Anda di halaman 1dari 12

Lampiran 1

Jadwal Kegiatan

102

Lampiran 1 Jadwal Kegiatan 102

103

Lampiran 2 Konversi Perhitungan Dosis untuk Beberapa Jenis Hewan dan Manusia

 

Mencit

Tikus

Marmot

Kelinci

Kucing

Kera

Anjing

Manusia

20 g

200 g

400 g

1,5 kg

2 kg

4 kg

12 kg

70 kg

Mencit

1,0

7,0

2,25

27,8

29,7

64,1

124,2

387,9

20 g

Tikus

0,14

1,0

1,74

3,9

4,2

9,2

17,8

56,0

200

g

Marmot

0,08

0,57

1,0

2,25

2,4

5,2

10,2

31,5

400

g

Kelinci

0,04

0,25

0,44

1,0

1,08

2,4

4,5

14,2

1,5 kg

Kucing

0,03

0,23

0,41

0,92

1,0

2,2

4,1

13,0

2 kg

Kera 4

0,016

0,11

0,19

0,42

0,45

1,0

1,9

6,1

kg

Anjing

0,008

0,06

0,10

0,22

0,24

0,52

1,0

3,1

12

kg

Manusia

0,0026

0,018

0,031

0,07

0,076

0,16

0,32

1,0

70

kg

Sumber: Kusumawati (2016)

Lampiran 3

 

104

 

Rincian Biaya Penelitian

 

No.

Rincian Kegiatan

 

Jumlah

 

Total

1.

Pembelian mencit

36

ekor

Rp

360.000

2.

Sewa tempat laboratorium

 

Rp

1.000.000

3.

Biaya Perawatan

36

hari

Rp

3.000.000

4.

Pembelian siklosporin A

30

ekor

Rp

5.480.000

5.

Kit TNF-α

 

Rp

6.800.000

6.

Antibodi MMP-9

Rp

2.500.000

7.

Pemeriksaan

25

ekor x Rp 150.000

Rp

3.750.000

immunohistokimia

   

8.

Pemeriksaan histopatologi

25

ekor x Rp 80.000

Rp

2.000.000

9.

Pembelian buah naga merah

40

kg x Rp 20.000

Rp

800.000

10.

Determinasi tanaman

 

Rp

35.000

11.

Ekstraksi kulit buah merah

Rp

900.000

12.

Penggandaan dan penjilidan tesis

Rp

450.000

 

TOTAL

Rp

27.075.000

105

Lampiran 4 Pembuatan Sediaan Ekstrak Etanol Kulit Buah Naga Merah (Hylecereus polyrhizus)

Ekstrak etanol kulit buah naga merah tidak larut dalam air, sehingga harus

disuspensikan dengan larutan Na-CMC 0,5%. Pembuatan sediaan ekstrak etanol

kulit buah naga merah dilakukan dengan perhitungan sebagai berikut:

Dosis 1

1. = 0,25 mg/gram BB

 

=

6,25 mg/25 gram BB

Ditentukan

: 0,2 ml/25 gram BB

Sediaan yang dibuat :

= 6,25 mg dalam 0,2 ml larutan Na-CMC 0,5%

= 625 mg dalam 20 ml Na-CMC 0,5%

Dosis 2

2. = 0,5 mg/gram BB

 

=

12,5 mg/25 gram BB

Ditentukan

: 0,2 ml/25 gram BB

Sediaan yang dibuat :

= 12,5 mg dalam 0,2 ml larutan Na-CMC 0,5%

= 1.250 mg dalam 20 ml Na-CMC 0,5%

Dosis 3

3. = 1 mg/gram BB

 

=

25 mg/25 gram BB

Ditentukan

: 0,2 ml/25 gram BB

Sediaan yang dibuat :

= 25 mg dalam 0,2 ml larutan Na-CMC 0,5%

106

Lampiran 5 Teknik ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) TNF-α

1. Isi Kit

a. Antimouse TNF-α pre-coated 96 well strip microplate

b. Antibodi Mouse TNF-α

c. Standard Mouse TNF-α

d. Matrix A

e. Avidin-HRP B

f. Assay Buffer A

g. Wash Buffer (20x)

h. Substrate Solution D

i. Stop Solution

j. Plate Sealers

2. Protokol

a. Pembuatan Standar:

Mengencerkan standar dan sampel dengan cara: siapkan standar 500 µl

dari 1.000 pg/ml dengan cara pengenceran 25 µl larutan stok standar dalam 475

µl Tes Buffer A. Dengan perbandingan 2:1 pengenceran serial standar 1.000

pg/ml dalam tabung terpisah menggunakan Tes Buffer A sebagai pengencer.

Dengan demikian, masing-masing konsentrasi standar mouse TNF-α dalam

tabung adalah: 1.000 pg/ml, 500 pg/ml. 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62,5 pg/ml, 31,3

pg/ml, dan 15,6 pg/ml. Tes Buffer A berfungsi sebagai standar nol (0 pg/ml).

b. Cuci 4 kali, 1 kali dengan 300 µl Wash Buffer untuk tiap well, kemudian

keringkan dengan tisu.

107

1)

Tambahkan 50 µl Matrix A ke masing-masing well yang akan berisi cairan

standar. Tambahkan 50 µl Assay Buffer A ke masing-masing well yang akan

berisi sampel.

2)

Tambahkan 50 µl larutan standar untuk well yang mengandung Matrix A.

Tambahkan 50 µl cairan sampel ke well yang mengandung Assay Buffer A.

d. Tutup plate dan inkubasi pada suhu kamar selama 2 jam sambil shaking 200 rpm.

e. Buang cairan ke wastafel, lalu cuci 4 kali, dengan 1 kali Wash Buffer, keringkan

dengan tisu.

f. Tambahkan 100 µl cairan antibodi mouse TNF-α pada tiap well, tutup plate dan

inkubasi pada suhu kamar selama 1 jam dengan shaking.

g. Buang cairan ke wastafel, lalu cuci 4 kali dengan 1 kali Wash Buffer, keringkan

dengan tisu.

h. Tambahkan 100 µl cairan Avidin-HRP B pada tiap well, tutup plate dan inkubasi

pada suhu kamar selama 30 menit dengan shaking.

i. Buang cairan ke wastafel, lalu cuci 5 kali dengan 1 kali Wash Buffer. Setelah

pencucian terakhir, balikkan plate untuk mengeringkan sisa cairan dengan

menggunakan tisu.

j. Tambahkan 100 µl cairan Substrat D untuk masing-masing well dan inkubasi

pada suhu ruang untuk pengembangan warna yang tepat (selama 15 menit). Well

yang mengandung Mouse TNF-α akan berubah warna dengan intensitas warna

sebanding dengan konsentrasi. Selama langkah ini, tidak perlu untuk menutup

plate.

k. Untuk menghentikan reaksi warna, tambahkan 100 µl Stop Solution untuk setiap

well. Warna solusio akan berubah dari biru menjadi kuning.

108

l. Dengan menggunakan microtiter plate reader, well dibaca dengan panjang

gelombang 450 nm.

m.

Kadar

TNF-α

selanjutnya

dihitung

menggunakan

kurva

standar,

yang

menunjukkan antara nilai OD dengan kadar TNF-α. Nilai OD diperoleh dari

masing-masing sampel, ditempatkan pada sumbu Y dari kurva standar dan

selanjutnya ditarik garis lurus dari sumbu Y ke garis regresi, dari titik potong

pada garis regresi tersebut, selanjutnya diproyeksikan ke sumbu X untuk

mendapatkan kadar TNF-α dalam pg/ml.

109

Lampiran 6

Hasil Analisis Statistik Kadar Tumor Necrosis Factor-α

 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K1

5

.775

17.661

18.436

1.80633E1

.137353

.307130

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K2

5

.694

19.209

19.903

1.96308E1

.114463

.255946

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K3

5

2.971

17.960

20.931

2.00460E1

.551067

1.232223

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K4

5

4.734

18.854

23.588

2.04849E1

.824591

1.843841

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K5

5

1.794

18.333

20.127

1.95461E1

.334967

.749009

Valid N (listwise)

5

           

110

 

Tests of Normality

 
   

Kolmogorov-Smirnov a

   

Shapiro-Wilk

 
 

KELOM

       

POK

Statistic

 

Df

Sig.

 

Statistic

df

Sig.

TNFalfa

K1

.231

 

5

.200 *

.944

 

5

.692

K2

.321

 

5

 

.102

.875

 

5

.286

K3

.266

 

5

 

.200 *

.800

 

5

.082

K4

.287

 

5

 

.200 *

.854

 

5

.208

K5

.283

 

5

 

.200 *

.836

 

5

.154

a. Lilliefors Significance Correction

         

*. This is a lower bound of the true significance.

 
   

Test of Homogeneity of Variances

   

TNFalfa

     

Levene Statistic

 

df1

df2

Sig.

 

2.408

 

4

 

20

 

.083

 
 

ANOVA

   

TNFalfa

         
 

Sum of Squares

 

df

Mean Square

 

F

 

Sig.

Between Groups

   

16.684

 

4

 

4.171

 

3.698

 

.021

Within Groups

   

22.556

 

20

 

1.128

   

Total

   

39.240

 

24

     

111

 

Multiple Comparisons

 

TNFalfa

           

Bonferroni

 

(I)

(J)

     

95% Confidence Interval

KELOM

KELOM

Mean Difference

   

POK

POK

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

K1

K2

-1.567518

 

.671653

.302

-3.68551

.55047

K3

-1.982708

 

.671653

.079

-4.10070

.13528

K4

-2.421626 *

 

.671653

.018

-4.53962

-.30363

K5

-1.482865

 

.671653

.391

-3.60086

.63513

K2

K1

1.567518

 

.671653

.302

-.55047

3.68551

K3

-.415191

 

.671653

1.000

-2.53318

1.70280

K4

-.854108

 

.671653

1.000

-2.97210

1.26388

K5

.084653

 

.671653

1.000

-2.03334

2.20264

K3

K1

1.982708

 

.671653

.079

-.13528

4.10070

K2

.415191

 

.671653

1.000

-1.70280

2.53318

K4

-.438917

 

.671653

1.000

-2.55691

1.67907

K5

.499844

 

.671653

1.000

-1.61815

2.61784

K4

K1

2.421626

*

.671653

.018

.30363

4.53962

K2

.854108

 

.671653

1.000

-1.26388

2.97210

K3

.438917

 

.671653

1.000

-1.67907

2.55691

K5

.938761

 

.671653

1.000

-1.17923

3.05675

K5

K1

1.482865

 

.671653

.391

-.63513

3.60086

K2

-.084653

 

.671653

1.000

-2.20264

2.03334

K3

-.499844

 

.671653

1.000

-2.61784

1.61815

K4

-.938761

 

.671653

1.000

-3.05675

1.17923

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

   
     

Jumlah Makrofag

112

 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K1

5

1.000

.000

1.000

.20000

.200000

.447214

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K2

5

.000

4.000

4.000

4.00000

.000000

.000000

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K3

5

1.000

3.000

4.000

3.20000

.200000

.447214

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K4

5

.000

3.000

3.000

3.00000

.000000

.000000

Valid N (listwise)

5

           
 

Descriptive Statistics

 
 

N

Range

Minimum

Maximum

Mean

Std. Deviation

 

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Statistic

Std. Error

Statistic

K5

5

3.000

.000

3.000

1.80000

.489898

1.095445

Valid N (listwise)

5

           

113

 

Tests of Normality b,c

 
   

Kolmogorov-Smirnov a

 

Shapiro-Wilk

 

KELOM

   

POK

Statistic

df

Sig.

Statistic

df

Sig.

MAKROFAG

K1

.473

5

.001

.552

5

.000

K3

.473

5

.001

.552

5

.000

K5

.372

5

.022

.828

5

.135

a. Lilliefors Significance Correction

         

b. MAKROFAG is constant when KELOMPOK = K2. It has been omitted.

 

c. MAKROFAG is constant when KELOMPOK = K4. It has been omitted.

 
     
   

Test of Homogeneity of Variances

MAKROFAG

     

Levene Statistic

 

df1

df2

Sig.

 

3.172

 

4

20

 

.036

Kruskall-Wallis

 
 

Ranks

   
 

KELOMPOK

N

Mean Rank

MAKROFAG

K1

5

3.60

K2

5

22.50

K3

5

16.10

K4

5

14.50

K5

5

8.30

Total

25

Test Statistics a,b

MAKROFAG

Chi-Square

21.471

df

4

Asymp. Sig.

.000

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable:

KELOMPOK