ESPECTROFOTOMETRA DE UV-VIS

Carlos Mera1, Viviana Pazmio1, Diego Bastidas1

1
Estudiantes de pregrado del programa de biologa de la Universidad de Nario (Colombia)

Resumen
Se realizaron diluciones de KMnO4 de 5, 10, 15, 20, 25 ml que se obtuvieron desde
una solucin stock de 0,0002M para el anlisis de espectrofotometra en un
espectrofotmetro de uv-visible una vez obtenidas las absorbancias en cada una de
las concentraciones dando como un mximo de absorbancia 0.441 en 525 de longitud
de onda se procedi por medio de la ecuacin a hallar la concentracin desconocida
de KMnO4

Introduccin
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la
concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas que
absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida dependen de forma lineal de la concentracin. Adems es usada para
identificar compuestos por su espectro de absorcin y conocer la concentracin de un
material o sustancia, esto ltimo permite, seguir el curso de reacciones qumicas y
enzimticas as como determinar enzimas y protenas incluso cidos nucleicos. Para
hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, como ya sabemos es un
equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por medio de una longitud
de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un medio es proporcional a la
concentracin del soluto presente, es entonces as que la concentracin de un soluto
colorido en solucin puede ser determinada en el laboratorio mediante la medicin de
su absorcin de luz a una longitud de onda especfica. Las muestras en estos equipos
se utilizan en estado lquido y se colocan en el compartimiento de las muestras de
celdas transparentes de diferentes tamaos y materiales.
En espectroscopia el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de radiacin
electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm). La regin UV se define como el
rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una regin de energa muy alta. En
la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que corresponde a las
longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el
complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones de
absorcin es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solucin
coloreada. La fuente de radiacin visible suele ser una lmpara de tungsteno y no
proporciona suficiente energa por debajo de 320 nm. La transmitancia(T) de una
sustancia en solucin es la relacin entre la cantidad de luz transmitida que llega al
detector una vez que ha atravesado la muestra y la absorbancia (A) es un concepto
ms relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por
la misma, Ley de Lambert-Beer
Si un haz de luz monocromtico paralelo (I0) atraviesa una cubeta de b cm de paso
ptico, conteniendo una solucin con una concentracin (c) de una especie
absorbente. A causa de la interaccin de la luz y de las partculas absorbentes la
intensidad del haz se atena de I0 a I.
La transmitancia (T) de la solucin es entonces la fraccin de la radiacin incidente
transmitida por la solucin:
T = I / I0 (1)
Tambin puede expresarse en forma porcentual:
T (%) = I / I0 x 100 (2)
A fin de obtener ecuaciones de ajuste lineal se utiliza su transformada logartmica
conocida como absorbancia (A) de una solucin y definida por la ecuacin
A = - log T = log I0/I (3)
La absorbancia de una solucin aumenta cuanto mayor es la atenuacin del haz de
luz, ocurriendo lo inverso en la transmitancia. La absorbancia es directamente
proporcional a la longitud b de la trayectoria a travs de la solucin, y a la
concentracin c de la especie absorbente. Estas relaciones se expresan en la ley de
Lambert-Beer como:
A = bc (4)
= absortividad molar expresada en L mol-1 cm-1
b = distancia recorrida a travs de la solucin (paso ptico) expresada en cm
c = concentracin de la solucin expresada en mol L-1

Metodologa.
Curva de calibracin
De la solucin stock de 0,0002 M de KMnO4 se hicieron las siguientes disoluciones y
se tomaron las cantidades indicadas en la tabla de KMnO4 y luego se aforaron hasta
50 ml con agua destilada:

Concentracin (M) Volumen KMnO4

1x10-4 M 25 mL
8x10-5 M 20 mL
6x10-5 M 15 mL
4x10-5 M 10 mL
2x10-5 M 5 mL

Luego cada concentracin fue llevada a un espectrofotmetro de UV 1800 shimadzu

para su anlisis de espectrofotometra y Se Realiz un barrido de 200 800 nm en el
espectrofotmetro y se determin el valor del mximo de absorcin para el KMnO4.
Referencias
ASTG-4 (2005) Technical guide: UV/Vis Spectrophotometers - Calibration Procedures.
International Accreditation New Zealand (IANZ).
http://www.ianz.govt.nz/publications2/pdfs/ASTG4_UVVIS_Spectro.pdf
Blzquez, J. (2005) Calibracin de espectrofotmetros para la medida directa de
absorbancias. III Congreso Virtual Iberoamericano. Gestin de Calidad en
Laboratorios. http://www.iberolab.org/opencms/opencms/congreso/IberolabIII2005/ind
ex.html
Burke, R.W. y Mavrodineanu, R. (1977) Certification and use of acidic potassium
dichromate solutions as an ultraviolet absorbance standard SRM 935. NBS Special
Publication 26054, NIST, Gaithersburg, MD, USA.
Clare J.L. (2005) Calibration of UV-vis spectrophotometers for chemical analysis.
Accreditation and Quality Assurance 10: 283-288
Skoog D.A, West D.M. 2001. Qumica analtica, sptima edicin, Mc Graw Hill. Mxico.
Skoog D.A, Holler J.F, Nieman T.A.2001. Principios de anlisis instrumental, quinta
edicin,Mc Graw Hill/ Interamericana.
Willar H, Merritt L, Dean J y Settle F. 1991. Mtodos instrumentales de anlisis, Grupo
Editorial Iberoamrica, Mxico.
Official methods of analysis of AOAC International editado por Patricia Conniff. 1998.
Publicado por AOAC International, 16th edicin, volumen 1 y 2, U.S.A.
Estndar Methods for the examination of water and wastewater editado por Arnold E.
Greenbers y otros.1992.Publicado por Publication office American Public Health
Association,18th edicin, U.S.A.
The Merck Index: an encyclopedia of chemical. Drugs and Biologicals. Budavari S.
Guide for safety in the Chemical Laboratory.
Espectrofometra: Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de
biomolculas.http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf