c
 

|
Existen mltiples mtodos de tincin histolgica, unos generales y otros
especficos, que permiten poner de manifiesto tanto la topografa tisular,
como tipos celulares concretos, determinados orgnulos o estructuras
intracelulares. |

Las tinciones histolgicas propiamente dichas utilizan colorantes, la

mayor parte de ellos derivados de la industria textil, que se eligen en
funcin de su capacidad de interaccionar con los diferentes
constituyentes de los tejidos. Tcnicas de tincin ms complejas como
las histoenzimticas o inmunocitoqumicas se basan en el empleo de
sustratos, lectinas, anticuerpos, etc.|

a

 
 |

n colorante es una molcula que tiene la capacidad de absorber

radiaciones electromagnticas dentro de la regin del espectro visible es
decier entre 400 y 650 nm. Los colorantes que absorben todas las
radiaciones entre estos mrgenes, no transmiten ningn tipo de luz y se
ven por lo tanto de color negro. Aquellos colorantes que absorben una
franja ms estrecha, transmiten un color determinado. Por ejemplo el
cido pcrico absorbe predominantemente la luz azul-violeta del final del
espectro visible, dando como resultado una luz transmitida de color
amarillo.|

a



   |

n buen mtodo de tincin es aquel que cuando se reproduce da un

alto porcentaje de xito con resultados equiparables. Todos lo mtodos
de tincin requieren siempre una adapatacin o modificacin para ser
utilizados correctamente. Para reproducir un mtodo de tincin hay que
utilizar siempre reactivos, colorantes y agua destilada de calidad y
preparar las soluciones colorantes en material de vidrio
extremadamente limpio. Conviene tener presente que la tcnica de
tincin en s misma no es una tcnica aislada sino que forma parte
integral de todo el proceso histolgico. |

Los protocolos de tincin deben escribirse de forma concisa, anotando

de forma muy precisa indicando claramente todos los pasos necesarios
para preparar todas las soluciones empleadas, tiempos de actuacin,
temperatura, condiciones, etc...|

a

     
     |
Los diferentes fijadores interactan de forma diferente sobre las
molculas que componen los tejidos produciendo modificaciones. En un
mismo tejido, los colorantes se comportan de forma diferente en funci
n del grado de fijacin y de la naturaleza del fijador utilizado. Por
ejemplo, se conoce que tanto la formalina como el tetrxido de smio
inducen basofilia en los tejidos, mientras que las soluciones colorantes a
base de dicromato inducen acidofilia. En comparacin con la formalina,
el fijador de Carnoy incrementa la avidez del tejido por los colorantes,
mientras que el fijador de Zenker disminuye el grado de coloracin.|

a

  
 
    |

na tincin progresiva es aquella en las que los cortes histolgicos se

sumergen en la solucin colorante durante el tiempo necesario hasta
que adquieren el grado de tincin deseada. Cuanto ms tiempo estn
los cortes en la solucin colorante, ms fuerte es la tincin. na tincin
regresiva es aquella en la que los cortes se "sobretien" dejndolos en
la solucin colorante durante un tiempo excesivo y posteriormente se
procede a retirar el exceso de colorante (proceso que se llama
"diferenciacin") mediante tratamiento con una solucin cida o
alcohlica. En este caso se ajusta el tiempo de diferenciacin.|

a
  
   
  


  |

En una tincin fsica, el colorante se disuelve en el sustrato. Por ejemplo

el Sudn III se disuelve en las grasas, y es empleado para demostrar
gotas lipdicas. En una tincin qumica, el colorante interacciona
qumicamente con el sustrato a travs de fuerzas de van der Waals,
puentes de hidrgeno, enlaces covalentes o enlaces electrostticos.|

a

    
    |

En una tincin directa el colorante interacciona directamente con el

sustrato. En una tincin indirecta se hace interaccionar en primer lugar a
una sustancia qumica denominada "mordiente" con el sustrato la cual
permite la posterior interaccin del colorante. sualmente los
mordientes son sales, hidrxidos o alumbres de metales bivalentes o
trivalentes.|

a

     |

Las tinciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante, o

mltiples cuando se usan dos o ms colorantes. En una tincin
tricrmica se emplean tres colorantes, cada uno de ellos con unas
particularidades, de tal manera que se consigue teir con colores
diferentes, estructuras diferentes, permitiendo as su rpida
identificacin en el microscopio.|

a

  

 
|

Es aquella que se realiza sobre clulas frescas, recin obtenidas, con

objeto de realizar una observacin de las estructuras teidas con las
clulas vivas. Por ejemplo, se puede teir las mitocondrias de clulas
vivas con el colorante Verde Jano y observarlas con el microscopio
mientras las clulas permanecen vivas.|

a

   
|

Es aquel procedimiento por el cual un colorante no-txico, como el

Carmn de litio o el Azul Tripn, se inyecta en un organismo vivo para
estudiar procesos vitales de clulas capaces de acumularlo por
pinocitosis o fagocitosis.|

a
  
    |

Esta forma de tincin se basa en que el colorante no-tie la estructura

que se desea estudiar, de tal forma que la morfologa externa o los
contornos de esa estructura quedan delimitados por el propio colorante
que se encuentra a su alrededor.|

a

   

  |

sualmente los cortes histolgicos se montan sobre portaobjetos antes

de ser teidos lo cual facilita su manipulacin. Sin embargo en
ocasiones, sobre todo cuando se utilizan cortes gruesos de 30-50
micras, obtenidos con un criostato o con un vibratomo, conviene realizar
determinado tipo de tinciones "en flotacin". Para ello los cortes de
tejido se mantienen sumergidos (en flotacin) en el interior de la
solucin colorante lo cual permite la accesibilidad del colorante por
ambas superficies. Este tipo de tcnica es poco comn cuando se
utilizan colorantes pero es habitual cuando se realizan tcnicas de
tincin histoenzimticas o inmunocitoqumicas.|

a

  

  |
Es aquella que se realiza utilizando placas de cultivo celulares. Es decir,
la tincin se realiza sobre clulas que se han mantenido vivas en
condiciones in vitro.|

a
  
  


 |

En ocasiones, en algunos tipos de impregnaciones metlicas, tcnicas de

Golgi, etc... conviene realizar la tincin no sobre cortes histolgicos sino
sobre la pieza o bloque de tejido. Para ello el bloque de tejido se
sumerge en la solucin colorante durante un tiempo determinado. Los
resultados finales no se pueden valorar, sin embargo, hasta que no se
han confeccionado los cortes y se realiza la observacin microscpica.|

a

  
  


   |

Para la observacin de los cortes ultrafinos con el microscopio

electrnico de transmisin, es preciso "contrastar" los cortes con objeto
de incrementar las diferencias de densidad electrnica de las diferentes
partes de la muestra. Para ello se recurre al emleo de sales de metales
pesados como uranio, wolframio o plomo.|

a

      |

El objetivo de una tincin histoenzimtica es detectar la presencia de un

enzima. Para ello se recurre a una serie de reacciones qumicas que
demuestran la presencia del producto de la actividade enzimtica.|

a

   
 
  |

Las tinciones inmunocitoqumicas o inmunohistoqumica pretenden

detectar la presencia de una molcula con caractersticas antignicas.
Para ello se recurre al empleo de anticuerpos que interaccionan
directamente con los antgenos. Estos anticuerpos pueden estar
marcados con una sustancia fluorescente y en este caso se trata de una
tincin de inmunofluorescencia. |

 
 

  
  
|


  


|


 


|


 !" |


 #$
 $ %
&'
!()
 |


  



|

*

+#
 #
   |