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toor
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u l
oon
n
Tpicos em Validao de M todos

AA C
C
F &
&
BBF
D r O scar B ahia Filho
B F& A C onsultores

Tpicos em Validao de Mtodos BF&A_ 1


I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Sistema de Gesto
no Lab

s
s
Barreira 1

ee
Confiabilidade Instrumental

t
toor
r
s u
ull
o n
n s 1. Reconhece Padres,

Barreira 2
C
C o 2. Observa e mantm

AA
Gargalos da Anlise
sob controle,

&
&
3. Melhora

F
BBF
Barreira 3
Significncia do resultado

Barreira 4 Gestor
Cumprimento dos requisitos legais

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Como os de fora pensam
que

Mtodo Analtico

rees
s
o r
Sistema Analtico

o
Como realmente

u
ullt
t
ss
Qualificao Instrumental Rplica Experimental

Avaliao
oon
n 9 padro

C
C
Ens aio Lo c al

AA
s 9 Matriz
Adequado? 9 Analitos

F &
& n Adequado?
n
Otimiza Mtodo

BBF
Ajusta / s
Verifica
Es tabilidade
9 Matriz
9 Analitos

Anlise de Rotina

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Por que validar?

s
s
9 A validao do mtodo feita para garantir que a metodologia

ree
analtica exata, reprodutvel e flexvel sobre uma faixa especfica

o r
t o
que uma substncia ser analizada.

s u
ullt
s
9 uma avaliao que garante a conformidade com as exigncias

n
n
legais ou fim proposto (interesse de terceiros) do mtodo analtico

oo
AA C
C
O processo que prove evidncia documentada de que realiza aquilo

&
&
para o qual est indicado para fazer.

F
BBFObstculo: Linguagem Metrolgica x Linguagem Cientfica

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Definies

ICH*

ee
O objetivo da validao de um mtodo analtico demonstrar que

r s
s
adequado para o seu propsito.

l t
toor
s uu l
*Internacional Conference on Harmonization of Technical Requiriments for Registration of Pharmaceuticals for

s
n
Human Use

Coon
USP**
AA C Para
Para quem?
quem?

&
&
Validao de um mtodo analtico o processo que fornece uma

F
BBF
evidncia documentada, atravs de estudos de laboratrio, de que realiza
aquilo para o qual indicado para fazer.
A performance expressa em termos de caractersticas analticas.

**United States Pharmacopeia 24

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Credenciamento / Avaliao

99 Reconhecimento
Reconhecimento formal
formal da
da competncia
competncia de
de um
um laboratrio
laboratrio para
para realizar
realizar
ensaios
ensaiosespecficos
s
especficos
99Voluntrio
Voluntrioeeaberto
abertoaaqualquer
qualquertipo
tipode
delaboratrio
laboratrio
r
rees
llt
too
nssu
u
Coon
Um
Um laboratrio
de
laboratrio de
de seus
de ensaios,
ensaios, deve
seus relatrios/laudos.
relatrios/laudos.
deve ter
ter meios
meios para
C
para assegurar

AA
assegurar aa qualidade
qualidade

Os
Os principais
principais meios
&
&
meios so:
so:

F
9 BBF 9
9
usar mtodos validados,
ter POPs de controle interno da qualidade,
9 participar de programas de ensaios de proficincia, e
9 estar credenciado por Norma nacional/internacional

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Avaliao para Credenciamento

rees
s
r
9 Exame de um laboratrio de calibrao ou ensaio para

l t
too
determinar a conformidade com os requisitos de credenciamento

l
u
u
previamente estabelecidos

n
nss
9Requisitos do Credenciamento*
C
Coo
NBR ISO/IEC 17025
AA
&
&
NIT DICLA 028 (BPL)

F
BBF
NIT DICLA 083 (Lab. Clnicos)
outros

* Todas as normas fazem aluso a: Validao de mtodos e Estimativa da Incerteza da medida

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Protocolos de Validao

9 EuraChem,
rees
s
9 ICH

l t
toor
9 US FDA
9 US EPA
ssu
u l
9 ICH
oon
n
IUPAC (Interdivisional Working Party on
Harmonisation of Quality Assurance
9 USP
9 FAO/AIEA
9 Codex, AA C
C Schemes for Analytical Laboratories)

9 MAPA (CLAVE),

F &
&
BBF
9 MS (ANVISA)
9 MMA (IBAMA)....

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Processo de Validao

e s
s
Mtodo Analtico

r e
Software

l t
toor
u
u l
Validao
ss
oon
n Critrios Conformidade

AA C
C
Hardware

F &
&
validao. BBF
9 A qualificao instrumental (IQ) uma etapa anterior ao processo de

9 Antes de validar um mtodo, deve-se certificar que todos os esforos de


otimizao j tenham sido esgotados para as condies locais do ensaio.

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Elementos da validao

rees
s
9 Especificidade/ seletividade (interferncia)

l t
toor
l
9 LOD
9 LOQ

nssu
u
9 Faixa (Linearidade)

Coon
C
9 Exatido (recuperao)

AA
9 Preciso ( Repetibilidade, Preciso intermediria e

&
&
Reprodutibilidade)

F
BBF
9 Robustez (resistncia a variaes intencionais)
9 Aplicabilidade (nvel)

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Plano de Validao

s
Elemento de validao

s
1. Linearidade e Faixa

o r
ree
- prepare 5 nveis de solues padro

ullt
t o Tarefa experimental
- adicione 0, 50, 75, 100 e 150% TD

n
nssu
o
- mede 3 x cada

C
C o
AA
Critrios de aceitao
- grfico adequado
- RSD 10%

F &
&
BBF
- modelo de Regresso
- mdia, SD e RSD%
- LOD e LOQ (instrumental)
Clculos

- Limite superior (LSC) e inferior da curva (LIC)

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Plano de Validao

Elemento de validao

s
s
2. Exatido

o r
ree
- prepare 12 rplicas de placebo

ullt
t o
Tarefa experimental
- fortifique 0, 80, 100 e 120% TD
- mede 3 x cada
n
nssu
C
Coo Critrios de aceitao
- 80 % recuperao 120
AA
&
- RSD (mdio) 15%

F &
BBF
Clculos
- % recuperao
- mdia, SD e RSD%
- LOD e LOQ (mtodo)

Tpicos em Validao de Mtodos BF&A_ 12


I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Plano de Validao

s
Elemento de validao

s
3. Seletividade/Especificidade

o r
ree
- prepare 5 rplicas de placebo

ullt
t o
Tarefa experimental
- mede 3 x cada

n
nssu
- mdia 33% do LOQ (mtodo)
C
Coo
AA
Critrios de aceitao
- RSD 15%

F &
&
BBF
- Concentrao equivalente do placebo
- mdia, SD e RSD%
Clculos

Tpicos em Validao de Mtodos BF&A_ 13


I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Plano de Validao

s
Elemento de validao

s
4. Preciso (repe e repro)

o r
ree
ull
- prepare 5 rplicas de placebo (2 labs mnimo)
t
t o Tarefa experimental
- fortifique com 100% LOQ

n
nssu
o
- mede 3 x cada

C
C o
AA
Critrios de aceitao
- RSD 15%

&
- 80 % recuperao 120

F &
BBF
- % de recuperao
- mdia, SD e RSD%
- teste de significncia de Fisher
Clculos

Tpicos em Validao de Mtodos BF&A_ 14


I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Plano de Validao

s
Elemento de validao

s
5. LOQ e LOD

o r
ree
- prepare 5 rplicas de placebo

ullt
t o
Tarefa experimental
- fortifique 100% TD

n
nssu
o
- mede 3 x cada

C
C o
AA
Critrios de aceitao
- 80 % recuperao 120

&
&
- RSD (mdio) 15%

F
BBF
- % recuperao
- mdia, SD e RSD%
Clculos

- LOD e LOQ (mtodo)

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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Plano de Validao

Elemento de validao
6. Robustez*

rees
s
l t
toor Tarefa experimental

l
- Nas 12 rplicas do placebo e 5 nveis de
soluo padro, medidas 3 x cada.

nssu
u
Coon
C
- nvel de treinamento do tcnico, Variaes intencionais

AA
- diferentes dias,
- diferentes fornecedores,

&
&
- diferentes laboratrios,

F
- pequenas mudanas nas etapas do mtodo

BBF
- etc.

- dependem das variaes Clculos

*Planejamento experimental (arranjo fatorial) minimiza esforos e promove


informaes quanto a robustez.
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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Testes Estatsticos

Usados para facilitar a tomada de decises, evitando as subjetivas, os


mais comuns so:

rees
s
9 Student

l t
toor
l
Distribuio normal dos valores experimentais Linearidade e Faixa,
Robustez

nssu
u
9 Cochran

Coon
C
Testa a homogeneidade (varincia) dos dados Linearidade e Faixa,

AA
Exadido, Preciso
9 Dixon

F &
&
Descobre dados outliers se o teste de Cochram for falso Linearidade e

BBF
Faixa, Exadido, Preciso
9 Fischer
Compara a varncia de duas populaes Linearidade e Faixa, Exadido,
Preciso, Robustez

Tpicos em Validao de Mtodos BF&A_ 17


I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
LOD e LOQ

u. de Resposta
s
s

ar
e

ne
Inclinao

Li
r
a

r
a
ix
o
Fa
ullt
t o
S/N > 10 e RSD < 10% LoQ

n
nssu
S/N > 3
LoD

o
Interseo

o
b

IUPAC
AA C
C u. de Concentrao

F &
&
YL= yB + k * SB

BBF
YL a menor leitura diferente do branco, yB a mdia das medidas do branco, SB o desvio
padro do branco e k fator (2,3, etc..)

Referncia
LD = 3 * S / a * C LQ = 10 * S / a * C

S o desvio padro da medida, a a inclinao da curva de calibrao e C a concentrao usada


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