DETERMINACION DE CAFEINA EN UNA BEBIDA ENERGIZANTE POR EL

METODO DE CROMATOGRAFIA DE ALTA EFICIENCIA (HPLC)

IBAEZ ARISTIZABAL, Jhon Alejandro (jhon.800913607@ucaldas.edu.co).

QUINTERO HENAO, Diana Lorena (diana.800920313@ucaldas.edu.co)
Universidad de caldas, Facultad de Ingenieras, Programa Ingeniera de Alimentos
Mayo 2015

RESUMEN

En la prctica se aplic la tcnica de cromatografa para la determinacin de

cafena y utilizando el ultravioleta visible para medir la concentracin de dicho
compuesto en la bebida energizante Peak, En la parte experimental, se realizaron
diferentes ensayos hasta obtener las condiciones ptimas en cada una de las
tcnicas para la determinacin tanto cualitativa como cuantitativa de la cafena,
ayudndonos de la interpolacin en una recta de calibrado confeccionada con
soluciones patrn de cafena de concentracin conocida. Tambin se ensayaron
distintos mtodos de extraccin de la cafena de las diferentes bebidas
energizantes. Despus de poner a punto tanto el mtodo de separacin de la
cafena de la bebida energizante como los dos mtodos analticos utilizados:
HPLC y espectrofotomtrico, se procedi a la determinacin cuantitativa de la
cafena en distintos energizantes comerciales de distinto origen y caractersticas.
Una vez efectuadas todas las determinaciones de cafena en los distintos
energizantes, trabajando siempre con varias repeticiones para poder realizar un
pequeo estudio estadstico de los valores obtenidos y asegurar la fiabilidad de
ellos, se intenta sacar conclusiones analizando los valores de cafena obtenidos y
una de ellas es la demostracin, tal y como preveamos, de que la cantidad de
cafena depende tanto del tipo de muestra, como del pas de origen y de su
procesado, los resultados arrojados para el analisis de cafena en las diferentes
muestras de bebidas energizantes dieron como resultado valores diferentes entre
replicas como lo fue en el caso de nuestra muestra de bebida energizante Peak
que en la rplica 1 dio un valor de 10,423 mg/100ml para la rplica 2 dio un valor
de 6,6139 mg/100ml y por ltimo para la rplica de 5.582 mg/100ml llevando
estos resultados a analizar a los investigadores que hubieron una serie de errores
sistemticos tanto en la preparacin como en el mtodo de obtencin de la
concentracin de la muestra.
 ABSTRACT

In practice chromatography technique applies for determination of caffeine and

using the ultraviolet visible for measuring the concentration of said compound in
Peak energy drink, In the experimental part, various tests were conducted to obtain
optimum conditions in each of techniques for qualitative and quantitative
determination of caffeine, helping interpolation on a calibration curve made from
standard solutions of known concentration caffeine. Various methods of extracting
caffeine from the various energy drinks were also tested. After fine-tune both the
method of separation of caffeine energy drink as the two analytical methods: HPLC
and spectrophotometric, we proceeded to the determination of caffeine in various
commercial energizing of different origins and characteristics. After making all
determinations of caffeine at different energizing, always working with several
repetitions to make a small statistical study of the values obtained and ensure the
reliability of them, we try to draw conclusions analyzing the values of caffeine
obtained and one of them It is proof, as we foresaw, that the amount of caffeine
depends on the type of sample, and the country of origin and processing.

INTRODUCCION atraviesan la fase estacionaria a

La cromatografa engloba a un
conjunto de tcnicas de anlisis
basadas en la separacin de
componentes de una mezcla y su
posterior deteccin. Las tcnicas
cromatogrficas son muy variadas,
pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste en un fluido (gas,
lquido, o fluido supercrtico) que
arrastra a la muestra con un flujo
constante de presin proporcionado
por una bomba, hasta llegar al punto
donde es introducida la muestra.
Siguiendo el flujo de presin la lleva a
una columna donde se encuentra la
fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido.
Los componentes de la mezcla
interaccionan de distinta forma con la
fase estacionaria y con la fase mvil.
De este modo, los componentes
distintas velocidades y se van
separando. Despus de haber
pasado los componentes por la fase
estacionaria y haberse separado,
pasan por un detector que genera
una seal que puede depender de la
concentracin y del tipo del
compuesto.
La cafena es una sustancia que se
encuentra de forma natural en las
hojas, las semillas o los frutos de ms
de 60 plantas, se usa como producto
para dar sabor a gran variedad de
bebidas El consumo de cafena no
est relacionado con el riesgo
de enfermedades coronarias ni
cardiovasculares, no
causa hipertensin crnica ni
aumento persistente de la presin
arterial.
Se define a la cafena como una
droga porque estimula el sistema
nervioso central, lo que aumenta el
estado de alerta. En la mayora de las situado al final de la columna es el
personas, la cafena produce un que garantiza la respuesta de los
aumento temporal de la energa y una componentes que se separan. La
mejora del estado de nimo. En
determinacin de la cafena se suele
estado natural la cafena tiene un
sabor amargo, hoy en da los llevar a cabo mediante tcnicas de
adolescentes obtienen la mayor parte separacin como HPLC
de la cafena de las bebidas (Cromatografa lquida de alta
gaseosas y energizantes. La cafena eficiencia), CE (Electroforesis
no se almacena en el cuerpo pero capilar), TLC (Cromatografa de capa
puede sentirse sus efectos por fina) o GC (Cromatografa de gases).
mximo 6 horas
Estos mtodos realizan la deteccin
La determinacin de cafena ha mediante tcnicas electroqumicas
adquirido mucha importancia, debido (potenciomtricas, conductimtricas,
a su uso en la industria farmacutica amperomtricas, etc.), pticas
y en la industria de alimentos; ya sea (espectrofotomtricas, fluorimtricas,
como ingrediente en la elaboracin etc.) y otras (termoqumicas). La
de refrescos y bebidas energticas o eleccin de una u otra tcnica
por su presencia en productos como
el t, el mate, el cacao y el caf. En depende del problema a resolver, del
todos estos casos, el control de volumen de muestra y de su
calidad del parmetro cafena es concentracin.
necesario en los productos que la
contienen. Por esta razn, se han METODOLOGIA
desarrollado nuevos mtodos
instrumentales para su determinacin RESULTADOS
en diversas matrices, especialmente Tabla 1. reas de los estndares de calibracin
en alimentos. Patrn conc AREA Promedio
La cromatografa no solo permite la entra
cin
separacin de los componentes de 1 10 75,7518 868456 - 81,2985
una mezcla, sino tambin su 2 20 102,8683 109,9757 - 106,422
identificacin y cuantificacin. El 3 40 179,2652 183,0969 - 181,18105
4 60 249,7633 256,0501 - 252,9067
anlisis cualitativo est basado en la 5 80 310,9967 318,0290 312,1739 313,7332
medida de parmetros 6 100 357,045 381,8068 364,6477 367,83316
cromatogrficos (tiempos y
Tabla 2.areas de las bebidas energizantes
volmenes de retencin) mientras
soluciones reas
que el anlisis cuantitativo est Replica 1 Replica 2 Replica 3
basado en la medida de alturas o Gold 442,7260 475,8842 249,5551
reas de picos cromatogrficos que Monster 515,6627 534,2009 274,3119
se relacionan con la concentracin. Red Bull 280,9749 497,4632 194,8018
La columna cromatogrfica y la forma Peak 389,0422 264,4559 229,069
con la que se disea, constituye el Rodeo 279,1829 272,6681 276,4303
corazn de la separacin. El detector, Shark 266,1132 265,6614 496,4209
Shin 10,8145 12,4279 7,7717
Vive 100 326,7819 319,2855 322,1431

Grafica 1: Curva de Calibracin de la cafena

Tabla 3. Concentraciones de las muestras
en ppm
muestra Concentraciones
Replica 1 replica 2 replica 3
CURVA DE CALIBRACION Gold 120.65 130.79 61.58
400 Monster
y = 3.2719x + 48.181 142.96 148.62 61.15
R = 0.997 Red Bull 71.190 137.39 44.83
AREA DEL PICO

300 Peak 104.23 66.139 55.82

CURVA DE
CALIBRACION
Rodeo
200
Shark
Shin
100 Linear (CURVA
Vive 100
DE
0 CALIBRACION)
0 50 100 150 Tabla 4. Concentraciones de la muestra en
CONCENTRACION PPM mg/100ml
muestra Concentraciones
Replica 1 replica 2 replica 3
Gold 12.065 13.079 6.158
= , + ,
Monster 14.296 14.862 6.115
= , Red Bull 7.119 13.739 4.483
Peak 10.423 6.6139 5.582
Muestra de clculo para hallar la
Rodeo
concentracin Shark
Shin
PEAK
Vive 100
REPLICA 1 ( muestra propia)
ANALISIS DE RESULTADOS
,
=
, Para la muestra Gold se puede analizar
que las concentraciones varan un poco
, ,
= = , una de la otra lo cual puede conllevar a
,
que hubo errores en la preparacin de la
REPLICA 2 muestra, ya sea por no haberla dejado el
tiempo suficiente en calentamiento y que
no se hayan eliminado por completo las
, ,
= = , burbujas de oxigeno que estaban
,
presentes en la muestra.
REPLICA 3
Segn la resolucin 4150 de 2009 el
, , contenido mximo de cafena por cada
= = .
, 100 ml de bebida es de 32 mg lo que nos
conlleva a analizar que la muestra Gold
*As se calcula para todas las cumple con los requisitos establecidos en
replicas la normativa colombiana.
Para la muestra de Monster se puede
analizar que dos de las 3
concentraciones son muy similares y
difieren solo en nmeros decimales,
dando solo por diferente a la rplica
numero 3 ya que esta est muy por
debajo de los valores que se obtuvieron
para las rplicas 1 y 2 llevndonos a
analizar que la rplica nmero tres tenia
errores de preparacin o de lectura.

Para la muestra de Red Bull los 3 valores

discrepan mucho el uno del otro dando
como resultado una lectura no uniforme y
esto conlleva a pensar que los
encargados al momento de la
preparacin de la muestra no se
percataron bien de llevar a cabo todos
los pasos para poder prepararla
exitosamente y esto pudo conllevar al
error.

Segn la resolucin 4150 de 2009 el

contenido mximo de cafena por cada
100 ml de bebida es de 32 mg