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Enriquecimiento y aislamiento

La cultura del enriquecimiento como concepto no ha variado mucho desde los Beijerinck y Winogradsky. Sin embargo, las variaciones en su uso han
evolucionado La deteccin de microorganismos de importancia industrial. En esencia, el enriquecimiento Es el proceso de proveer un ambiente adecuado
para el crecimiento y Reproduccin de un microbio especfico mientras que es inhibitoria o letal para el Microorganismos. Formulacin de medios de
crecimiento para la seleccin de los rasgos deseados Es el ms prominente empleado .Estos incluyen el uso de compuestos particulares Como fuentes
nicas de carbono cuando se selecciona la utilizacin o degradacin de tales Compuestos, inhibidores para bloquear vas bioqumicas especficas, pH
Ajustes, etc. Uno de los enfoques ms directos del aislamiento De nuevos organismos es el uso de una fuente especfica de carbono y / o energa para
Seleccin de organismos para su utilizacin de estos compuestos. Este mtodo ha dado como resultado organismos capaces de utilizar o degradar
compuestos tales como hidrocarburos clorados (42, 54, 59), benceno (56), anilina y otro compuesto recalcitrante. Como se mencion anteriormente,
Utilizaron la misma tcnica para el aislamiento de una nueva Agrobacterium sp. Capaz de degradar EDTA frrico en concentraciones tan altas como 100
mM (3 3). El EDTA se utiliza como quelante de metales en muchos productos industriales y, debido a Su recalcitrancia, representa una afluencia sustancial
de demanda qumica de oxgeno como Parte del efluente de residuos industriales. Los estudios iniciales muestran que este organismo tambin Tiene
potencial para tratar el material de desecho nuclear degradando EDTA degradante ligado a radionucleidos Inhibiendo as la migracin de estos compuestos
desde los sitios de almacenamiento. Aunque la recalcitrancia del EDTA hizo difcil el aislamiento (solo uno Positivo se obtuvo de ms de 100
enriquecimientos), Shirai (56) ilustra La diversidad de microorganismos y el potencial de la cultura de enriquecimiento Utilizando benceno como nica
fuente de carbono en un enriquecimiento para organismos asimiladores de benceno. De 150 muestras tomadas de arrozales, Jardines y bosques, Shirai
observ crecimiento microbiano en 102 enriquecimientos Y aislaron 95 cepas de organismos asimiladores de benceno. Uno de los problemas inherentes
con el enriquecimiento y la seleccin de la utilizacin de un compuesto como nica fuente de carbono es el enriquecimiento concomitante de bacterias
fijadoras de dixido de carbono. Strotmann & Roschenthaler eludi este problema desarrollando un ensayo que explot la liberacin de protones durante
la degradacin de hidrocarburos clorados por bacterias. Mediante la incorporacin del indicador de pH azul de bromotimol en el medio de crecimiento, se
control la liberacin de protones y la cada del pH para identificar la degradacin Mientras que algunos organismos son fcilmente aislados en el cultivo
por lotes, otros pueden requerir una seleccin ms intensiva. A menudo, una poblacin de microbios puede contener un nmero relativamente pequeo
de organismos con el genotipo dirigido, los organismos pueden exhibir una baja expresin de una enzima particular, o los organismos pueden ser inhibidos
por el compuesto que se est tratando de degradar. En esos casos, Pueden utilizarse ajustes graduales en un cultivo quimosttico o continuo para
Enriquecer lentamente para un organismo especfico. De esta manera, se puede seleccionar para organismos en pequeos nmeros y / o puede explotar
mutaciones en la poblacin general. Este progresivo enriquecimiento es tedioso, posiblemente requiriendo meses De cultivo continuo, pero puede ser la
tcnica ms eficaz en ciertos casos Los investigadores han utilizado con xito el cultivo quimiosttico para seleccionar un microbio especfico de una
poblacin mixta para aislar los microbios capaces de crecer en ciertos herbicidas (29) y alcanos halogenados. La manipulacin del pH ha demostrado ser
til en el aislamiento de organismos capaces De crecer a extremos de pH. Los medios alcalinos (pH <10) son rutinariamente (31, 52, 58) para el aislamiento
de bacterias alcalfilas. Los organismos capaces de producir enzimas alcalinas activas tienen un tremendo potencial industrial en reas tales como
formulacin de detergente para lavandera, papel y celulosa Produccin y procesamiento de alimentos. Nuestro laboratorio utiliz un Enriquecimiento (pH
10,5) para aislar Bacillus sp. De una fuente termal que produce una proteasa nica que exhibe una alta actividad especfica contra la elastina Y otras
protenas insolubles. Otros investigadores aislaron con xito una amplia gama de organismos alcaloflicos de una variedad de ambientes que producen
muchas enzimas alcalinas activas y estables incluyendo proteasas (12, 62), amilasas (22), lipasas (63), celulasas (16, 24) y xilanasa. El aislamiento acidfilos
ha logrado igual xito, descubriendo organismos capaces de crecer y producir enzimas activas a bajos niveles de pH. Una comprensin incompleta de los
requerimientos metablicos y fisiolgicos Pueden dificultar grandemente el progreso al disear procedimientos de seleccin. En presencia de un sistema
Na + / H antiportador, el crecimiento de ciertos lcaliphilos obligatorios depende de la presencia de sodio en el medio de crecimiento. Pueden ser
necesarios requisitos similares para el crecimiento de otros tipos de organismos cuando se utilizan fuentes de carbono o de energa particulares .La falta
de calcio requerida para la estabilidad enzimtica de ciertas proteasas podra oscurecer los cultivos positivos durante el enriquecimiento y posterior
seleccin. Diferentes gneros de organismos pueden predominar en los enriquecimientos del mismo ambiente usando el mismo medio al mismo pH,
simplemente cambiando el sistema tampn. Estas diferencias aparentemente menores subrayan la importancia de comprender los mecanismos
fisiolgicos que operan en estos organismos. De hecho, el avance del conocimiento en el rea de fisiologa microbiana es primordial para la mejora futura
y el xito de la tecnologa de enriquecimiento-cultura. La investigacin sobre la produccin de I ~ -fenilalanina por Hummel et al (25) ejemplifica cmo el
conocimiento de la fisiologa microbiana puede ayudar a un programa de cribado. Trabajos anteriores haban establecido que el cido acetamidocinmico
(ACA) era un intermedio en la sntesis qumica de fenilalanina; Por lo tanto se esperaba que se pudiera usar una AC-acilasa en un esquema de produccin
alternativo. Usando ACA como un solo carbono El enriquecimiento de la fuente result infructuoso. Una doble pantalla que produjo organismos capaces de
crecer en ACA y L-fenilalanina (indicando catabolismo del compuesto aromtico va fenilpiruvato) tuvo xito en el aislamiento de varios Brevibacterium
sp. Que produjo la ACA-acilasa deseada. Los parmetros fsicos tales como la temperatura pueden manipularse para el aislamiento de los psicrfilos y
termfilos. Enzimas que son estables y Activos a temperaturas extremas son muy importantes para diversas Procesos. Las enzimas termoestables son
tiles en varios procesos de conversin Utilizados para el procesamiento de frutas y hortalizas, procesamiento de almidn y Reduccin estereoespecfica
de alcoholes (9). Un sistema termo-activo de penicilina- Acilasa se produce actualmente a gran escala (66). Un problema particular con el aislamiento y
el cultivo de termfilos es que el agar es un pobre agente solidificante a altas temperaturas (<70 C). El desarrollo de nuevos agentes de solidificacin
tales como la goma de gelano producida por Pseudomonas, Gelrite, estn facilitando el aislamiento de tales organismos. Tal vez el mayor paso que se
est haciendo en la tcnica de enriquecimiento es el progreso en la comprensin de los diversos rasgos metablicos de los microorganismos. A medida
que se aprende ms de vas especficas de degradacin, por ejemplo, los microbios pueden seleccionarse usando ensayos enzimticos especficos, o los
enriquecimientos pueden modificarse para aprovechar el conocimiento especfico de vas bioqumicas o mecanismos energticos. Comprensin de la vida
bajo condiciones nutritivas bajas y otras condiciones adversas Est avanzando (19, 32, 70). El desarrollo de los llamados medios de inanicin y otros
avances han permitido el aislamiento de nuevas y nuevas bacterias de ambientes extremos como los lagos antrticos oligotrficos). Las tcnicas
innovadoras de cultivo de enriquecimiento implican la combinacin de todos los elementos posibles en la creacin del ambiente ms riguroso para la
seleccin del microorganismo deseado