PRACTICA N2

Bacterias coliformes. Coliformes termotrficos. E. coli. Mtodo del

Numero Ms Probable (NMP). Pruebas bioqumicas de identificacin.

INTEGRANTES:
Julca Alcantara Katerin Milagros
Motta Pardo Angelo Paul
Saldaa Mucching Maricielo Shantall
Torres Chacn, Franklyn

DOCENTE:
Dra. Carmen Lpez Flores
GRUPO: 5 D

2017-II
 INTRODUCCIN

El grupo coliforme constituyen un grupo heterogneo con hbitat primordialmente

intestinal para la mayora de las especies que involucra, es constante, abundante y casi
exclusivo de la materia fecal, su capacidad de sobrevivencia y multiplicacin fuera del
intestino tambin se observan en aguas potables, por lo que este grupo se utiliza como
indicador de contaminacin fecal en agua; encontrndose que mientras mayor sea el
nmero de coliformes en agua, mayor ser la probabilidad de estar frente a una
contaminacin reciente. Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no slo
sobreviven, sino que se multiplican, por lo que en los alimentos el grupo coliforme
adquiere un significado distinto al que recibe en el agua. Cuando los productos
alimenticios han recibido un tratamiento trmico (pasteurizacin, horneado, coccin,
etc.), estos microorganismos se utilizan como indicadores de malas prcticas sanitarias.
Para su estudio, se dividen en dos grupos. El grupo de bacterias coliformes totales el
cual comprende a todos los bacilos Gram-negativos aerobios o anaerobios facultativos,
no esporulados, que fermentan la lactosa con produccin de gas en un lapso mximo de
48 h. a 35C 1C. Este grupo est conformado por 4 gneros principalmente:
Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella. El grupo de coliformes fecales,
est constituido por bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con
produccin de gas a las 48 h de incubacin a 44.5 0.1C. Este grupo no incluye una
especie determinada, sin embargo la ms prominente es Escherichia coli1.
La determinacin de microorganismos coliformes totales por el mtodo del Nmero
ms Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de
fermentar la lactosa con produccin de cido y gas al incubarlos a 35C 1C durante
48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinacin
consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa. En la fase presuntiva el
medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite la
recuperacin de los microorganismos daados que se encuentren presentes en la
muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono. Durante la
fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante
el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de
tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante. La determinacin del nmero ms
probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los tubos positivos
de la prueba presuntiva y se fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar
la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 0.1C por
un periodo de 24 a 48 h2.
 PROCEDIMIENTO

MARICIELITO

Favor de subir todas las imgenes para anexar a los resultados

 RESULTADOS

NMP DE COLIFORMES, COLIFORMES TERMOTROFICOS Y E. coli

COLIFORMES ANGELO
Prueba presuntiva:
Medio de cultivo, temperatura y tiempo de incubacin:
Positividad de la prueba:
Fundamento de las reacciones:
Prueba confirmativa:
Medio de cultivo, temperatura y tiempo de incubacin:
Positividad de la prueba:
Fundamento de las reacciones:
COLIFORMES TERMOTROFICOS: FRANKLYN

Para la determinacin de la presencia de coliformes termotrficos se selecciona tubos de

Caldo LST (prueba presuntiva) con formacin de gas e inoculamos una asada en en
tubos con Caldo E.C. a 44.5 C x 48 horas en los cuales se observar como positivo
para coliformes termotrficos la formacin de gas.

El fundamento consiste en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y

producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 0.1C por un periodo de
24 a 48 h.

Escherichia coli FRANKLYN

Fundamento de las reacciones:

Identificacin bioqumica de Escherichia coli mediante pruebas (IMViC).

-Produccin de Indol: Se determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa). La

triptofanasa hidroliza el triptfano en indol y alanina. El indol se detecta empleando un
reactivo especfico (Reactivo de Kovacs). El triptfano forma parte de las peptonas del
medio. Un anillo rosa-rojizo en la superficie indica que se ha formado un complejo
coloreado entre el indol y el p-dimetilamino benzaldehdo. El alcohol amlico concentra
el complejo coloreado en la superficie.

-Rojo de Metilo: Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos (actico,

frmico, etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de
pH se detecta aadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo (observacin de color
rojo a pH 4-5; amarillo a pH>6).

-Voges-Proskauer: Detecta la fermentacin butanodilica. En esta fermentacin se

producen menor cantidad de cidos que en la fermentacin cido-mixta, y una gran
cantidad de butanodiol. Mediante un reactivo, (alfa-naftol y KOH al 40%), se detecta la
presencia de un precursor del butanodiol (acetilmetilcarbinol o acetona). La acetoina en
presencia de oxgeno se oxida a diacetilo. El diacetilo oriigina una coloracin roja al
reaccionar con los restos guanidnicos de algunos aminocidos de la peptona del medio.
-Prueba de Citrato de Sodio: Se determina la utilizacin del citrato como nica fuente de
carbono y energa. La prueba emplea un medio definido (Koser) con citrato como nica
fuente carbonada (se detecta turbidez). Alternativamente se utiliza el medio de
Simmons: utiliza un medio slido con citrato sdico y un indicador cido-base (azul de
bromotimol). En este caso se detecta la alcalinizacin del medio por el consumo del
citrato (el indicador toma color azul).

Coliformes
DILUCIONE COLIFORMES Observacione
Termotrficos
S s
P.P. P. C. E.C.
A -
B -
C -
a -
b -
c -
a -
b -
c -

Pruebas bioqumicas Observaciones

IMViC
Indol
Rojo de Metilo
Voges- Proskauer
Citrato de Sodio

CODIGO NMP/Coliformes: 321 NMP/g o mL Coliformes:

CODIGO NMP/Col. Termotrficos: 0 0 0 NMP/g o mL termotrficos:

CUESTIONARIO KATY DEL MAL

1. Cmo define la OMS al grupo coliformes?

2. Explique el significado de la presencia de E. coli en carne refrigerada.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Brooks, Geo F., Batel, Janet S. y Morse, Stephen A., Microbiologa Mdica de
Jawetz. Manual Moderno 17a Edicin 2002, (17): 274-275.
2. Kornacki J.L. & Johnson J.L.Enterobacteriaceae, Coliforms, and Escherichia
coli as Quality and Safety Indicators. In: Compendium of Methods for the
Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K.APHA.
Washington. 69-82.