CODIGO P-SA-63

PROCEDIMIENTO TCNICO DETERMINACIN FECHA DE

CUALITATIVO Y CUANTITATIVA DE 27/10/2015
EMISIN
COLIFORMES TOTALES Y Escherichia coli
EN AGUAS SUSTRATO DEFINIDO (COLILERT) VERSIN 01
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PROCEDIMIENTO TCNICO DETERMINACIN CUALITATIVO Y CUANTITATIVA DE

COLIFORMES TOTALES Y Escherichia coli EN AGUAS
SUSTRATO DEFINIDO (COLILERT)
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ELABOR REVIS APROB

REFERENTE DE LABORATORIO SECRETARIO DE SALUD REPRESENTANTE DE LA
REPRESENTANTE DE CALIDAD DIRECCIN
DIRECTOR (S) TECNICO (S)
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1. OBJETIVO

Describir la Tcnica de Sustrato definido Metodologa Colilert Ausencia / Presencia y/o

NMP para microorganismos Coliformes Totales y Escherichia coli en agua de consumo, en
agua potable tratada envasada, aguas de estanques de piscina y estructuras similares

2. ALCANCE

Este procedimiento permite la identificacin de microorganismos Coliformes totales y

Escherichia coli en agua de consumo, en agua potable tratada envasada, aguas de
estanques de piscina y estructuras similares. Aplica a todas las muestras de agua para
anlisis microbiolgico que son recepcionadas y analizados en el Laboratorio de Salud
Pblica.

3. DEFINICIONES

Coliformes: Son un grupo de Gneros Bacterianos que tienen ciertas caractersticas

bioqumicas en comn: 1. Ser aerobias o anaerobias facultativas; 2. Bacilos gran
negativos; 3. No ser esporgenas; 4. Fermentar la glucosa a 35C en 48 horas,
produciendo cido lctico y gas. Adicionalmente tienen importancia relevante
como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos.
Se encuentran comnmente en las plantas, el suelo, los animales y los humanos. La
presencia de bacterias Coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el
suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos
en descomposicin.

Coliformes fecales: Son Coliformes totales de origen intestinal que como

caracterstica diferencial fermentan la lactosa a 44,5 45,5C, Desde el punto
de vista de la salud pblica esta diferenciacin es importante puesto que permite
asegurar con alto grado de certeza que la contaminacin que presenta el agua es
de origen fecal.

Escherichia coli (E. coli): Bacteria cuyo hbitat natural son los intestinos de la mayor
parte de los mamferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del
sistema digestivo. El aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado de certeza
de contaminacin de origen fecal, alrededor del 99%.

Colilert: Tecnologa de Sustrato Definido que detecta simultneamente Coliformes

Totales y E. coli en agua para Consumo Humano, Agua Potable Tratada Envasada,
Aguas de Estanques de Piscina y estructuras similares. . Dos nutrientes indicadores,
ONPG y MUG, son las principales fuentes de carbono en Colilert y pueden ser
metabolizados por la enzima coliforme -galactosidasa para metabolizar ONPG y
cambiarla de incolora a color amarillo. y E. coli usa la -glucuronidasa para
metabolizar MUG y crear fluorescencia
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NMP: El mtodo del Nmero ms probable (NMP) (Most probable number - MPN - en
ingls), tambin conocido como el mtodo de los ceros de Poisson, es una forma de
obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos
de incidencia positiva/negativa.

Ausencia / Presencia: Forma de obtener datos cualitativos en caso que bacteria sea
positiva o negativa en el anlisis.

ATCC = American Type Culture Collection. Es un material biolgico de referencia

certificado. La coleccin certifica que se suministra una determinada cepa, que es un
cultivo puro, y que se han observado las convenientes pruebas morfolgicas,
bioqumicas y moleculares.

Agua Potable Tratada Envasada: El elemento que se obtiene al someter el agua de

cualquier sistema de abastecimiento a los tratamientos fsicos. \ qumicos necesarios
para su purificacin, el cual debe cumplir los requisitos establecidos en esta resolucin.

4. RESPONSABLES

Ser responsabilidad del profesional asignado a la seccin del Anlisis Microbiolgico de

Aguas y Alimentos, del Laboratorio de Salud Pblica del Meta cumplir con los lineamientos
establecidos en este documento, sin hacer ningn cambio que no est debidamente
documentado y autorizado y se ejecutara segn cronograma de anlisis de muestras.

5. GENERALIDADES

Grupo Coliforme Total: Toda bacteria que posea la enzima D Galactosidasa; la cual
tiene la propiedad de abrir el sustrato cromognico, resultando en la liberacin del
cromgeno. Escherichea coli es definida como toda bacteria que da respuesta positiva al
grupo Coliforme Total y adems posee la enzima Glucoronidasa, la cual tiene la propiedad
de abrir el sustrato fluorognico, resultando en la liberacin del fluorgeno.

Los microorganismos Coliformes son Gram negativos pertenecientes a la familia

enterobactericea, se utilizan como indicadores de contaminacin, pues se encuentran
ampliamente difundidos en la naturaleza, agua y suelo. Tambin son habitantes normales
del tracto intestinal del hombre y animales de sangre caliente. Su presencia en alimentos
es signo de mala calidad higinica en el proceso, falta de higiene de los manipuladores,
recontaminacin despus del proceso y an de contaminacin fecal.

6. DESARROLLO

6.1. Fundamento
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6.1.1. Fundamento Sustrato Definido- Coliler

Colilert es un sistema de reactivos diseado para un diagnstico de Coliformes
totales y E.coli en aguas. En su formulacin solo se encuentran presente dos nicas
fuentes de carbono ONPG y MUG, lo que permite que solo los microorganismos
enzimticamente equipados para hacer el metabolismo de estos azucares, tengan
oportunidad de desarrollarse y entonces evidenciar una seal positiva.

Si bien es cierto que las enzimas B-D Galactosidasa y B-D Glucoronidasa, se

encuentran presentes en la mayora de las bacterias Coliformes y E coli,
respectivamente, es importante aclarar que estas dos enzimas necesitan ser
INDUCIDAS, esta induccin es netamente restrictiva (necesita la ABSOLUTA
restriccin de otras fuentes de carbono, para su expresin de forma adecuada)
Cuando los coliformes crecen en Colilert, utilizan -galactosidasa para metabolizar
la nutriente indicador ONPG y el cambio de incoloro a amarillo.

E. coli utilizan -glucuronidasa para metabolizar el MUG y crear fluorescencia.

6.1.2. Fundamento - Quanti-Tray

El sistema utiliza el mismo modelo de distribucin estadstica de Poisson en que se

basa la fermentacin en tubos mltiples, pero utiliza muchas ms submuestras (es
decir, tubos) y realiza el trabajo automticamente. El sellador Quanti-Tray distribuye
automticamente la mezcla de muestra y reactivo en pocillos discretos. Este proceso
elimina el pipeteado manual de los mtodos tradicionales.

El diseo con dos tamaos de pocillos Quanti-Tray/2000 aprovecha el mismo

modelo de probabilidad usado por el procedimiento de dilucin en serie de nmeros
ms probables. Los pocillos de mayor tamao funcionan como submuestras no
diluidas; los pocillos pequeos como submuestras diluidas. Sin embargo, no se
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requiere un diluyente. Los 97 pocillos de Quanti-Tray/2000 dan lugar a mrgenes

muy amplios de conteos (1 a 2.419) y a lmites de confianza del 95% muy precisos.

6.2. Materiales
6.2.1. Equipos

Cabina de Flujo Laminar

Equipo Sellador Quanty Sealer-Sellador Modelo 2x
Incubadora a 35C+/- 2 C
Lmpara de Luz Ultravioleta 365 nm

6.2.2. Reactivos

Agua estril
Reactivo Colilert
Bolsas Quanti tray 2000.

6.2.3. Otros

Frascos schott estriles 100ml y 1000ml

Asas Bacteriolgicas
Marcador
Guantes
Tapa bocas
Bata
Cofia

6.2.4. Cepas de Referencia

E. coli cepas ATCC 25922 o 11775

Klebsiella pneumoniae o variicola cepa ATCC 31488
Pseudomonas aeruginosa cepas ATCC 10145 0 27853 -

6.3. Procedimiento
6.3.1. Controles y/o curvas de calibracin
Llene tres recipientes estriles con 100 ml de agua estril, libre de
oxidantes, no tamponada, e inocule con un asa estril los siguientes
controles microbiolgicos:

Frasco 1: Control positivo: Cepa ATCC Escherichia coli

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Frasco 2: Control negativo: Cepa ATCC Pseudomonas aeruginosa

Frasco 3: Control para Coliformes Totales: Cepa ATCC Klebsiella pneumoniae o
variicola

Nota: Para los controles los frascos sern esterilizados junto con el agua.
6.3.2. Acondicionamiento y manejo de equipos

El acondicionamiento y manejo de equipos se realiza segn hoja de vida

(F-SA-18) de los mismos.

6.3.3. Condiciones ambientales

El anlisis no exige condiciones ambientales especficas.

6.3.4. Condiciones generales

Realizar procesos de limpieza y desinfeccin del laboratorio Microbiolgico de
Aguas y Alimentos.
Realizar procesos de limpieza y desinfeccin de Equipos: la cabina de flujo
laminar, Incubadora y Quanty Sealer-Sellador Modelo 2x
Esterilizacin de Frascos
Consultar las fichas de seguridad de los reactivos qumicos a emplear para la
realizacin del anlisis.
El material debe desecharse de acuerdo con las buenas prcticas de laboratorio.
Cada una de las unidades del producto que conforman la Muestra recepcionadas
debe ser verificada segn tem Criterios para Aprobacin F-SA-112
Manipulacin de tems de Ensayo.
Verificar la identificacin y numeracin de las muestras que ingresan con cada
Acta de toma de Muestra.
Realizar el registro de la muestra que ingresa en el Libro Resultados
Microbiolgicos de Aguas y Alimentos.

6.3.5. Descripcin del mtodo

6.3.5.1. Cualitativo Presencia/Ausencia para Aguas de consumo
Humano, Aguas de estanques de Piscinas y estructuras
similares.

Marcar los frascos schott estriles con el nmero de la muestra a analizar

Homogenizar la muestra de agua.
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Servir en el frasco Schott 100ml de la muestra (Cabina de flujo laminar).

Adicionar el contenido del vial de Colilert en su totalidad sobre los 100ml de agua
(muestra).
Tapar y agitar el recipiente, asegurarse de que el reactivo se disuelva
completamente.
Colocar el frasco en una Incubadora a 35oC 2oC durante 24 horas.

LECTURA:

Coliformes Totales: Color Amarillo: positivo Incoloro: Negativo

E coli: Usando la cabina de la Luz UV 365nm en un entorno oscuro, coloque el
frasco para realizar la lectura con el haz de luz hacia la muestra:
Fluorescencia: Positivo No fluorescencia: Negativo
Leer los resultados de acuerdo con el cuadro de interpretacin de resultados

Los resultados son definidos de 24-48 horas

PRODUCTO RESULTADO
Incoloro o Amarillo igual al control Negativo Negativo para Coliformes Totales y E. coli
Amarillo mayor al control Negativo Positivo para Coliformes
Amarillo y Fluorescencia Positivo para E. coli

6.3.5.2. Cuantitativo para Agua Potable Tratada Envasada

6.3.5.2.1. Preparacin de la muestra

Para el laboratorio de Microbiologa de Alimentos deben entregarse tres (3)

unidades de cada muestra, una bolsa presentacin mayor de 3L o un (1) botelln

Cuando llegan presentaciones mayores de 3L se debe envasar la muestra en frasco

estril de 1000ml. Para garantizar las buenas prcticas de manipulacin de la
muestra y facilitar las actividades envasado en la cabina.
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Marcar los frascos estriles y las Bolsas Quanti tray 2000 con los 4 ltimos nmeros del
consecutivo asignado en el momento de la recepcin de la muestra. De la siguiente
manera:

6.3.5.2.2. Descripcin del Mtodo

Deteccin de Coliformes Totales y Escherichia coli por la Tcnica de Sustrato Definido -

Colilert* NMP en muestras de Agua Potable Tratada Envasada.

Mezclar la muestra de agua por 15 a 20 segundos con movimientos rotacin.

Servir en el frasco estril de 100ml de la muestra en Cabina.
Adicionar el contenido del vial de Colilert en su totalidad del sobre los 100ml de agua
(muestra)

Tapar y agitar el recipiente, asegurarse de que el reactivo se disuelva completamente.

Mezclar por 15 a 20 segundos, dejar en reposo, mezclar nuevamente y verificar la
completa disolucin del reactivo

Transferir del contenido del frasco (agua a analizar + reactivo) a una Bolsa Quati Tray
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Tomar la bolsa Quanty tray colocarla en el porta bandeja del sellador Quanti tray y
pasarla a traves del sellador con los pozos hacia abajo con la bandeja de soporte de
abajo hacia arriba

Llevar la Bandeja de incubacin a 35C 2C por 24 horas.

6.3.5.2.3. Lectura y Clculos

Coliformes Totales :

Realizar la lectura de Coliformes Totales contando el numero de pozos grandes y

pequeos que presentan color amarillo pasar el dato a la tabla de NMP Anexo 1
interpolar los 2 numeros (pozos grandes versus pozos pequeos) y obtener el
numero coincidente a estos que indica el numero de micoorganismos en 100ml

Reportar: Coliforfes Totales = X microorganismso en 100 ml

(X = Numero hallado en la Tabla)

Positivo
Escherichia coli:

Realizar la lectura de Escherichia coli contando el numero de pozos grandes y

pequeos que presentan color Amarillo y Fluorescencia al exponer la Bandeja a la
luz UV de 365nm en la cabina para lectura de UV pasar el dato a la tabla de NMP
(Anexo 1) interpolar los 2 numeros (pozos grandes versus pozos pequeos) y
obtener el numero coincidente a estos que indica el numero de micoorganismos en
100ml
Reportar: E. coli = X microorganismso en 100 ml:
(X = Numero hallado en la Tabla)

Los resultados son definidos de 24-48 horas. Adems Para Coliformes y E.coli
observado antes de las 24 horas y Negativos observados despus de 28 horas.

Positivo
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Interpolar los dos numeros ( Pozos grandes vs Pozos pequeos ) en la tabla de

NMP y hallar el numero conicidente a estos que equivale al numero de
microoganismos en 100 ml
Reportar asi Escherichia coli = X microorganismso en 100 ml
(X = Numero hallado en la Tabla)
Si la totalidad de los Pozos Grandes y pequeos se presentan sin fluorescencia
indica la no prescencia de Escherichia coli en la muestra y se reportara

Escherichia coli = 0 microorganismso en 100 ml

Nota: El rango de medicin es desde 1 Microorganismos en 100 ml hasta > 2419

Microorganismos en 100 ml (Segn la tabla de intrepretacin NMP)

6.3.5.3. Valores de Referencia

6.3.5.3.1. AGUAS PARA CONSUMO HUMANO:

De acuerdo a la Resolucin 2115 de 2007 Artculo 11 los valores

mximos aceptables desde el punto de vista microbiolgico en aguas
para consumo humano son:

Tcnica Coliformes Totales Escherichia coli

Utilizada
Sustrato Ausencia microorganismo Ausencia microorganismo en
Definido en 100 cm3 100 cm3

Pargrafo 2. Ninguna muestra de agua para consumo humano debe

contener E. Coli en 100 cm3 de agua, independientemente del
mtodo de anlisis utilizado.

6.3.5.3.2. AGUAS DE ESTANQUES DE PISCINA: En la

actualidad no se cuenta con normatividad vigente.

6.3.5.3.3. AGUAS POTABLE TRATADA ENVASADA: De

acuerdo a la Resolucin 12186 de 1991 Artculo 4 de las
condiciones del agua potable tratada envasada:

NMP Coliformes Totales < 2/100ml

NMP Coliformes Fecales < 2/100ml

6.3.5.4. Obtencin Resultados

Con la interpretacin de clculos, los resultados segn correspondan se registran
en:
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Resultados Microbiolgicos para Aguas de Consumo Humano F-SA-106

Resultados Microbiolgicos para Aguas de Piscinas y Estructuras Similares F-
SA-107.
Resultados Microbiolgicos para Alimentos F-SA-75
Los resultados del control del mtodo se registran en Control de calidad
anlisis microbiolgico F-SA-101

6.3.6 Aseguramiento de Calidad Resultados

Para demostrar la capacidad del laboratorio de detectar Coliformes Totales y E.coli

con el mtodo sustrato definido, realizar los siguientes controles con materiales de
Referencia y analizarlos en las mismas condiciones que la muestra

Para cada cepa bacteriana (Empleada como control), tome una colonia con una asa
de siembra estril e inoculo en 100 ml de agua estril y sea procesada como una
muestra (actividad 7.5)

6.3.6.1. Control de Calidad Interno

Control Negativo de Reactivo

Incubar 100ml de agua destilada estril ms el reactivo Colilert servido en Frasco tapa
rosca auto lavables o bolsa Quanty-Tray/2000 y rotularla como control Negativo.

Incubar 100ml de agua destilada con de Cepa Klebsiella pneumoniae o variicola ATCC
31488 ms el Reactivo Colilert servido en Frasco tapa rosca auto lavables o bolsa
Quanty-Tray/2000 y rotular Control Positivo Coliformes Totales.

NOTA: Este control es tambin Valido como Control Negativo para E coli

Control Positivo Escherichia coli: Incubar 100ml de agua destilada con la Cepa E
Coli ATCC 25922 ms el Reactivo Colilert servido en Frasco tapa rosca auto lavables
o bolsa Quanty-Tray/2000 y rotulada Control Positivo E. coli
Control Negativo Coliformes: Incubar 100ml de agua destilada con la cepa
Pseudomona aeuriginosa ATCC 10145 o 27853 ms el Reactivo Colilert servido
Frasco tapa rosca auto lavables o en bolsa Quanty-Tray/2000 y rotulada Control
Negativo Coliformes.

MATERIAL DE REFERENCIA RESULTADO PARAMETRO

PREVISTO EVALUADO

Color Amarillo Positivo reactivo Colilert

E. coli ATCC 25922
Fluorescencia
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Negativo reactivo Colilert

Klebsiella Color Amarillo
pneumoniae o ATCC 31488
variicola sin Fluorescencia

No Coliformes
Pseudomona ATCC 10145 o Incoloro
aeuriginosa ATCC 27853 Sin Fluorescencia

Control Negativo del

Incoloro reactivo
No Aplica
Agua Estril
Sin Fluorescencia

Registrar en el formato Registro de Control de Calidad Anlisis Microbiolgico

Verificar que los reactivos estn vigentes

Verificar la temperatura de la Incubadora
Verificar calibracin y mantenimiento de equipos.
Verificar el control de esterilizacin del Material.

Criterio de Aceptacin o Rechazo

ACCION PARA
CRITERIO LECTURA RANGO DE ACEPTACION INCUMPLIMIENTO
DE CRITERIOS
Coliforfes Totales =
No debe presentar 0 microorganismos en 100
cambio de color ni ml Repetir Anlisis
Control Negativo
Fluorescencia en ningn Escherichia coli = Verificar.
pozo 0 microorganismso en 100
ml
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Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el Coliforfes Totales =
Coliformes totales cambio de color en los >2419 microorganismos en Repetir siembra
Cepa ATCC 31438 pozos pasando de 100 ml de cepas ATCC y
Klebsiella incoloro a amarillo y SIN Escherichia coli = repetir el Anlisis
0 microorganismos en 100
pneumoniae presentar fluorescencia ml
al exponerse a la luz UV
Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el
E coli cambio de color en los
pozos pasando de Escherichia coli = Repetir siembra
incoloro a amarillo y > 2419 microorganismos en de cepas ATCC y
Cepa ATCC
repetir el Anlisis
Escherichia coli CON presencia de 100 ml
ATCC 25922 fluorescencia al
exponerse a la luz UV
Control Negativo
Coliformes Coliforfes Totales =
No debe presentar 0 microorganismso en 100
Repetir siembra
Cepa ATCC cambio de color ni ml
de cepas ATCC y
Pseudomona Fluorescencia en ningn Escherichia coli =
repetir el Anlisis
aeruginosa pozo 0 microorganismso en 100
ATCC 10145 ml
ATCC 27853
Descartar
Reactivos y
Vigencia del reactivo Reactivo Vigente a la fecha adquirir y
Reactivos vigentes
dentro de la fecha de utilizacin procesar con
reactivos en
fechas vigentes
Ajustar control de
Temperatura y
tomar
Temperaturas de Temperatura ajusta a Temperatura
nuevamente
Incubadoras 36C +/- 2 36C +/- 2
hasta obtener
temperatura
deseada.
Solicitar y ejecutar
los
mantenimientos o
Mantenimiento de Calibracin, verificacin y Calibracin, verificacin y verificaciones
equipos mantenimiento vigente mantenimiento vigente pendientes para
realizar anlisis
con equipos
idneos
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Descartar el
Verificar la fecha de Material y realizar
Control de esterilizacin de Material, Fecha de esterilizacin de el proceso con
Esterilizacin de verificar el cumplimiento Material. Controles de material que
Material de los controles de esterilizacin. cumpla con los
esterilizacin. controles de
esterilizacin.

Los resultados de los controles se registran en el Control De Calidad Anlisis Microbiolgico

F-SA-101

8.1 Expresin de Resultados

Los resultados se expresan en: Microorganismos en 100 ml

8.2 Rango de Medicin

Desde 1 Microorganismos en 100 ml hasta 2419 Microorganismos en 100 ml

1. REGISTROS

Como Donde Tiempo de

Registro Responsable Disposicin final
conservarlo conservarlo conservacin

F-SA-75 Resultados Segn F-MC-04 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04

Microbiolgicos de Profesional Listado Maestro Listado Maestro de Listado Maestro
Alimentos Universitario o de documentos, documentos, Segn de documentos,
Profesional del Segn F-MC-03 - F-MC-03 -Listado Segn F-MC-03 -
Laboratorio Listado maestro maestro de Listado maestro
Fsico de registros y/o registros y/o tabla de registros y/o
tabla de retencin de retencin tabla de retencin
documental documental documental
F-SA-18 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
Hoja de vida de Listado Maestro Listado Maestro de Listado Maestro
Equipos Profesional del de documentos, documentos, Segn de documentos,
Laboratorio Segn F-MC-03 - F-MC-03 -Listado Segn F-MC-03 -
Digital y Fsico
Referente de Listado maestro maestro de Listado maestro
calidad de registros y/o registros y/o tabla de registros y/o
tabla de retencin de retencin tabla de retencin
documental documental documental
F-SA-101 Control Segn F-MC-04 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
de calidad anlisis Listado Maestro Listado Maestro de Listado Maestro
microbiolgico Profesional del de documentos, documentos, Segn de documentos,
Laboratorio Segn F-MC-03 - F-MC-03 -Listado Segn F-MC-03 -
Fsico Listado maestro maestro de Listado maestro
de registros y/o registros y/o tabla de registros y/o
tabla de retencin de retencin tabla de retencin
documental documental documental

2. ANEXOS

10.1 Tabla NMP

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10.2 ANEXO 2

RESPONS
N. ACTIVIDAD FLUJOGRAMA REGISTRO
ABLE
INICIO
1 INICIO

Verificar la identificacin y Verificar identificacin y

numeracin de las numeracin de las
muestras
2 ANALISTA muestras que ingresan
con cada Acta de toma de
Muestra
Realizar el registro de la Registrar en Libro
Resultados Microbiolgicos
muestra que ingresa en el de Alimentos
Registro de
Libro Resultados
3 ANALISTA Libro Resultados Microbiolgicos
Microbiolgicos de de Alimentos
Alimentos
Marcar los frascos
estriles y Bolsas Quanti
Marcar los frascos tray 2000 con el nmero
de la muestra a analizar.
estriles y Bolsas Quanti
4 ANALISTA
tray 2000 con el numero
de la muestra a analizar Mezclar la muestra de
aguas 15 a 20 segundos

Mezclar la muestra de
agua por 15 a 20 Servir en el frasco Schott
5 ANALISTA
segundos con 100 ml de la muestra
.
movimientos rotacin

Servir en el frasco Schott Adicionar el contenido Registro de

del vial de Pseudalert.+ 2 Control de uso
6 ANALISTA 100ml de la muestra en gotas de antiespumante cabina de Flujo
Cabina de flujo laminar Laminar

Adicionar el contenido del

vial de Pseudalert en su
Mezclar hasta la
totalidad sobre los 100ml completa disolucin del
7 ANALISTA de agua y Aadir 2 gotas reactivo.
de solucin
antiespumante
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RESPONS
N. ACTIVIDAD FLUJOGRAMA REGISTRO
ABLE
Mezclar por 15 a 20 segundos,
dejar en reposo, mezclar
8 ANALISTA nuevamente y verificar la
completa disolucin del
reactivo

Transferir del contenido

del frasco (agua a
9 ANALISTA Transferir el contenido
analizar + reactivo) a una del frasco schott a una
Bolsa Quanti Try
Bolsa Quati Try

Tomar la bolsa Quanty try Tomar la bolsa Quanti

colocarla en el porta bandeja del Try colocarla en el porta Registro
sellador Quanti try y pasarla a Bandejas del sellador Control de
10 ANALISTA traves del sellador con los pozos
Quanty try y pasarlo a Limpieza y
travs del sellador desinfeccin de
hacia abajo con la bandeja de
soporte de abajo hacia arriba equipos

Llevar la Bandeja de Llevar la Bandeja de

Registro
incubacin a 38C 0.5C incubacin a 38C
0.5C por 24 horas Control de
por 24 horas. Los
Temperatur
11 ANALISTA resultados son vlidos
as de
hasta. Transcurridas 28
Incubadora
horas.
s

Realizar la lectura de Registro de

Pseudomona contando Realizar la lectura de Resultados
Pseudomona Anlisis
el numero de pozos contando el numero de Microbiolgico
grandes y pequeos que pozos grandes y de Aguas de
presentan Fluorescencia pequeos que estanques de
presentan Piscina
Azul al exponer la Fluorescencia pasar el
12 ANALISTA Bandeja a la luz UV de FINde NMP
dato a la tabla
365nm en cuarto oscuro (Anexo 1) e interpolar Sistema
pasar el dato a la tabla de los nmeros para Integral de
obtener el numero de Informacin
NMP (anexo 1) interpolar microorganismos
los 2 numeros (pozos en Salud
grandes vsg pozos modulo
pequeos) y obtener el Laboratorio
numero coincidente a
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RESPONS
N. ACTIVIDAD FLUJOGRAMA REGISTRO
ABLE
estos que indica el
numero de
micoorganismos en
100ml
reportar:
Pseudomona =
X microorganismso en
100 ml

FIN
13
FIN

13. HISTORIAL

1. Historial

VERSIN VIGENCIA IDENTIFICACIN DE LOS

CAMBIOS

1 27/10/2015 Versin inicial

MATERIAL DE REFERENCIA RESULTADO PARAMETRO

PREVISTO EVALUADO

Color Amarillo
E. coli ATCC 25922 Escherichia coli
Fluorescencia

Color Amarillo
Klebsiella pneumoniae ATCC 31438 Coliformes Totales
sin Fluorescencia
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ATCC 10145
Pseudomona Incoloro
o No Coliformes
aeuriginosa Sin Fluorescencia
ATCC 27853

Incoloro Control Negativo

Agua Estril
No Aplica Sin Fluorescencia del reactivo

Criterio De Aceptacin O Rechazo

ACCION PARA
CRITERIO LECTURA RANGO DE ACEPTACION INCUMPLIMIENTO
DE CRITERIOS
Coliforfes Totales =
No debe presentar 0 microorganismos en 100
cambio de color ni ml Repetir Anlisis
Control Negativo
Fluorescencia en ningn Escherichia coli = Verificar.
pozo 0 microorganismso en 100
ml
Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el Coliforfes Totales =
Coliformes totales cambio de color en los >2419 microorganismos en Repetir siembra
Cepa ATCC 31438 pozos pasando de 100 ml de cepas ATCC y
Klebsiella incoloro a amarillo y SIN Escherichia coli = repetir el Anlisis
0 microorganismos en 100
pneumoniae presentar fluorescencia ml
al exponerse a la luz UV
Verificar el Crecimiento en
Control Positivo el control Positivo el
E coli cambio de color en los
pozos pasando de Escherichia coli = Repetir siembra
incoloro a amarillo y > 2419 microorganismos en de cepas ATCC y
Cepa ATCC
repetir el Anlisis
Escherichia coli CON presencia de 100 ml
ATCC 25922 fluorescencia al
exponerse a la luz UV
Control Negativo
Coliforfes Totales =
Coliformes
No debe presentar 0 microorganismso en 100
Repetir siembra
cambio de color ni ml
Cepa ATCC de cepas ATCC y
Fluorescencia en ningn Escherichia coli =
Pseudomona repetir el Anlisis
pozo 0 microorganismso en 100
aeruginosa
ml
ATCC 10145
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ATCC 27853
Descartar
Reactivos y
Vigencia del reactivo Reactivo Vigente a la fecha adquirir y
Reactivos vigentes
dentro de la fecha de utilizacin procesar con
reactivos en
fechas vigentes
Ajustar control de
Temperatura y
tomar
Temperaturas de Temperatura ajusta a Temperatura
nuevamente
Incubadoras 36C +/- 2 36C +/- 2
hasta obtener
temperatura
deseada.
Solicitar y ejecutar
los
mantenimientos o
Mantenimiento de Calibracin, verificacin y Calibracin, verificacin y verificaciones
equipos mantenimiento vigente mantenimiento vigente pendientes para
realizar anlisis
con equipos
idneos
Descartar el
Verificar la fecha de Material y realizar
Control de esterilizacin de Material, Fecha de esterilizacin de el proceso con
Esterilizacin de verificar el cumplimiento Material. Controles de material que
Material de los controles de esterilizacin. cumpla con los
esterilizacin. controles de
esterilizacin.

Los resultados de los controles se registran en el Control De Calidad Anlisis

Microbiolgico F-SA-101

1.1.1.1. Control de calidad externo

El laboratorio participa en programas de evaluacin externa como PICCAP

(programa interlaboratorio de control de calidad de agua potable) para agua
potable.

Los resultados de los controles se registran en el anlisis de resultados de control de

calidad externo F-SA-109
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2. Registros

Como Donde Tiempo de Disposicin

Registro Responsable
conservarlo conservarlo conservacin final
F-SA-106 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
Listado Maestro Segn F-MC-04 Listado Maestro
Resultados
Profesional de documentos, Listado Maestro de documentos,
microbiolgicos Segn F-MC-03 de documentos, Segn F-MC-03
Universitario o
para aguas para Profesional del -Listado Segn F-MC-03 - -Listado
Fsico
consumo humano Laboratorio maestro de Listado maestro maestro de
registros y/o de registros y/o registros y/o
tabla de tabla de retencin tabla de
retencin documental retencin
documental documental
F-SA-107 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
Profesional Listado Maestro Segn F-MC-04 Listado Maestro
Resultados
Universitario o de documentos, Listado Maestro de documentos,
microbiolgicos de Profesional del Fsico Segn F-MC-03 de documentos, Segn F-MC-03
aguas de estanques Laboratorio -Listado Segn F-MC-03 - -Listado
de piscinas y maestro de Listado maestro maestro de
registros y/o de registros y/o registros y/o
estructuras
tabla de tabla de retencin tabla de
similares retencin documental retencin
documental documental
F-SA-75 Resultados Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
Microbiolgicos de Profesional Listado Maestro Segn F-MC-04 Listado Maestro
Universitario o de documentos, Listado Maestro de documentos,
Alimentos Profesional del Segn F-MC-03 de documentos, Segn F-MC-03
Laboratorio -Listado Segn F-MC-03 - -Listado
Fsico maestro de Listado maestro maestro de
registros y/o de registros y/o registros y/o
tabla de tabla de retencin tabla de
retencin documental retencin
documental documental
F-SA-18 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
Listado Maestro Segn F-MC-04 Listado Maestro
Hoja de vida de
de documentos, Listado Maestro de documentos,
Equipos Profesional del Segn F-MC-03 de documentos, Segn F-MC-03
Laboratorio -Listado Segn F-MC-03 - -Listado
Digital y Fsico
Referente de maestro de Listado maestro maestro de
calidad registros y/o de registros y/o registros y/o
tabla de tabla de retencin tabla de
retencin documental retencin
documental documental
F-SA-101 Control Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
de calidad anlisis Listado Maestro Segn F-MC-04 Listado Maestro
Profesional del de documentos, Listado Maestro de documentos,
microbiolgico Laboratorio Segn F-MC-03 de documentos, Segn F-MC-03
-Listado Segn F-MC-03 - -Listado
Fsico maestro de Listado maestro maestro de
registros y/o de registros y/o registros y/o
tabla de tabla de retencin tabla de
retencin documental retencin
documental documental
Segn F-MC-04 Segn F-MC-04 Segn F-MC-04
F-SA-109 Listado Maestro Listado Maestro Listado Maestro
Anlisis de Profesional del de documentos, de documentos, de documentos,
Laboratorio Segn F-MC-03 Segn F-MC-03 - Segn F-MC-03
resultados de Fsico -Listado Listado maestro -Listado
control de calidad maestro de de registros y/o maestro de
externo registros y/o tabla de retencin registros y/o
tabla de documental tabla de
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Como Donde Tiempo de Disposicin

Registro Responsable
conservarlo conservarlo conservacin final
retencin retencin
documental documental

3. ANEXOS

ANEXO 1
TABLA NMP
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4. Historial

VERSIN VIGENCIA IDENTIFICACIN DE LOS

CAMBIOS

1 27/10/2015 Versin inicial