Reaccin Resultado
Esteroides Negativo
III.- RESULTADOS Triterponoides ++
-Se observ una reaccin positiva para
presencia de carbohidratos, taninos,
antraquinonas, flavonoides y alcaloides. (ver Tabla N14: Resultados para observar
tablas 11-20) presencia de alcaloides
ALCALOIDES
Tabla N11: Resultados para observar Reaccin Resultado
presencia de carbohidratos Mayer +++
CARBOHIDRATOS Bertrand ++
Reaccin Resultado Sonnenschein ++
Molish ++ Dragendorff +++
Antrona ++

a b
a b c
Fig. 1. (a) Reaccin de coloracin de antrona.
(b) Reaccin de coloracin de Molish. Fig. 3 (a) Reaccin de coloracin de
Dragendorff (b) Reaccin de coloracin de
Tabla N12: Resultados para observar Mayer. (c). Reaccin de coloracin de
presencia de flavonoides Bertrand
FLAVONOIDES
Tabla N15: Resultados para observar
Reaccin Resultado presencia de azcares reductores
FeCl3 ++ AZCARES REDUCTORES
Shinoda +++ Reaccin Resultado
Rosenheim ++ Fehling +++

a b c

Fig. 2. (a) Reaccin de coloracin de FeCl3 Fig. 4 Reaccin de coloracin de Fehling

(b) Reaccin de coloracin de Shinoda. (c).
Reaccin de coloracin de Rosenheim

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Tabla N16: Resultados para observar Tabla N19: Resultados para observar
presencia de antraquinonas presencia de glucsidos
ANTRAQUINONAS GLICSIDOS
Reaccin Resultado Reaccin Resultado
Borntrager ++ Vainilln-sulfrico ++

Tabla N17: Resultados para observar

presencia de antocianinas
ANTOCIANINAS
Reaccin Resultado
Rosenhein +++
Hidroxilamina --- Fig. 7 Reaccin de coloracin de glucsidos

Tabla N19: Resultados para observar

presencia de taninos
TANINOS
Reaccin Resultado
FeCl3 ++
Gelatina ++
K2Cr2O7 +++
Pb(CH3COO)2 +++
Agua de cal ++
KCN 5% ++
a b Hipoclorito de sodio +++
K4[Fe(CN)6] + NH4OH ++
Fig. 5. (a) Reaccin de coloracin de KMnO4 ++
Rosenhein. (b) Reaccin de coloracin de
hidroxilamina.

Tabla N18: Resultados para observar

presencia de saponinas
SAPONINAS
Reaccin Resultado
Saponina ++
a b c

d e f
Fig. 8. (a) Reaccin de coloracin de FeCl3
(b) Reaccin de coloracin de Pb(CH3COO)2.
(c). Reaccin de coloracin con agua de cal.
Fig. 6 Reaccin de coloracin de saponina d) Reaccin de coloracin de KMnO4
(e) Reaccin de coloracin de K4[Fe(CN)6] +
NH4OH. (f). Reaccin de coloracin con
gelatina

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3.2. Anlisis cromotogrfico

a) Taninos hidrolizables IV.- DISCUSIN

En el presente estudio se obtuvo el extracto

hidroalcoholico de Origanum vulgare L,
realizando posteriormente el tamizaje
fitoqumico donde se observaron resultados
positivos para la presencia de carbohidratos,
taninos, antraquinonas, alcaloides y
compuestos fenlicos.
Segn Cynthia Cristina Arcila-Lozano, el
Origanum vulgare, nativo de Europa, entre las
especies de Origanum se encuentran como
componentes principales el limoneno, el !-
cariofileno, el r -cimeno, el canfor, el linalol, el
carvacrol y el timol. Su contenido depende de
la especie, el clima, la altitud, la poca de
recoleccin y el estado de crecimiento. Algunas
propiedades de los extractos del organo han
5.3
Rf S.T. cido glico = =0.98 sido estudiadas debido al creciente inters por
5.4
sustituir los aditivos sintticos en los
5.2 alimentos.6 El organo tiene una buena
Rf M.P. organo= =0.96 capacidad antioxidante y antimicrobiana contra
5.4
microorganismos patgenos como Salmonella
typhimurium, Escherichia coli, Staphylococcus
b) Flavonoides aureus, Staphylococcus epidermidis, entre
otros. Estas caractersticas son muy
importantes para la industria alimentaria ya que
pueden favorecer la inocuidad y estabilidad de
los alimentos como tambin protegerlos contra
alteraciones lipdicas. Existen adems algunos
informes sobre el efecto antimutagnico y
anticarcinognico del organo sugiriendo que
representan una alternativa potencial para el
tratamiento y/o prevencin de trastornos
crnicos como el cncer.
Segn Diofanor Acevedo, se ha analizado
qumicamente el organo (Origanum vulgare)
cultivado en Coloso, departamento de Sucre
en Colombia para determinar la variabilidad en
la composicin qumica causada por las
condiciones climticas de la regin. Para ello se
emple cromatografa de gases acoplada con
espectrometra de masas. Se identific como
compuesto mayoritario al timol con 67,51%,
seguido de p-cimeno, -terpineno, cariofileno,
oxido de cariofileno, trans--bergamoteno,
5.2 eugenol, y - bergamoteno, con 11.66%,
Rf S.T. quercetina = =0.98
5.3 5.51%, 5.38%, 2.22%, 1.65%, 1.49%, y 1.32%
respectivamente. El Timol le otorga al organo
5.1
Rf M.P. organo= =0.96 mltiples propiedades antioxidantes,
5.3 microbiolgicas y conservantes de alimentos,
adems de potenciales aplicaciones en
perfumera y cosmtica. 7

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Segn Arnoldo Flores Hernndez se tomaron
seis muestras de tres bloques por cada
tratamiento de humedad a las cuales se les
midi altura, cobertura, nmero de
ramificaciones, peso fresco, peso seco y
materia seca til (producto). Los resultados
mostraron diferencias significativas superiores
en las variables consideradas en las plantas
bajo cultivo, con respecto a las silvestres. Sin
embargo, la parte vegetal til de los individuos
en condiciones de riego es afectada por la
mayor altura, cobertura y nmero de ramas.
As mismo con el tratamiento de humedad de
2 /3 de la capacidad de campo del suelo, se
obtuvo elmejor resultado. Segn un estudio
Origanum vulgare presenta compuestos
fenlicos con actividad antioxidante,
antimicrobiana, antiparsita y estrognica,
como el carvacrol y timol. El timol es utilizado
por va oral en el tratamiento de la bronquitis,
tos ferina, dolor de garganta, diarrea,
dispepsia, gastritis, desrdenes de la piel,
desinfectante urinario y antihelmntico. De
igual forma, en cuanto a la obtencin de
alcaloides y flavonoides (como apigenina y la
luteolina), esto coincide con el estudio de
Esquivel et al. quien seala que presentan
efecto contra E. coli y Lactobacillus casei.
La presencia de antraquinonas en Origanum
vulgare no presenta alguna fuente de
referencia, sin embargo, se seala que son el
grupo ms numeroso de quinonas naturales y
son la base de una importante cantidad de
colorantes.8
V.- CONCLUSIONES
Se Identific constituyentes qumicos
presentes en el extracto hidroalclico
de Origanum vulgare L. a travs de
una marcha fitoqumica
Se separ los constituyentes
qumicos mediante tcnicas
cromatogrficas
VI.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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aromticas y especias. Espaa: Rinbook
Impres; 2007, p.101
2. Luz M., Plantas medicinales espaolas:
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malacitana. 2002, 27: 273-280
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Guadalupe Loarca-Pia, Salvador
Lecona-Uribe y Elvira Gonzlez de
8 Facultad de Farmacia y Bioqumica
UNMSM | 2017
Meja. El organo: propiedades,
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mouse embryos. Rev. peru biol. . 2010,
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Hernndez Herrera. Produccin y
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Chapingo. Rev. Mex. Cien. For. Vol. 2
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un proceso de obtencin y caracterizacin
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Universidad Central de Ecuador, Facultad
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qumico dirigido y estudio del efecto
antimicrobiano in vitro de algunos
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mexicana. Nuevo Len: UANL, Facultad
de Ciencias Qumicas; 2010.
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9 Facultad de Farmacia y Bioqumica

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