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Concepto de fijacin.

- Se entiende por fijacin toda manipulacin sobre un ser


vivo, o bien sobre parte de l, que tiene por objeto mantener toda su arquitectura
tanto estructural como qumica lo ms inalterada posible, de tal forma que sus
componentes celulares mantengan las mismas caractersticas que cuando dicho
ser o tejido estaban vivos. es claro que la mayora de la estructura celular se debe
a la presencia de protenas y por tanto todo proceso de fijacin debe tener en
cuenta la naturaleza qumica de stas, de forma que el fijador no reacciona con
las mismas. Es cierto que existen componentes muy distintos ms o menos
lbiles que tambin se encuentran formando parte de la estructura celular, pero
son las protenas las que nos van a reflejar fundamentalmente si un fijador es
bueno o no bueno. Por otra parte, un fijador prepara tambin de alguna forma el
tejido o la clula para la posterior manipulacin, bien en el proceso de inclusin,
actuando como mordiente o como fijador del colorante dependiendo de su
naturaleza, por eso es importante la eleccin del fijador.

Hay razones por las que los tejidos vegetales no deben fijarse como los animales.
Muchas veces las plantas estn cubiertas de sustancias creas en sus cutculas que
son hidrfobas e impiden la penetracin del fijador. Por otra parte el bajo
contenido proteico de las clulas vegetales, en comparacin con ls animales,
vuelve al glutaraldehido (un componente de un fijador que se tratar ms
adelante), menos efectivo en sus enlaces curzados con la protena. As mismo la
pared de las clulas vegetales supone una barrera parcial a la penetracin del
mismo

Un fijador por el contrario inmoviliza y estabiliza los elementos celulares, bien


sea por precipitacin de las protenas y dems sustancias celulares activas, ya sea
mediante un bloqueo qumico de su actividad, siendo estos fenmenos
permanentes.

En resumen, un fijador tiene como misin:

* Evitar la autolisis debida a los propios enzimas.

* Proteger el corte o la pieza del ataque bacteriano.

* Insolubilizar los componentes celulares que se desean estudiar.

* Preparar a las distintas estructuras para posteriores tratamientos.

* Evitar la disolucin de determinados compuestos en el fijador.

* Conservar o provocar determinadas reacciones qumicas.


* Mantener las propiedades fsicas.

En cualquier caso hay caractersticas de los fijadores que tenemos que tener en
cuenta antes de su uso:

Velocidad de penetracin. El proceso de fijacin ha de ser rpido y la velocidad


de difusin de la sustancia fijadora en los tejidos es un factor determinante. Este
parmetro condiciona el tamao de la pieza que queramos fijar, ms pequea cuanto
menor sea la velocidad de difusin del fijador empleado, y tambin determina el tiempo
de fijacin, mayor cuanto menor tiempo de difusin.

Velocidad de fijacin. Esta caracterstica no dependen de la velocidad de


difusin sino de las propiedades qumicas del fijador y condiciona el tiempo que debe
permanecer el tejido en contacto con el fijador.

Endurecimiento. Los fijadores generalmente endurecen los tejidos, lo cual


depende del tipo de fijador y del tiempo que el tejido haya estado expuesto a l.

smosis y pH. Es indispensable evitar cambios de volumen en la clulas


producidos por una osmolaridad del fijador diferente a la del tejido. A las alteraciones
artificiales producidas durante el procesamiento histolgico se les llama artefactos. Por
tanto, en muchas ocasiones hay que equilibrar la osmolaridad de las soluciones
fijadoras y la de los tejidos a fijar. No es necesario aadir sustancias complejas. Por
ejemplo, para los tejidos de animales terrestres basta con aadir 0.9 % de cloruro
sdico. Son sales que no afectan a la capacidad del fijador. Normalmente se suelen
usar soluciones tamponadoras a un pH semejante al del tejido e isoosmticas con
dicho tejido.

Efecto mordiente. Algunas estructuras tisulares son difciles de teir puesto que
tienen poca apetencia por los colorantes. Esta apetencia puede ser incrementada con
un tratamiento previo. Algunos fijadores, adems de fijar, modifican qumicamente a
ciertas estructuras celulares para que posteriormente puedan unirse a ellas los
colorantes. Este este tipo de modificacin qumica se le denomina efecto mordiente.

Artefactos. Los procesos de fijacin pueden acarrear alteraciones tisulares como


variaciones morfolgicas, cristalizacin de compuestos, desplazamiento de sustancias,
etctera. Estos cambios pueden producirse por las caractersticas del fijador o por un
mal uso de ste. En cualquier caso deben tenerse en cuenta para no describir como
caractersticas tisulares lo que es un artefacto introducido durante la fijacin. Una
consecuencia frecuente son las retracciones o encogimientos de la muestra, lo cual se
puede comprobar midiendo la muestra antes y despus de la fijacin. No debe
asumirse que las posibles retracciones afecten a todos los tejidos por igual.

los ms comnmente utilizados para las plantas superiores son el alcohol 70% y el FAA, que es una
mezcla de 90 ml de alcohol 70%, 5 ml de cido actico y 5 ml de formol al 4%. Para las algas se
utiliza como fijador una mezcla de agua de mar y formol al 5 %; para los hongos se utiliza una
solucin acuosa de glicerina al 10% a la que se le aaden unas gotas de fenol. El tiempo de fijacin
depende del material y del fijador, aunque, por lo general, se recomienda un mnimo de 24 horas.