BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS

EVALUACION DE LA BIODEGRADACION AEROBIA Y ANAEROBIA DE

HIDROCARBUROS EN TIERRAS DE TALLERES AUTOMOTRICES MEDIANTE LA
UTILIZACION DE MICROORGANISMOS PRESENTES EN LOS CULTIVO DE
YOGURT: Lactobacillus Bulgaricus y Streptococcus Thermophilus

Gutierrez Cansaya Marco Antonio, Chilo Quispe Ivoneth, Ccama Arotaipe Julio
Cesar, Suni Huanqui Jose y Chire Iquiapaza Angie Lizbet,

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTN DE AREQUIPA

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Notas del autor
Gutierrez Cansaya Marco Antonio, Chilo Quispe Ivoneth, Ccama Arotaipe Julio
Cesar, Suni Huanqui Jose y Chire Iquiapaza Angie Lizbet; Escuela de Ingeniera
Qumica, Universidad Nacional San Agustn de Arequipa

Este Proyecto ha sido Financiado por los Propios Alumnos

La Correspondencia Relaciona a este Proyecto de Investigacin va Dirigida a :Ing.

Quequezana Marcia

Universidad de Arequipa, Santa Catalina 117-Arequipa-Peru

Contacto: crazy_aqp_123@live.com
BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS

INTRODUCCIN

El suelo es uno de los ms grandes recursos que tiene el ser humano en el planeta tierra, sin el cual
no podemos producir vida ni continuarla por ello la contaminacin a causa de la negligencia de la
mano del hombre por el crecimiento demogrfico y la industrializacin, ha causado la
contaminacin indiscriminada de los suelos y sedimentos a causa de las millones de toneladas de
productos qumicos orgnicos como los hidrocarburos. El 1 % del crudo producido mundialmente
ingresa al ambiente ya sea por derrames, eliminacin de residuos o volatilizacin, esto equivale a
266 millones de barriles producidos anualmente.
En este trabajo de investigacin consideramos como material de estudio los suelos contaminadas
por disel el cual tiene mayor demanda debido al crecimiento de los medios de transporte llmese
carros, aviones, etc. el disel es utilizado comnmente para el transporte y la limpieza de
maquinarias, lo preocupante es que est compuesto por una mezcla compleja de n-alcanos, iso y
ciclo alcanos e hidrocarburos aromticos estos son un peligro por su potencial carcinognico y
mutagnico.
Esta investigacin hecha por estudiantes de la Escuela Profesional de Ingeniera Qumica busca
disminuir en la medida posible la contaminacin de los suelos de una manera natural y efectiva sin
producir ms contaminacin, por ello utilizamos microorganismos biodegradadores los cuales
estn en contacto con los contaminantes, en el cual nosotros controlamos el crecimiento
microbiano, con parmetros importantes como nutrientes, oxigeno, concentracin de
microorganismos.
Existen diversas tecnologas para la eliminacin de hidrocarburos, stas presentan ciertas
limitaciones. Los mtodos fisicoqumicos y trmicos pueden remover, alterar, aislar o transformar
el contaminante a un producto menos peligroso. Los mtodos trmicos son muy eficaces para
eliminar hidrocarburos del suelo, pero una de las desventajas principales es que generan cenizas y
toxinas que pueden ser expulsadas a la atmsfera sino se hace un lavado y purificacin de gases.
Adems, este proceso deja al suelo como un residuo inerte. Por otra parte, su alto costo y consumo
de energa hacen a esta tecnologa inaplicable en pases subdesarrollados.
En contra parte, la biorremediacin es un proceso viable para remover los hidrocarburos del
ambiente y dependiendo del tipo de hidrocarburo, la remediacin se logra en das o meses.
Adems, de ser un tratamiento econmico, es amigable con el ambiente, al transformar los
compuestos txicos en compuestos no peligrosos o menos peligrosos.
BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS

INTRODUCTION

The soil is one of the greatest resources that has the human being on planet earth, without which we
can not produce life and therefore, continue pollution because of the negligence of the hand of man
by population growth and industrialization, it has caused the indiscriminate pollution of soils and
sediments because of millions of tons of organic chemicals such as hydrocarbons. The 1% of the
world's produced crude enters the environment either by spills, waste disposal or volatilization, this
is equivalent to 266 million barrels produced annually.

In this research we consider as study material soils contaminated by diesel, which has higher demand
due to the growth of the means of transport called cars, airplanes, etc. Diesel is commonly used for
transportation and cleaning of machinery, the concern is that it is composed of a complex mixture of
n-alkanes, iso and cycloalkanes and aromatic hydrocarbons these are a hazard because of their
carcinogenic and mutagenic potential.

This research was done by students of the Professional School of Chemical Engineering, seeks to
reduce the contamination of soils in a natural and effective way without producing more
contamination, so we use biodegradable microorganisms which are in contact with pollutants and we
control microbial growth, with important parameters such as nutrients, oxygen, concentration of
microorganisms.

There are several technologies for the elimination of hydrocarbons, these have certain limitations.
Physicochemical and thermal methods can remove, alter, isolate or transform the contaminant into
a less hazardous product. Thermal methods are very effective at removing hydrocarbons from the
soil, but one of the main disadvantages is that they generate ashes and toxins these can be expelled
into the atmosphere if we dont washing and purifying the gas previusly. In addition, this process
leaves the soil as an inert residue. On the other hand, its high cost and energy consumption make this
technology inapplicable in underdeveloped countries.

In contrast, bioremediation is a viable process to remove hydrocarbons from the environment and
depending on the type of hydrocarbon, remediation is achieved in days or months. In addition, being
an economic treatment, it is environmentally friendly, by transforming toxic compounds into non-
hazardous or less dangerous compounds.
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PALABRAS CLAVES: Biodegradacin, hidrocarburos, microorganismos del yogurt, tierras

contaminadas.

KEYWORDS:, Biodegradation, hydrocarbons, yogurt microorganisms, contaminated soil.

OBJETIVO GENERAL

Evaluar la biodegradacin aerobia y anaerobia de hidrocarburos en tierras de talleres automotrices

mediante la utilizacin de microorganismos presentes en los cultivo de yogurt: lactobacillus
bulgaricus y streptococcus thermophilus.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Cuantificar la cantidad de hidrocarburo degradado por la accin de las bacterias lcticas.

Determinar en qu condicin de trabajo (aerobio o anaerobio) la bacteria es ms eficiente.

MARCO TEORICO

BIORREMEDIACIN

La biorremediacin es una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los microorganismos

(fundamentalmente bacterias, pero tambin hongos y levaduras) para transformar contaminantes orgnicos
en compuestos ms simples poco o nada contaminantes, y, por tanto, se puede utilizar para limpiar terrenos
o aguas contaminadas.

Es conocido que los microorganismos indgenas tienen la capacidad de adaptarse y eventualmente degradar
cualquier compuesto orgnico natural sin asistencia del hombre; sin embargo, esta adaptacin requiere la
presencia de condiciones ambientales apropiadas tales como el pH, temperatura, el aceptor final de
electrones (que en procesos aerbicos es el oxgeno), concentraciones de contaminante no txicas para los
microorganismos y adecuadas condiciones de humedad y conductividad del medio, entre las ms
importantes.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES

6 Placas Petri
6 Tubos de ensayo
4 Baldes de plstico de 4 litros
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1 Matraz de 250ml
1 Probeta graduada de 1 litro
6 Jeringas
1 balanza analtica
1 autoclave
1 incubadora
1 vela
1 cinta masking
1 bagueta
1 papel craft, algodn, pabilo

INSUMOS

2 Kg aprox de tierra contaminada con hidrocarburos.

Inoculo ( cultivo de yogurt)
1 lt de Leche de vaca
Agar nutritivo
Agua destilada
Suero fisiolgico

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Para la determinacin de la biodegradacin de hidrocarburos por las bacterias de cultivo de Yogurt,

procedemos de la siguiente manera:

Se recolecta aproximadamente 2.5 kilogramos de tierra contaminada (localizada en un centro

automotriz del distrito de Cerro Colorado), tomamos 200g y llevar a analizar al laboratorio
(laboratorio de la LABIVSERV) para determinar la concentracin inicial de hidrocarburos
presentes en la muestra.
Se procede a la activacin de la bacteria.
Se realiza el conteo celular utilizando el mtodo de conteo en placa para determinar las unidades
formadoras de colonias.
Se procede a la inoculacin de la biomasa bacteriana en la muestra de tierra contaminada siguiendo
el siguiente orden.

Pasado los dos das se vuelve a agregar los volmenes indicados de las bacterias y las dejamos
actuar dos das ms.
Se toma 200 gramos de la tierra final y llevar a analizar.
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Tabla N1.

Muestra total de inoculo utilizado.

MUESTRA INOCULO 1 AGUA 1 INOCULO 2

1 30 ml 120 ml 15 ml
2 70 ml 80 ml 35 ml
3 30 ml 120 ml 15 ml
4 70 ml 80 ml 35 ml
Notas: muestra total de inoculo=300ml

ACTIVACION DE LA BACTERIA

Calentar en bao mara el cultivo hasta una temperatura ptima para el microorganismo, que es de
35C a 40C.

Pasteurizar un litro de leche (70C), trasvasar a un recipiente con tapa y dejar enfriar hasta 40C,
agregar el cultivo, tapar el recipiente y llevar a la incubadora o abrigar durante 2 horas
aproximadamente. Sembrar.

RECOJO DE TIERRA CONTAMINADA DEL TALLER

Recolectar aproximadamente 2 Kg de tierra contaminada de un taller automotriz, el cual haya estado en

funcionamiento de dos aos a ms. Colocar la tierra colectada en una bolsa completamente cerrada.

AGREGADO DE LAS BACTERIAS

Tomar 500 g de tierra proveniente del taller automotriz y ponerla en un balde. De 4.litros de
volumen.
Agregar el volumen necesario para cada una de las pruebas al balde con tierra, formando una
pequea torta.
Tapar hermticamente los medios que sern anaerobios, insertando previamente una vela
encendida.
Pasado los dos das, se vuelve a agregar los volmenes indicados de las bacterias y las dejamos
actuar dos das ms.
Tomar 200 gramos de la tierra final y llevar a analizar.

CONTJE DE CELULAS VIABLES

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De la solucin de microorganismos tomar 1 ml y hacer las diluciones correspondientes para el

conteo de Unidades formadoras de colonia. (UFC) (ver tcnica de dilucin).

De cada dilucin realizada, sembrar en placas Petri, las cuales contienen agar Nutritivo.

Dejar 24 horas en la incubadora, posteriormente realizar el conteo en placa de las colonias que se
formaron.

RESULTADOS

CONTEO DE CLULAS VIABLES

Para saber el nmero de bacterias que se sembr en las muestras se determin el nmero de UFC al
momento de sembrar, obtenindose:

Dilucin 3 (10-3) = 410

Dilucin 4 (10-4) = 298 298 x 1/10-4 = 2.98 x 10+6 cel/ml

Dilucin 5 (10-5) = se esparci

El nmero de cel/ml que se sembr en el inoculo es de 2,98 x 10+6

El mtodo utilizado para el anlisis de hidrocarburos presentes en tierra es el mtodo de extraccin por
solventes (mtodo soxflet).

Obtuvimos como resultados de la biodegradacin:

RECOJO DE LOS RESULTADOS DE MUESTRA

Tabla n2

Recojo de resultados de anlisis de tierra

Numero X1 X2 Disel Medio inoculo UFC Disel final

Muestra inicial (mililitros) (x10+5) (ppm)
(ppm)
1 + + 7350 anaerobio 30 894 7265.55
2 + - 7350 anaerobio 70 2086 7034.45
3 - + 7350 Aerobio 30 894 7315.25
4 - - 7350 Aerobio 70 2086 7221.31
Nota: El resultados con mayor cantidad de degradacin de hidrocarburos obtenido es la muestra N2
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Tabla N3

Resultados del anlisis de tierras en porcentaje

Numero Medio UFC Diesel Porcentaje

Muestra (x10+5) degradado de
(ppm) degradacin (%)

1 anaerobio 894 84.45 1.15

2 anaerobio 2086 315.55 4.29
3 Aerobio 894 34.75 0.47
4 Aerobio 2086 128.69 1.75
Nota: se muestra mayor porcentaje de degradacin de hidrocarburos en la muestra N2 con un
4.29% degradado.

DISCUSIN DE RESULTADOS

De acuerdo a los datos obtenidos en la tabla N2 podemos decir que las bacterias lcticas presentes
en el cultivo de Yogurt no degradan efectivamente los hidrocarburos presentes en la tierra
evaluada..
La muestra que tiene mayor variacin de hidrocarburos por biodegradacin es la N2 con una
disminucin de 315.55 ppm en medio anaerobio, en la cual se produjo una reduccin de 4.29 % y
con un mnimo valor de variacin de 34.75 ppm de la tercera muestra en medio aerobio, que
expresado en porcentaje es un 1.75% de biodegradacin.
El tiempo transcurrido para la biodegradacin de hidrocarburos, fue de cuatro das a condiciones
ambientales, con una masa de 500 g de tierra contaminada, se observ que el volumen de tierra
trabajado era mnimo ya que este se secaba rpidamente no permitiendo el desarrollo del
microorganismo, si se hubiera trabajado en un mayor intervalo de tiempo probablemente se hubiera
obtenido una mayor biodegradacin.

CONCLUSIONES

Se obtuvo un 4.29 % de biodegradacin de tierras contaminadas por los microorganismos presentes

en el cultivo de Yogurt, en un tiempo de 4 das.
Las muestras tratadas en medio anaerobio (1 y 2) obtuvieron un mayor grado de degradacin de
hidrocarburos, mientras que los tratados en medio aerobios tuvieron un bajo rendimiento (3 y 4).
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BIBLIOGRAFIA

Tesis DANIELA MARGARITA COBOS CHONG: AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE

BACTERIAS DEL SUELO DEL CAMPO PETROLERO MIGUEL ALEMAN, PARA SU POSIBLE USO
EN LA REMEDIACION DE SUELOS CONTEMINADOS POR HIDROCARBUROS.

Ocampo, J., Robles. (2002). El compostaje como mtodo de bioremediacin de suelos contaminados con
hidrocarburos. Tesis UNALM. Lima, 81 pp.

Juzcamayta J. (2007). Biorremediacin de suelos contaminados mediante el uso de organismos vivos. Lab.
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Cobos Chong .D. M. (2014) Aislamiento e Identificacion de Bacterias del Suelo del Campo Petrolero
Miguel Aleman, para su Posible uso en la Remediacion de Suelos Conteminados por Hidrocarburos.

Garces.G.L. (s.f) Fermentacin Lctica. (https://www.biomanantial.com/propiedades-del-yogurt-y-sus-

efectos-en-la-salud-de-la-piel-a-1209-es.html)

WIKIPEDIA: Fermentacin Lctica.

WIKIPEDIA: Cultivo de Yogurt.