ORIGEN DE LA NEFELOMETRA

Nefelometra deriva del griego Nephele, significa nube o neblina. Se define como
la deteccin de la energa lumnica dispersa o reflejada hacia un detector que no
se encuentra en el camino directo del haz luminoso. Las mediciones se realizan en
un determinado ngulo en relacin con dicho haz. La intensidad de luz dispersa en
un determinado ngulo est en funcin de la longitud de onda del rayo incidente,
del tamao y forma de las partculas, y de la diferencia entre los ndices de
refraccin de las partculas y del medio. A mayor tamao de las partculas, ms
cantidad de luz incidente sufrir dispersin a partir de su direccin inicial. Existe
una dependencia angular de la intensidad de luz dispersa, y la distribucin angular
resultante que sufre dicha luz, indica el tamao y la forma de las partculas
dispersas. La formacin de inmunocomplejos se ha relacionado con la cuanta de
dicha dispersin y se ha empleado como fundamento para cuantificar antgenos.
Entre 1967-1969 aparecieron los primeros nefelmetros por R. F. Ritchie
disponibles en el laboratorio clnico y en 1974 se desarroll el primer nefelmetro
con un sistema ptico de rayo lser. En los ltimos 15 aos el laboratorio clnico
ha remplazado el mtodo de inmunodifusin radial por los mtodos
nefelomtricos.
Un sistema nefelomtrico ideal es el que produce un campo totalmente oscuro en
el detector cuando no existen partculas difusoras. Las mediciones nefelomtricas
son ms adecuadas para medir muestras cuya concentracin de partculas es
baja, lo que da lugar a una dbil dispersin de la luz. Los mtodos nefelomtricos
permiten detectar partculas extremadamente pequeas en solucin y detectar los
estadios muy precoces de la agregacin molecular. La nefelometra tiene
aplicacin para la determinacin de fracciones del complemento,
inmunoglobulinas, transferrina, haptoglobina, cadenas kappa y lambda, albmina,
pre-albmina, protena C reactiva, factor reumatoide, alfa 2 macro globulina y otras
protenas.

Figura1. Sistema nefelomtrico.

El procedimiento generalmente es emprico y slo se consideran 3 factores:
La concentracin: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es la dispersin.
Tamao de la partcula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla,
concentracin de los reactivos, duracin del estado de reposo y la fuerza inica.
Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero
si estn coloreadas, se debe escoger una porcin del espectro electromagntico
en la que la absorcin del medio se reduzca al mnimo.

Figura2. Esquema nefelmetro.

Nefelometra cuantitativa
Es un examen para medir en forma rpida y precisa el nivel especfico de ciertas
protenas, llamadas inmunoglobulinas, en la sangre. Las inmunoglobulinas son
anticuerpos que ayudan al cuerpo a combatir una infeccin.
Especficamente, este examen busca las inmunoglobulinas IgM, IgG e IgA.

Forma en que se realiza el examen

Se necesita una muestra de sangre.
Razones por las que se realiza el examen
El examen proporciona una medicin rpida y precisa de las cantidades de
inmunoglobulinas IgM, IgG e IgA.
Resultados normales
IgG: 560 a 1800 mg/dL
IgM: 45 a 250 mg/dL
IgA: 100 a 400 mg/dL
Significado de los resultados anormales
El aumento de los niveles de IgG puede deberse a:
Infeccin o inflamacin crnicas
Hiperinmunizacin
Mieloma mltiple por IgG
Enfermedad heptica
Artritis reumatoide
La disminucin de los niveles de IgG puede deberse a:
Agamaglobulinemia (muy rara)
Leucemia
Mieloma
Preeclampsia
Tratamiento con ciertos frmacos quimioteraputicos
El aumento de los niveles de IgM puede deberse a:
Mononucleosis infecciosa
Linfoma
Macroglobulinemia
Mieloma
Artritis reumatoide
La disminucin de los niveles de IgM puede deberse a:
Agamaglobulinemia (muy rara)
Leucemia
Mieloma
El aumento de los niveles de IgA puede deberse a:
Infecciones crnicas, que comprometen especialmente el tracto
gastrointestinal
Enfermedad intestinal inflamatoria
Mieloma
La disminucin de los niveles de IgA puede deberse a:
Agamaglobulinemia (muy rara)
Deficiencia hereditaria de IgA
Mieloma
Gastroenteropata por prdida de protenas

Consideraciones
La nefelometra determina la cantidad total de cada inmunoglobulina, pero no
puede distinguir anticuerpos especficos. Otros exmenes, como la
inmunoelectroforesis o la inmunofijacin, se pueden utilizar para hacer estas
diferenciaciones.

IgG, IgA e IgM:

Son unas protenas denominadas gammaglobulinas, formadas por dos cadenas
pesadas y dos ligeras. Tambin se las conoce por inmunoglobulinas de las cuales
la mayora es IgG, por tanto forma la mayor parte de los anticuerpos circulantes.
La IgA se encuentra sobre todo en secreciones gastrointestinales, saliva y
lagrimas. La IGM en menor medida se encarga fundamentalmente del sistema
ABO y factor reumatoide, es la primera en aparecer en un proceso infeccioso. Hay
otra, la IgD que rara vez se evala. Se utilizan para la deteccin de deficiencias
inmunes, infecciones virales crnicas, mielomas mltiples, enf. Autoinmunes, etc.
Figura3. Estructura de gammaglobulinas.
C3 y C4: Tambin llamado complemento. Favorecen la permeabilidad vascular,
quimio taxis, fagocitosis y la adherencia Ag-Ac. Son importantes para la deteccin
de enf. autoinmunes.
La activacin del complemento por la va clsica se inicia con la activacin del
complejo C1qrs por complejos antgeno-anticuerpo. Este complejo ataca
enzimticamente a C4, que al adquirir a su vez actividad proteoltica, produce la
hidrolisis de C2, que al ser activado, es capaz de degradar enzimticamente a C3.
La hidrolisis secuencial contina hasta C8 que, al activarse, provoca la
polimerizacin de C9 y conduce a la lisis osmtica de la clula "blanco". El sistema
puede asimismo activarse por microrganismos o toxinas sin la intervencin de
anticuerpos a travs de la llamada va alterna. A partir de C3, ambas vas de
activacin utilizan una secuencia comn de producir cit lisis.
AAT 1-antitripsina: Protena enzimtica relacionada por tendencia hereditaria
con el enfisema. Tambin la podemos encontrar disminuida en lesiones hepticas
y sndrome nefrtico.
COE ceruloplasmina: Protena que se une al cobre y facilita su transporte por
la corriente sangunea. Es muy importante su deteccin precoz en la enfermedad
de Wilson, ya que puede ser mortal.
PCR protena C reactiva: Es un reactante de fase aguda no especfico que se
utiliza para diagnosticar enfermedades infecciosas y alteraciones inflamatorias
tales como la artritis reumatoide y fiebre reumtica aguda. La PCR interacciona
con el complemento. Tambin se puede usar para la deteccin de infecciones en
postoperatorios, despus de infarto de miocardio, etc.
B2MG 2-microglobulina: Se utiliza tanto como marcador tumoral, como de
seguimiento en VIH. Tambin en infecciones vricas, procesos inflamatorios, etc.
ApoA: Sus valores son vlidos para estudio de cardiopatas y riesgo aterognico.
ApoB: Los niveles sricos elevados de esta protena estn asociados con
hiperlipidemia, angina de pecho y ataque cardiaco.
Transferrina: Es una protena que se une al hierro para transportarlo por el
torrente sanguneo.

TURBIDIMETRIA
La turbiedad de una muestra se puede medir por el efecto sobre la transmisin de
la luz, que se denomina turbidimetra.
Estas propiedades se utilizan en los procedimientos de los 'Mtodos estndar"
para la medicin de la turbiedad. Mientras que estos procedimientos se valen del
ojo humano para detectar la luz emitida, los mtodos que emplean fotmetros
elctricos comunes tambin se pueden usar, con la ventaja de que se pueden
hacer y registrar mediciones continuas de turbiedad, sin que exista el factor de
error humano al hacer las observaciones.
Caractersticas:
En la turbidimetra se mide la cantidad de luz que pasa a travs de una solucin. A
mayor turbiedad es menor la cantidad de luz transrnitida.
Aunque los anlisis turbidimtricos se pueden llevar a cabo a cualquier longitud de
onda de la luz, los procedimientos de los 'Mtodos estndar' para la determinacin
de sulfatos por anlisis turbidirntrico recomiendan una longitud de onda de 420
nm. Esto produce un anlisis ms sensible, debido a que la luz azul de esta
longitud de onda se dispersa ms que la luz roja, que tiene longitudes de onda
mayores.

EQUIPOS UTILIZADOS
Nefelmetro:
Para la nefelometra es necesario emplear un equipo con caractersticas
especficas, que recibe el nombre de nefelmetro. Sus componentes bsicos son:
1. Fuente de luz: los modelos ms antiguos empleaban la lmpara de wolframio.
En la actualidad se usan lmparas de arco de mercurio (Hg), diodos emisores o
lser de helio-nen, de baja potencia.
2. Sistema colimador (innecesario con la lmpara de lser), cuya funcin es la de
concentrar el rayo de luz en haces paralelos.
3. Selector de longitud de onda.
4. Cubeta de medicin.
5. Detector (fotomultiplicador).
6. Galvanmetro.
Los primeros equipos de este tipo efectuaban la medicin de la luz en un ngulo
de 90, pero hoy se prefiere trabajar con la deteccin en ngulo ms pequeo, lo
cual confiere una mayor sensibilidad.
Figura 4. Nefelmetro.
Turbidmetro:
El turbidmetro porttil TB1 permite la medicin, en forma simple y precisa, de la
turbidez de muestras acuosas, indicando la misma directamente en unidades
nefelomtricas (NTU). Utiliza un LED infrarrojo como fuente lumnica.
Su excelente calidad, simplicidad de uso y su impermeabilidad total, hacen del
mismo un instrumento nico y de absoluto inters para los usuarios del sector de
anlisis de aguas. La medicin de turbidez es realizada segn el mtodo analtico
internacional ISO 7027, cuyas especificaciones permiten una elevada
reproducibilidad de los valores medidos.
Mediante el uso de pocas teclas es posible realizar una calibracin rpida y
simple: en pocos segundos el instrumento indica automticamente los
requerimientos del estndar y la muestra a analizar.