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Captulo

1
VALTER T. MOTTA
BIOQUMICA BSICA

Introduo
bioqumica
1
Introduo Bioqumica

Objetivos

1 Relacionar a importncia da gua a suas propriedades fsicas e qumicas.


2 Definir pH, pK, tampo e seu significado biolgico.
3 Descrever as propriedades biologicamente importantes do carbono.
4 Descrever a estrutura tridimensional das molculas biolgicas.
5 Descrever as macromolculas como polmeros de pequenas molculas.
6 Descrever as molculas hbridas como conjugados de diferentes classes de
molculas biolgicas.
7 Diferenciar as clulas procariticas das clulas eucariticas

A bioqumica estuda as estruturas moleculares, os mecanismos e


os processos qumicos responsveis pela vida. Os organismos vivos
continuamente efetuam atividades que permitem a sua sobrevivncia,
crescimento e reproduo. Para realizar as suas funes, os seres
vivos dependem da capacidade de obter, transformar, armazenar e
utilizar energia. Sem energia ocorre a perda da vitalidade e a morte
celular. A maioria dos constituintes moleculares apresenta formas
tridimensionais que executam inmeras reaes qumicas entre si
para manter e perpetuar a vida. Em bioqumica, a estrutura, a
organizao e as atividades potenciais dessas molculas so
examinadas na tentativa de elucidar que aspectos promovem as
indispensveis contribuies manuteno da vida.
Os organismos vivos so estruturalmente complexos e
diversificados. Todavia, muitas caractersticas so comuns a todos
eles. Todos fazem uso das mesmas espcies de molculas e extraem a
energia do meio ambiente para as suas funes. Quando as molculas
que compem os seres vivos so isoladas, esto sujeitas a todas as
leis da qumica e da fsica que regem o universo no vivo.
Apesar da grande diversidade dos processos bioqumicos que
envolvem a integrao funcional de milhes de molculas para
manter e perpetuar a vida, a ordem biolgica conservada por vrios
processos: (1) sntese de biomolculas, (2) transporte de ons e
molculas atravs das membranas biolgicas, (3) produo de energia
e movimento e (4) remoo de produtos metablicos de excreo e
substncias txicas.
2 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

A quase totalidade das reaes qumicas que ocorre nos seres


vivos so catalisadas por enzimas protenas com funes catalticas.
As reaes celulares, conhecidas coletivamente como metabolismo,
resultam de atividades altamente coordenadas. Os tipos mais comuns
de reaes encontradas nos processos bioqumicos so: (1)
substituio nuclefila, (2) eliminao, (3) adio, (4) isomerizao e
(5) oxidao e reduo.
Os seres vivos so formados por uma grande variedade de
molculas, tais como: carboidratos, lipdeos, protenas, cidos
nuclicos e compostos relacionados. Alm dessas, outras substncias
esto presentes em pequenas quantidades: vitaminas, sais minerais,
hormnios, etc. Muitos desses compostos se caracterizam por um ou
mais grupos cidos ou bsicos em suas molculas e ocorrem em
soluo aquosa como espcies ionizadas. A ionizao tem lugar em
gua, sendo este um pr-requisito para muitas reaes bioqumicas. O
grau de dissociao ou a extenso da ionizao de um grupo qumico
em particular e, portanto, a reatividade bioqumica da molcula,
amplamente influenciada pela concentrao do on hidrognio da
soluo. Isto aplicvel tanto para as vias metablicas, como
tambm para os catalisadores biolgicos (enzimas), que controlam as
reaes celulares.

1.2 gua: o meio da vida

A gua compe a maior parte da massa corporal do ser humano.


o solvente biolgico ideal. A capacidade solvente inclui ons (ex.:
Na + , K + e Cl ), acares e muitos aminocidos. Sua incapacidade
para dissolver algumas substncias como lipdeos e alguns
aminocidos, permite a formao de estruturas supramoleculares (ex.:
membranas) e numerosos processos bioqumicos (ex.: dobramento
protico). Nela esto dissolvidas ou suspensas as molculas e
partculas necessrias para o bom funcionamento celular. Reagentes e
produtos de reaes metablicas, nutrientes, assim como produtos de
excreo, dependem da gua para o transporte no interior das clulas
e entre as clulas.
As interaes fracas so os meios pelos quais as molculas
interagem entre si enzimas com seus substratos, hormnios com
seus receptores, anticorpos com seus antgenos. A fora e a
especificidade das interaes fracas so grandemente dependentes do
meio onde ocorrem, sendo que a maioria das interaes biolgicas
tem lugar na gua. Duas propriedades da gua so especialmente
importantes para a existncia dos seres vivos:
A gua uma molcula polar. A molcula de gua no-linear
com distribuio da carga de forma assimtrica.
A gua altamente coesiva. As molculas de gua interagem
entre si por meio de pontes de hidrognio. A natureza altamente
coesiva da gua afeta as interaes entre as molculas em soluo
aquosa.

A. Estrutura da gua
A gua uma molcula dipolar formada por dois tomos de
hidrognio ligados a um tomo de oxignio. Cada tomo de
1 Introduo Bioqumica 3

hidrognio possui uma carga eltrica parcial positiva ( + ) e o tomo


de oxignio, carga eltrica parcial negativa ( ). Assim, o
compartilhamento dos eltrons entre H e O desigual, o que acarreta
o surgimento de dois diplos eltricos na molcula de gua; um para
cada ligao H O. O ngulo de ligao entre os hidrognios e o
oxignio (H O H) 104,3 , tornando a molcula eletricamente
assimtrica e produzindo diplos eltricos (Figura 1.1). Ao se
aproximarem, as molculas de gua interagem, pois a carga eltrica
parcial positiva do hidrognio de uma molcula atrai a carga eltrica
parcial negativa do oxignio de outra molcula de gua adjacente,
resultando em uma atrao eletrosttica denominada ponte de
hidrognio. Quatro molculas de gua podem interagir produzindo
uma estrutura quase tetradrica estabilizada por pontes de hidrognio
(Figura 1.1).

O
104.3
Figura 1.1
H Estrutura da molcula de gua.
+
O ngulo de ligao H-O-H
0
104,3 e tanto os hidrognios
como o oxignio possuem cargas
eltricas parciais criando um
H H dipolo eltrico. A parte inferior da
figura mostra quatro molculas de
gua interagindo para formar uma
H O O H estrutura estabilizada por pontes
de hidrognio.
H H
O

O
H H

B. Interaes no-covalentes
As interaes no-covalentes so geralmente eletrostticas; elas
ocorrem entre o ncleo positivo de um tomo e a nuvem eletrnica de
outro tomo adjacente. De modo diferente das ligaes covalentes, as
interaes no-covalentes so individualmente fracas e facilmente
rompidas (Tabela 1.1). No entanto, coletivamente elas influenciam de
modo significativo as propriedades qumicas e fsicas da gua e as
estruturas, propriedades e funes das biomolculas (protenas,
polissacardeos, cidos nuclicos e lipdeos) pelo efeito cumulativo
de muitas interaes. O grande nmero de interaes no covalentes
estabiliza macromolculas e estruturas supramoleculares, de tal modo
que essas ligaes sejam rapidamente formadas ou rompidas
permitindo a flexibilidade necessria para manter os processos
dinmicos da vida. Nos organismos vivos, as interaes no-
4 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

covalentes mais importantes so: pontes de hidrognio, interaes


inicas, interaes hidrofbicas e interaes de van der Waals.

Tabela 1.1 Energia de dissociao de ligao (energia necessria para


romper a ligao) de ligaes encontradas nos seres vivos

Energia de dissociao de
Tipo de ligao 1
ligao (kJmol )

Ligaes covalentes >210


Ligaes no covalentes
Interaes eletrostticas (ligaes inicas) 4 80
Pontes de hidrognio 12 30
Interaes hidrofbicas 3 12
Foras de Van der Waals 0,3 9

C. Propriedades solventes da gua


A natureza polar e a capacidade de formar pontes de hidrognio,
torna a gua uma molcula com grande poder de interao. A gua
solvata facilmente as molculas polares ou inicas pelo
enfraquecimento das interaes eletrostticas e das pontes de
hidrognio entre as molculas competindo com elas por suas atraes
(efeito hidroflico, do grego que gosta de gua).

H H
+ +

H O O H

+
H O O H
+ +

H H

O
H + H
H H
O + + O
H H

Figura 1.2
Solvatao de ons. A carga do on orienta os dipolos das molculas
da gua.

A gua dissolve sais como o NaCl por hidratao e estabilizao


dos ons Na + e Cl , enfraquecendo as interaes eletrostticas, e
assim impedindo a associao para formar uma rede cristalina.
1 Introduo Bioqumica 5

Cl
Na Na
Cl

Na Cl
Na
Na Cl Na Cl

Cl Na Cl Na Cl

Na Cl Na Cl Na

Cl Na Cl Na+ Cl

Figura 1.3
Dissoluo de sais cristalinos. A gua dissolve o NaCl (e outros sais
cristalinos) por meio da hidratao dos ons Na + e Cl . medida que as
+
molculas de gua se agrupam ao redor dos ons Cl e Na a atrao
eletrosttica necessria para a formao da rede cristalina de NaCl
rompida.

A gua dissolve biomolculas com grupos ionizveis e muitas


com grupos funcionais polares, porm no carregadas, por formar
pontes de hidrognio com os solutos. Essas associaes so formadas
entre a gua e os grupos carbonila, aldedico, cetnico e hidroxila dos
lcoois.
As biomolculas ou grupamentos no-polares so insolveis em
gua, pois as interaes entre as molculas de gua so mais fortes
que as interaes da gua com compostos no polares. Os compostos
no polares tendem a se aglomerar em gua (efeito hidrofbico, do
grego que teme a gua). As interaes hidrofbicas so as
principais foras propulsoras no enovelamento de macromolculas
(exemplo, protenas).

D. Molculas anfiflicas
Um grande nmero de biomolculas, denominadas anfiflicas (ou
anfipticas), contm tanto grupos polares como grupos no-polares.
Essa propriedade afeta significativamente o meio aquoso. Por
exemplo, os cidos graxos ionizados so molculas anfipticas
porque contm grupos carboxilatos hidroflicos e grupos
hidrocarbonetos hidrofbicos. Quando misturados com a gua, as
molculas anfiflicas se agregam formando estruturas estveis
chamadas micelas. Nas micelas, as regies carregadas (grupos
carboxilatos), denominadas cabeas polares, so orientadas para a
gua com a qual interage. A cauda hidrocarboneto no-polar tende a
evitar o contato com a gua e orienta-se para o interior hidrofbico.
A tendncia das biomolculas anfipticas espontaneamente se
rearranjar em gua e uma caracterstica importante de numerosos
componentes celulares. Por exemplo, a formao de bicamadas por
molculas de fosfolipdeos a estrutura bsica das membranas
biolgicas (Figura 1.4).
6 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

Aquoso

Hidroflico

Hidrofbico

Hidroflico
Aquoso

Figura 1.4
Bicamada lipdica. Formada na gua por molculas anfiflicas
(fosfolipdeos) com cabeas polares e caudas sinuosas.

E. Presso osmtica
Osmose o processo espontneo no qual as molculas solventes
atravessam uma membrana semipermevel de uma soluo de menor
concentrao de soluto para uma soluo de maior concentrao de
soluto. Poros na membrana so suficientemente amplos para permitir
que as molculas solventes atravessem nas duas direes mas muito
estreitos para a passagem de grandes molculas de soluto ou ons. A
presso osmtica a presso necessria para interromper o fluxo
lquido de gua por meio da membrana. A presso osmtica depende
da concentrao do soluto.

Membrana Membrana Membrana


permevel permevel permevel
seletiva seletiva seletiva

gua
Soluto

Figura 1.5
Presso osmtica. A gua difunde do lado A (mais diludo) para o lado B
(mais concentrado). O equilbrio entre as solues nos dois lados da
membrana semipermevel atingido quando no houver mais movimento de
molculas de gua do lado A para o lado B. A presso osm tica interrompe o
fluxo de gua por meio da membrana.

A presso osmtica cria alguns problemas crticos para os


organismos vivos. As clulas contm altas concentraes de alguns
solutos, que so pequenas molculas orgnicas e sais inicos, tambm
como, macromolculas em baixas concentraes. Conseqentemente,
as clulas podem ganhar ou perder gua devido a concentrao de
1 Introduo Bioqumica 7

soluto em relao ao seu meio. Se as clulas esto em soluo


isotnica (a concentrao de soluto e gua a mesma nos dois lados
da membrana plasmtica seletivamente permevel) e a clula nem
ganha nem perde gua. Por exemplo, os eritrcitos so isotnicos em
soluo de NaCl a 0,9%. Quando as clulas so colocadas em uma
soluo com concentrao baixa de soluto (soluo hipotnica) a
gua se move para o interior das clulas. Os eritrcitos, por exemplo,
se distendem e se rompem em processo chamado hemlise quando
eles so imersos em gua pura. Nas solues hipertnicas, aquelas
com maior concentraes de soluto, as clulas murcham medida que
a gua flui para a soluo. Por exemplo, em soluo hipertnica de
NaCl a 3%, os eritrcitos murcham e tornem-se crenados.
Um aumento da osmolaridade no plasma, desencadeia
rapidamente a sede, exigindo a ingesto de gua para diluir o Na + e
reajustar a osmolaridade para baixo.

F. Ionizao da gua
Pequena proporo de molculas de gua se dissociam para
formar ons hidrognio (H + ) e hidroxila (OH ):
H2 O H + + OH

Para cada mol de H + , um mol de OH produzido. Devido a


elevada reatividade do on hidrognio (ou prton) e o momento
dipolar da molcula de gua, o H + no existe como tal em soluo
aquosa, mas reage com uma segunda molcula de H 2 O para formar o
on hidrnio (H 3 O + ). O grau de ionizao descrito
quantitativamente pela constante de dissociao (K):

H OH
K
H2O

O valor da K para a gua 1,8 x 10 16 a 25 C. A concentrao da


gua no dissociada pode ser considerada como uma constante (1000
g/18 g/mol = 55,5 M; ou seja, o nmero de gramas de gua em 1000
mL dividido pela molcula-grama da gua). Portanto, a quantidade
ionizada de gua insignificante em relao a no ionizada.
Substituindo os valores na equao anterior, tem-se:

H + OH 16
K 1,8 10
55,5
Desse modo, uma nova constante para a dissociao da gua pode
ser definida, Kw , a constante do produto inico da gua:

K w = K eq 55,5 = [H + ][OH ]
16 14
K w = (1,8 10 )(55,5) = 1,0 10
Assim, a 25 C o valor de K w dado por:

K w = [H + ][OH ] = (10 7 )(10 7 ) = 10 14

Portanto, o valor numrico do produto [H + ][OH ] em solues


aquosas a 25 C sempre 1,0 x 10 14 . Em gua pura [H + ] = [OH ]
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tem o valor 1,0 x 10 7 M. Sempre existe equilbrio entre H 2 O, H + e


OH - em solues diludas, independentemente da presena de
substncias dissolvidas. Ao adicionar qualquer substncia, como
ocorre na adio de um cido ou uma base, alteraes concomitantes
devem ocorrer nas concentraes do H + ou OH , para satisfazer
relao de equilbrio. Conhecendo-se a concentrao de um deles,
facilmente calculado o teor do outro.

G. Escala de pH
Para evitar o uso de exponenciais para expressar as concentraes
dos ons hidrognio em solues emprega-se a escala de pH, um
modo conveniente para expressar a concentrao real de ons
hidrognio de uma soluo. O pH de uma soluo definido como o
logaritmo negativo base 10 da concentrao de ons hidrognio:

pH = log[H+ ]
Em uma soluo aquosa neutra a 25 C, a concentrao do on
hidrognio (como tambm a [OH ]) 1,0 x 10 7 M ou pH = 7,0:

[H+ ] = 0,000.000.1 M = 1,0 x 10 7 M

log [H + ] = 7

pH = log[H+ ] = 7
Solues com pH menor do que 7 so cidas, enquanto aquelas
com pH>7 so bsicas. A Tabela 1.2 mostra a relao entre a [H + ],
[OH ], pH e pOH.
1 Introduo Bioqumica 9

Tabela 1.2 Relao entre [H + ], [OH - ], pH e pOH.

[H + ] (M) pH [OH ] (M) pOH

1,0 0 1 x 10 14 14

0,1(1 x 10 1) 1 1 x 10 13 13
2 2 12 12
1 x 10 1 x 10
1 x 10 3 3 1 x 10 11 11

1 x 10 4 4 1 x 10 10 10
5 5 9 9
1 x 10 1 x 10
1 x 10 6 6 1 x 10 8 8
7 7 7 7
1 x 10 1 x 10
1 x 10 8 8 1 x 10 6 6

1 x 10 9 9 1 x 10 5 5
10 10 4 4
1 x 10 1 x 10
11 11 3 3
1 x 10 1 x 10
1 x 10 12 12 1 x 10 2 2

1 x 10 13 13 0,1(1 x 10 1) 1
14 14 1,0 0
1 x 10

importante frisar que o pH varia na razo inversa da


concentrao de H + . Desse modo, o aumento de [H + ] reduz o pH
enquanto a diminuio, o eleva. Notar tambm, que o pH uma
funo logartmica, portanto, quando o pH de uma soluo aumenta
de 3 para 4, a concentrao de H + diminui 10 vezes de 10 3 M a 10 4
M.

Exerccio 1.1

Como a gua pura tem [H + ] = 10


7
M, calcular o pH das seguintes solues:
4
1. HCl 10 M
2. NaOH 10 5 M
A auto-ionizao da gua apresenta uma contribuio negligencivel
para as concentraes de ons hidrnio e ons hidrxido.
Soluo:
4
: [H 3 O + ] = 10
4
1. Para o HCl 10 M; portanto pH = 4.
5 5 + 14
2. Para o NaOH 10 : [OH ] = 10 M. Como [OH ][H 3 O ] = 1 x 10 ,
+ 9
ento, [H 3 O ] = 10 M; assim, pH = 9

Os pH de diferentes lquidos biolgicos so mostrados na


Tabela 1.3. Em pH 7 o on H + est na concentrao 0,000.000.1 M (1
x 10 7 ), enquanto a concentrao de outros catons esto entre 0,001
e 0,10 M. Um aumento no teor de on H + de somente 0,000.001 (1 x
6
10 ) tem um grande efeito deletrio sobre as atividades celulares.
10 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

Tabela 1.3 Valores de pH de alguns lquidos biolgicos.

Lquido pH

Plasma sangneo 7,4


Lquido intersticial 7,4
Lquido intracelular (citosol heptico) 6,9
Suco gstrico 1,5 3,0
Suco pancretico 7,8 8,0
Leite humano 7,4
Saliva 6,4 7,0
Urina 4,5 8,0

1.3 cidos e bases

A concentrao do on hidrognio, [H + ], afeta a maioria dos


processos nos sistemas biolgicos. As definies de cidos e bases
propostas por Bronsted e Lowry so as mais convenientes no estudo
das reaes dos seres vivos:
cidos so substncias que podem doar prtons.

Bases so substncias que podem aceitar prtons.


Por exemplo, a adio de cido clordrico (HCl) a uma amostra
de gua aumenta a concentrao de on hidrognio ([H + ] ou [H 3 O + ])
pois o HCl doa um prton para a gua:
HCl + H 2 O H 3 O + + Cl
A H 2 O atua como uma base que aceita um prton do cido
adicionado.
Do mesmo modo, a adio da base hidrxido de sdio (NaOH)
aumenta o pH (reduo da [H + ]) pela introduo de ons hidrxido
que combinam com os ons hidrognios existentes:
NaOH + H 3 O + Na + + 2H 2 O
Na reao, o H 3 O + o cido que doa um prton para a base
adicionada. O pH final da soluo depende o quanto de H + (por
exemplo, do HCl) foi adicionado ou quanto de H + foi removido da
soluo por sua reao com uma base (por exemplo, on OH - do
NaOH).
1 Introduo Bioqumica 11

Quadro 1.1 Fora de cidos

A fora de um cido ou base refere-se a No equilbrio, a velocidade lquida zero pois as


eficincia com que o cido doa prtons ou a base velocidades absolutas em ambas as direes so
aceita prtons. Com respeito a fora, existem duas exatamente iguais. Tal posio descrita pela
classes de cidos e bases: fortes e fracos. cidos e equao:
bases fortes so aqueles que se dissociam quase
completamente em meio aquoso diludo (Ex.: HCl ou H A
NaOH). cidos e bases fracos so os que dissociam K
parcialmente em solues aquosas diludas (Ex.: HA
CH 3 -COOH ou NH 3 ).
A tendncia de um cido fraco no-dissociado em que K a constante de equilbrio da reao
(HA) para perder um prton e formar a sua base reversvel e tem um valor fixo para cada
conjugada (A ) dada pela equao: temperatura. As K para as reaes de ionizao so
denominadas constantes de dissociao ou de
ionizao.
HA H+ + A
Para os cidos usada a designao K a . Os
Esta reao no ocorre at o final, mas, atinge cidos fortes tem valor de K a elevado, pois
um ponto de equilbrio entre 0 e 100% da reao. apresentam maior nmero de prtons liberados por
mol de cido em soluo.

A. Pares cido-base conjugados


Quando um cido fraco, como o cido actico, dissolvido em
gua, obtm-se uma dissociao parcial, estabelecendo um equilbrio
entre o cido, o acetato e o on hidrognio (prton):

CH 3 COOH + H 2 O CH 3 COO + H 3 O +
cido Base Base cido
conjugado conjugada conjugada conjugado

O cido actico um cido conjugado (doador de prtons). A


forma ionizada do cido actico, o on acetato (CH 3 COO )
denominada base conjugada (aceptora de prtons) ou sal. Em
reaes deste tipo, tpicas de todos os equilbrios cido-base, o cido
fraco (CH 3 COOH) e a base formada na sua dissociao (CH 3 COO )
constituem um par cido-base conjugado.

Tabela 1.4 Alguns pares cido-base conjugados de importncia nos


sistemas biolgicos.

Doador de prtons Aceptor de prtons

CH 3 CHOH COOH H + + CH 3 CHOHCOO


CH 3 CO COOH H + + CH 3 CO COO
HOOC CH 2 CH 2 COOH 2H + + - OOC CH 2 CH 2 COO
+ NH
3 CH 2 COOH H + + + NH 3 CH 2 COO

A constante de equilbrio para a dissociao do cido actico :


CH 3 COO H 3O
K
CH 3 COOH H2O
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Como a concentrao da gua (55,5 M) pouco alterada pela


constante de dissociao cida, K a :
CH 3 COO H
Ka
CH 3 COOH

O valor de K a para o cido actico 1,74 x 10 5 .


A tendncia de um cido conjugado em dissociar especificada
pelo valor de K a ; em valores baixos, a tendncia em liberar prtons
pequena (menos cido se dissocia), em valores elevados maior a
tendncia em liberar prtons (mais cido se dissocia). As constantes
de dissociao so mais facilmente expressas em termos de pK a , que
definido como:
pK a = log K a
ou seja, o pKa de um cido o logaritmo negativo da constante de
dissociao do mesmo. Para o cido actico,

pK a = log (1,74 x 10 5 ) = 4,76


A relao entre pK a e K a inversa; o menor valor de Ka fornece o
maior pK a . Os valores de Ka e pK a de alguns cidos so mostrados na
Tabela 1.4. A gua considerada um cido muito fraco com pK a = 14
a 25 C.

Tabela 1.5 Constantes de dissociao e pK a de alguns cidos fracos


importantes em bioqumica (a 25 C).

cido K a, M pK a

cido actico (CH 3 COOH) 5 4,76


1,74 x 10
cido lctico (CH 3 CHOH COOH) 4 3,86
1,38 x 10
cido pirvico (CH 3 CO COOH) 3 2,50
3,16 x 10
7 6,11
Glicose 6 PO 3 H 7,76 x 10
cido fosfrico (H 3 PO 4 ) 2 2,0
1,1 x 10

on diidrogenofosfato H 2 PO 4- 7 6,8
2,0 x 10

on hidrogenofosfato HPO 24 - 13 12,5


3,4 x 10

cido carbnico H 2 CO3 4 3,77


1,70 x 10

on amnio NH 4 10 9,25
5,62 x 10

B. Equao de Henderson-Hasselbalch
O pH de uma soluo contendo uma mistura de cido fraco com
sua base conjugada pode ser calculado pela equao de Henderson-
Hasselbach. Para a dissociao do cido fraco (HA H+ + A ) a
equao pode ser derivada tomando-se o logaritmo negativo dos dois
lados da equao K a :

H A
Ka
HA
1 Introduo Bioqumica 13

Por rearranjo

HA
H Ka
H

Pode-se expressar [H + ] como log[H + ] e K a como log K a e obter-se

A
log H log K a log
HA

e empregando as definies de pH e pK a

A
pH pK a log
HA

ou escrita de forma genrica:

Base conjugada
pH pK 'a log10
cido conjugado
Esta equao apresenta um modo conveniente para o estudo do
inter-relacionamento do pH de uma soluo, o pK a do cido fraco e as
quantidades relativas de cido conjugado e base conjugada presentes.
Nos casos onde a concentrao molar de cido conjugado igual a da
base conjugada ([HA] = [A ]), a relao [A ]/[HA] igual 1. Como
o logaritmo de 1 zero o pH da soluo igual ao valor do pK a do
cido fraco.

Exerccio 1.2
Calcular a quantidade relativa de cido actico e de on acetato presente
quando 1 mol de cido actico titulado com 0,3 mol de hidrxido de sdio.
Calcular tambm o valor do pH da soluo final.
Soluo:
Ao adicionar 0,3 mol de NaOH, 0,3 mol de cido actico reage para formar
0,3 mol de on acetato, deixando 0,7 mol de cido actico. A composio
70% de cido actico e 30% de on acetato.

Acetato
pH pK a log
cido actico

0,3
pH 4,75 log 4,39
0,7

1.4 Tampes e tamponamento

A regulao do pH nos lquidos biolgicos atividade essencial


dos organismos vivos. Mesmo pequenas mudanas na concentrao
do on hidrognio podem afetar grandemente as estruturas e as
funes das biomolculas. A concentrao do H + mantida
relativamente constante por meio de solues-tampes que resistem a
14 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

alteraes bruscas de pH quando adicionadas quantidades


relativamente pequenas de cido (H + ) ou base (OH ). So formados
por cidos fracos e suas bases conjugadas.
Quando um cido forte como o HCl adicionado a gua pura,
todo o cido adicionado contribui diretamente para a reduo do pH.
No entanto, quando o HCl adicionado a uma soluo contendo um
cido fraco em equilbrio com sua base conjugada (A ), o pH no
altera to dramaticamente, pois parte dos prtons adicionados
combinam com a base conjugada para amenizar o aumento da [H + ]
(Figura 1.6).
HCl H + Cl grande aumento da [H + ]
HCl + A HA + Cl pequeno aumento da [H + ]
Quando uma base forte (como o NaOH) adicionada a gua pura
ocorre grande reduo da [H + ]. Se a base for adicionada a uma cido
fraco em equilbrio com sua base conjugada (A ), parte dos ons
hidrxidos aceitam prtons do cido para formar H 2 O e, portanto, no
contribuem para a reduo do [H + ].
NaOH Na+ + OH grande reduo da [H + ]
NaOH + HA Na + + A + H 2 O pequena reduo da [H + ]

O sistema cido fraco/base conjugada (HA/A ) atua como tampo


para evitar mudanas bruscas do pH quando so adicionados cidos
ou bases a soluo.

9 Ao tampo
4
8 A
4 OH H2O
7
4
6
4 [HA] = [A ]
5 HA A
4 pH = pK
4
4
3
4 HA
2 H+
Equivalentes de OH

Figura 1.6
Capacidade tamponante do par cido fraco (HA) e sua base conjugada
+
(A ). O sistema capaz de absorver tanto H como OH por meio da
reversibilidade da dissociao do cido. O doador de prtons (cido fraco),
+
contm uma reserva de H ligado que pode ser liberada para neutralizar a
adio de OH ao sistema resultando na formao de gua. De forma
semelhante, a base conjugada (A - ), pode reagir com os ons H + adicionados
ao sistema. Assim, o par cido base conjugado resiste s variaes de pH
quando quantidades relativamente pequenas de cido ou base so
adicionadas soluo.

A resistncia a mudanas no pH de um tampo depende de dois


fatores: (a) a concentrao molar do cido fraco e sua base conjugada
e (b) a relao entre suas concentraes.
1 Introduo Bioqumica 15

Exerccio 1.3
Calcular o valor do pH obtido quando 1,0 mL de HCl 0,1 M adicionado a 99
mL de gua pura. Calcular tambm o pH aps a adio de 1,0 mL de NaOH
0,1 M a 99 mL de gua pura. (Levar em conta a diluio tanto do cido como
da base ao volume final de 100 mL)
Soluo:
Sobre a diluio, tem-se 100 mL de HCl 0,001 M e 100 mL de NaOH
0,001 M.
+ -3
cido adicionado, [H 3 O ] = 10 , portanto, pH = 3.
Base adicionada,
- -3
[0H ] = 10 M.
- + - 14 + - 11
Como [OH ][H 3 O ] = 1 x 10 , [H 3 O ] = 10 M; portanto, pH = 11

A capacidade tamponante mxima de um cido quando o pH =


pK a do cido fraco, ou seja, quando a as concentraes molares do
cido fraco (HA) e sua base conjugada (H ) so iguais. Na realidade,
a capacidade tamponante considervel mesmo dentro de uma faixa
de 1,0 unidade de pH do valor de seu pK a . Fora destes limites a ao
tamponante mnima. Esse fato est representado na curva de
titulao do cido actico (Figura 1.7). Para o par cido
actico/acetato (pK a = 4,76) o tamponamento efetivo situa-se entre
pH 3,76 e 5,76.

9
8
7
6 pH = pK + 1
5
4 pH = 4,76 = pK
pH = pK - 1
3
2

Equivalentes de OH-

Figura 1.7
Curva de titulao do cido actico por uma base (OH ). No ponto inicial
(antes da adio da base), o cido est presente na forma CH 3 COOH. A
adio de base dissocia prtons at atingir o ponto mdio da titulao onde o
pH = pK, as concentraes do cido (CH 3 COOH) e de sua base conjugada
(CH 3 -COO ) so iguais. A adio de mais base dissocia mais prtons at que
todo o cido atinja a forma CH 3 COO - (ponto final). Na regio de
tamponamento efetivo (PK 1), adies de cidos ou bases no alteram
grandemente o pH da soluo.

A. cidos fracos com mais de um grupo ionizvel


Algumas molculas contm mais de um grupo ionizvel. O cido
fosfrico (H 3 PO 4 ) um cido fraco poliprtico pode doar trs ons
16 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

hidrognio. Durante a titulao com NaOH as ionizaes ocorrem em


etapas com a liberao de um prton por vez:
pK1 2 ,15 pK 2 6 ,82 pK 3 12 , 38
H 3 PO 4 H H 2 PO 4 H HPO 24 H PO 33

Os valores de pK 1 , pK 2 e pK 3 representam os pK a de cada grupo


ionizado (Figura 1.8).

14
5
pH = 12,38 = pK3
13
4

12
4 HPO42-
11
4
H3PO4
10
4 H2PO4-
9
4

8
4
PO33-
7
4

6 pH = 6,82 = pK2
4

5
4

4
4
3
4
2
4 pH = 2,15 = pK1
1

Quantidade de base (equivalentes)

Figura 1.8
Curva de titulao do cido fosfrico (poliprtico). O cido fosfrico
possui pK mltiplos, um para cada etapa da titulao.

B. Tampes fisiolgicos
Os trs tampes mais importantes no corpo humano so: tampo
bicarbonato, o tampo fosfato e o tampo protico. Cada um est
adaptado para solucionar problemas fisiolgicos especficos do
organismo.
1. Tampo bicarbonato. Um caso especial de sistema tampo de
grande importncia nos mamferos o bicarbonato/cido carbnico.
O dixido de carbono reage com a gua para formar cido carbnico:
CO 2 + H 2 O H 2 CO 3
O cido carbnico rapidamente se dissocia para formar ons H + e
HCO + :
H 2 CO 3 H + + HCO 3
Como a concentrao do H 2 CO 3 muito baixa no sangue, as
equaes acima podem ser simplificadas a:
CO 2 + H 2 O H + + HCO 3
1 Introduo Bioqumica 17

O H 2 CO 3 um cido relativamente fraco (pK a = 6,37) e,


consequentemente, um tampo ineficaz no sangue. A relao do
HCO 3 /CO 2 necessria para manter o pH = 7,4 (normal no sangue)
aproximadamente 11 para 1. Em outras palavras, o tampo
bicarbonato atua no sangue quase no limite de seu poder tamponante.
Alm disso, as concentraes de CO 2 e HCO3 no so
excepcionalmente altas. Apesar dessas dificuldades, o sistema
tamponante do bicarbonato importante, pois os dois compontes
podem ser regulados. O dixido de carbono ajustado por alteraes
na velocidade da respirao. Enquanto, o teor de bicarbonato
regulado pelos rins.
O dixido de carbono fisicamente dissolvido est em constante
equilbrio com o cido carbnico e tambm com o CO 2 alveolar.
Alteraes em qualquer dos componentes na fase aquosa, provocam
modificaes no equilbrio; por exemplo, o aumento do CO 2 eleva o
H 2 CO 3 , que desvia o equilbrio da reao de dissociao aumentando
o H + . Assim, o CO considerado parte do cido conjugado e
2
participa do componente cido da equao:

H HCO 3
Ka
H 2 CO 3 CO 2

Com a incluso do CO 2 o valor de pK a 6,1. A quantidade de


H 2 CO 3 no-dissociado menor que 1/700 do contedo de CO 2 e,
normalmente, desprezada. uma prtica comum referir-se ao CO 2
dissolvido como o cido conjugado. Existe uma relao direta entre o
pH do sangue e a presso do gs dixido de carbono nos pulmes.
Embora o pK a para o sistema HCO 3 /CO 2 seja 1,3 unidades de pH
menor do que o pH extracelular normal de 7,40, este sistema tampona
extremamente bem, porque o CO 2 pode ser regulado por alteraes da
ventilao alveolar.
2. Tampo fosfato. Consiste de um cido fraco/base conjugada
H 2 PO 4 /HPO 4 2 (diidrogeno fosfato/hidrogeno fosfato):
H 2 PO 4 H + + HPO 4 2
Com pK a 7,2, poderia parecer que o tampo fosfato uma escolha
excelente para o tamponamento sangneo. No entanto, as
concentraes do H 2 PO 4 e HPO4 2 no sangue so muito baixas para
exercer atividade significante. Por outro lado, o sistema fosfato
fundamental para o tamponamento dos lquidos intracelulares onde
suas concentraes so de, aproximadamente, 75 mEq/L. Os nveis de
fosfato nos lquidos extracelulares como o sangue est ao redor de 4
mEq/L. Como o pH normal dos lquidos extracelulares cerca de 7,2
(o intervalo de 6,9 a 7,4) uma mistura equimolecular de H 2 PO 4 e
HPO 4 2 est presente. Apesar das clulas conterem outros cidos, eles
so de pouca importncia pois seus valores de pK a so baixos para o
pH intracelular. Por exemplo, o cido lctico tem um pK a de 3,86.
3. Tampo de protenas. As protenas apresentam uma grande
capacidade tamponante. Composta de aminocidos ligados entre si
por ligaes peptdicas, as protenas contm vrios grupos ionizveis
nas cadeias laterais que podem doar ou aceitar prtons. Como as
molculas de protenas esto presentes em significantes
18 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

concentraes nos organismos vivos, elas so tampes poderosos. Por


exemplo, a hemoglobina a mais abundante biomolcula nas clulas
sangneas e exerce um importante papel na manuteno do pH no
sangue. Tambm presentes em altas concentraes e auxiliares na
manuteno do pH so a albumina e outras protenas sricas.

1.5 Biomolculas

Os organismos vivos so compostos por milhares de molculas


inorgnicas e orgnicas diferentes. Contm cerca de 27 elementos
qumicos. O nmero real depende do tipo de clula e a espcie de
organismo. Acima de 99% da massa da maioria das clulas, so
compostas por oito elementos denominados elementos principais. Os
outros constituintes so elementos secundrios (Quadro 1.1). A
grande maioria dos constituintes moleculares dos sistemas vivos
contm carbonos ligados covalentemente a outros carbonos e a
tomos de hidrognio, oxignio e nitrognio.

A. Carbono
O carbono (nmero atmico 6, peso atmico 12) um tomo
pequeno que tem quatro eltrons em seu orbital eletrnico externo
que permite participar no compartilhamento com outros quatro
tomos. Os eltrons externos do carbono esto arranjados ao redor do
ncleo como um tetraedro, uma pirmide com faces triangulares.
Uma das mais importantes propriedades do tomo de carbono
sua capacidade para formar ligaes covalentes com outros tomos de
carbono e com tomos de hidrognio, oxignio, nitrognio e enxofre
para formar cadeias ou anis das macromolculas. As propriedades de
ligao do carbono permitem a produo de inmeras molculas. As
ligaes necessitam energia, exemplo: a ligao C-H requer 414
kJmol 1 ; a ligao C-C 343 kJmol 1 ; a ligao C-O 351 kJmol 1 ; a
ligao C=C 615 kJmol 1 e a ligao C=O 686 kJmol 1 .
As ligaes simples carbono-carbono podem girar livremente a
menos que estejam restritos por grupos muito grandes ou cargas
eltricas. A rotao permite a uma molcula orgnica assumir
diferentes formas chamadas conformaes. As ligaes duplas
carbono-carbono:
So mais curtas que as ligaes simples.
Apresentam rotao limitada.
So mais rgidas, (propriedade importante em grandes
molculas).
Variam o ngulo entre dois eltrons, afetando a conformao da
molcula. Isto tem um grande impacto sobre a atividade biolgica
da molcula, que muitas vezes envolve uma interao que
depende da conformao de outras molculas.
As cadeias e anis podem apresentar diferentes arranjos em suas
ligaes que se alternam dando origem a um sistema de ligao
conjugada. Os eltrons da ligao movem-se no interior da molcula
aumentando a estabilidade da estrutura. Esse fenmeno chamado
estabilizao por ressonncia.
1 Introduo Bioqumica 19

Quadro 1.2 Talidomida

Durante o perodo entre 1957 e 1961, A talidomida prescrita para humanos era
aproximadamente 10.000 pessoas em todo o mundo formada por uma mistura racmica (mistura que
nasceram com membros deformados ou inexistentes contm quantidades iguais de cada enancimero).
aps as mes terem ingerido a droga talidomida, um Somente em 1995 foi comprovada que em
sedativo para tratar enjos e nuseas durante a humanos h uma rpida interconverso entre os dois
gravidez. enancimeros. O equilbrio estabelecido entre as
A talidomida pode existir em duas formas duas formas no sangue, independente de qual
enanciomricas. Animais tratados com a enancimero foi empregado inicialmente. Isso sugere
R (+) talidomida produziam neonatos normais que, mesmo utilizando a forma pura r(+) talidomida,
enquanto aquelas que recebiam o enancimero S ( ) os defeitos de nascimento em seres humanos seriam
produziam nascituros deformados. os mesmos.

De modo simplificado, consideram-se as molculas biolgicas


como esqueletos de tomos de carbono ligados covalentemente entre
si para formar cadeias longas, lineares ou ramificadas ou, ainda,
estruturas cclicas. Os tomos de hidrognio que esto ligados aos
tomos de carbono podem ser substitudos por N, O e S para formar
uma grande variedade de grupos funcionais, tais como: aminas,
aldedos, lcoois e sulfidrilas. Isso confere uma grande variedade de
propriedades qumicas especficas encontradas nas molculas e que
determinam as suas funes biolgicas especficas. As molculas
biolgicas muitas vezes contm mais que um grupo funcional e so
denominadas polifuncionais. Por exemplo, os aminocidos contm
grupos aminos e grupos carboxlicos.

Tabela 1.6 Elementos encontrados nas clulas

Elementos principais Oligoelementos

Elemento Smbolo Elemen to Smbolo

Carbono C Arsnico As
Hidrognio H Boro B
Nitrognio N Cloro Cl
Oxignio O Cromo Cr
Fsforo P Fluor F
Enxofre S Iodo I
Clcio Ca Ferro Fe
Potssio K Magnsio Mg
Mangans Mn
Molibdnio Mo
Nquel Ni
Selnio Se
Silicnio Si
Sdio Na
Estanho Sn
Vandio V
Zinco Zn
20 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

B. Estrutura tridimensional
Os compostos de carbono cujas composies so idnticas, mas
as relaes espaciais entre os tomos so diferentes, so denominados
estereoismeros. O tomo de carbono ligado a quatro substituintes
diferentes chamado assimtrico. Carbonos assimtricos so centros
quirais indicando que os estereoismeros podem ocorrer em formas
orientadas direita ou esquerda. Os estereoismeros so imagens
especulares um do outro e no superponveis e so chamados
molculas quirais. Alguns estereoismeros so enancimeros e
apresentam atividade ptica, ou seja, giram a luz plano-polarizada
para a direita (dextrgiro) ou para a esquerda (levgiro). Uma
mistura equimolar de dois enancimeros opticamente inativa
(mistura racmica).
As posies dos tomos ou grupos ao redor de um tomo de
carbono quiral no esto relacionados com a direo do desvio da luz
plano-polarizada de uma maneira simples. Emil Fisher em 1891,
arbitrria e corretamente, designou uma das estruturas do
gliceraldedo e chamou de D -gliceraldedo. O ismero levorrotatrio
foi chamado L -gliceraldedo. Atualmente, o gliceraldedo permanece
como base da configurao estereoqumica das molculas biolgicas.
Estereoismeros de todas as molculas quirais tem configuraes
estruturais relacionadas com um dos gliceraldedos e so designadas
D ou L independente de sua atividade ptica. A atividade ptica
indicada por (+) para dextrorrotatrio e ( ) para levrrotatrio.
Os centros quirais so de grande importncia biolgica pois
muitas molculas so seletivas quanto a quiralidade, por exemplo,
virtualmente todas as protenas e polissacardios dos organismos
superiores so compostos por L aminocidos e D monossacardeos,
respectivamente. Essa seletividade promove estabilidade adicional s
molculas polimricas.

C. Macromolculas
As macromolculas so construdas pela unio qumica de
precursores relativamente simples (subunidades monomricas) para
formar polmeros de unidades repetidas. Todos os organismos vivos
tm os mesmos tipos de subunidades monomricas que alm da
formao de macromolculas exercem, tambm, vrias funes
biolgicas. As ligaes especficas para cada tipo de macromolcula,
so formadas por reaes de condensao com perda de gua, em
processos que requerem o fornecimento de energia.
1 Introduo Bioqumica 21

Unidades monomricas

Onde n = nmero de
Reao de
condensao
-(n-1)H 2O unidades monomricas

Ligaes covalentes
Polmero

Figura 1.9
As macromolculas so formadas a partir u nidades monomricas. As
macromolculas intracelulares so polmeros de elevada massa molecular
formadas com precursores relativamente simples.

O tamanho de uma molcula dado em termos de massa


molecular. A unidade de massa empregada o dalton (D) (1000 D = 1
kilodalton = kD) onde 1 D definido como 1/12 da massa do tomo
de 12 C.
As quatro principais classes de molculas biolgicas so:
1. Protenas ou polipeptdeos. So longos polmeros formados
por vinte diferentes aminocidos. Apresentam elevada massa
molecular que variam de centenas a milhes de daltons. Atuam como
elementos estruturais, catalisadores (enzimas), anticorpos,
transportadores, hormnios, reguladores gnicos, toxinas, etc.
2. Carboidratos. So polmeros de acares simples, como a
glicose, com elevadas massas moleculares. Liberam e armazenam
energia e tambm so elementos estruturais extracelulares.
3. Lipdeos. So formados por molculas relativamente pequenas
(ao redor de 300-1.500 D) que podem se associar para constituir
grandes molculas que servem, principalmente, como componentes
estruturais das membranas, como forma de armazenamento de energia
e outras funes (hormnios esterides, vitaminas, proteo, material
isolante).
22 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

Quadro 1.3 Sistema RS

O sistema RS de nomenclatura para a Se a ordem dos outros trs grupos diminui na


configurao estereoqumica foi desenvolvido em direo horria, a configurao ser considerada R
1956 para superar o principal problema associado (do latim, rectus, direita). Se a ordem for no sentido
com a nomenclatura DL , que pode ser ambiga para anti-horrio, a configurao ser considerada S (do
compostos com mltiplos centros quirais. O sistema latim, sinistrus, esquerda). Desse modo, o
RS compara os quatro tomos ou grupos ligados ao R gliceraldedo sinnimo de D gliceraldedo. O
tomo de carbono tetradrico (centro quiral). Cada sistema RS descreve sem ambigidades a
grupo ligado ao centro quiral tem uma prioridade. As configurao estereoqumica de compostos
prioridades so: SH > OH > NH 2 > COOH > CHO > contendo vrios centros quirais, exemplo, (2 S , 3 R )
CH 2 OH > CH 3 > H. A configurao do centro quiral treonina.
visualizada com o grupo de menor prioridade
orientado para longe do observador, exemplo, o H
no gliceraldedo.

4. cidos nuclicos (DNA e RNA). So polmeros formados por


nucleotdeos. Armazenam, transmitem e transcrevem a informao
gentica. So componentes das organelas celulares.
Na Quadro 1.2 esto destacadas algumas caractersticas da
construo das macromolculas. Como exemplo, os carboidratos
polimricos so constitudos por monossacardeos unidos por
ligaes glicosdicas para formar oligossacardeos (2 a 10 unidades)
ou polissacardeos (mais de 10 unidades). Os oligossacardeos so
descritos como dissacardeos, trissacardeos ou tetrassacardeos e
assim por diante, de acordo com o nmero de unidades monomricas.
Nomenclatura similar empregada para as protenas e cidos
nuclicos. A maioria das macromolculas contm uma ou poucas
unidades monomricas diferentes, por exemplo, o glicognio
formado por uma nica unidade monomrica, denominada glicose; o
cido desoxirribonuclico (DNA) contm somente quatro diferentes
nucleotdios.
A forma precisa de uma estrutura polimrica conferida pela
natureza das ligaes covalentes e das ligaes no-covalentes. As
trs ligaes no-covalentes fundamentais so: pontes de hidrognio,
interaes eletrostticas e foras de van der Waals. Elas diferem
quanto geometria, fora e especificidade. Alm disso, essas
ligaes so grandemente afetadas pela presena da gua. As ligaes
no-covalentes podem ocorrer entre tomos ou grupos funcionais na
mesma cadeia ou entre cadeias adjacentes. A estrutura polimrica
pode ser degradada em suas unidades monomricas por hidrlise pela
adio de gua aos grupos que esto envolvidos nas ligaes
covalentes. Nos sistemas biolgicos isto conseguido pela ao
catalisadora de enzimas.
As classes de macromolculas biolgicas no so mutuamente
exclusivas e podem interagir para produzir molculas hbridas ou
conjugadas. Por exemplo, as protenas e os carboidratos formam
proteoglicanos ou glicoprotenas. Os proteoglicanos so
fundamentalmente constitudos por polissacardios (95% da massa da
macromolcula) unidos entre si por ligaes covalentes e no-
covalentes s protenas. As glicoprotenas contm pequenas
quantidades de carboidratos ligados s cadeias polipeptdicas por
ligaes covalentes.
Molculas hbridas como os glicolipdeos, lipoprotenas e
nucleoprotenas tambm esto presentes nos organismos vivos.
1 Introduo Bioqumica 23

Quadro 1.2 Comparao das classes de macromolculas

Caractersticas Carboidratos Protenas cidos nuclicos

Unidades monomricas Monossacardeos Aminocidos Nucleotdeos


Ligao covalente formada por reao de
Glicosdica Peptdica Fosfodister
condensao
Nomenclatura de unidades mltiplas:
2-10 unidades Oligossacardeos Olipeptdeos Oligonucleotdeos
>10 unidades Polissacardeos Polipetdeos Polinucleotdeos
Ocorrncia de pontes de hidrognio Intra e intermolecular Intra e inter molecular Intra e intermolecular
Enzima hidroltica Glicosidases Peptidases Nucleases

Finalmente, deve-se notar que a atividade biolgica no est


confinada a unidades monomricas, ou grandes cadeias polimricas
ou ainda, a molculas conjugadas. Existem muitos exemplos de
oligmeros biologicamente ativos, como por exemplo, o glutationa
(um tripeptdeo) que atua na manuteno da integridade das
membranas.

1.1 Clulas: a unidade bsica da vida

As clulas so as unidades estruturais e funcionais de todos os


organismos vivos. Elas diferem amplamente em suas estruturas e
funes, mas todas so circundadas por uma membrana que controla a
troca de substncias para o interior e para o exterior da clula.
As clulas so classificadas de acordo com seu tamanho e
complexidade em uma das duas categorias:
Procariticas (do grego pro, antes), nas quais, o material
gentico no est delimitado em um envelope nuclear. No
possuem ncleo ou estruturas internas delimitadas por membrana.
A sua estrutura mantida pela parede celular. So organismos
unicelulares que podem existir em associao, formando colnias
de clulas independentes.
Eucariticas (do grego eu, verdadeiro, e karyon, ncleo),
contm o material gentico organizado em cromossomos dentro
de um envelope nuclear. So organismos complexos e podem ser
unicelulares ou multicelulares. As clulas eucariticas possuem
vrias organelas limitadas por membranas no seu citoplasma, tais
como, lisossomos, peroxissomos, mitocndrias, retculo
endoplasmtico e aparelho de Golgi (Quadro 1.1).
24 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

Quadro 1.4 Clula

A palavra clula foi introduzida na biologia em No incio do sculo 19, as clulas foram
1665 por Robert Hooke em sua coleo de desenhos reconhecidas como form as vivas e como
microscpicos, chamados Micrographia, que inclui pertencentes a organismos multicelulares mais
uma fina fatia de cortia. Ele registrou a estrutura de complexos. Em 1839, Theodor Schwann, um
favos vazios da cortia e denominou os zoologista, publicou o Mikroskopische
compartimentos de clulas em analogia a cela de Untersuchungen, que contm figuras desenhadas por
uma priso ou mosteiro. O termo, atualmente, no Mathias Schleiden, um botnico, que registrou
empregado para descrever o compartimento vazio semelhanas entre as clulas vegetais e animais.
mas o contedo vivo existente entre estas paredes Vinte anos aps, Rudolf Virchow anunciou omnis
celulares. Hoje, a clula pode ser definida como a cellula et cellula, i.e. todas as clulas so
mais simples unidade integrada nos sistemas vivos provenientes de outras clulas.
capazes de sobreviver independentemente.

O metabolismo celular compartimentalizado para organizar as


diferentes vias metablicas como a sntese e degradao, em diversos
compartimentos, para que operem independentemente. Algumas
funes em diferentes organelas so mostradas no Quadro 1.3.

Quadro 1.3 Resumo das funes das organelas

Organela Funo

Ncleo Envolvido com uma membrana nuclear.


Localizao do DNA e protenas (histonas);
stio da sntese da maior parte do DNA e do
RNA.
Mitocndria Corpos separados constitudos por membranas
altamente convolutas. Stio de reaes de
oxidao produtoras de energia; possui o seu
prprio DNA. Parte do sistema sinttico:
biossntese e metabolismo energtico.
Retculo endoplasmtico Membrana citoplasmtica contnua com as
membranas nuclear e plasmtica; parte rugosa
apresenta com ribossomos ligados
Complexo de Golgi Srie de membranas achatadas; envolvido na
secreo de protenas pela clula e em reaes
que ligam acares e outros componentes
celulares.
Lisossomos Vesculas envolvidas por membranas contendo
vrios tipos de enzimas hidrolticas. Parte do
sistema sinttico (digestivo); hidrlise do
material estranho, lise de clulas mortas.
Peroxissomos Vesculas que contm enzimas envolvidas no
metabolismo do perxido de hidrognio.
Ribossomos Compostos de partculas nucleoproticas (RNA
e protenas). Stios da sntese protica.
Membrana plasmtica uma camada semipermevel contnua ao
redor do citoplasma que separa o seu contedo
da circunvizinhana. Contm transportadores e
receptores. Regula a troca com o meio.
1 Introduo Bioqumica 25

Com base na comparao de molculas de RNA, Carl Woese


agrupou todos os organismos em trs grupos fundamentais chamados
domnios: Eukarya (eucariontes), Bacteria (anteriormente
Eubacteria) e Archaea (anteriormente Archaebacteria). A Eukaria
compreende todos os organismos macroscpicos, incluindo os seres
humanos tambm como muitos organismos microscpicos
unicelulares como os fungos. Os dois domnios, Bacteria e Archaea,
consistem de procariontes.

Bacteria Eukarya Archaea

Ancestral
comum

Figura 1.10
rvore filogentica de classificao dos trs domnios. O domnio
Eukaria consiste de eucariotos. Os dois domnios, Bacteria e Eukarya,
consistem de procariotos. Na evoluo, os trs domnios possuem um
ancestral comum.

Resumo
1. A bioqumica o estudo das estruturas moleculares, dos mecanismos e
dos processos qumicos responsveis pela vida. Os organismos vivos so
mantidos por sua capacidade de obter, transformar, armazenar e utilizar
energia.

2. A gua contribui com 50 90% do peso de uma clula. As molculas de


gua so constitudas por dois tomos de hidrognio e um de oxignio.
Cada tomo de hidrognio est ligado ao tomo de hidrognio por uma
ligao covalente simples. As ligaes oxignio-hidrognio so polares e
as molculas de gua so dipolos. As molculas de gua podem formar
pontes de hidrognio entre o oxignio de uma molcula e o hidrognio
de outra molcula.
3. As ligaes no-covalentes so relativamente fracas e facilmente
rompidas. Exercem papel fundamental na determinao das propriedades
fsicas e qumicas da gua e de biomolculas. Interaes inicas ocorrem
entre tomos e grupos carregados. O grande nmero de pontes de
hidrognio exerce considervel efeito nas molculas envolvidas.
4. Os pontos de ebulio e fuso da gua so excepcionalmente elevados
quando comparados com compostos de estrutura e peso molecular
semelhante. As pontes de hidrognio so responsveis por esse
comportamento anmalo.
26 Motta Bioqumica Laboratrio Autolab Ltda.

5. A estrutura dipolar da gua e sua capacidade de formar pontes de


hidrognio permite a dissoluo de muitas substncias inicas e polares.
6. As molculas de gua lquida apresentam capacidade limitada de ionizar-
se para formar H + e OH. Quando uma soluo contm quantidades iguais
dos ons H + e OH , considerada neutra. Solues com excesso de H +
so cidas, enquanto aquelas com grande nmero de OH so bsicas.
Como os cidos orgnicos no se dissociam completamente em gua, so
chamados de cidos fracos. A constante de dissociao de um cido, K a ,
expressa a fora de um cido fraco. Em geral, o K a expresso como pK a
( log K a ).
7. A concentrao do on hidrognio expressa na forma de pH definido
como o logaritmo negativo da concentrao do on hidrognio ( log
[H + ]).
8. Os cidos so definidos como doadores de prtons, a as bases como
aceptores de prtons. A tendncia de um cido HA doar prtons
expressa pela sua constante de dissociao ( K a =[H + ][A ]/[HA]).
9. A regulao do pH essencial para a atividade dos seres vivos. A
concentrao do on hidrognio mantida dentro de estreitos limites. As
solues tamponadas (par cido base conjugado) resistem a mudanas
de pH. A capacidade mxima de tamponamento est situada uma unidade
de pH acima ou abaixo do seu pK a .
10. Vrias propriedades fsicas da gua modificam as molculas de soluto
dissolvidas. Uma importante modificao a presso osmtica, a presso
que evita o fluxo de gua atravs das membranas celulares.
11. Todos os seres vivos so constitudos de clulas procariticas ou clulas
eucariticas. As procariticas o material gentico no est delimitado em
um envelope nuclear. As eucariticas apresentam o material gentico
dentro de um envelope nuclear. Essas clulas contm ncleo e estruturas
complexas que no so observadas nas procariticas.

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 1-19.
CAMPBELL, M. K. Bioquimica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 64-87.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed.
So Paulo: Sarvier, 2002. p. 3-85.
Captulo

2
VALTER T. MOTTA
BIOQUMICA BSICA

Aminocidos e
protenas
2
Aminocidos e Protenas

Objetivos

1. Descrever as propriedades dos aminocidos encontrados nas protenas.


2. Identificar os seguintes grupamentos qumicos nas cadeias laterais dos
aminocidos: hidrofbicos, alcolicos, tilicos, cidos, bsicos e amidas.
3. Descrever a dissociao dos aminocidos em funo da variao do pH.
4. Interpretar a curva de dissociao de um aminocido neutro, de um
aminocido cido e de um aminocido bsico.
5. Calcular o pI de um aminocido, dados os seus pKs
6. Representar uma ligao peptdica entre dois aminocidos.
7. Identificar numa cadeia polipeptdica: o amino terminal, o carbxi terminal,
os resduos de aminocidos, os radicais e a ligao peptdica.
8. Caracterizar os diferentes nveis estruturais das protenas e descrever as
foras responsveis pelos mesmos.
9. Caracterizar a desnaturao protica como uma modificao das propriedades
fsicas, qumicas e biolgicas das protenas.
10. Descrever a estrutura, as propriedades e as funes das protenas globulares
e fibrosas.

As protenas so as biomolculas mais abundantes nos seres


vivos e exercem funes fundamentais em todos os processos
biolgicos. So polmeros formados por unidades monomricas
chamadas -aminocidos, unidos entre si por ligaes peptdicas. As
protenas so constitudas de 20 aminocidos-padro diferentes
reunidos em combinaes praticamente infinitas, possibilitando a
formao de milhes de estruturas diversas.

2.1 Aminocidos

Os -aminocidos possuem um tomo de carbono central ( )


onde esto ligados covalentemente um grupo amino primrio ( NH 2 ),
um grupo carboxlico ( COOH), um tomo de hidrognio e uma
cadeia lateral (R) diferente para cada aminocido (Figura 2.1).
Existem duas excees, a prolina e hidroxiprolina, que so -
iminocidos.
29
30 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Os aminocidos com um nico grupo amino e um nico grupo


H carboxila, ocorrem em pH neutro na forma de ons dipolares
H 3N C COO (zwitterions) eletricamente neutros. O grupo amino est
protonado (on amnio, NH 3 ) e o grupo carboxlico est
R
dissociado (on carboxilato, COO ).
Figura 2.1
Estrutura de um -aminocido Os aminocidos apresentam as seguintes propriedades gerais:
na forma de on dipolar
(zwitterions).
Com exceo da glicina, todos os aminocidos so opticamente
ativos desviam o plano da luz polarizada pois o tomo de
carbono de tais molculas um centro quiral. So tomos de
carbono ligados a quatro substituintes diferentes arranjados numa
configurao tetradrica e assimtrica. Os aminocidos com
tomos quirais podem existir como estereoismeros molculas
que diferem somente no arranjo espacial dos tomos.
Os aminocidos que constituem as protenas tm a
configurao estereoqumica L . Por conveno, na forma L , o
grupo NH 3 est projetado para a esquerda, enquanto na forma
D , est direcionado para a direita. Os D -aminocidos so
encontrados em alguns antibiticos: valinomicina e actinomicina
D ; e em paredes de algumas bactrias: peptidoglicano. A
designao L ou D de um aminocido no indica a sua capacidade
para desviar o plano da luz polarizada.
A cadeia lateral (R) determina as propriedades de cada
aminocido.
Os -aminocidos so classificados em classes, com base na
natureza das cadeias laterais (grupo R). Os 20 tipos de cadeias
laterais dos aminocidos variam em tamanho, forma, carga,
capacidade de formao de pontes de hidrognio, caractersticas
hidrofbicas e reatividade qumica. Os 20 aminocidos-padro so
classificados pelos seus grupos R (cadeias laterais):

Aminocidos com cadeias laterais no-polares e alifticas

H H H
H 3N C COO H 3N C COO H3N C COO
H CH3 CH CH3
Glicina Alanina CH3

Valina
H H
COO
H 3N C COO H3N C COO
CH2 CH CH3 +
H2N
CH CH3 CH2
CH3 CH3 Prolina
Leucina Isoleucina
2 Aminocidos e protenas 31

Aminocidos com cadeias laterais aromticas

H 3N CH COO H3 N CH COO H3N CH COO


CH2 CH2 CH2

HN

Fenilalanina OH Triptofano
Tirosina

Aminocidos com cadeias laterais polares no-carregadas

H3N CH COO H 3N CH COO H3N CH COO


CH2 CH OH CH2
OH CH3 SH
Serina Treonina Cistena

H 3N CH COO H3 N CH COO H 3N CH COO


CH2 CH2 CH2
CH2 C O CH2
S OH C O
CH3 Asparagina OH

Metionina Glutamina

Aminocidos com cadeias laterais carregadas negativamente


(cidos)

H3N CH COO H 3N CH COO


CH2 CH2
COO CH2
Aspartato COO
Glutamato
32 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Aminocidos com cadeias laterais carregadas positivamente


(bsicos)

H 3N CH COO H3N CH COO H 3N CH COO


CH2 CH2 CH2
CH2 CH2
N
CH2 CH2
NH
NH CH2
Histidina
C NH2 NH3
NH2 Lisina
Arginina

A. Aminocidos incomuns em protenas


Vrias protenas contm aminocidos incomuns formados por
modificao de resduos de aminocidos existentes na cadeia
polipeptdica aps a sua sntese. Entre eles est o cido
carboxiglutmico, um aminocido ligado ao clcio e encontrado na
protrombina, uma protena da cascata de coagulao sangnea. A
hidroxiprolina e a hidroxilisina produtos de hidroxilao da prolina e
lisina, respectivamente, so importantes componentes estruturais do
colgeno (ver adiante). A fosforilao dos aminocidos contendo
grupos hidroxila, tais como a serina, a treonina e a tirosina
empregada para regular a atividade das protenas.

NH2
CH2
OH
CHOH
HC CH2
CH2
H 2C CH COOH
CH2 N
CHNH2 H
COOH Hidroxiprolina

Hidroxilisina

B. Aminocidos biologicamente ativos


Alm da funo primria como componentes das protenas, os
aminocidos tm vrios outros papis biolgicos.
Vrios -aminocidos ou seus derivados atuam como
mensageiros qumicos entre as clulas. Por exemplo, glicina,
cido aminobutrico (GABA, um derivado do glutamato),
serotonina e melatonina (derivados do triptofano) so
neurotransmissores, substncias liberadas de uma clula nervosa
e que influenciam outras clulas vizinhas (nervosas ou
musculares). A tiroxina (um derivado da tirosina produzida pela
glndula tireide) e cido indolactico (um derivado do
triptofano e encontrado nas plantas) so exemplos de hormnios.
2 Aminocidos e protenas 33

Os aminocidos so precursores de vrias molculas complexas


contendo nitrognio. Exemplos incluem as bases nitrogenadas
componentes dos nucleotdeos e cidos nuclicos, o heme (grupo
orgnico contendo ferro) e clorofila (pigmento de importncia
crtica na fotossntese).
Vrios aminocidos-padro e aminocidos no padro atuam
como intermedirios metablicos. Por exemplo, arginina,
citrulina e ornitina so aminocidos no padro componentes do
ciclo da uria (Captulo 10). A sntese da uria uma molcula
formada no fgado o principal mecanismo de excreo do
excesso de nitrognio proveniente do catabolismo dos
aminocidos.

C. Titulao dos aminocidos


Como os -aminocidos possuem grupos ionizveis na molcula,
a forma inica predominante dessas molculas em soluo depende
do pH. A titulao dos aminocidos ilustra o efeito do pH sobre sua
estrutura. A titulao tambm til para determinar a reatividade das
cadeias laterais dos aminocidos.
As cadeias laterais R diferenciam um aminocido de outro. O
significado funcional da cadeia lateral enfatizado nas protenas
onde o grupo carboxlico e o grupo amino formam ligaes
peptdicas e, portanto, no exercem suas propriedades cidobsicas.
Quando o grupo R neutro, a sua composio tem pequeno efeito
sobre as propriedades de dissociao dos grupos carboxlicos e
grupos aminos do carbono . Os aminocidos com cadeias laterais
ionizveis apresentam trs grupos cidobsicos. Na Tabela 2.1 esto
relacionados os valores de pK e pI dos grupos amino,
carboxlico alm de grupos ionizveis das cadeias laterais dos
aminocidos.
34 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Tabela 2.1 Valores de pK e pI para os aminocidos.

Abreviaes pK

Aminocido Comum Letra COOH NH 3 Outro (R) pI

Alanina Ala A 2,34 9,69 - 6,02


Arginina Arg R 2,17 9,04 12,48 (guanidino) 10,76
cido asprtico Asp D 2,09 9,82 3,86 (carboxil) 2,97
Asparagina Asn N 2,02 8,80 - 5,41
cido glutmico Glu E 2,19 9,67 4,25 (carboxil) 3,22
Glutamina Gln Q 2,17 9,13 - 5,65
Cistena Cys C 1,96 10,28 8,18 (sulfidril) 5,07
- - 1,65; 2,26 7,85; - 5,06
Cistina
9,85
Fenilalanina Phe F 1,83 9,13 - 5,48
Glicina Gly G 2,34 9,60 - 5,97
Histidina His H 1,82 9,17 6,0 (imidazol) 7,59
Hidroxilisina Hyl - 2,13 8,62 9,67 ( -amino) 9,15
Hidroxiprolina Hyp - 1,92 9,73 - 5,83
Isoleucina Ile I 2,36 9,68 - 6,02
Leucina Leu L 2,36 9,60 - 5,98
Lisina Lys K 2,18 8,95 10,53 ( -amino) 9,74
Metionina Met M 2,28 9,21 - 5,75
Prolina Pro P 1,99 10,.60 - 6,30
Serina Ser S 2,21 9,15 - 5,68
Tirosina Tyr Y 2,20 9,11 10,07 (fenol) 5,66
Treonina Thr T 2,63 10,43 - 6,53
Triptofano Trp W 2,38 9,39 - 5,66
Valina Val V 2,32 9,62 - 5,.97

Ao considerar a alanina em soluo fortemente cida (pH 0), tem-


se os grupos cido e bsico da molcula totalmente protonados. Com
a adio de uma base forte tal como NaOH, ocorre inicialmente a
perda de prton do grupo COOH e, posteriormente, a perda do
prton do grupo NH 3 .

CH3 CH3 CH3


+ +
HC NH3 HC NH3 HC NH2
- -
COOH COO COO

A curva de titulao da alanina mostrada na Figura 2.2.


2 Aminocidos e protenas 35

114
pH = 9,69 = pK2
10
4

9
4

8
4

7
4

6
4

5 pI = 6
4

4
4
3
4
2
4 pH = 2,34 = pK1
1

Quantidade de base (equivalentes)

Figura 2.2
Curva de titulao da alanina

O valor de pH no qual o aminocido fica eletricamente neutro


(igual nmero de cargas positivas e negativas) corresponde ao ponto
isoeltrico (pI). O valor do pI uma constante de um composto em
particular em condies especficas de fora inica e temperatura.
Para o aminocido monoamino e monocarboxlico, o ponto isoeltrico
calculado:
pK 1 pK 2
pI
2
em que K so as constantes de dissociao dos grupos cido e bsico.
Para a alanina tem-se:
2,34 9 ,69
pI 6,02
2
Um exemplo mais complexo da relao entre a carga eltrica da
molcula e o pH, a titulao dos aminocidos monoamino e
dicarboxlicos cujos representantes so o cido glutmico e o cido
asprtico. Os dois aminocidos possuem em suas cadeias laterais um
segundo grupo carboxlico. Para o cido asprtico tem-se:
- -
COOH COOH COO COO
CH2 CH2 CH2 CH2
+ + +
CHNH3 CHNH3 CHNH3 CHNH2
- - -
COOH COO COO COO

A curva de titulao do cido asprtico mostrada na Figura 2.3.


36 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

114 pH = 9,82 = pK3


10
4

9
4

8
4

7
4

6
4

5
4

4
4
3 pH = 3,86 = pK2
4
2 pI = 2,97
4
pH = 2,09 = pK1
1

Quantidade de base (equivalentes)

Figura 2.3
Curva de titulao do cido asprtico

Para o cido asprtico o pK do COOH 2,09, o pK do grupo


COOH 3,86 e o pK do NH 3 9,82. O ponto isoeltrico (pI)
calculado pela frmula:
2 ,09 3,86
pI 2,97
2
A lisina um exemplo de aminocido com dois grupos bsicos na
molcula. O grupo NH 2 da molcula confere basicidade.
+ + +
NH3 NH3 NH3 NH2
(CH2 )4 (CH2 )4 (CH2 )4 (CH2 )4
+ +
CHNH3 CHNH3 CHNH2 CHNH2
- - -
COOH COO COO COO

No caso da lisina o pK do COOH 2,18 o pK da NH 3 e o


pK do NH 3 10,53. O ponto isoeltrico calculado:

8,95 10,53
pI 9,74
2
A curva de titulao da lisina mostrada na Figura 2.4.
2 Aminocidos e protenas 37

pH = 10,53 = pK3
11
4

10
4

9 pI =9,74
4

8 pH = 8,95 = pK2
4

7
4

6
4

5
4

4
4
3
4
2
4 pH = 2,18 = pK1
1

Quantidade de base (equivalentes)

Figura 2.4
Curva de titulao da lisina

Tabela 2.2. Grupos ionizveis de aminocidos

Onde o grupo
Forma cida Forma bsica
encontrado

+
+ +
Resduo NH 2 -terminal R NH3 R NH2 H

Amnio Amina

Resduo COOH-terminal R COOH R COO


-
+ H
+

cido carboxlico Carboxilato


+
+
+
R NH C NH2 R NH C NH H
Arginina
NH2 NH2

Guanidnio Guanidino

+
-
Cistena R SH R S H2

Tiol Tiolato
H H

N CH N CH
Histidina
+
+
+ H
R C NH R C N
CH CH
Imidazlio Imidazol
CH CH CH CH
-
Tirosina R C C OH R C C O

CH CH CH CH

Fenol Fenolato
38 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

2.3 Reaes dos aminocidos

Os aminocidos com seus grupos carboxlicos, grupos amino


primrios e os grupos presentes nas cadeias laterais podem sofrer
diferentes reaes qumicas. Duas reaes ligao peptdica e a
oxidao da cistena (formao de pontes dissulfeto) so de
especial interesse por afetar a estrutura das protenas.
1. Formao de ligao peptdica. Os polipeptdeos so
polmeros lineares compostos de aminocidos ligados covalentemente
entre si por ligaes amida do grupo COOH de um aminocido
com o grupo NH 2 de outro, com a remoo da gua (reao de
condensao) para formar ligaes peptdicas.
H O H O H O H O
H2N C C OH + H2N C C OH H2 N C C N C C OH
R1 R2 R1 H R2

Aps incorporao a peptdeos, os aminocidos individuais so


denominados resduos de aminocidos.
A estrutura que contm dois resduos de aminocidos chamada
dipeptdeo; com trs aminocidos tripeptdeo, etc. Quando um grande
nmero de aminocidos esto unidos dessa forma, o produto
denominado polipeptdeo. As protenas podem conter centenas ou
milhares de resduos de aminocidos.
Os polipeptdeos so geralmente representados com o grupo
amino livre chamado aminoterminal ou N terminal esquerda e o
grupo carboxlico livre denominado carbxi terminal ou C terminal
direita.
R1 O R2 O R3 O R4 O
+
N-terminal H3 N CH C N CH C N CH C N CH C O C-terminal
H H H
Residuo 1 Residuo 2 Residuo 3 Residuo 4

A nomenclatura dos peptdeos pequenos dada pela seqncia


dos nomes de resduos de aminocidos que os formam e inicia a
partir da esquerda com o resduo que possui o grupo amino terminal
livre, substituindo se o sufixo ina pelo sufixo il. Assim, so
relacionados todos os aminocidos que formam o polipeptdeo, com
exceo do que contm o grupo carboxila livre que permanece com o
nome original. Exemplo:
H O H H O H
H2N C C N C C N CHCOOH
CH2 HC CH3 CHOH
C CH3 CH3
HC CH

HC CH
CH

Tirosilvaliltreonina

As principais caractersticas das ligaes peptdicas so:


2 Aminocidos e protenas 39

Os seis tomos que formam a ligao C CO NH C , esto no


mesmo plano (C o carbono alfa de aminocidos adjacentes).
O C=O e N H da ligao so trans um em relao ao outro.
A ligao C N apresenta algumas caractersticas de dupla ligao
parcial no podendo girar livremente.
A livre rotao possvel para as ligaes carbono carbono e
nitrognio carbono (no carbonila), permitindo variaes na
conformao.
2. Oxidao da cistena. O grupo sulfidrlico da cistena
reversivelmente oxidado. A oxidao de duas molculas de cistena
produz a cistina uma molcula que contm uma ponte dissulfeto. A
sntese da cistina realizada aps a incorporao da cistena s
protenas e exerce importante papel na estabilizao da conformao
protica. A ligao covalente pode ocorrer entre cistenas de uma
nica cadeia polipeptdica formando um anel ou entre cadeias
separadas para formar pontes intermoleculares.

SH S S

CH2 CH2 CH2


2 CHNH2 CHNH 2
CHNH 2
COOH COOH COOH

Cistena Cistina

2.4 Peptdeos

Apesar de apresentarem estruturas menos complexas que as


molculas de protenas, os peptdeos exercem atividades biolgicas
significantes.
O tripeptdeo glutationa (GSH, L glutamil- L cisteinilglicina)
contm uma ligao incomum amida ( o grupo carboxlico e no
o grupo carboxlico do cido glutmico que participa da ligao
peptdica). Encontrada em quase todos os organismos, a glutationa
est envolvida em diferentes processos, tais como, sntese de
protenas e DNA, transporte de aminocidos e metabolismo de
frmacos e substncias txicas. A glutationa tambm atua como
agente redutor e protege as clulas dos efeitos destrutivos da
oxidao por reao com substncias como o perxido (R O O R),
que so metablitos reativos do O 2 . Nos eritrcitos, o perxido de
hidrognio (H2 O 2 ) oxida o ferro da hemoglobina para a forma frrica
(Fe 3+ ). A metaemoglobina, o produto da reao, incapaz de ligar o
O 2 . A glutationa protege contra a formao de metaemoglobina pela
reduo do H2 O2 em reao catalisada pela enzima
glutationa peroxidase. No produto oxidado GSSG duas molculas de
GSH esto unidas por uma ponte dissulfeto entre seus grupos
sulfidrla.
2 GSH + H 2 O 2 GSSG + H 2 O
A enzima glutamil-transpeptidase participa do metabolismo da
glutationa e empregada como marcador para algumas hepatopatias,
como carcinoma hepatocelular e hepatopatias por alcoolismo.
40 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.1 Cromatografia de troca inica

A cromatografia de troca inica utiliza colunas Quando uma soluo contendo protenas com
cromatogrficas que separam as molculas com cargas positivas e negativas aplicada coluna
base na sua carga lquida. So usados compostos contendo um trocador de cargas de sinal contrrio,
com grupamentos funcionais positiva ou as molculas carregadas ligam-se por meio de
negativamente carregados, tais como, dietilaminoetil interaes inicas a trocadores de ctions e nions.
ou carboximetila, covalentemente ligados a uma Molculas neutras ou carregadas com as mesmas
matriz slida porosa (ex.: resinas base de acrlico, cargas, movem-se atravs da coluna sem serem
agarose, slica ou estireno divinilbenzeno) para captadas. A separao das molculas carregadas
formar trocadores de ctions ou nions. usualmente realizada em soluo-tampo com
concentraes de ons salinos e pH apropriados
(determinam os estados de ionizao da molcula)
que progressivamente, vo enfraquecendo as
ligaes inicas.

Alguns peptdeos atuam como molculas de sinalizao usadas


para coordenar o imenso nmero de processos bioqumicos em
organismos multicelulares. Os exemplos incluem o apetite, presso
sangnea e a percepo da dor. O papel de alguns desses peptdeos
so descritos brevemente.
Os estudos de regulao da ingesto de alimentos e do peso
corporal tem revelado vrias molculas de sinalizao no crebro.
Entre elas, esto os peptdeos estimulantes do apetite como o
neuropeptdeo Y (NPY) e a galanina, e peptdeos inibidores do
apetite como colecistocinina e hormnio estimulador melancito
( MSH). Evidncias recentes sugerem que a leptina, um
polipeptdeo produzido primariamente pelos adipcitos, exerce seus
efeitos sobre o peso corporal e atua sobre o neuropeptdeo Y, a
galanina e vrias outras molculas sinalizadoras para reduzir a
ingesto de alimentos e aumentar o gasto calrico.
A presso sangnea a fora exercida pelo sangue contra as
paredes dos vasos influenciada pelo volume sangneo e pela
viscosidade. Dois peptdeos afetam o volume sangneo: a
vasopressina e o fator natriurtico atrial. A vasopressina, tambm
chamada hormnio antidiurtico (ADH), sintetizada no hipotlamo
e contm nove resduos de aminocidos. O ADH estimula os rins a
reter gua. A estrutura do ADH bastante similar a outro peptdeo
produzido pelo hipotlamo chamado oxitocina, uma molcula de
sinalizao que estimula a liberao do leite pelas glndulas
mamrias e influencia o comportamento sexual, maternal e social. A
oxitocina produzida no tero estimula a contrao uterina durante o
parto. O fator natriurtico atrial (FNA) um peptdeo produzido por
clulas atriais cardacas em resposta a distenso estimula a
formao de urina diluda, um efeito oposto ao da vasopressina. O
FNA exerce seus efeitos, em parte, pelo aumento da excreo de Na +
pela urina, um processo que causa o aumento da excreo da gua e a
inibio da secreo de renina pelo rim.
2 Aminocidos e protenas 41

S S O
+H3N Cys Tyr Phe Glu Asp Cys Pro Arg Gly C
1 2 3 4 5 6 7 8 9 NH2

8-Arginina vasopressina (Hormnio antidiurtico)

A met encefalina e a leu encefalina pertencem a um grupo de


peptdeos chamados peptdeos opiceos, encontrados
predominantemente nas clulas do tecido nervoso. Os peptdeos
opiceos so molculas que atenuam a dor e produzem sensaes
agradveis. Os pentapeptdeos leu encefalina e met encefalina
diferem entre si somente pelos resduos de aminocidos dos
C terminais. A substncia P e a bradiquinina estimulam a percepo
de dor e apresentam efeitos opostos aos peptdeos opiceos.
Um importante dipeptdeo comercial sinttico o adoante
artificial aspartame (ster metlico de L aspartil L fenilalanina).

2.5 Protenas

As protenas so componentes essenciais matria viva. Atuam


como catalizadores (enzimas), transportadores (oxignio, vitaminas,
frmacos, lipdeos, ferro, cobre, etc.), armazenamento (casena do
leite), proteo imune (anticorpos), reguladores (insulina, glucagon),
movimento (actina e miosina), estruturais (colgeno), transmisso
dos impulsos nervosos (neurotransmissores) e o controle do
crescimento e diferenciao celular (fatores de crescimento)
Alm das resumidas acima, citam-se algumas funes de grande
importncia fisiolgica das protenas: manuteno da distribuio de
gua entre o compartimento intersticial e o sistema vascular do
organismo; participao da homeostase e coagulao sangnea;
nutrio de tecidos; formao de tampes para a manuteno do pH,
etc.
Baseado na sua composio, as protenas so divididas em
simples, que consistem somente de cadeias polipeptdicas, e
conjugadas que, alm das cadeias polipeptdicas tambm possuem
componentes orgnicos e inorgnicos. A poro no-peptdica das
protenas conjugadas denominada grupo prosttico. As mais
importantes protenas conjugadas so: nucleoprotenas, lipoprotenas,
fosfoprotenas, metaloprotenas, glicoprotenas, hemoprotenas e
flavoprotenas.
As protenas variam amplamente em suas massas moleculares.
Algumas atingem valores acima de um milho de daltons. O limite
mnimo mais difcil de definir mas, em geral, considera-se que uma
protena quando existir pelo menos 40 resduos de aminocidos. Isso
representa o ponto de demarcao no tamanho entre um polipeptdeo
e uma protena, entretanto deve-se enfatizar que essa uma definio
de convenincia, pois no existem diferenas marcantes nas
propriedades dos polipeptdeos grandes e protenas pequenas.
As propriedades fundamentais das protenas permitem que elas
participem de ampla variedade de funes:
As protenas so polmeros constitudos por unidades
monomricas chamadas aminocidos.
42 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.2 Cromatografia de filtrao em gel

A cromatografia de filtrao em gel separa as Assim, molculas de diferentes massas


molculas de acordo com seu tamanho e forma. moleculares podem ser separadas quando passam
Utiliza esferas porosas de um polmero insolvel mas pela coluna (peneira molecular). A resoluo
muito hidratado, como a agarose, dextrana ou depende do tamanho da partcula, tamanho do poro,
poliacrilamida. As esferas so contm poros de velocidade do fluxo, comprimento e dimetro da
diferentes tamanhos. A separao acontece quando coluna e o volume da amostra.
as molculas de diferentes tamanhos so passadas A tcnica aplicada no fracionamento de
atravs da coluna contendo as esferas porosas. As protenas e polissacardeos, determinao da massa
molculas pequenas se distribuem dentro dos poros, molecular de protenas e a purificao de cidos
enquanto as molculas grandes no entram nos nuclicos.
poros e passam rapidamente atravs da coluna.

As protenas contm vrios grupos funcionais.


As protenas podem interagir entre si ou com outras
macromolculas para formar associaes complexas.
Algumas protenas so bastante rgidas, enquanto outras
apresentam flexibilidade limitada.

2.6 Estrutura das protenas

A estrutura das protenas extraordinariamente complexa e seu


estudo requer o conhecimento dos vrios nveis de organizao. A
distino dos nveis de organizao realizada em termos de natureza
das interaes necessrias para a sua manuteno. Destingem-se
quatro nveis de organizao existentes nas protenas. Os conceitos a
seguir destinam-se fundamentalmente a melhor compreenso das
estruturas proticas, pois existem casos de sobreposio entre os
diferentes nveis de organizao. As quatro estruturas so:
1. Primria: nmero, espcie e a seqncia dos aminocidos
unidos por ligaes peptdicas e pontes dissulfeto. especificada por
informao gentica.
2. Secundria: arranjos regulares e recorrentes da cadeia
polipeptdica ( hlice e folha pregueada).
3. Terciria: pregueamento no peridico da cadeia
polipeptdica, formando uma estrutura tridimensional estvel.
4. Quaternria: arranjo espacial de duas ou mais cadeias
polipeptdicas (ou subunidades proticas) com a formao de
complexos tridimensionais.

A. Estrutura primria
Cada cadeia polipeptdica tem uma seqncia especfica de
aminocidos determinada por informao gentica. A estrutura
primria descreve o nmero de aminocidos, a espcie, a seqncia
(ordem) e a localizao das pontes dissulfeto (cistina) de uma cadeia
polipeptdica. A estrutura estabilizada pelas ligaes peptdicas e
pontes dissulfeto. Polipeptdeos com funes e seqncias de
aminocidos similares so denominados homlogos.
2 Aminocidos e protenas 43

O conhecimento das seqncias de aminocidos em protenas


importante por vrias razes:
Compreender como as protenas realizam suas aes moleculares.
Compreender os efeitos das mutaes resultantes da substituio
ou delees de um ou mais aminocidos nas protenas.
Verificar como protenas similares em diferentes organismos
podem contribuir com informaes acerca das vias evolutivas.
Comparar seqncias especficas de protenas com funes
similares em espcies diferentes.
Identificar a presena de repeties de seqncias em diferentes
protenas para agrup-las em famlias.
Estudar da constituio de protenas desconhecidas.
Atualmente so conhecidas as estruturas primrias de numerosas
protenas. A primeira a ser determinada foi a insulina (Sanger, 1953)
que possui duas cadeias polipeptdicas: cadeia A (21 aminocidos) e
B (30 aminocidos) que esto unidas entre si por duas pontes
dissulfeto (Cys S S Cys):

S S
A Gly Cys Cys Cys Cys Asn
S S

S S
B Phe Cys Cys Ala

B. Estrutura secundria
As protenas apresentam arranjos tridimensionais com
dobramentos regulares denominados estruturas secundrias das
protenas. Esta estrutura estabilizada por pontes de hidrognio entre
o oxignio carbonil de uma ligao peptdica e o hidrognio amida de
uma outra ligao peptdica prxima ( NH O=C ) . A presena de
numerosas pontes de hidrognio entre as ligaes peptdicas tem
grande significado na estabilizao da estrutura secundria. Existem
dois tipos de estruturas secundrias: hlice e folha pregueada.

Hlice
Na estrutura -hlice, a molcula polipeptdica se apresenta
como uma hlice orientada para a direita como se estivesse em torno
de um cilindro, mantida por pontes de hidrognio arranjadas entre os
grupos C=O e o H N das ligaes peptdicas. Cada volta da hlice
corresponde a 3,6 resduos de aminocidos (Figura 2.5). A distncia
que a hlice aumenta ao longo do eixo por volta de 54 nm. As
cadeias laterais R dos aminocidos projetam-se para fora da hlice.
44 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.3 Resina trocadora de ons

Diferentes trocadores de ons esto disponveis A cromatografia de troca inica usada em


para suprir necessidades especficas. A seleo do vrias separaes e purificaes de molculas
trocador de on apropriado depende das biolgicas, ex.: protenas, peptdeos, aminocidos,
propriedades das molculas de interesse. Com nucleotdeos e isoenzimas. tambm utilizada na
molculas anfotricas, a estratgia de separao deionizao da gua ou em solues de substncias
est baseada no pI e na estabilidade da molcula em no-inicas e na ultra-purificao de tampes,
diferentes valores de pH. Em pHs maiores que o pI, reagentes inicos etc.
a molcula estar negativamente carregada; em pHs
abaixo do pI estar positivamente carregada.
Assim, se a molcula estvel acima de seu
valor de pI, um trocador de nion usado ou, ao
contrrio, se estvel abaixo do seu valor de pI, um
trocador de ction empregado.

A presena dos aminocidos prolina e hidroxiprolina, cujas


estruturas cclicas relativamente rgidas no se encaixam hlice,
foram a cadeia a dobrar-se rompendo a estrutura secundria regular.
Esses dois aminocidos, tambm como a glicina, favorecem a
formao de conformao folha pregueada (ver adiante).
Seqncias polipeptdicas com grande nmero de aminocidos com
carga (ex.: cido asprtico, cido glutmico) e grupos R volumosos
(ex.: triptofano) so incompatveis com a estrutura helicoidal pelos
efeitos provocados por suas cadeias laterais.

N
C
C
N C
C
N

C C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
0,54 nm de passo C
(3,6 resduos) N
C
C
N 0,15 nm
N C C
C

Figura 2.6
Estrutura helicoidal de um segmento polipeptdeo mostrando os locais das
pontes de hidrognio intracadeia (C=O---H N).
2 Aminocidos e protenas 45

Quadro 2.4 Cromatografia de afinidade

A cromatografia de afinidade envolve a As substncias sem afinidade pelo ligante


propriedade de algumas protenas de se ligarem por passam pela coluna e so lavadas por um tampo. A
interaes no-covalentes. Um ligante se liga protena desejada liga-se ao ligante de forma
covalentemente a uma matriz inerte, exemplo, especfica de modo no-covalente. A protena ligada
agarose (uma matriz de resina slida) que pode ser eluda por soluo de ligantes livres ou
colocada em uma coluna. Uma mistura de aplicando solventes orgnicos ou, ainda, por
biomolculas passada atravs da coluna. solues de pH ou fora inica diferente.

Folha pregueada
A estrutura de folha pregueada resulta da formao de pontes
de hidrognio entre duas ou mais cadeias polipeptdicas adjacentes.
As pontes de hidrognio ocorrem entre os grupos C=O e NH de
ligaes peptdicas pertencentes a cadeias polipeptdicas vizinhas em
vez de no interior da cadeia (Figura 2.7). Cada segmento
polipeptdico individual denominado folha . Diferentemente da
hlice compacta, as cadeias polipeptdicas da folha esto quase
inteiramente estendidas.
Os segmentos polipeptdicos na folha pregueada so alinhados
no sentido paralelo ou antiparalelo em relao s cadeias vizinhas:
Estrutura folhas paralelas formada por cadeias polipeptdicas
com os N terminais alinhados na mesma direo.
Estrutura folhas antiparalelas, os N terminais de cada cadeia
polipeptdica esto alinhados em direes opostas.
Ocasionalmente, misturas de cadeias paralelas e antiparalelas so
observadas.
46 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

N N N N C N
C C C C C C
O C O C O C O C N H O C
N H N H N H N H O C N H
C C C C C C
C O C O C O C O H N C O
H N H N H N H N C O H N
C C C C C C
O C O C O C O C N H O C
N H N H N H N H O C N H
C C C C C C
C O C O C O C O H N C O
H N H N H N H N C O H N
C C C C C C
O C O C O C O C N H O C
N H N H N H N H O C N H
C C C C C C
C C C C N C
Paralela Anti-paralela

Figura 2.7
Estrutura de folha pregueada entre cadeias polipeptdicas.

A representao esquemtica das ligaes intermoleculares e das


cadeias paralelas dispostas em estrutura de folha pregueada so
mostradas na Figura 2.7. Nessas estruturas as cadeias laterais (R) so
projetadas para cima e para baixo aos planos formados pelas pontes
de hidrognio entre as cadeias polipeptdicas.

Estrutura secundria irregular


As hlices e as folhas pregueadas so classificadas como
estruturas secundrias regulares, pois seus componentes exibem
conformaes estruturais peridicas. Dependendo da natureza das
cadeias laterais dos aminocidos presentes, as hlices e as folhas
pregueadas podem se apresentar levemente distorcidas em sua
conformao especfica.
Muitas protenas apresentam combinaes de estruturas hlice
e de estruturas folha pregueada em propores variadas. As
combinaes produzem vrios arranjos denominados de estruturas
supersecundrias ou motivos cujas variaes so:
Motivo , em que duas folhas pregueadas paralelas esto
conectadas a uma hlice.
Motivo meandro, onde duas folhas pregueadas antiparalelas
esto conectadas por aminocidos polares e glicina que efetuam
uma mudana brusca de direo da cadeia polipeptdica.
Motivo , onde duas hlices antiparalelas consecutivas esto
separadas por uma ala ou segmento no-helicoidal.
Barris , so formados quando vrias folhas pregueadas
enrolam-se sobre si mesmas.
2 Aminocidos e protenas 47

(a) Unidade (b) Grampo (c) Meandro

(d) Chave grega (e) Sanduche

Figura 2.8
Algumas estruturas supersecundrias (motivos-protena). As setas
indicam as direes das cadeias polipeptdicas. (a) Motivo , (b)
motivo grampo, (c) motivo meandro, (d) motivo chave grega e (e)
sanduche.

As estruturas secundrias e supersecundrias de grandes


protenas, geralmente, so organizadas como domnios regies
compactas semiindependentes ligadas entre si por uma cadeia
polipeptdica.

C. Estrutura terciria
A estrutura terciria descreve a conformao especfica da cadeia
polipeptdica secundria que resulta numa estrutura mais compacta
onde os tomos ocupam posies especficas. O dobramento protico
um processo no qual uma molcula no organizada, nascente
(recentemente sintetizada) adquire uma estrutura altamente
organizada como conseqncia de interaes entre as cadeias laterais
presentes na sua estrutura primria. A estrutura terciria apresenta
vrias caractersticas importantes:
Muitos polipeptdeos dobram de modo que os resduos de
aminocidos que esto distantes um do outro na estrutura
primria podem estar prximos na estrutura terciria.
Devido ao empacotamento eficiente pelo dobramento da cadeia
polipeptdica, as protenas globulares so compactas. Durante o
processo, a maioria das molculas de gua so excludas do
interior da protena tornando possvel interaes entre grupos
polares e no polares.
Algumas cadeias polipeptdicas dobram-se em duas ou mais
regies compactas conectadas por um segmento flexvel de cadeia
polipeptdica. Essas unidades globulares compactas, chamadas
domnios, so formadas por 30 a 400 resduos de aminocidos.
Dominios so segmentos estruturalmente independentes que tm
48 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

funes especficas. Por exemplo, o receptor protico CD4, que


permite a ligao do vrus da imunodeficincia humana (HIV)
com a clula do hospedeiro, formado por quatro domnios
similares de aproximadamente 100 aminocidos cada. As
pequenas protenas possuem, geralmente, apenas um domnio.
A estrutura terciria tridimensional das protenas estabilizada
por interaes entre as cadeias laterais:
1. Interaes hidrofbicas. So as foras no-covalentes mais
importantes para a estabilidade da estrutura enovelada. As interaes
so resultantes da tendncia das cadeias laterais hidrofbicas
presentes na alanina, isoleucina, leucina, fenilalanina e valina de
serem atradas umas pelas outras para agruparem-se em reas
especficas e definidas para minimizar seus contatos com a gua.
Quando circundados por molculas de gua, os grupos hidrofbicos
so induzidos a juntarem-se para ocupar o menor volume possvel.
Assim, as molculas de gua altamente ordenadas so liberadas do
interior, aumentando a desordem do sistema (entropia). O aumento da
entropia termodinamicamente favorvel e dirige o dobramento
protico.
2 Interaes eletrostticas (ligaes inicas). Grupos
carregados positivamente como os grupos -amino, ( NH 3 ), nas
cadeias laterais de resduos de lisina podem interagir com grupos
carregados negativamente, como o grupo carboxila ( COO ) do cido
glutmico ou cido asprtico. Cerca de dois teros dos resduos de
aminocidos com cargas nas protenas formam pares inicos (ou
pontes salinas: associao de dois grupos inicos de cargas opostas).
3. Ligaes covalentes. O nico tipo de ligao covalente
presente na manuteno da estrutura terciria a ponte dissulfeto
formada de dois grupos sulfidrila de cadeias laterais de duas cistenas
(Cys S S Cys) para produzir uma cistina. As pontes dissulfeto
separadas uma da outra na estrutura primria (intracadeia) ou entre
duas cadeias polipeptdicas (intercadeias) formam-se medida que a
protena se dobra para adquirir a sua conformao nativa. No meio
extracelular, essas ligaes protegem parcialmente a estrutura das
protenas de modificaes adversas de pH e das concentraes de
sais. As protenas intracelulares raramente contm pontes dissulfeto
devido s altas concentraes citoplasmticas de agentes redutores.
4. Pontes de hidrognio. Grande nmero de pontes hidrognio
so formadas no interior e na superfcie das protenas (so pontes
diferentes daquelas envolvidas na manuteno de hlice ou folha
pregueada). Alm de formar pontes de hidrognio entre si, os grupos
polares das cadeias laterais dos aminocidos podem interagir com a
gua ou com o esqueleto polipeptdico. As pontes de hidrognio
contribuem moderadamente para direcionar o enovelamento.
5. Foras de van der Waals. uma fora de atrao inespecfica
que ocorre quando dois tomos quaisquer esto prximos. Podem
existir entre unidades de fenilalanina e tirosina prximas umas das
outras ou entre resduos vizinhos de serina. As foras de van der
Waals so tambm proeminentes entre as cadeias laterais envolvidas
nas interaes hidrofbicas. Apesar dessas foras serem
comparativamente fracas (Tabela 2.3), o efeito acumulativo de
2 Aminocidos e protenas 49

numerosos stios de interao tem substancial influncia para a


estabilidade da estrutura enovelada.

Cys Ile Val Trp Tyr Ser Glu

CH2 CH CH2 CH2 CH2 CH2


CH3 CH3
O CH2
CH H
CH3 CH2 N C O
S O
H O
CH3
+
S N H2 N NH2
N O C
CH3 CH3
CH C OH NH
CH2 CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 (CH2 )3

Cys Ala Phe Leu His Asp Arg


Ligao Interaes Pontes de Ligaes
covalente hidrofbicas hidrgnio eletroestticas

Figura 2.9
Ligaes ou interaes que estabilizam a estrutura terciria das protenas.

Os ons metlicos tambm podem formar ligaes cruzadas


internas nas protenas. Exemplo, os domnios contendo ligaes
cruzadas chamadas dedos de zinco so comuns em protenas ligadoras
de DNA. Essas estruturas consistem de 20-60 resduos com um ou
dois ons Zn 2+ . Os ons Zn 2+ so coordenados em um tetraedro pelas
cadeias laterais de Cys e/ou His e, algumas vezes, Asp ou Glu. Os
domnios so muito pequenos para assumir uma estrutura terciria
estvel na ausncia de Zn 2+ . O zinco um on ideal para estabilizar
protenas; ele pode interagir com vrios ligantes (S, N ou O)
provenientes de vrios aminocidos.

D. Estrutura quaternria
Muitas protenas so multimricas, ou seja, so compostas por
por duas ou mais cadeias poliptdicas. As cadeias individuais de
polipeptdeos chamadas protmeros ou subunidades esto
associadas por interaes no covalentes: efeitos hidrofbicos,
pontes de hidrognio e interaes eletrostticas. O arranjo espacial
das subunidades conhecido como estrutura quaternria das
protenas. As protenas multimricas em que algumas ou todas as
subunidades so idnticas, denominam-se oligmeros. Os oligmeros
so compostos de protmeros, que podem consistir de uma ou mais
subunidades. Grande quantidade de protenas oligomricas contm
duas ou quatro subunidades protomricas, e so chamadas de
dimricas ou tetramricas, respectivamente.
Existem vrias razes para a existncia de protenas
multissubunidades:
50 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

A sntese isolada de subunidades mais eficiente que aumentos


de tamanho da cadeia polipeptdica nica.
Em complexos supramoleculares como as fibrilas do colgeno, a
reposio de pequenos componentes defeituosos um processo
mais eficiente.
As interaes complexas de mltiplas subunidades ajudam a
regular as funes proticas.
Um exemplo de estrutura quaternria a hemoglobina formada
por quatro subunidades, ligadas entre si numa configurao
especfica (oligmero). Cada uma das subunidades caracterizada
por sua prpria estrutura secundria e terciria. As interaes dos
polipeptdeos ocorrem entre os grupos desprotegidos que no
participam do enovelamento da cadeia (estrutura terciria) (ver
Protenas globulares). Por outro lado, a enzima quimotripsina no
possui estrutura quaternria apesar de ser formada por trs cadeias
polipeptdicas, j que essas subunidades esto unidas entre si por
ligaes covalentes.

E. Protenas chaperones
uma famlia de protenas que previnem a agregao de
protenas recm-sintetizadas antes que elas assumam sua forma ativa,
sem alterar o resultado final do processo de enovelamento. As
protenas de choque trmico (hsp, heat shock protein) cuja sntese
aumentada em temperaturas elevadas, um exemplo de chaperones
que se liga a polipeptdeos medida que so sintetizadas nos
ribossomos. Existem duas classes principais de chaperones: a famlia
hsp70, de protenas de peso moleculares 70 kD, e as chaperoninas.

F. Dinmica protica
Apesar da importncia das foras que estabilizam as estruturas,
deve-se reconhecer que as funes das protenas exigem um certo
grau de flexibilidade. O significado da flexibilidade conformacional
(flutuaes contnuas e rpidas na orientao dos tomos na protena)
foi demonstrado nas interaes protenas-ligantes. A funo protica
muitas vezes envolve a rpida abertura e fechamento de cavidades na
superfcie da molcula. A velocidade com que as enzimas catalisam
reaes est limitada em parte pela rapidez com que o produto
liberado do stio ativo. A transferncia de informaes entre
biomolculas acompanhada por modificaes na estrutura
tridimensional. Por exemplo, a conformao das subunidades das
molculas de hemoglobina sofre modificaes estruturais especficas
com a ligao e liberao do oxignio da molcula.

2.7 Desnaturao e renaturao

A desnaturao ocorre pela alterao da conformao


tridimensional nativa das protenas (estrutura secundria, terciria e
quaternria) sem romper as ligaes peptdicas (estrutura primria).
Como a estrutura tridimensional especfica das protenas
fundamental para o exerccio de suas funes, alteraes estruturais
2 Aminocidos e protenas 51

provocadas pela desnaturao ocasionam a perda parcial ou completa


das suas funes biolgicas.
Muitas vezes, em condies fisiolgicas, as protenas recuperam
a conformao nativa e restauram atividade biolgica quando o
agente desnaturante removido em processo denominado
renaturao.
A desnaturao ocorre nas seguintes condies:
1. cidos e bases fortes. Modificaes no pH resultam em
alteraes no estado inico de cadeias laterais das protenas, que
modificam as pontes de hidrognio e as pontes salinas (associao de
grupos inicos de protenas de carga oposta). Muitas protenas
tornam-se insolveis e precipitam na soluo.
2. Solventes orgnicos. Solventes orgnicos solveis em gua
como o etanol, interferem com as interaes hidrofbicas por sua
interao com os grupos R no polares e forma pontes de hidrognio
com a gua e grupos proticos polares. Os solventes no-polares
tambm rompem interaes hidrofbicas.
3. Detergentes. As molculas anfipticas interferem com as
interaes hidrofbicas e podem desenrolar as cadeias polipeptdicas.
4. Agentes redutores. Em presena de reagentes como a uria e
mercaptoetanol ocorre a converso das pontes dissulfeto em grupos
sulfidrlicos. A uria rompe pontes de hidrognio e interaes
hidrofbicas.
5. Concentrao de sais. A ligao de ons salinos a grupos
ionizveis das protenas enfraquecem as interaes entre grupos de
cargas opostas da molcula protica. As molculas de gua solvatam
os grupos proticos. Com a adio de grandes quantidades de sal s
protenas em soluo, formam-se precipitados. As molculas de gua
competem pelo sal adicionado tornando a quantidade de solvente
muito pequena e, com isso, promovendo a agregao de molculas
proticas e a sua precipitao. Esse efeito chamado salting out.
6. ons de metais pesados. Metais pesados como o mercrio
(Hg 2+ ) e chumbo (Pb 2+ ) afetam a estrutura protica de vrias formas.
Podem romper as pontes salinas pela formao de ligaes inicas
com grupos carregados negativamente. Os metais pesados tambm se
ligam com grupos sulfidrlicos, um processo que pode resultar em
profundas alteraes das estruturas e funes proticas. Por exemplo,
o chumbo liga-se aos grupos sulfidrlicos de duas enzimas da via
sinttica da hemoglobina causando anemia severa (na anemia o
nmero de eritrcitos ou da concentrao de hemoglobina no sangue
esto abaixo dos valores de referncia).
7. Alteraes na temperatura. Com o aumento da temperatura, a
velocidade de vibrao molecular aumenta. Eventualmente,
interaes fracas como as pontes de hidrognio so rompidas
promovendo alteraes na conformao das protenas.
8. Estresse mecnico. Agitao e triturao rompem o delicado
equilbrio de foras que mantm a estrutura protica. Por exemplo, a
espuma formada quando a clara do ovo batida vigorosamente
contm protena desnaturada.
52 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Nativa Desnaturada

Figura 2.10
Desnaturao de protenas

2.8 Protenas fibrosas

As protenas fibrosas tipicamente contm altas propores de


estruturas secundrias regulares, como hlices ou folha
pregueadas. Compem os materiais estruturais de rgos e tecidos,
dando a eles elasticidade e/ou resistncia. Em geral, so pouco
solveis em gua pela presena de teores elevados de aminocidos
hidrfobos tanto no interior como no exterior das cadeias
polipeptdicas helicoidais reunidas em feixes. So exemplos
caractersticos da relao entre a estrutura protica e a funo
biolgica. As principais protenas fibrosas so: o colgeno, as
queratinas e a fibrona da seda.

A. Colgeno
O colgeno a protena mais abundante em vertebrados sendo
componente essencial do tecido conjuntivo que, numa variedade de
formas geneticamente distintas, se distribui pela matriz ssea, pele,
tendes, cartilagens, crnea, vasos sangneos, dentes e outros
tecidos. sintetizado pelas clulas do tecido conjuntivo e secretada
para o espao extracelular para fazer parte de uma rede complexa de
macromolculas localizadas na matriz extracelular.
2 Aminocidos e protenas 53

Quadro 2.5 Osteogenesis imperfecta

A osteogenesis imperfecta, tambm conhecida A estabilidade da estrutura do colgeno


como doena dos ossos quebradios, um grupo de reduzida pelo rompimento da ponte de hidrognio N
pelo menos quatro doenas clnica, gentica e H do esqueleto de cada alanina (normalmente
bioquimicamente distintas com prevalncia de glicina) ao grupo carbonila da prolina adjacente da
1:10.000. A gravidade da doena varia de moderada cadeia vizinha.
a letal e depende da natureza e da posio da A posio da aberrao est relacionada com a
mutao. Nas formas mais severas, mais de 100 gravidade da doena. Mutaes prximas do C-
fraturas in tero foram relatadas com o resultante terminal so mais severas que as mais prximas do
parto de natimorto. N-terminal. Isso porque a formao da hlice trplice
O defeito fundamental so mutaes nos genes inicia a partir do C-terminal e progride em direo ao
do procolgeno Tipo I. Na maioria das mutaes N-terminal. A gravidade da doena tambm esta
ocorre a substituio de uma nica base no cdon relacionada com as propriedades do aminocido que
para a glicina, resultando na distoro da hlice substitui a glicina.
trplice do colgeno.

O colgeno uma protena extracelular pouco solvel em gua e


organizada em fibras de grande resistncia. Cada molcula de
colgeno constituda de trs cadeias polipeptdicas (uma tripla
hlice) enroladas uma em torno da outra e orientadas para a direita
com cerca de 1.000 resduos de aminocidos cada uma.
A estrutura primria das cadeias polipeptdicas do colgeno (com
exceo de 15 a 25 aminocidos nos terminais NH 2 e COOH)
constituda de glicina (~33% do total), de prolina (~10%) e
4 hidroxiprolina (~10%), constituindo tripletes da seqncia repetida
(Gly X Y) n , em que X e Y so freqentemente prolina e
hidroxiprolina. A 5 hidroxilisina e a 3 hidroxiprolina tambm esto
presentes em pequenas quantidades. Alguns resduos de hidroxilisina
do colgeno esto ligados a carboidratos simples por meio de sua
hidroxila formando glicoprotenas. Os componentes carboidratos do
colgeno so necessrios para a fibrilognese, associao de fibras de
colgeno em suas localizaes extracelulares, como os tendes e
ossos.
As trs cadeias polipeptdicas entrelaam-se para formar uma
trplice hlice direita estabilizada por pontes de hidrognio
formadas entre as cadeias polipeptdicas individuais (entre o NH da
glicina de uma cadeia e a C=O da prolina ou de outro aminocido em
outra cadeia) constituindo o mdulo estrutural bsico do colgeno,
chamado tropocolgeno.
A sntese do colgeno ocorre inicialmente no retculo
endoplasmtico, depois no aparelho de Golgi e, finalmente, no espao
extracelular. A cadeia nascente polipeptdica, chamada
pr procolgeno, sofre modificao ps transducional fornecendo o
procolgeno. Modificaes ps-translacionais adicionais envolvem a
hidroxilao, a oxidao, a condensao aldlica, reduo e
glicolisao. Pela ao de hidrolases (prolil hidroxilase e
lisil hidroxilase) so adicionados grupos hidroxila aos resduos de
prolina e lisina da cadeia em reaes que requerem cido ascrbico
(vitamina C).
Na deficincia de vitamina C, o tropocolgeno no forma as
ligaes cruzadas covalentes. O resultado o escorbuto, uma doena
nutricional cujos sintomas so: descoloraes da pele, fragilidade dos
vasos sangneos, hemorragia gengival e, em casos extremos, a
morte.
54 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Quadro 2.6 Pron protena

A encefalopatia espongiforme bovina (doena A protena encontrada principalmente na


da vaca louca), scrapie em ovelhas, a sndrome de superfcie externa de neurnios, mas sua funo
Creutzfeldt Jacob e a kuru em humanos so ainda desconhecida.
doenas causadas por uma protena conhecida como Mutaes nos genes humanos PrPc parecem ser
pron protena celular (PrPC). A pron protena responsveis por doenas inerentes da
(agentes infecciosos proteinceos) componente pron protena, por exemplo, a doena de
das clulas cerebrais normais onde se encontra Gerstmann Strussler Scheinker e insnia familiar
fundamentalmente na conformao hlice. Em fatal. Mais de 18 diferentes mutaes j foram
tecidos doentes, a forma infecciosa da protena pron identificadas.
apresenta-se como uma mistura de hlice e folhas O pron foi descoberto pelo Dr. Stanley B.
pregueadas (PrPSc), produzindo agregados Prusiner, o qual recebeu o Prmio Nobel de
fibrosos que danificam as clulas cerebrais. As Fisiologia em 1997.
doenas por prons derivados de PrPSc podem ser
de origem gentica ou infecciosa.

Figura 2.11
Representao do modelo de colgeno

As ligaes cruzadas covalentes formadas dentro e entre as


hlices do tropocolgeno, aumentam a resistncia tensional dessas
estruturas. As ligaes cruzadas so obtidas a partir da lisina em duas
fases:
O grupo amino da lisina ou da hidroxilisina oxidado pela
lisil-oxidase para formar alisina um aminocido contendo o
grupo R aldedo.
O grupo aldedo da alisina reage com o grupo -amino de outro
resduo de lisina de um filamento adjacente para produzir uma
ligao cruzada estvel. Alternativamente, dois resduos de
alisina reagem por condensao aldlica para formar outra
ligao cruzada.
A biossntese das cadeias de tropocolgeno e sua associao em
microfibrilas do colgeno ocorre a partir de molculas precursoras
chamadas pr-colgenos que so processadas pela remoo dos
aminoterminais e carboxi-terminal por meio de protelise seletiva.
As trs cadeias polipeptdicas que compem o colgeno so
denominadas cadeias . Essas cadeias combinadas em uma estrutura
em tripla hlice formam os vrios tipos de colgeno presentes nos
Fibras de colgeno
tecidos. O colgeno tipo I, o mais abundante (90% do colgeno total),
formado por duas cadeias polipeptdicas 1 e uma cadeia 2 que
formam uma hlice trplice. Alguns tipos de colgeno so mostrados
na Tabela 2.3.
2 Aminocidos e protenas 55

Tabela 2.3 Alguns tipos de colgeno mais abundantes

Tipo Composio Distribuio nos tecidos

I ( 1 )2 2 Tendes, pele, ossos, crnea, vasos sangneos


II ( 1 )3 Cartilagem, disco intervertebral, humor vtreo
III ( 1 )3 Pele fetal, vasos sangneos, rgos internos
IV ( 1 )2 2 Membrana basal
V ( 1 )2 2 Pele, placenta, vrios tecidos

B. -Queratinas
As queratinas so protenas constitudas quase exclusivamente
de hlices compostas de trs cadeias polipeptdicas enroladas em
forma de corda helicoidal resistente ao estiramento. So ricas em
resduos de cistena que formam pontes covalentes de dissulfeto que
estabilizam as cadeias polipeptdicas adjacentes. Apresentam tambm
teores importantes de resduos de aminocidos hidrofbicos alanina,
valina, isoleucina, fenilalanina e metionina.
As queratinas formam a protena da pele, cabelo, unhas,
chifres, penas e l. O cabelo constitudo de clulas mortas.

C. Fibrona da seda
Muitos insetos e aranhas produzem seda, uma estrutura que
consiste da protena fibrosa fibrona embebida em uma matriz
amorfa. Na fibrona, considerada uma queratina, as cadeias
polipeptdicas so arranjadas na conformao de folhas
antiparalela. As folhas so formadas porque a fibrona tem
elevado contedo de aminocidos com grupos R relativamente
pequenos como a glicina, alanina ou serina. A seda uma fibra
resistente por estar quase completamente distendida. Para estic-la
mais, seria necessrio romper as ligaes covalentes de suas cadeias
polipeptdicas. No entanto, a flexibilidade da seda ocasionada pelo
deslizamento das folhas adjacentes que esto associados por foras
de van der Waals.

2.9 Protenas globulares

As protenas globulares possuem cadeias polipeptdicas


enoveladas firmemente em estruturas tridimensionais compactas com
forma esfrica ou elipside. Suas massas moleculares so variveis
enquanto a solubilidade em gua relativamente elevada pois as
cadeias laterais hidrofbicas (insolveis em gua) dos aminocidos
(fenilalanina, leucina, isoleucina, metionina e valina) esto
orientados para o interior das estruturas, enquanto os grupos polares
hidrfilos (arginina, histidina, lisina, cido asprtico e cido
glutmico) esto situados na rea externa. Os aminocidos com
grupos polares no carregados (serina, treonina, asparagina,
glutamina e tirosina) esto tanto na superfcie externa da protena,
como no interior da molcula. As protenas globulares exercem
diferentes tipos de atividades biolgicas, tais como: enzimas,
56 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

transportadores e moduladores fisiolgicos e genticos. Os exemplos


tpicos so: a mioglobina, a hemoglobina e os anticorpos.

Protena globular com estrutura -hlice e folha pregueada.

A. Mioglobina
A mioglobina presente no citosol das clulas musculares, uma
protena transportadora e armazenadora de oxignio nos msculos
esquelticos e cardacos dos vertebrados. A mioglobina liga o
oxignio liberado pela hemoglobina nos capilares e posteriormente
difundido atravs das membranas celulares. Formada por uma nica
cadeia polipeptdica de 153 resduos de aminocidos e um grupo
prosttico heme (anel heterocclico porfirnico contendo quatro anis
pirrlicos e um tomo de Fe 2+ ). No possui resduos de cistena e,
portanto, no apresenta ligaes dissulfeto. As caractersticas
fundamentais da estrutura da mioglobina so:
uma protena globular com dimenses aproximadas de 4,5 x 3,5
x 2,5 nm.
A superfcie da molcula polar e seu interior apolar. Os
aminocidos polares da cadeia polipeptdica contribuem para a
alta solubilidade da molcula.
O interior da molcula compacto e consiste quase inteiramente
de resduos de aminocidos no-polares (leucina, valina,
metionina e fenilalanina) e desprovido de resduos de
aminocidos com carga, tais como, aspartato, glutamato, lisina e
arginina. Os nicos resduos polares no interior so dois resduos
de histidina, que atuam na ligao do ferro e oxignio.
Resduos de aminocidos polares e no-polares (ex.: treonina e
tirosina) esto orientados com sua poro no-polar para o
interior da molcula.
Composta por oito regies -hlice conectadas por dobras
formadas por aminocidos desestabilizadores designados AH ,
que constituem 75% da cadeia. Cada aminocido da cadeia
2 Aminocidos e protenas 57

codificado, ex.: His F8 refere-se ao oitavo resduo da hlice F


(Figura 2.12).
A cadeia contm um total de sete segmentos no-helicoidais:
cinco deles no interior das regies helicoidais e designados de
acordo com as hlices que eles interrompem.
A ocorrncia de prolina interrompe as hlice. Existem quatro
resduos de prolina na mioglobina.

Figura 2.12
Estrutura da molcula de mioglobina. O esqueleto peptdico
constitudo por oito -hlices marcadas por letras, de A a H.

B. Hemoglobina
A hemoglobina uma protena tetramrica presente nas hemceas
cuja principal funo o transporte do oxignio dos pulmes aos
tecidos perifricos. A hemoglobina tambm transporta CO 2 e prtons,
dos tecidos perifricos aos pulmes, para subseqente excreo.
A hemoglobina normal de adulto, a HbA consiste de quatro
cadeias polipeptdicas: duas (cada uma com 141 resduos de
aminocidos) e duas (cada uma com 146 resduos de aminocidos)
representada por 2 2 e estabilizadas por pontes de hidrognio e
interaes eletrostticas. Outra forma encontrada em baixos teores (1
a 3,5% do total) no adulto a HbA 2 composta por cadeias 2 2 . A
HbF formada por 2 2 predomina no feto, em 60 a 90% no recm-
nascido e <1% aps um ano. A hemoglobina H formada por quatro
cadeias , produzida quando faltam cadeias para a sntese de HbA.
A hemoglobina de Bart constituda de tetrmero de , formada
quando faltam cadeias para a sntese de HbF no feto; apresenta-se
em <2% no recm-nascido normal.
Cada uma das cadeias de hemoglobina contm um grupo
prosttico, o heme (molcula de protoporfirina IX contendo um
tomo de Fe 2+ ). Nas cadeias , o heme est encaixado entre a His 58
58 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

e a His 87, enquanto nas cadeias , o encaixe ocorre entre a His 63 e


His 92.
Com respeito estrutura secundria, cada cadeia de
hemoglobina consiste de vrias regies hlice separadas umas das
outras por segmentos no helicoidais. A estrutura terciria envolve
vrias voltas e espirais, tendo cada cadeia uma forma esferide.
Apesar das estruturas primrias das cadeias e da hemoglobina
diferirem significativamente daquela da mioglobina, as conformaes
secundria e terciria so bastante semelhantes.
As principais caractersticas da molcula de hemoglobina so:
No existem ligaes covalentes entre as quatro cadeias
polipeptdicas, apesar da existncia de dois resduos de cistena
em cada subunidade e um resduo por subunidade .
Entre as subunidades idnticas ( ou ), existem poucas
interaes eletrostticas e algumas pontes de hidrognio.
Entre as subunidades e existem extensas regies de
interaes eletrostticas que produzem dois dmeros idnticos,
1 1 e 2 2 , que se movimentam juntos.

O
O

H2 C CH CH3

H3 C A B CH2
N N CH
Fe(II)
N N
H3 C D C CH3

OOC CH2 CH2 CH 2 CH 2 COO

HN
CH2
C O
H
N C
H

Figura 2.13
Grupo heme. O grupo heme est presente na mioglobina, hemoglobina e
em hemoprotenas.

Entre os dmeros esto presentes uma rede de interaes


eletrostticas e pontes de hidrognio que se rompem e so
substitudas pela formao de novas ligaes no decorrer da
oxigenao reversvel da hemoglobina. Na oxigenao no
ocorrem alteraes na estrutura terciria de cada subunidade, mas
as cadeias e sofrem alteraes rotacional e posicional de
2 Aminocidos e protenas 59

diferentes magnitudes causando um novo empacotamento das


subunidades.

Figura 2.13
Estrutura da hemoglobina.

Em presena de oxignio, os tomos de ferro da


desoxihemoglobina se dirigem ao plano do anel heme. Esse
movimento transmitido histidina proximal (F8), que se move em
direo ao plano do anel e aos resduos ligados. (Figura 2.14).

Hlice F N
C
CH
HC N

Fe
Plano da
porfirina
+O2
Hlice F
C N
HC CH
N

Fe

O
O
60 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Figura 2.14
O tomo de ferro se dirige para o plano do heme oxigenado. A histidina
F8 atrada junto com o tomo de ferro.

Enquanto a mioglobina apresenta grande afinidade pelo oxignio,


a hemoglobina demonstra uma afinidade inicial lenta que se torna
progressivamente mais rpida. Esse fenmeno conhecido como
interao cooperativa, uma vez que a ligao do primeiro O 2
desoxi hemoglobina facilita a ligao de O 2 s outras subunidades na
molcula. De modo inverso, a dissociao do primeiro O 2 da
hemoglobina completamente oxigenada, Hb(O 2 ) 4 , tornar mais fcil a
dissociao de O 2 das outras subunidades da molcula. A oxigenao
da hemoglobina acompanhada por mudanas conformacionais nas
proximidades do grupo heme. A estrutura quaternria da hemoglobina
desoxigenada (desoxi Hb) descrita como estado conformacional T
(tenso) e aquela da hemoglobina oxigenada (oxi Hb) como estado
conformacional R (relaxada). A afinidade do O 2 mais baixa no
estado T e mais alta no estado R.
Em funo da cooperatividade em associao e dissociao do
oxignio, a curva de saturao de oxignio para a hemoglobina difere
da observada para a mioglobina (Figura 2.15)

100 Mioglobina

80 Hemoglobina

60

40

Presso Presso
20
venosa arterial

0 20 40 60 80 100 120
Presso parcial de oxignio (mm Hg)

Figura 2.15
Curva de ligao da mioglobina e hemoglobina pelo oxignio. A forma
hiperblica da curva de ligao da mioglobina representa a ligao simples
de uma molcula pequena a uma protena. A ligao do oxignio
hemoglobina segue uma curva sigmide caracterstica de uma interao
cooperativa entre os stios de ligao.

Alm das modificaes estruturais de protenas causadas pela


oxigenao/desoxigenao, a ligao do O 2 hemoglobina afetada
por substncias chamadas efetores alostricos (ver Captulo 3:
Enzimas): CO 2 , H + e 2,3 bifosfoglicerato (2,3 BPG).
1. Efeito do 2,3 bifosfoglicerato (2,3 BPG). O 2,3 BPG,
sintetizado a partir de um intermedirio da via glicoltica (o
1,3 bifosfoglicerato), um importante modulador da ligao do
2 Aminocidos e protenas 61

oxignio hemoglobina. Nos tecidos perifricos, a deficincia de


oxignio determina acmulo de 2,3 DPG. Nos eritrcitos, o 2,3 BPG
liga-se fortemente a desoxiemoglobina e fracamente a oxiemoglobina
atuando como um efetor alostrico negativo. Assim, o BPG reduz a
afinidade da hemoglobina pelo oxignio atravs da ligao com a
desoxiemoglobina, mas no oxiemoglobina.

O
2-
C OPO3
H C OH
2-
CH2 OPO3

2,3-Bifosfoglicerato
A concentrao do 2,3 BPG nos eritrcitos sensvel a vrias
condies fisiolgicas e patolgicas. Os nveis de 2,3 BPG esto
elevadas na privao crnica de O 2 nos tecidos como acontece em
algumas anemias, insuficincias cardacas e na adaptao a altitudes
elevadas. Desse modo, ocorre a maior estabilizao do estado T
desoxigenado, provocando a liberao de mais oxignio para os
tecidos hipxicos. (Figura 2.16).

1.0
Sem
BPG
0.8

0.6
y

0.4 Com BPG

0.2

20 40 60
Pa O2 (torr)

Figura 2.16
Efeito do BPG sobre a ligao do oxignio hemoglobina. A
hemoglobina sem BPG tem maior afinidade pelo O 2 do que a hemoglobina
com BPG.

2. Efeito de Bohr. A combinao da hemoglobina com O 2


tambm depende do pH, um fenmeno conhecido como efeito de
Bohr. Teores elevados de on hidrognio (pH reduzido) favorecem a
liberao de O 2 ; o inverso tambm verdadeiro. O efeito de Bohr
possui considervel importncia fisiolgica no transporte de O 2 dos
pulmes para os tecidos e no transporte do CO 2 dos tecidos
perifricos para os pulmes. medida que o sangue atinge os
tecidos, o CO 2 difunde-se para os eritrcitos, reduzindo o pH e a
afinidade da hemoglobina pelo O 2 , realizando a reao H + + HbO 2
O 2 + HHb + . Nos pulmes, a perda de CO 2 eleva o pH e aumenta a
afinidade da hemoglobina pelo O2 .
62 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Exalado

2CO2 +2H2 O

Anidrase
carbnica

2H2 CO3

Tecidos
perifricos
2HCO3 +2H + Hb 4O2
4O2

2H + + 2HCO3
4O2 Hb 2H +
(Tampo)
Pulmes 2H2 CO3

Anidrase
carbnica

2CO2 +2H2O

Gerado pelo
ciclo de Krebs

Figura 2.17
Efeito de Bohr. O CO 2 produzido nos tecidos perifricos se combina com a
gua com a formao de cido carbnico que se dissocia nos ons
bicarbonato e hidrognio. A hemoglobina desoxigenada funciona como
tampo se ligando a prtons e os liberando nos pulmes. Nos pulmes, o
oxignio ligado hemoglobina provoca a sada dos prtons da hemoglobina.
Os prtons se combinam com o on bicarbonato produzindo cido carbnico
que, em presena de anidrase carbnica, produz o dixido de carbono,
posteriormente exalado pelos pulmes. A afinidade da hemoglobina pelo
oxignio aumenta com o aumento do pH.

3. Efeito do CO 2 . Clulas metabolicamente ativas produzem


elevados teores de CO 2 . Concentraes elevadas de CO 2 reduzem a
afinidade da hemoglobina pelo O 2 . O CO 2 reage transitoriamente com
grupos amino N terminais das cadeias polipeptdicas da
hemoglobina para formar carbamino hemoglobina que transporta o
CO 2 para os pulmes para a sua eliminao.

Hemoglobinopatias
Mais de 600 variantes genticas da seqncia dos aminocidos da
hemoglobina de adultos normais (HbA) foram relatadas. Essas
molculas, em cerca de 95% dos casos, so resultado da substituio
de um nico aminocido nas cadeias ou durante o processo de
sntese protica. Outras variantes podem ser devidas a insero ou
deleo de um ou mais nucleotdeos que modificam a matriz de
leitura dos cdons durante a sntese protica. Algumas hemoglobinas
variantes causam doenas debilitantes dependendo da natureza e
posio da substituio. Vrias mutaes desestabilizam as estruturas
tercirias e quaternrias modificando a afinidade da hemoglobina
pelo O 2 .
2 Aminocidos e protenas 63

Quadro 2.7 Anemia falciforme

A anemia falciforme uma sndrome falcmica A mutao, entretanto, confere maior resistncia dos
caracterizada pela presena de hemoglobina S nos eritrcitos com HbS ao Plasmodium falciparum
eritrcitos. Na hemoglobina S (de Silckle), uma forma (protozorio transmitido por mosquito e responsvel pela
variante da hemoglobina adulta normal (HbA 1 ) em que malria) que necessita dos eritrcitos do hospedeiro
ocorre a substituio do glutamato, na posio 6 da durante parte do seu ciclo de vida. Clulas falciformes,
cadeia de HbA 1 pela valina. Ou seja, o glutamato de devido a sua fragilidade, so removidas da circulao
cadeia lateral polar substitudo pela valina apolar. O sangnea mais rapidamente que as hemcias normais e
novo arranjo permite a interao hidrofbica com a o parasito no completa esse estgio do seu
85 88
fenilalanina e leucina de uma desoxi HbS desenvolvimento. Parasitas existentes nessas clulas
adjacente. As molculas se agregam com a formao de so tambm destrudos pela atividade esplnica.
polmeros com outras molculas de conformao desoxi
da HbS, produzindo longos precipitados fibrosos (280
milhes em cada eritrcito) que, por sua vez, deformam
os eritrcitos (forma de foice), resultando em alta
velocidade de hemlise. Apenas indivduos
homozigticos para HbS apresentam a doena. Em
indivduos com duas cpias do gene mutante
(homozigticos), os drepancitos interagem para formar
agregados que podem obstruir os vasos capilares
reduzindo o fluxo normal de sangue. O bloqueio da
microcirculao ocorre em qualquer parte do organismo;
nos glomrulos, causam glomerulite focal e hematria. A
remoo aumentada de eritrcitos falciformes promove
anemia. A expectativa de vida de um homozigtico
menor que 30 anos.

As anormalidades da sntese da hemoglobina so as doenas


genticas mais comuns em todo o mundo e so divididas em trs
grupos:
Hemoglobinopatias estruturais. So defeitos genticos em que h
troca de aminocidos na seqncia das cadeias globnicas da
hemoglobina. Ex.: hemoglobina S (caracteriza a anemia de
clulas falciformes), microdrepanocitose, hemoglobinopatia SC,
hemoglobinopatia C, hemoglobinopatia D, hemoglobinopatia E
hemoglobinas instveis.
Talassemias. Defeitos genticos em que h reduo da sntese de
uma ou mais cadeias globnicas. Ex.: talassemias,
talassemias, talassemia do recm-nascido e talassemia.
Persistncia hereditria da hemoglobina fetal. Sntese de
hemoglobina fetal durante a idade adulta. H formas
homozigticas e heterozigticas. Os homozigticos tm 100% de
HbF, pois no sintetizam cadeias e .

C. Anticorpos
Os anticorpos ou imunoglobulinas compem uma famlia de
glicoprotenas produzidas pelos linfcitos B em resposta presena
de molculas estranhas conhecidas como antgenos (resposta
imunitria humoral). As caractersticas estruturais fundamentais das
imunoglobulinas so:
As molculas de anticorpo so glicoprotenas com quatro cadeias
polipeptdicas. Cada molcula tem estrutura em Y contendo duas
unidades idnticas chamadas cadeias pesadas (H) e duas
64 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

unidades idnticas entre si, porm de menor tamanho,


denominadas cadeias leves (L).
A estrutura primria das cadeias pesadas, denominadas cadeias ,
, , e , a base da classificao das imunoglobulinas em
cinco classes: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. A IgG
humana pode ser subdividida em quatro subclasses: IgG 1 , IgG 2 ,
IgG 3 e IgG 4 , enquanto a IgA em duas classes.
As cadeias leves de cada molcula de imunoglobulina so
formadas por apenas dois tipos e .
As quatro cadeias so covalentemente interconectados por pontes
dissulfeto. No interior de cada cadeia da molcula, ligaes
dissulfeto intercadeias dobram a molcula em uma estrutura mais
compacta.
Cada cadeia polipeptdica consiste de duas regies regio
varivel (V) e regio constante (C) quanto seqncia de
aminocidos, (estrutura primria). A regio varivel da cadeia
leve (V L ) , aproximadamente, 50% do comprimento da cadeia
enquanto a regio varivel da cadeia pesada (V H )
aproximadamente 25% do comprimento da cadeia.
A digesto pela papana fornece dois fragmentos principais
chamados fragmento F ab , que retm a capacidade de ligar o antgeno
da molcula intacta, e o fragmento F c , que cristalizvel.

2.10 Protenas como eletrlitos

As protenas apresentam caractersticas cido base semelhantes


aquelas dos aminocidos. Com exceo dos aminocidos N terminal
e C terminal, os grupos amino e carboxlicos esto
comprometidos nas ligaes peptdicas. Os polipeptdeos possuem
cargas eltricas devido principalmente aos grupos ionizveis das
cadeias laterais (R) dos resduos de aminocidos. Os valores de pK
desses grupos nas protenas diferem daqueles apresentados para os
aminocidos livres, pois so influenciados pela natureza dos outros
resduos presentes na vizinhana.
O pK dos grupos ionizveis dos resduos de aminocidos numa
cadeia polipeptdica so mostrados na Figura 2.18.
2 Aminocidos e protenas 65

Quadro 2.8 Eletroforese das protenas

As protenas nos lquidos biolgicos so A eletroforese empregada em laboratrio


molculas anfteras que podem ser separadas em clnico para a separao das fraes proticas do
fraes quando aplicadas sobre um suporte poroso e soro sangneo (ou urina, lquido cefalorraquidiano
submetidas a um campo eltrico em processo ou outros lquidos biolgicos). O soro aplicado num
denominado eletroforese. A migrao ocorre de suporte (papel de filtro, acetato de celulose,
acordo com o grau de ionizao, tamanho e forma da poliacrilamida, gel de agarose, etc) cujas
molcula protica, tambm como das caractersticas extremidades esto mergulhadas numa soluo
da soluo tampo onde se realiza o processo; da tampo com pH 8,6 (neste pH predominam cargas
fora do campo eltrico; da porosidade, viscosidade negativas nas protenas) que esto sob diferena de
e temperatura do suporte. potencial eltrico. As protenas migram e so
As fraes nas quais predominam as cargas separadas em fraes.
negativas, a protena se dirige para o nodo (plo Aps a migrao o suporte corado e tornam-se
positivo) e as positivas, migram para o ctodo (plo visveis seis fraes: a albumina e as globulinas 1 ,
negativo). Como a carga da protena depende da 2, 1, 2 , e .
concentrao do on hidrognio da soluo, o pH O suporte corado submetido leitura
deve ser especificado e mantido constante durante o densitomtrica e representada na forma de grfico.
procedimento.

+
HN CH

NH
-
COO
-
C CH
COO CH2
O CH2 H O CH2 H O CH2 H
H H H -
H2N C C N C C N C C N COO
CH2 N C C N C C N C C
H H H
H O CH2 H O CH2 H O CH3
CH2 CH2
CH2 CH2
CH2 NH
+
NH3 C
+
H2N NH2

Figura 2.18
Cadeia polipeptdica hipottica contendo alguns grupos que contribuem com
cargas eltricas nas protenas.

A carga lquida de uma protena depende do nmero de cadeias


ionizveis, o valor do pK e o pH do meio. O pH onde a soma cargas
negativas igual a das cargas positivas denominado ponto
isoeltrico (pI) da protena. Quando submetida a um campo eltrico
como na eletroforese, uma protena em seu pI no migra em qualquer
direo. O pI varia de uma protena para outra e depende dos valores
individuais de pK de todos os grupos ionizveis presentes nas cadeias
laterais dos aminocidos e dos extremos das cadeias polipeptdicas.
Os pI das protenas esto, geralmente, entre 4 e 7 apesar de algumas
apresentarem valores fora desses limites como no caso da pepsina (pI
= 1) e histona (pI = 10). Os valores de pI de algumas protenas so
mostrados na Tabela 2.4.
66 MOTTA Bioqumica Laboratorio Autolab Ltda.

Tabela 2.4
Valores de pI de algumas protenas

Protena pI

Pepsina 1,0
Haptoglobina 4,1
Lipoprotena 1 5,5
Globulina 1 5,8
Fibrinognio 5,8
Hemoglobina 7,2
Citocromo c 10,0

Em pH maior do que o pI a protena tem carga negativa efetiva.


Em pH menor do que o pI a protena tem carga positiva efetiva. A
magnitude da carga eltrica efetiva de uma protena e funo da
distncia entre o pH e o pI. A albumina plasmtica humana contm
585 resduos de aminocidos e tem pI de 4,9 (pH onde a carga lquida
zero). Em pH 8,6 vrios grupos esto titulados em sua forma bsica
com carga lquida de 20. Por outro lado, em pH 3 a carga eltrica
lquida da molcula de albumina em soluo +60.

Resumo
1. As protenas apresentam uma elevada gama de funes nos seres vivos.
Alm de servir como material estrutural, as protenas esto envolvidas na
regulao metablica, transporte, defesa e catlise. Os polipeptdeos so
polmeros de aminocidos. As protenas consistem de uma ou mais
cadeias polipeptdicas.
2. Cada aminocido contm um tomo de carbono central (o carbono ) no
qual esto ligados um grupo amino, um grupo carboxlico, um tomo de
hidrognio e um grupo R. Alm de formar protenas, os aminocidos tem
outros papis biolgicos. De acordo com sua capacidade de interagir com
a gua, os aminocidos so separados em quatro classes: (1) no polar
ou neutra, (2) polar e neutra, (3) cida e (4) bsica.
3. A titulao de aminocidos e peptdeos ilustra o efeito do pH sobre suas
estruturas. O pH em que a molcula no apresenta carga eltrica lquida
chamado ponto isoeltrico.
4. Os aminocidos sofrem duas reaes de particular importncia: a
formao da ligao peptdica e a oxidao da cistena.
5. As protenas tambm so classificadas de acordo com sua conformao e
composio. As protenas fibrosas (exemplo, o colgeno) so longas,
molculas enoveladas insolveis em gua e fisicamente rgidas. As
protenas globulares (exemplo, a hemoglobina) so molculas compactas
e esfricas quase sempre solveis em gua.
6. Existem quatro nveis estruturais das protenas. A estrutura primria a
seqncia de aminocidos determinada por informao gentica. Os
arranjos regulares e recorrentes da cadeia polipeptdica constituem a
estrutura secundria das protenas. O pregueamento no peridico da
cadeia polipeptdica forma a estrutura tridimensional das protenas. As
protenas que consistem de dois ou mais polipeptdeos formam
complexos tridimensionais denominados estruturas quaternrias. Vrias
condies fsicas e qumicas podem romper a estrutura das protenas.
Agentes desnaturantes incluem cidos ou bases fortes, agentes redutores,
metais pesados, mudanas da temperatura e estresse mecnico.
2 Aminocidos e protenas 67

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butter worth, 1998. p. 47-75.
CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3 ed. Porto Alegfre: ArtMed, 2000. p. 94-155.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed.
So Paulo: Sarvier, 2002. p. 87-188.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed.
New York: McGraw-Hill, 2003. p. 108-160.
MOTTA, V. T. Bioqumica clnica para o laboratrio: princpios e
interpretaes. 4 ed. Porto Alegre: Editora Mdica Missau, 2003. p. 75-103.
Captulo

3
VALTER T. MOTTA
BIOQUMICA BSICA

Enzimas
3
Enzimas

Objetivos

1. Compreender a sistematizao da nomenclatura enzimtica.


2. Descrever as classes enzimticas: hidr olase, transferase, isomerase, liase,
ligase e oxirredutase.
3. Descrever a funo de coenzimas e co-fatores na biocatlise.
4. Conceituar energia livre de ativao e correlacionar com a atividade
enzimtica.
5. Conceituar stio ativo de uma enzima e correlacionar com atividade enzimtica.
6. Conceituar nmero de renovao (turnover) e reconhecer sua significao
biolgica.
7. Conceituar especificidade enzimtica e reconhecer sua significao biolgica.
8. Descrever o efeito da temperatura e pH sobre a velocidade da reao
enzimtica.
9. Descrever o efeito da variao da concentrao do substrato na velocidade da
reao enzimtica e indicar o significado do Km.
10. Descrever as semelhanas e diferenas entre inibi o enzimtica competitiva,
no-competitiva e incompetitiva ao nvel de stio ativo.
11. Descrever a regulao alostrica e seus efeitos.
12. Reconhecer que o carter sigmoidal da curva de substrato de uma protena
alostrica, depende da interao entre as subunidades e modificado pela
interao da protena com o efetor.

A vida depende de uma bem orquestrada srie de reaes


qumicas. Muitas delas, entretanto, ocorrem muito lentamente para
manter os processos vitais. Para resolver esse problema, a natureza
planejou um modo de acelerar a velocidade das reaes qumicas por
meio da catlise. As aes catalticas so executadas por enzimas que
facilitam os processos vitais em todas as suas formas, desde os vrus
at os mamferos superiores.

69
70 MOTTA Bioqumica

Quadro 3.1 Natureza qumica das enzimas

A palavra enzima foi introduzida por Kuhne em A natureza qumica das enzimas permaneceu
1878 para designar a ocorrncia no levedo de algo controversa. Em 1926, Sumner cristalizou a urease a
responsvel pela sua atividade fermentativa. partir de extratos de feijo, no entanto, a preparao
Berzelius, 50 anos antes, tinha reconhecido a tinha pequena atividade cataltica e outros
presena de fermentos de ocorrncia natural que investigadores atriburam o efeito cataltico a
promoviam reaes qumicas e antecipou o conceito contaminantes e no protena. Willsttter, por outro
de catalisadores biolgicos. Berzelius classificou os lado, prurificou a peroxidase com elevada
fermentos em organizados e no-organizados com capacidade cataltica e ausncia de outras protenas.
base na presena ou ausncia de microorganismos No incio dos anos 30, Northrop e cols. cristalizaram
intactos. Kuhne aplicou a palavra enzima aos a pepsina e a tripsina demonstrando definitivamente
fermentos derivados de extratos de levedos, i.e. que as enzimas eram protenas.
fermentos no-organizados.
Em 1897, Bchner preparou um filtrado de
extratos de levedo que foi o primeiro extrato
enzimtico removido de clulas vivas que pode
catalisar a fermentao.

As enzimas so protenas com a funo especfica de acelerar


reaes qumicas que ocorrem sob condies termodinmicas
no favorveis. Elas aceleram consideravelmente a velocidade das
reaes qumicas qumicas em sistemas biolgicos quando
comparadas com as reaes correspondentes no catalisadas. Para ser
classificada como enzima, uma protena deve:
Apresentar extraordinria eficincia cataltica.
Demonstrar alto grau de especificidade em relao a seus
substratos (reagentes) e aos seus produtos.
Acelerar a velocidade das reaes em 10 6 a 10 12 vezes mais do
que as reaes correspondentes no-catalisadas.
No ser consumida ou alterada ao participar da catlise.
No alterar o equilbrio qumico das reaes.
Ter sua atividade regulada geneticamente ou pelas condies
metablicas.

Tabela 3.1 Velocidade de reaes no catalisadas e catalisadas por


enzimas

Aumento
No catalisada Catalisada
Enzima 1 da
(s ) (s 1 )
velocidade

Anidrase carbnica 1,3 x 10 1


1.000.000 7,7 x 10 6
Adenosina deaminase 1,8 x 10 10
370 2,1 x 10 12
Nuclease estafiloccica 1,7 x 10 13
95 5,6 x 10 14
Triose fosfato isomerase 4,3 x 10 6
4.300 1,0 x 10 9
Quimiotripsina 1,0 x 10 9
190 1,7 x 10 11
Orotidina descarboxilase 2,8 x 10 16
39 1,4 x 10 17
3 Enzimas 71

s -1 = unidade da constante de velocidade de reao de primeira ordem

Quadro 3.2 Uso industrial das enzimas

A indstria biotecnolgica produz vrias enzimas Outras enzimas tambm apresentam uso
para diferentes usos. industrial. Por exemplo, a lipase adiconada a
O uso de proteases em detergentes melhora a lquidos detergentes para degradar graxas (lipdeos)
remoo de manchas de origem biolgica, como o e em alguns queijos para desenvolver aroma. A
sangue e molhos. O termo biolgico empregado nas pectinase usada na indstria de gelias para
embalagens de sabo em p reflete a presena de promover a mxima extrao de lquido das frutas.
proteases. As proteases so tambm utilizadas em As amilases so empregadas para degradar o amido
restaurantes para amaciar a carne, por cervejeiros em certos removedores de papel de parede para
para eliminar a turvao nas cervejas, por padeiros facilitar a sua retirada.definitivamente que as
para melhorar a textura do po e em indstrias de enzimas eram protenas.
luvas para amaciar o couro.

As protenas no so nicas substncias com propriedades


catalticas nos sistemas biolgicos. Alguns RNA, denominados
ribozimas, tambm executam essa funo.
A reao catalisada por enzima pode ser esquematizada como
segue:
Enzima (E)
Substrato (S) Produto (P)
A molcula sobre a qual a enzima atua o substrato (S) que se
transforma em produto (P) da reao. Na ausncia de enzima pouco
produto (ou nenhum) formado, mas em presena da mesma, a reao
se processa em alta velocidade. Como a maioria das reaes
reversvel, os produtos da reao numa direo tornam-se substratos
para a reao inversa.
As enzimas so os catalisadores mais especficos que se conhece,
tanto para o substrato como para o tipo de reao efetuada sobre o
substrato. A especificidade inerente da enzima, reside em uma
cavidade ou fenda de ligao do substrato, que est situada na
superfcie da protena enzimtica. A cavidade, denominada stio
ativo, um arranjo de grupos presentes em cadeias laterais de certos
aminocidos que ligam o substrato por ligaes no-covalentes.
Muitas vezes, os resduos de aminocidos que formam o stio ativo
ficam em regies distantes, na seqncia primria, mas prximos no
stio ativo, pelo enovelamento de cadeia polipeptdica (estrutura
terciria).
Algumas enzimas tm outra regio na molcula, o stio
alostrico, afastada do stio ativo. No stio alostrico molculas
pequenas especficas se ligam e causam alteraes na conformao
protica que afetam o stio ativo, aumentando ou reduzindo a
atividade enzimtica.
A maioria das enzimas necessitam de molculas orgnicas ou
inorgnicas pequenas, essenciais sua atividade e denominadas
coenzimas e co-fatores.
72 MOTTA Bioqumica

3.1 Classificao das enzimas

Com a descoberta de grande nmero de enzimas, houve a


necessidade de sistematizao da nomenclatura. A Unio
Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular (IUBMB) adotou
um sistema racional e prtico de nomenclatura identificando as
enzimas em seis classes, de acordo com a natureza da reao qumica
que catalisam. Para cada enzima, so atribudos dois nomes e um
nmero de classificao de quatro dgitos que identificam as classes,
as subclasses e as sub-subclasses.
Na classificao internacional sistemtica, as enzimas so
divididas em seis grupos de acordo com o tipo de reao catalisada
(Tabela 3.1).

Tabela 3.1 Classificao das enzimas

Classe da enzima Tipo de reao catalisada


Oxidorredutases Reaes de oxidao reduo
Transferases Transferncia de grupos funcionais
Hidrolases Reaes de hidrlise
Liases Remoo de grupos para formar ligaes duplas
Isomerases Isomerizao
Ligases Formao de ligaes entre duas molculas

Por exemplo, a enzima glicose 6 fosfatase (nome trivial), tem


como nome sistemtico D -Glicose 6 fosfato fosfohidrolase e nmero
de classificao EC 3.1.3.9. Os nmeros representam a classe (3,
hidrolase), subclasse (1, atua sobre ligaes ster), sub subclasse (3,
fosforil monoster hidrolase) e seu nmero de srie dentro da sub-
subclasse (9). A sigla EC a abreviatura de Enzyme Comission).
Muitas enzimas de uso rotineiro so designadas pelo nome
alternativo ou trivial. Por exemplo, algumas so denominadas pela
incorporao do sufixo ase ao nome do substrato sobre os quais elas
atuam; por exemplo, a enzima que hidrolisa a uria denominada
urease; o amido, a amilase; steres do fosfato, as fosfatases. Outras
so designadas pelo tipo de ao cataltica que realizam, tais como,
anidrase carbnica; D amino oxidase; lactato desidrogenase.
Algumas levam nomes vulgares como a tripsina, pepsina, emulsina,
etc.
3 Enzimas 73

Quadro 3.3 Enzimas usadas como agentes teraputicos

Algumas enzimas so empregadas como agentes A desoxiribonuclease (DNase) til no


teraputicos no tratamento de diferentes doenas. As tratamento da fibrose cstica. A principal
proteases, amilases e lpases so usadas para caracterstica da fibrose cstica so as infees
auxiliar a digesto. respiratrias recorrentes, particularmente devido a
A asparaginase usada no tratamento da Pseudomonas aeroginosa, o que resulta em grandes
leucemia linfoctica aguda. As clulas normais so quantidades de DNA proveniente das bactrias
capazes de sintetizar asparagina enquanto certas destrudas e morte das clulas fagocticas do sistema
clulas tumorais, inclusive as leucmicas, no imune. O DNA contribui para a viscosidade do muco
produzem o derivado do aminocido. A administrao que provoca sintomas aflitivos. A DNase usada
intravenosa de asparaginase reduz o nvel para degradar o DNA e diluir o muco.
plasmtico de asparagina e, assim, diminui o A estreptocinase empregada na remoo de
desenvolvimento de clulas leucmicas. cogulos sangneos no infarto do miocrdio e nas
extremidades dos membros inferiores. Ativa a
transformao da proenzima fibrinoltica
plasminognio plasmina , uma enzima que quebra a
fibrina insolvel do cogulo sangneo.

3.2 Co-fatores metlicos e coenzimas

Algumas enzimas so protenas simples consistindo inteiramente


de cadeias polipeptdicas, como as enzimas hidrolticas pepsina,
tripsina, lisozima e ribonuclease. Entretanto, a maioria das enzimas
somente exercem sua atividade cataltica em associao com
co fatores metlicos e coenzimas.
1. Co-fatores metlicos. Os metais importantes nos organismos
vivos so classificados em dois grupos: metais de transio
(exemplo, Fe 2+ , Zn 2+ e Cu2+ ) e metais alcalinos e alcalinos terrosos
(exemplo, Na + , K + , Mg 2+ e Ca 2+ ). Devido a sua estrutura eletrnica,
os metais de transio esto freqentemente envolvidos na catlise.
Vrias propriedades dos metais de transio os tornam essenciais
para a catlise. Os ons metlicos apresentam um grande nmero de
cargas positivas especialmente teis na ligao de pequenas
molculas. Os metais de transio atuam como cidos de Lewis
(aceptores de pares eletrnicos), e so eletrfilos efetivos. Como suas
valncias permitem interagirem com dois ou mais ligantes, os ons
metlicos participam na orientao apropriada do substrato para a
reao. Como conseqncia, o complexo substrato-on metlico
polariza o substrato e promove a catlise. Exemplo, quando o Zn 2+ ,
co fator da anidrase carbnica, polariza uma molcula de gua,
forma-se um grupo OH ligado ao Zn 2+ (funo de cido de Lewis do
zinco). O grupo OH ataca nucleofilicamente o CO 2 , convertendo-o em
HCO 3 - .
Finalmente, como os metais de transio tm dois ou mais estados
de oxidao, eles podem mediar reaes de oxidao reduo. Por
exemplo, a oxidao reversvel do Fe 2+ para formar Fe3+ importante
na funo do citocromo P 450 , uma enzima microssomal que processa
substncias txicas.
74 MOTTA Bioqumica

Quadro 3.1 Algumas coenzimas, as reaes que promovem e as vitaminas precursoras

Coenzima Reao Fonte vitamnica

Biocitina Carboxilao Biotina


Coenzima A Transferncia de grupos acila cido pantotnico
Cobalamina Alquilao Cobalamina (B 12 )
Flavina Oxidao reduo Riboflavina (B 2 )
cido lipico Transferncia de grupo acila -
Nicotinamida Oxidao reduo Nicotinamida (niacina)
Fosfato de piridoxal Transferncia de grupo amino Piridoxina (B 6 )
Tetraidrofolato Transferncia de grupos de cido flico
1 carbono
Pirofosfato de tiamina Transferncia de grupo aldedo Tiamina (B 1 )
Retinal Viso, crescimento e reproduo Vitamina A
1, 25-diidroxicolecalciferol Metabolismo do clcio e fsforo Vitamina D

2. Coenzimas. So molculas orgnicas pequenas,


frequentemente derivadas de vitaminas. Existem tambm certos
nutrientes anlogos s vitaminas (exemplo, cido lipico e cido
p aminobenzico) que so sintetizados em pequenas quantidades e
que facilitam os processos catalisados por enzimas. Na Tabela 3.1 so
listadas as coenzimas, as reaes que elas participam e as fontes
vitamnicas que do origem as coenzimas.
A enzima cataliticamente ativa quando forma um complexo
denominado holoenzima. O componente protico do complexo
designado de apoenzima.
Holoenzima (ativa) co fator + apoenzima (inativa)

Quadro 3.2 Coenzimas/co-fatores metlicos e enzimas

Coenzimas e co-fatores Enzima

Coenzima
Pirofosfato de tiamina (TTP) Piruvato desidrogenase
Flavina adenina dinucleotdeo (FAD) Monoaminooxidase
Nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD) Lactato desidrogenase
Piridoxal fosfato Glicognio fosforilase
Coenzima A (CoA) Acetil CoA carboxilase
Biotina Piruvato carboxilase
Tetraidrofolato Timidilate sintase
Co-fator metlico
Zn 2+ Anidrase carbnica
2+
Zn Carboxipeptidase
Mg 2+ Hexocinase
3 Enzimas 75

Ni 2+ Urase
Mo Nitrato redutase
Se Glutationa peroxidase
Mn 2+ Superxido dismutase
K+ Propionil CoA carboxilase

3.3 Reaes catalisadas por enzimas

Para reagir, as molculas presentes em uma soluo devem colidir


com orientao apropriada e com a quantidade de energia que lhes
permitam formar o complexo ativado, denominado estado de
transio que representa os reagentes em seu estado ativado. Para
atingir o estado de transio, necessita-se de uma quantidade de
energia definida como energia de ativao (E a ) ou mais comum em
bioqumica energia livre de ativao, G (o smbolo ( ) indica o
processo de ativao). Sob condies fisiolgicas, a velocidade das
reaes pode ser aumentada pela reduo da energia livre de ativao
conseguida pela ao de enzimas.
A comparao do perfil energtico das reaes catalisadas e no-
catalisadas mostrada na Figura 3.1 para a reao:
A+B C+D
No grfico, o estado de transio corresponde ao ponto de mais
alta energia da reao no-catalisada e a medida da energia livre de
ativao, G . Ou ainda, G a energia livre do estado de transio
subtrada da energia livre dos reagentes. No complexo ativado (estado
de transio do sistema), os reagentes esto em forma intermediria
de alta energia e no podem ser identificados nem como reagentes
nem como produtos. O complexo do estado de transio pode ser
decomposto em produtos ou voltar aos reagentes.
76 MOTTA Bioqumica

Estado de transio

=
No-catalisada AG Em ausncia
de enzima

=
AG
Catalisada
Reagentes A, B
(Estado inicial)
AG

Produtos C, D
(Estado final)

Progresso da reao

Figura 3.1
Diagrama energtico de reao catalisada e de reao no-catalisada.
G = energia livre de ativao, G 0 = variao de energia livre. A diferena
entre os valores da energia de ativao de uma reao catalisada e de uma
reao no-catalisada, indica a eficincia do catalisador.

A velocidade de uma reao inversamente proporcional ao valor


de sua energia livre de ativao. Quanto maior o valor de G , menor
ser a velocidade da reao. Os catalisadores aumentam a velocidade
da reao reduzindo a energia livre de ativao. A velocidade de
uma reao pode aumentar na ordem de 10 6 a 10 12 vezes mais do que
a reao correspondente no-catalisada.
Trs propriedades distintas das enzimas permitem que elas
exeram papel central na promoo e regulao dos processos
celulares, caracterizando-as como componentes vitais aos sistemas
vivos:
Elevada especificidade da reao. Como regra geral, cada reao
sob condies apropriadas catalisada por uma enzima
especfica. Diante de vrias rotas potencialmente possveis, a
enzima escolhe a com menor energia livre de ativao.
Condies reacionais mais brandas. A atividade de cada enzima
dependente do pH, da temperatura, da presena de vrios co-
fatores e das concentraes de substratos e produtos.
Capacidade de regulao da concentrao e da atividade.
Permite o ajuste fino do metabolismo em diferentes condies
fisiolgicas.
3 Enzimas 77

3.4 Stio ativo cataltico

Stio ativo a regio na superfcie da enzima onde ocorre a


catlise. O substrato liga-se ao stio ativo por ligaes
no covalentes (interaes eletrostticas, pontes de hidrognio,
interaes de van der Waals e interaes hidrofbicas). Os grupos que
participam das ligaes so: a carboxila do cido glutmico ou do
cido asprtico, o grupo -amino da lisina, o imidazol da histidina, a
hidroxila da serina, etc.
Somente uma pequena poro do substrato onde ocorre
transformao est ligada enzima. Isso no implica, entretanto, que
os aminocidos no stio ativo estejam um ao lado do outro na
estrutura primria da protena. Em conseqncia das dobras e
enovelamento da enzima (estrutura secundria e terciria), certos
resduos de aminocidos podem estar distantes um do outro na
seqncia primria, ainda que juntos no stio ativo da protena
completa.
A especificidade da ligao enzima-substrato depende do arranjo
precisamente definido de tomos no stio ativo. Uma das explicaes
para a elevada especificidade das enzimas que suas estruturas
tridimensionais permitem um perfeito encaixe com o substrato. Dois
modelos foram propostos para explicar a especificidade enzimtica, o
modelo chave-fechadura e o modelo do encaixe induzido.
1. Modelo chave fechadura. Muitas enzimas contm fendas com
dimenses fixas que permitem a insero somente de compostos com
uma dada configurao. O substrato se ajusta a esse stio de ligao
como uma chave se ajusta sua fechadura. Substncias que no se
encaixam na fenda para formar o complexo enzima substrato (ES),
no reagem, mesmo possuindo grupos funcionais idnticos ao do
substrato verdadeiro. Esse conceito chamado modelo
chave fechadura proposto por Fisher em 1890.

E+S ES (ES - EP) E+P

Figura 3.2
Modelo chave-fechadura. A interao entre a enzima (com estrutura rgida)
e seu substrato.

2. Modelo do encaixe induzido. Um modelo mais flexvel de


interao enzima-substrato o encaixe induzido (induced fit)
proposto por Koshland em 1958. Os stios ativos dessas enzimas no
esto completamente pr-formados e a interao inicial do substrato
com a enzima induz uma alterao conformacional na enzima. Isso
promove o reposicionamento dos aminocidos catalticos para formar
78 MOTTA Bioqumica

o stio ativo e a estrutura correta para interagir com os grupos


funcionais do substrato (Figura 3.3).

E+S ES

Figura 3.3
Modelo do encaixe induzido. A ligao inicial do substrato enzima induz
uma mudana conformacional na enzima produzindo um melhor encaixe.

3.5 Mecanismos catalticos

As reaes qumicas envolvidas na transformao dos substratos


variam com os mecanismos de ao das enzimas. Os principais tipos
de mecanismos catalticos que as enzimas utilizam so: (1) efeitos de
proximidade e orientao, (2) catlise eletrosttica, (3) catlise cido-
bsica e (4) catlise covalente.
1. Efeitos de proximidade e orientao. Os substratos se
aproximam dos grupos funcionais catalticos da enzima em uma
orientao espacial apropriada para que a reao possa ocorrer. Aps
o correto posicionamento do substrato, uma modificao na
conformao da enzima resulta em um complexo enzima substrato
orientado. Essa orientao leva o complexo enzima substrato ao
estado de transio.
2. Catlise por ons metlicos. A fora das interaes
eletrostticas est relacionada com a capacidade das molculas
solventes vizinhas em reduzir os efeitos de atrao entre os grupos
qumicos. Como a gua excluda do stio ativo quando o substrato
se liga, a constante dieltrica local muitas vezes baixa. A
distribuio de cargas nos stios ativos das enzimas pode influenciar a
reatividade qumica do substrato. Uma ligao mais eficiente do
substrato reduz a energia livre do estado de transio, que acelera a
reao.
3. Catlise cido-bsica geral. Os grupos qumicos podem se
tornar mais reativos pela adio ou remoo de prtons. Os stios
ativos das enzimas contm cadeias laterais que podem atuar como
doadores ou receptores de prtons. Esses grupos so denominados
cidos gerais ou bases gerais. Por exemplo, a cadeia lateral da
histidina (grupo imidazol) muitas vezes atua como catalisador cido
e/ou bsico em concerto porque tem pK a na faixa de pH fisiolgico.
4. Catlise covalente. Acelera a velocidade da reao pela
formao de uma ligao covalente transitria entre a enzima e o
substrato. Um grupo nucleoflico da cadeia lateral do catalisador
3 Enzimas 79

forma uma ligao covalente instvel com um grupo eletroflico do


substrato. O complexo enzima substrato ento forma o produto.

A. Mecanismo de ao da lisozima
O mecanismo de ao da lisozima emprega tanto a distoro da
cadeia polissacardica como a catlise cido-bsica geral. A lisozima
uma enzima com cadeia polipeptdica nica com 129 resduos de
aminocidos. A lisozima, uma glicosidase, destri as paredes das
clulas bacterianas ao hidrolisar a ligao glicosdica entre o
N acetilmuramato e N acetilglicosamina. A molcula da lisozima tem
uma fenda, qual os substratos se ligam por ligaes pontes de
hidrognio e foras de van der Waals. O mecanismo cataltico da
lisozima envolve o cido glutmico 35, na sua forma no-carregada,
que atua como catalisador cido para clivar o substrato
polissacardico pela doao de um H + ao oxignio da ponte entre os
anis D e E. O C1 do anel D fica, ento, com carga positiva O on
axnio resultante carregado positivamente e planar,
eletrostaticamente estabilizado pelo aspartato 52 na sua forma de
carboxilato. A reao facilitada pela distoro do resduo D na
conformao planar de meia-cadeira, o que permite que a carga
positiva seja compartilhada entre o C-1 e o tomo de oxignio do
anel.

Figura 3.4
Estrutura da lisozima.
80 MOTTA Bioqumica

B. Mecanismo de ao das serino proteases


As enzimas serino proteases empregam a catlise cido bsica
geral e a catlise covalente para a sua ao. As serino proteases so
um grupo de enzimas proteolticas que incluem a quimotripsina,
tripsina, elastase, trombina, plasmina, e so assim chamadas por
utilizar um nico resduo serina ativada no stio ativo. As
serino proteases utilizam o grupo CH 2 OH da serina como um
nucleoflico para hidrolisar cataliticamente ligaes peptdicas.
Formam um intermedirio covalente acil enzima, no qual o grupo
carboxila do substrato esterificado com a hidroxila da serina 195
(catlise covalente). O carter nuclefilo da OH bastante
acentuado pela histidina 57, que recebe um prton da serina (catlise
cido-bsica geral). A histidina resultante com carga positiva
estabilizada pela interao eletrosttica com a carga negativa do
aspartato 102. A segunda etapa, o intermedirio acil enzima
deacilado pelo reverso das etapas anteriores.
Outras serino-proteases existem na forma precursora inativa,
denominadas zimognios, que so ativadas por clivagem cataltica de
uma ligao poliptdica especfica por outras serino-proteases.
A atividade das proteases limitada por inibidores sintetizados
pelo pncreas e fgado. Por exemplo, se enzimas pancreticas forem
prematuramente ativadas ou liberadas do pncreas aps um trauma,
elas so rapidamente inativadas por inibidores da protease. Os
inibidores passam por substratos da protease, mas no so
completamente hidrolizados. O desequilbrio entre a atividade das
proteases e a atividade de inibidores da protease pode provocar
doenas, por exemplo, enfisema.

3.6 Fatores que influenciam a atividade


enzimtica

Vrios fatores influenciam a atividade enzimtica, incluindo a


temperatura, pH, concentrao do substrato, tempo e produto da
reao.

A. Temperatura
As reaes qumicas so afetadas pela temperatura. Quanto maior
a temperatura, maior a velocidade da reao. A velocidade aumenta
porque mais molculas adquirem energia suficiente para atingir o
estado de transio. Em reaes catalisadas por enzimas, a velocidade
acelerada pelo aumento da temperatura at atingir uma temperatura
tima na qual a enzima opera com a mxima eficincia. Como as
enzimas so protenas, os valores de temperatura tima situam-se
entre 40 e 45 C e dependem do pH e da fora inica. Acima dessa
temperatura, a atividade das enzimas declina adruptamente por
desnaturao protica. Sob condies de hipotermia, a atividade
enzimtica deprimida. As relaes acima descritas so mostradas na
Figura 3.5.
3 Enzimas 81

Temperatura em C

Figura 3.5
Efeito da temperatura sobre a velocidade de uma reao catalisada por
enzima.

B. pH
A concentrao de ons hidrognio afeta as enzimas de vrios
modos. Primeiro, a atividade cataltica das enzimas est relacionada
ionizao de aminocidos no do stio ativo.. Por exemplo, a atividade
cataltica de certas enzimas necessita a forma protonada da cadeia
lateral do grupo amino. Se o pH torna-se suficientemente alcalino de
tal modo que o grupo perde seu prton, a atividade da enzima pode
ser reduzida. Alm disso, os substratos podem tambm serem
afetados. Se um substrato contm um grupo ionizvel, as mudanas
no pH afetam a capacidade de ligao ao stio ativo. Segundo,
alteraes nos grupos ionizveis podem modificar a estrutura terciria
das enzimas. Mudanas drsticas no pH promovem a desnaturao de
muitas enzimas.
Apesar de algumas enzimas tolerar grandes mudanas no pH, a
maioria delas so ativas somente em intervalos muitos estreitos. Por
essa razo, os organismos vivos empregam tampes que regulam o
pH. O valor do pH no qual a atividade da enzima mxima
chamado pH timo. O pH timo das enzimas varia consideravelmente.
Por exemplo, o pH timo da pepsina, enzima proteoltica produzida
no estmago , aproximadamente, 2. Para a quimotripsina, que digere
as protenas no intestino delgado, o pH timo , aproximadamente, 8.
O efeito do pH sobre a atividade das enzimas esquematizado na
Figura 3.6.
82 MOTTA Bioqumica

pH

Figura 3.6
Atividade enzimtica versus pH (considerando-se os outros fatores
constantes)

C. Concentrao da enzima
A velocidade mxima da reao uma funo da quantidade de
enzima disponvel, aquela aumenta proporcionalmente pela
introduo de mais enzima ao sistema. Assim, a velocidade inicial da
reao enzimtica diretamente proporcional concentrao de
enzima (existindo substrato em excesso) (Figura 3.7).

Concentrao de enzima

Figura 3.7
Efeito da concentrao da enzima sobre a velocidade inicial (v 0 ). A
concentrao do substrato est acima da necessria para atingir a velocidade
mxima.

D. Concentrao do substrato
Para atender as necessidades do organismo, as reaes
bioqumicas devem ocorrer em velocidade compatvel. A velocidade
de uma reao bioqumica expressa em termos de formao de
produto ou pelo consumo do reagente por unidade de tempo. Ao
considerar uma reao unimolecular (que envolve um nico
reagente):
A P
3 Enzimas 83

O progresso da reao descrita pela equao da velocidade na


qual a velocidade expressa em termos da constante de velocidade
(k) e a concentrao do reagente [A]:
A
Velocidade kA
t
onde [A] = concentrao do substrato, t = tempo e k = constante de
proporcionalidade designada constante de velocidade (sua unidade
o recproco do tempo, s 1 ) que depende das condies da reao
(temperatura, pH e fora inica). O sinal negativo para as variaes
da [A] indica que A est sendo consumido na reao. A equao
mostra que a velocidade da reao diretamente proporcional a
concentrao do reagente A. O processo exibe cintica de primeira
ordem (Figura 3.8).
Quando a adio de mais reagente no aumenta a velocidade, a
reao exibe cintica de ordem zero (Figura 3.8). A expresso da
velocidade para a reao A P
Velocidade = k[A] 0 = k
A velocidade constante porque no depende da concentrao
dos reagentes, mas de outros fatores. A quantidade de reagente o
suficiente grande para saturar todos os stios catalticos das molculas
enzimticas. Assim, o reagente s existe na forma de complexos
enzima substrato (ES). Como a curva velocidade-substrato
hiperblica, a fase de ordem zero atinge uma velocidade mxima,
V max.

Cintica de ordem zero

Cintica de primeira ordem

Concentrao de substrato [S]

Figura 3.8
Efeito da concentrao do substrato sobre a velocidade inicial ( 0 ) em
reaes catalisadas por enzimas.

Uma reao bimolecular ou de segunda ordem pode ser escrita:


A+B C

Sua equao de velocidade


84 MOTTA Bioqumica

A B
Velocidade kA B
t t
O k a constante de velocidade de segunda ordem e tem como
unidade M 1 s 1 . A velocidade de uma reao de segunda ordem
proporcional ao produto da concentrao dos dois reagentes ([A][B]).

3.7 Cintica enzimtica

O estudo da velocidade das reaes enzimticas ou cintica


enzimtica, envolve informaes indiretas sobre o mecanismo de ao
cataltica, especificidade das enzimas, alguns fatores que afetam a
velocidade das reaes e a determinao quantitativa de seus efeitos.
Apesar de catalisarem uma grande variedade de reaes por
diferentes mecanismos, as enzimas podem ser analisadas quanto as
suas velocidades para quantificar as suas eficincias.
Quando o substrato S liga o stio ativo de uma enzima E, um
complexo enzima substrato (ES) formado em processo rpido e
reversvel antes da formao do produto. Aps um breve tempo, o
produto se dissocia da enzima conforme a equao:
E+S ES P
onde
k 1 = constante de velocidade para a formao do complexo ES
k 2 = constante de velocidade para a dissociao de ES em P
k 3 = constante de velocidade para a formao de produto e liberao
do stio ativo.
A relao quantitativa entre a velocidade de reao enzimtica e a
concentrao do substrato definida pela equao de
Michaelis Menten (Leonor Michaelis e Maud Menten em 1913). No
desenvolvimento da equao deve-se supor que (1) o k 2
negligencivel quando comparado com k 1 e (2) a velocidade de
formao de ES igual a velocidade de sua degradao no sofrendo
alteraes durante a medida da velocidade (postulado do estado
estacionrio):
P
Velocidade k 3[ES]
t
Para ter utilidade, a velocidade de uma reao deve ser definida
em termos de [S] e [E]. A velocidade de formao de ES igual a
k 1 [E][S], enquanto a velocidade de dissociao de ES igual a (k 2 +
k 3 )[ES]. O postulado do estado estacionrio iguala as duas
velocidades:
K 1 [E][S] = (k 2 + k 3 )[ES]
E S
ES
k2 k 3 k1

Michaelis e Menten introduziram uma nova constante, K m


3 Enzimas 85

k2 k3
Km
k1

assim, a expresso de velocidade pode ser obtida aps manipulao


algbrica adequada:
Vmax S
o
Km S
Essa a equao de Michalis Menten que relaciona a velocidade
inicial ( o , mudana na concentrao de reagente ou produto durante
os primeiros poucos segundos da reao) de uma reao catalisada
por enzima com a concentrao do substrato. As duas constantes
nessa equao, a velocidade mxima (V max, velocidade atingida sob
condies de saturao da enzima em condies especficas de
temperatura, pH e fora inica) e K m so especficas para cada
enzima sob condies especficadas de pH e temperatura. Para
aquelas, onde k 3 k 2 , a K m torna-se a recproca da constante de
ligao enzima-substrato:
1
Km
Ka
e a V max reflete a fase cataltica do mecanismo enzimtico conforme
sugere a equao 3.1. Em outras palavras, nesse modelo simples da
atividade da enzima distingue-se duas fases: inicialmente a ligao do
substrato seguida pela modificao qumica do mesmo.
Se for permitido velocidade inicial de reao, 0 , ser igual a
metade da velocidade mxima (v 0 = V max) na equao 3.3, o K m ser
igual a [S]:

1 Vmax Vmax S
2 Km S

Dividindo por V max , obtm-se


1 S
2 Km S

Reorganizando a equao:
K m + [S] = 2[S]
K m = [S]
O valor do K m (constante de Michaelis) numericamente igual
concentrao do substrato (mol/L) na qual a velocidade inicial da
reao corresponde metade da velocidade mxima. Ou seja, na
concentrao de substrato em que [S] = K m , a equao de
Michaelis Menten torna-se 0 = V max /2. A concentrao da enzima
no afeta o K m .
86 MOTTA Bioqumica

Concentrao de substrato [S]

Figura 3.9
Determinao do K m pelo grfico de velocidade inicial (v 0 ) versus
concentrao do substrato, [S]. O K m a concentrao do substrato (mol
por litro) na qual a velocidade inicial da reao metade da velocidade
mxima.

Valores pequenos de K m refletem afinidade elevada da enzima


pelo substrato e, portanto, atingir a mxima eficincia cataltica em
baixas concentraes de substrato. Valores grandes de K m refletem
baixa afinidade da enzima pelo substrato.

Tabela 3.2 Valores do K m para algumas enzimas

Enzima Substrato K m ( M)

Anidrase carbnica CO 2 8.000


Arginina tRNA sintetase Arginina 3
tRNA 0,4
ATP 300
Galactotidase Lactose 4.000
Lisozima Hexa N acetilglicosamina 6
Penicilase Benzilpenicilina 50
Piruvato carboxilase Piruvato 400
HCO 3 - 1.000
ATP 60
Quimiotripsina Acetil 1 triptofanamida 5.000
Treonina desaminase Treonina 5.000

A. Constante cataltica (k cat )


As enzimas nas clulas e fludos do corpo normalmente no
atuam em concentraes saturadas de substrato. Para avaliar a
eficincia cataltica de uma enzima, define-se a constante cataltica,
k cat tambm conhecida como nmero de reciclagem (turnover
number):
3 Enzimas 87

V max
k cat
E total

k cat representa o nmero de molculas de substrato convertidos em


produto por segundo por molcula de enzima (ou por mol de stio
ativo nas enzimas oligomricas) sob condies de saturao. Em
outras palavras, o K cat indica o nmero mximo de molculas
convertidas em produto por segundo por cada stio ativo. [E] total =
concentrao total da enzima.

Tabela 3.3 Constantes catalticas de algumas enzimas

Enzima K cat (s 1 )

Nuclease estafiliccica 95

Citidina deaminase 299

Triose fosfato isomerase 4.300


Ciclofilina 13.000

Cetoesteride isomerase 66.000

Anidrase carbnica 1.000.000

B. Constante de especificidade (k cat /K m )


A relao k cat /K m chamada constante de especificidade e
relaciona a eficincia cataltica da enzima com a sua afinidade pelo
substrato. A velocidade da reao varia diretamente com a freqncia
de colises entre as molculas de enzima e as de substrato na soluo.
A decomposio do complexo ES em E + P no pode ocorrer mais
velozmente que o encontro de E e S para formar ES.
A relao k cat /K m , em geral, o melhor parmetro cintico para
comparaes de eficincia cataltica entre diferentes enzimas. Valores
baixos da relao indicam pouca afinidade da enzima pelo substrato.
Por exemplo, a acetilcolinoestarase tem valor de k cat /K m de 1,5 x 10 8
5
s 1 M 1 mostrando alta eficincia, enquanto a urease o valor 4 x 10
s M descreve uma menor eficincia.
1 1

Tabela 3.4 Constante de especificidade, k cat /K m , de algumas enzimas

1 1
Enzima k cat /K M (s M )

Acetilcolinesterase 1.6 10 8
Anidrase carbnica 8.3 10 7
Catalase 4 10 7
Crotonase 2.8 10 8
Fumarase 1.6 10 8
Triose phosphate isomerase 2.4 10 8

Lactamase 1 10 8

Superoxide dismutase 7 10 9
88 MOTTA Bioqumica

C. Grfico de Lineweaver-Burk
Os valores do K m e da V max de uma enzima so determinados pela
medida das velocidades iniciais para vrias concentraes de
substrato. Pela construo do grfico mostrado na Figura 3.6 s
possvel calcular valores aproximados de K m e da V max . A
determinao mais acurada desses valores possvel pela
modificao algbrica da equao de Michaelis Menten:
Vmax S
o
Km S

utilizando o inverso da equao:


1 Km 1 1
v0 Vmax S Vmax

A representao grfica da recproca de velocidade inicial, 1/ 0 ,


versus a recproca da concentrao do substrato, 1/[S], fornece uma
linha reta com inclinao K m /V max em um grfico duplo-recproco ou
Lineweaver Burk. O ponto onde essa linha intercepta a ordenada
igual a 1/V max , e o ponto de interseco na abscissa igual a-1/K m
(Figura 3.10). A utilizao do grfico permite calcular com preciso
V max e K m pela medida da inclinao e do intercepto.

1/

Inclinao = Km/Vmax

1/Vmax

-1/Km 0 1/[S]

Figura 3.10
Determinao da V m ax e K m a partir do grfico duplo-recproco de
Lineweaver-Burk. O grfico 1/ 0 versus 1/[S] derivado de medidas das
velocidades iniciais em vrias concentraes diferentes de substratos. A linha
reta obtida pela ligao de pontos individuais ampliada para interceptar a
ordenada e abscissa. Os valores de K m e V m ax so determinados pela medida
das inclinaes e interseces.

D. Reaes com multissubstratos


Mais da metade das reaes bioqumicas envolvem dois
substratos, em lugar de reaes simples com um nico substrato e que
3 Enzimas 89

obedecem o modelo de Michaelis Menten. As reaes com


multissubstratos podem proceder por diferentes mecanismos:
1. Mecanismo ordenado. Os substratos, S 1 e S 2 , devem associar-se
enzima com uma ordem obrigatria antes que a reao possa
ocorrer. A ligao do primeiro substrato necessria para que a
enzima forme o stio de ligao para o segundo substrato. Muitas
desidrogenases nas quais o segundo substrato uma coenzima
(NAD + , FAD etc.) so exemplos desse mecanismo.
2. Mecanismo aleatrio. Os dois substratos, S 1 e S 2 , podem se ligar
enzima em qualquer ordem. A hexocinase transfere um grupo
fosfato do ATP para a glicose por esse mecanismo, apesar da
glicose tender ligar inicialmente a molcula de ATP.
3. Reaes de dupla troca (pingue pongue). Um ou mais produtos
so liberados antes que os outros substratos se liguem enzima
modificada. As reaes catalisadas pela UDP glicose 1 fosfato
uridiltransferase, piruvato carboxilase e acetil CoA carboxilase
so exemplos desse mecanismo.

3.8 Inibio enzimtica

Inibidores so substncias que reduzem a atividade das enzimas e


incluem frmacos, antibiticos, preservativos de alimentos e venenos.
So importantes por vrias razes: (1) Os inibidores enzimticos
atuam como reguladores das vias metablicas. (2) Muitas terapias por
frmacos so baseadas na inibio enzimtica. Por exemplo, muitos
antibiticos e frmacos reduzem ou eliminam a atividades de certas
enzimas. O tratamento da AIDS inclui inibidores das proteases,
molculas que inativam a enzima necessria para produzir novos
vrus. (3) Desenvolvimento de tcnicas para demonstrar a estrutura
fsica e qumica, e as propriedades funcionais das enzimas.
Distinguem-se dois tipos de inibio: reversvel e irreversvel,
segundo a estabilidade da ligao entre o inibidor e a molcula de
enzima. Na inibio reversvel ocorre interaes no-covalentes entre
o inibidor e a enzima, enquanto na inibio irreversvel envolve
modificaes qumicas da molcula enzimtica, levando a uma
inativao definitiva. Na inibio reversvel, a enzima retoma sua
atividade aps dissociao do inibidor. Trs classes de inibidores
reversveis so descritos: competitivo, no competitivo e
incompetitivo.
90 MOTTA Bioqumica

Quadro 3.4 Inibidores de enzimas do HIV

O vrus da imunodeficincia humana (HIV) leva Vrios inibidores da transcriptase reversa foram
sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS) desenvolvidos. O arqutipo o AZT (3-azido-3-
infectando as clulas do sistema imune. Nas desoxitimidina; Zidovudina), o qual absorvido pelas
primeiras etapas da infeco, o HIV fixa-se clula- clulas, fosforilado e incorporado nas cadeias de
alvo e injeta o seu material gentico (RNA em vez de DNA sintetizadas pela transcriptidase reversa a partir
DNA) na clula hospedeira. O RNA viral transcrito do molde do HIV. Uma vez que o AZT no possui o
em DNA por uma enzima viral conhecida como grupo 3-OH, ele funciona como um terminador de
transcriptase reversa. A seguir, o DNA integrado no cadeia, da mesma maneira que os
genoma do hospedeiro, e a clula pode produzir mais didesoxinucleotdeos utilizados no sequenciamento
RNA viral e protenas para empacot-los em novas do DNA. A maioria das DNA-polimerases celulares
partculas virais. tem baixa afinidade pela AZT fosforilado, mas a
transcriptidase reversa tem uma alta afinidade por
essa droga, o que torna o AZT efetivo contra a
replicao.

A. Inibio competitiva
Inibidores competitivos so substncias que competem
diretamente com o substrato normal pelo stio ativo das enzimas. So
molculas estruturalmente semelhantes ao substrato. O inibidor (I)
competitivo reage reversivelmente com a enzima para formar um
complexo enzima inibidor (EI) anlogo ao complexo
enzima substrato, mas cataliticamente inativo:
E+I EI + S No h reao
A atividade da enzima declina por no ocorrer a formao do
complexo enzima substrato durante a existncia do complexo EI. A
ao do inibidor pode ser revertida aumentando-se a quantidade de
substrato. Em altas [S], todos os stios ativos esto preenchidos com
substrato e a velocidade da reao atinge o mesmo valor que o
observado sem o inibidor.
Como o substrato e o inibidor competem pelo mesmo stio de
ligao na enzima, o K m para o substrato mostra um aumento aparente
em presena do inibidor. Ou seja, mais substrato necessrio para
atingir a metade da V max . No h alterao na V max quando a
concentrao do substrato suficientemente elevada.
Um exemplo clssico de inibio competitiva envolve a enzima
succinato desidrogenase uma enzima do ciclo do cido ctrico que
converte o succinato a fumarato pela remoo de dois tomos de
hidrognio:

COOH COOH
CH2 CH
CH2 CH
+ H2

COOH COOH

O malonato anlogo em sua estrutura ao succinato e liga-se ao


stio ativo da enzima mas no convertido a produto.
3 Enzimas 91

COOH
CH2 Produto
COOH

O mecanismo da inibio competitiva mostrado na Figura 3.11.

I
S

+ Substrato
I

Enzima Inibidor

Inibida
Sem inibidor

+ Inibidor
competitivo

No inibida

[S] 1/[S]
(-Inibido) (+Inibido)

Figura 3.11
Inibio competitiva. Grficos de v o versus concentrao de substrato para
uma reao de MichaelisMenten na presena de um inibidor competitivo. A
segunda figura mostra o mesmo tipo de inibio em um grfico de
Lineweaver Burk.

B. Inibio no-competitiva
O inibidor no-competitivo se liga tanto enzima como ao
complexo ES em um stio diferente do stio de ligao do substrato. A
ligao do inibidor no bloqueia a ligao do substrato, mas provoca
uma modificao da conformao da enzima que evita a formao de
produto:
E+I EI + S EIS No h reao
E+S ES + I EIS No h reao
A inibio no reverte pelo aumento na concentrao do
substrato. O inibidor reduz a concentrao da enzima ativa e, assim,
diminui a V max aparente. Nesses casos, o inibidor no afeta o K m para
o substrato. O inibidor no-competitivo no apresenta semelhana
estrutural com o substrato. Os metais pesados, Hg 2+ e Pb 2+ , que
ligam-se aos grupos sulfidrlicos e modulam a conformao da
enzima, so exemplos de inibidores no-competitivos
92 MOTTA Bioqumica

+
I
I

Sem inibidor Inibida

+ Inibidor no-
competitivo
No inibida

(S)
1/[S]

Figura 3.12
Inibio no-competitiva. A. Efeito da concentrao do substrato sobre a
velocidade inicial na presena de um inibidor no-competitivo. B. Grfico de
Lineweaver-Burk para a reao mostrada em A.

C. Inibio incompetitiva
O inibidor incompetitivo liga-se apenas ao complexo ES da
enzima originando um complexo inativo, ESI. O inibidor no se
combina com a enzima livre.
E+S ES + I EIS No h reao
A inibio no revertida pelo aumento na concentrao do
substrato. O resultado a modificao aparente do K m e V max . (Figura
3.14).

Sem inibidor
Inibida

+ Inibidor
competitivo

No inibida

[S]
(-Inibido) (+Inibido) 1/[S]

Figura 3.13
Grfico de Lineweaver-Burk para um inibidor incompetitivo.

D. Inibio irreversvel
A inibio irreversvel envolve modificao covalente e
permanente do grupo funcional necessrio para a catlise, tornando a
enzima inativa. classificado como um inativador. Alguns pesticidas
inibem o stio ativo da acetilcolina esterase, o que impede a hidrlise
3 Enzimas 93

da acetilcolina na sinapse, resultando, no homem, paralisia dos


msculos respiratrios e edema pulmonar.

E. Frmacos que atuam como inibidores enzimticos


Muitos frmacos modernos atuam como inibidores da atividade
enzimtica. Esse mecanismo encontrado com antivirais,
antitumorais e antibacterianos. Os compostos com diferentes
estruturas em relao ao substrato natural que atuam como inibidores
so conhecidos como antimetablitos. Entre os quais citam-se, as
sulfas (a sulfanilamida compete com o cido p aminobenzico
necessrio para o crescimento bacteriano), o metotrexato (compete
com o diidrofolato e usado no tratamento da leucemia infantil),
substratos suicidas (geram uma espcie altamente reativa que reage
de forma irreversvel com o stio ativo, exemplo, o Omeprazol usado
no tratamento de excessiva acidez estomacal), fluorouracil (inibidor
irreversvel da timidilato sintetase) e 6 mercaptopurina (compete
com a adenina e guanina e efetiva no tratamento de leucemias
infantis).

3.9 Regulao da atividade enzimtica

Alm da influncia exercida sobre a atividade enzimtica de


diversos fatores, tais como: concentrao do substrato e enzima, pH,
temperatura e presena de co fatores, tem-se tambm, a integrao
das enzimas nas vias metablicas e a interrelao dos produtos de
uma via com a atividade de outras vias. As vias metablicas no
operam em capacidade mxima o tempo todo. De fato, muitos
processos podem ser interrompidos, inibidos ou ativados, durante
certas fases no ciclo de vida da clula. Se assim no fosse, a clula
teria um crescimento descontrolado e antieconmico.
A regulao das vias metablicas ocorre por meio da modulao
da atividade de uma ou mais enzimas-chave do processo. A etapa de
maior energia de ativao denominada etapa de comprometimento
(geralmente uma reao irreversvel). Comumente, enzima-chave que
catalisa a etapa comprometida serve como vlvula de controle do
fluxo de molculas no percurso metablico.
94 MOTTA Bioqumica

Quadro 3.5 Inibidores irreversveis

Inibidores enzimticos irreversveis so Outro exemplo de inibidor irreversvel a


geralmente substncias txicas. Podem ser aspirina (cido acetil-saliclico), porm com
substncias naturais ou sintticas. propriedades farmacolgicas (antiinflamatrio,
Os compostos organofosforados como o antipirtico e analgsico). A aspirina transfere
diisopropilfosfofluoridato (DIFP), formam ligaes irreversivelmente seu grupo acetil para o grupo OH
covalentes com o grupo OH de resduos de serina de um resduo de serina da molcula de
195 da acetilcolinesterase (enzima que catalisa a cicloxigenase, inativando-a. Essa enzima
hidrlise da acetilcolina), inativando-a. A responsvel pela catlise da primeira reao da
iodoacetamida, reage com o grupo SH de resduos de sntese de prostaglandinas (substncias reguladoras
cistena. Esses inibidores so bastante txicos para de muitos processos fisiolgicos).
os organismos, no s pela irreversibilidade de sua A penicilina liga-se especificamente s enzimas
ligao s enzimas, mas tambm devido sua da via de sntese da parede bacteriana, inibindo-as
inespecificidade. irreversivelmente.

A regulao das vias bioqumicas envolve mecanismos


sofisticados e complexos. conseguida principalmente pelo ajuste
das concentraes e atividades de certas enzimas. O controle
atingido por: (1) controle gentico, (2) modificao covalente, (3)
regulao alostrica e (4) compartimentalizao.

A. Controle gentico
A quantidade das enzimas disponveis nas clulas depende da
velocidade de sua sntese e da velocidade de sua degradao. A
sntese de enzimas em resposta s mudanas das necessidades
metablicas um processo conhecido como induo enzimtica, que
permite a resposta celular de maneira ordenada s alteraes no meio.
A sntese de certas enzimas pode ser especificamente inibida por
represso. O produto final de uma via bioqumica pode inibir a
sntese de uma enzima-chave da mesma via.

B. Regulao por modificao covalente


A atividade de algumas enzimas que modulam o fluxo das vias
metablicas, regulada por modificaes covalentes reversveis, em
reaes catalisadas por outras enzimas. Isso resulta na ativao ou
inibio da atividade enzimtica. Freqentemente, a modificao
envolve a fosforilao e defosforilao da enzima por adio ou
remoo de grupos fosfato ou, por modificaes covalentes de outro
tipo. As fosforilao e defosforilao so catalisadas por
protenas cinases e protenas fosfatases, respectivamente. Como
exemplo do processo regulador, tem-se a enzima glicognio
fosforilase que catalisa o desdobramento do glicognio. A enzima se
apresenta na forma fosforilada (ativa) e desfosforilada (inativa) em
processo de interconverso cclica entre as duas formas. O
mecanismo geral de regulao por modificao covalente est
intimamente associado ao hormonal.
3 Enzimas 95

Outros exemplos de modificaes covalentes reversveis incluem


acetilao desacetilao, adenilao desadenilao,
uridinilao desuridililao e metilao desmetilao.

C. Regulao alostrica
As enzimas reguladas por moduladores ligados a stio(s)
adicional(is) e que sofrem mudanas conformacionais no-covalentes
so denominadas alostricas. A afinidade da ligao enzima-substrato
das enzimas alostricas modificada por ligantes denominados
efetores ou moduladores alostricos, unidos reversvel e
no covalentemente a locais especficos da estrutura tridimensional
protica e nominados stios alostricos, que so diferentes e distantes
dos stios ativos especficos para os substratos. Os efetores so
pequenas molculas orgnicas, por exemplo, o ATP (trifosfato de
adenosina), protenas de baixo peso molecular, substratos ou produtos
da reao. A maioria das enzimas sujeitas a esses efeitos so
decisivas na regulao do metabolismo intermedirio.
Os efetores podem ser:
Efetor alostrico positivo aumenta a afinidade da enzima pelo
substrato e, assim, eleva a velocidade da reao.
Efetor alostrico negativo reduz a afinidade da enzima pelo
substrato e, assim, diminui a velocidade da reao.
A maioria das enzimas alostricas oligomrica; ou seja, so
compostas de vrias subunidades polipeptdicas, cada uma com um
stio ativo. Em algumas enzimas, o stio alostrico e o stio ativo
esto localizados na mesma subunidade (ex.: piruvato carboxilase);
em outras, esto localizados em subunidades diferentes (ex.:
aspartato carbamoiltransferase). Em conseqncia da natureza
oligomrica das enzimas alostricas, a ligao do substrato a uma
subunidade pode afetar a ligao de outras molculas de substrato aos
outros stios ativos. Cooperatividade a influncia que a unio de um
ligante a uma protmero tem sobre a unio de ligante a outro
protmero numa protena oligomrica. A interao estabelecida entre
os stios ativos evidenciada pela cintica da catlise: o grfico de o
versus a concentrao de substrato [S] uma curva sigmide, em
lugar da curva hiperblica de Michaelis Menten (Figura 3.14).
Quanto a cooperatividade as reaes podem ser:
Positivamente cooperativa onde a ligao do primeiro substrato
aumenta a afinidade de substratos adicionais por outros stios
ativos.
Negativamente cooperativa em que a ligao do primeiro
substrato reduz a afinidade por substratos adicionais.
96 MOTTA Bioqumica

[S]

Figura 3.14
Velocidade inicial da reao versus a concentrao de substrato (S)
para enzimas alostricas comparadas com enzimas no alostricas.

As enzimas alostricas podem exercer diferentes efeitos:


Interaes homotrpicas. A unio do ligante a um protmero
pode afetar a unio de ligantes aos outros protmeros do
oligmero.
Interaes heterotrpicas. o efeito de um ligante sobre a
ligao de um ligante diferente; o efeito pode ser tanto positivo
como negativo.
Algumas enzimas alostricas tm dois ou mais efetores e podem
ser reguladas por efetores positivos e negativos que podero estar
presentes em diferentes concentraes.

(a)

(b)

Figura 3.15
Modelos de sistemas de enzimas alostricas. (a) Modelo de uma enzima
monomrica. A ligao de um efetor alostrico positivo (A) ao stio ativador, j,
induz a uma nova conformao da enzima, com maior afinidade pelo substrato. A
ligao de um efetor alostrico negativo ao stio inibidor, i, resulta numa
conformao da enzima com afinidade diminuda pelo substrato (S). (b) Modelo
de uma enzima alostrica polimrica. A ligao de um efetor alostrico positivo
(A) no stio j, causa uma mudana alostrica na conformao do protmero ao
qual o efetor se liga que transmitida a um segundo protmero por meio de
interaes cooperativas protmero protmero. A afinidade pelo substrato
3 Enzimas 97

aumenta nos dois protmeros. Um efetor negativo diminui a afinidade pelo


substrato nos dois protmeros.

Dois modelos explicam o comportamento de enzimas alostricas


com curvas sigmoidais v 0 versus [S] que refletem as interaes
cooperativas entre as subunidades oligomricas:
1. Modelo concertado (ou de simetria) . Proposto por Monod,
Wyman e Changeux, onde as subunidades esto todas na forma
inativa (T, tenso) ou todas na forma ativa (R, relaxado). Os estados T
e R esto em equilbrio. Ativadores e substratos favorecem o estado
R. Inibidores favorecem o estado T. Uma mudana conformacional
num protmero causa uma mudana correspondente em todos os
protmeros.
2. Modelo seqencial. Proposto por Koshland, Nmethy e Filmer
as subunidades podem sofrer a mudana conformacional
individualmente. A ligao do substrato aumenta a probabilidade da
mudana conformacional. A mudana em uma subunidade faz ocorrer
uma mudana similar na subunidade adjacente, vizinho do protmero
contendo o ligante unido, assim como torna mais provvel a ligao
de uma segunda molcula de substrato.

Modelo concertado

+ + + +

Modelo seqencial

+ + + +

Estado T Estado R Substrato

Figura 3.16
Comportamento das enzimas alostricas. No modelo concertado, todas as unidades so
convertidas do estado T (baixa afinidade) para o estado R (alta afinidade) simultaneamente. No
modelo seqencial, as subunidades sofrem mudanas conformacionais progressivamente com
as ligaes do substrato.

D. Zimognios
Muitas enzimas so sintetizadas como precursores inativos e,
subsequentemente, ativadas pela clivagem de uma ou mais ligaes
peptdicas especficas. O precursor inativo chamado zimognio (ou
proenzima). No necessria uma fonte de energia (ATP) para a
clivagem.
98 MOTTA Bioqumica

As formas zimognios so geralmente designadas pelo sufixo


ognio depois do nome da enzima; a forma zimognio da
quimotripsina denominada quimotripsinognio. Algumas vezes, a
forma zimognio referida pr-enzima; a forma zimognio do
colgeno o pro colgeno.
A protelise especfica um meio comum de ativao de enzimas
e outras protenas nos sistemas biolgicos. Exemplos:
As enzimas digestivas que hidrolisam protenas so sintetizadas
como zimognios no estmago e pncreas (Quadro 3.3).
A coagulao sangnea mediada por uma cascata de ativadores
proteolticos que asseguram uma rpida e amplificada resposta a
leso celular. Os zimognios so sintetizados nas clulas do
fgado e so secretados no sangue para subseqente ativao por
serino-proteases.
Alguns hormnios proticos so sintetizados como precursores
inativos. Por exemplo: a insulina derivada da pr insulina pela
remoo proteoltica de um peptdeo.
A protena fibrosa colgeno, o maior constituinte da pele e ossos,
derivado do pro colgeno, um precursor solvel.
Muitos processos de desenvolvimento so controlados pela
ativao de zimognios. Por exemplo, parte do colgeno
desdobrado no tero dos mamferos aps o parto. A converso da
pr colagenases em colagenases, a protease ativa, realizado no
momento apropriado dentro do processo.
A apoptose ou a morte celular programada mediada por
enzimas proteolticas denominadas captases e sintetizadas na
forma de precursor pr caspases. Quando ativadas por vrios
sinais, as caspases atuam na morte celular. A apoptose promove
um meio de esculpir as formas de parte do corpo no curso do
desenvolvimento e um meio de eliminar clulas produtoras de
auto-anticorpos ou infectadas com patgenos tambm como,
clulas contendo uma grande quantidade de DNA lesado.

Quadro 3.3 Zimognios gstricos e pancreticos

Local de sntese Zimognio Enzima ativa

Estmago Pepsinognio Pepsina


Pncreas Quimiotripsinognio Quiniotripsina
Pncreas Tripsinognio Tripsina
Pncreas Pr carboxipeptidase Carboxipeptidase
Pncreas Proelastase Elastase

E. Isoenzimas
Outro fenmeno de regulao metablica e que depende da
estrutura quaternria das protenas enzimticas so as isoenzimas. As
isoenzimas ou isozimas so formas moleculares mltiplas de uma
3 Enzimas 99

enzima, que realizam a mesma ao cataltica e ocorrem na mesma


espcie animal. O exemplo clssico a lactato desidrogenase (LDH)
um tetrmero formado por duas espcies diferentes de cadeias
polipeptdicas, denominadas M (msculo) e H (corao). Essas
subunidades so codificadas por genes diferentes. A combinao das
duas cadeias produz cinco isoenzimas que podem ser separadas
eletroforeticamente (Quadro 3.4).

Quadro 3.4 Composio das subunidades da lactato-desidrogenase e


suas principais localizaes

Tipo Composio Localizao

LDH 1 HHHH Miocrdio e eritrcitos


LDH 2 HHHM Miocrdio e eritrcitos
LDH 3 HHMM Crebro e fgado
LDH 4 HMMM -
LDH 5 MMMM Msculo esqueltico e fgado

A lactato desidrogenase catalisa a reduo reversvel do piruvato


a lactato. Desse modo, no msculo esqueltico a isoenzima LDH 5
apresenta V max elevada para o piruvato e, portanto, converte
rapidamente o piruvato a lactato. No caso da LDH 1, encontrada no
corao a V max relativamente baixa para o piruvato, no favorecendo
a formao do lactato. O excesso de piruvato inibe a isoenzima
LDH 1. O msculo cardaco, um tecido essencialmente aerbico,
metaboliza a glicose a piruvato e, a seguir, a CO 2 e H 2 O, produzindo
pouco lactato. Entretanto, em situaes de dficit de oxignio, o
piruvato pode ser convertido a lactato como medida de emergncia.
Assim, as caractersticas cinticas distintas das duas enzimas
determinam o tipo de metabolismo em cada tecido.
Foram estudadas isoenzimas de vrias enzimas diferentes, sendo
as mais importantes, do ponto de vista clnico, alm da lactato
desidrogenase, a creatina cinase e a fosfatase alcalina.

3.10 Aplicaes clnicas das enzimas

Muitas das enzimas presentes no plasma, lquido


cefalorraquidiano, urina e exudatos, so provenientes,
principalmente, do processo normal de destruio e reposio celular.
Entretanto, certas enzimas se apresentam, nesses lquidos, em teores
elevados aps leso tecidual provocadas por processos patolgicos
com o aumento na permeabilidade celular ou morte prematura da
clula. Nos casos de alterao da permeabilidade, as enzimas de
menor massa molecular aparecem no plasma. Quanto maior o
gradiente de concentrao entre os nveis intra e extracelular, mais
rapidamente a enzima difunde para fora. As enzimas citoplasmticas
surgem no plasma antes daquelas presentes nas organelas
sub celulares. Quanto maior a extenso do tecido lesado, maior o
aumento no nvel plasmtico. As enzimas no especficas do plasma
100 MOTTA Bioqumica

so clarificadas em vrias velocidades, que dependem da estabilidade


da enzima e sua susceptibilidade ao sistema reticuloendotelial.
Algumas enzimas tem sua atividade no prprio plasma; por
exemplo, as enzimas associadas a coagulao sangnea (trombina),
dissoluo de fibrina (plasmina) e clareamento de quilomicrons
(lipase lipoprotica). As enzimas mais ensaiadas no laboratrio
clnico so mostradas na Quadro 3.5.

Quadro 3.5 Enzimas rotineiramente ensaiadas no laboratrio clnico

Enzimas rgo ou tecido afetado

Aldolase Msculo, corao


Amilase Pncreas

Creatina cinase (CK ou CPK) Corao, msculo, crebro

Fosfatase cida Prstata (carcinoma)


Fosfatase alcalina Fgados, ossos

Lactato desidrogenase (DHL) Fgado, corao, eritrcitos

Lipase Pncreas

-Glutamil transpeptidase Fgado

Glicose 6 P desidrogenase Eritrcitos (doena gentica)

Transaminase oxalactica (OT) Fgado, corao

Transaminase pirvica (PT) Fgado, corao

Resumo
1. As enzimas so catalisadores biolgicos. Elas aumentam a velocidade da
reao pois seguem uma via alternativa que necessita menos energia que
a reao no-catalisada. As enzimas so especficas para o ripo de reao
que catalisam. Cada tipo de enzima possui um local especfico em sua
superfcie denominado stio ativo, que uma pequena fenda onde se liga
o substrato. No modelo chave e fechadura, a fenda do stio ativo e o
substrato so complementares. No modelo do encaixe-induzido
protena mais flexvel e se adapta ao substrato.
2. Cada enzima classificada de acordo com o tipo de reao que catalisa.
Existem seis tipos de categorias enzimticas: oxidorredutases,
transferases, hidrolases, liases, isomerases e ligases.
3. A cintica enzimtica o estudo quantitativo da catlise por enzimas. De
acordo com o modelo de Michaelis Menten, quando o substrato S liga-se
ao stio ativo de uma enzima E, um complexo de estado de transio
formado. Durante o estado de transio, o substrato convertido em
produto. Aps algum tempo, o produto se dissocia da enzima.
4. O nmero de renovao (K cat ) a medida do nmero de molculas de
substrato convertidos em produto por unidade por uma enzima quando
ela est saturada de substrato. O termo K cat/ K m descreve a eficincia da
enzima.
5. A inibio enzimtica pode ser reversvel ou irreversvel. Os inibidores
irreversveis geralmente ligam-se covalentemente s enzimas. Na
inibio reversvel, o inibidor pode dissociar-se da enzima. Os tipos mais
3 Enzimas 101

comuns de inibio reversvel so a competitiva, no competitiva e a


incompetitiva.
6. As propriedades cinticas das enzimas alostricas no so explicadas
pelo modelo de Michaelis Menten. A maioria das enzimas alostricas so
protenas multi-subunidades. A ligao do substrato ou efetor a uma
subunidade afeta as propriedades de ligao dos outros protmeros.
7. As enzimas empregam os mesmos mecanismos dos catalizadores no-
enzimticos. Vrios fatores contribuem para a catlise enzimtica:
efeitos de proximidade e orientao, efeitos eletrostticos, catlise
cido base e catlise covalente. A combinao desses fatores afetam os
mecanismos enzimticos.
8. As cadeias laterais de aminocidos presentes nos stios ativos so os
principais responsveis pela transferncia de prtons e substituies
nuclefilas. Co-fatores no proticos (metais e coenzimas) so usados
pelas enzimas para catalisar vrios tipos de reaes.
9. As enzimas so sensveis aos fatores ambientais como a temperatura e
pH. Cada enzima tem uma temperatura tima e um pH timo.
10. As reaes qumicas nas clulas vivas so organizadas em uma srie de
vias bioqumicas. As vias so controladas principalmente pelo ajuste das
concentraes e atividades das enzimas por meio do controle gentico,
modificao covalente, regulao alostrica e compartimentalizao.