Restauración de Suelos Contaminados

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Restauracin de suelos contaminados con

hidrocarburos: Conceptos Bsicos
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Restauracin de suelos contaminados por hidrocarburos
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RESTAURACIN DE SUELOS CONTAMINADOS CON

HIDROCARBUROS: CONCEPOTOS BSICOS
1. INTRODUCCIN
El dao que el hombre ha provocado en el ambiente al satisfacer sus necesidades de vida ha

originado problemas de contaminacin y, como consecuencia, se enfrenta a graves problemas
de salud. Lo peligroso que resulta vivir en lugares perturbados por el hombre ha originado que
se tomen las medidas necesarias para tratar de solucionar algunos problemas generados al
ambiente, mediante la utilizacin de diversas tecnologas de limpieza como la remediacin de
sitios.
La aplicacin de tecnologas de remediacin tiene la finalidad de limpiar suelos,

acuferos y cuerpos de aguas contaminados con hidrocarburos. De ellas, la biorremediacin es
una de las ms utilizadas, ya que en su mayora los hidrocarburos son biodegradables (Saval,
1997).
En suelos contaminados con hidrocarburos, la biorremediacin puede llevarse a cabo

con los microorganismos que habitan el suelo y con el establecimiento de plantas; esto ltimo
es mejor conocido como fitorremediacin. En la fitorremediacin se utilizan plantas para
recuperar suelos contaminados por compuestos orgnicos como el petrleo, porque stas
remueven y destruyen a los contaminantes (Anderson y Walton, 1995).
Lo anterior se debe a que en las races de las plantas (zona rizosfrica) existe una
proliferacin de microorganismos del suelo para llevar a cabo la degradacin de compuestos
orgnicos. As, se ha demostrado la capacidad que tienen las plantas y su rizosfera en la
remocin de contaminantes como insecticidas y herbicidas presentes en el suelo (Walton y
Anderson, 1990).
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En el estado mexicano de Tabasco, por efecto de las actividades de la industria

petrolera y principalmente a causa de la extraccin y transporte del petrleo, han sido
contaminadas varias hectreas de suelos dedicadas a la agricultura. Cultivos como la caa de
azcar, ctricos, cacao, pltano, coco, pastos y maz, entre otros, han dejado explotarse por las
condiciones de estrs que se presentan (Trujillo et al., 1995a). Problemas similares de
contaminacin de los suelos por hidrocarburos se presentan en los estados de Veracruz,
Campeche y Tamaulipas.
Dada la problemtica que existe en estos suelos, el objetivo principal de los

investigadores que aplican la fitorremediacin es tratar de recuperar el suelo contaminado y
llevarlo a su condicin natural para volver a ser cultivado, de preferencia por plantas que
originalmente se desarrollaban ah o por especies que pudieran adaptarse a tales condiciones.
Para que esta meta se cumpla, los investigadores deben estudiar el efecto que las plantas tienen
sobre el suelo contaminado. Al respecto, Anderson et al. (1993) demostraron que plantas
como el trigo, caa de azcar, trbol, arroz, maz, chcharo, pastos, algodn, alfalfa, tabaco,
lino y soya pueden ser utilizadas en la fitorremediacin de suelos contaminados por
compuestos orgnicos como el petrleo y sus derivados.
Una vez conocida la influencia que tienen las plantas en la recuperacin de suelos
contaminados, el objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de la rizosfera en la
fitorremediacin de suelos contaminados por petrleo.
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2. Antecedentes y origen del petrleo
2.1. Antecedentes del petrleo
Slo gracias a la inteligencia humana y al uso de la ms alta tecnologa, es posible convertir el

llamado oro negro en combustibles y otros productos que son base del desarrollo de los pases
que lo producen. El petrleo es mencionado con el nombre de asfalto en uno de los libros ms
antiguos del mundo, la Biblia, en los captulos del Gnesis. Hasta la mitad del siglo XVIII los
usos que el hombre le daba al petrleo eran muy pocos. El petrleo empez a utilizarse
comercialmente a mediados del siglo XIX hasta el fin de la primera Guerra Mundial, como
lubricante y materia prima para alumbrado. En ese entonces los principales centros de
produccin se encontraban en Rusia y Estados Unidos de Amrica, aunque ya comenzaba a
desarrollarse la produccin del Medio Oriente (Chow, 1987; Pmex, 1988).
El primer pozo petrolero fue perforado por Edwin L. Drake en 1859, en los Estados
Unidos de Amrica; l mismo inici el mercado del petrleo cuando logr separar keroseno de
la mezcla compleja del crudo, sustituyendo as al aceite de ballena, el cual se utilizaba como
combustible en las lmparas. No fue sino hasta 1895, con la aparicin del automvil, cuando
el petrleo pudo cobrar una gran importancia, ya que de l se extrajo la gasolina utilizada
como combustible automotriz. Este hecho cobr tanta importancia que, antes de 1914, se
necesitaba producir gasolina para poco ms de un milln de automviles. As, 50 aos ms
tarde se necesit abastecer ms de 170 millones de automviles de todo el mundo (Chow,
1987). Actualmente, resulta difcil estimar cuntos millones de vehculos de todo el mundo
son abastecidos con gasolina.
La expansin del automvil favoreci entonces el surgimiento de la produccin, con lo

que empez su carrera para convertirse en la principal fuente de energa primaria. Despus de
la segunda Guerra Mundial complet sus aplicaciones con las de materia prima de la industria
petroqumica. De esta manera, el petrleo se vincul estrechamente con los sectores
productivos de la economa mundial, constituyendo una de las bases ms importantes para la
recuperacin industrial durante la posguerra (Pmex, 1988).
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A partir de 1970, por otro lado, la accin mancomunada de los principales productores
rabes produjo un fuerte aumento de precios que se combin con una serie de
nacionalizaciones de los yacimientos petroleros, lo cual supuso un aumento significativo de
las rentas econmicas de los productores. En este sentido, el petrleo no slo constituy el
motor de crecimiento de los pases capitalistas, sino que tambin se erigi como una de las
principales fuentes de ingresos de los pases productores, la mayora de ellos en vas de
desarrollo (Pmex, 1988).
2. 2. Origen del petrleo
Existen diversas hiptesis que tratan de explicar cmo se form el petrleo. Una de ellas
establece que surgi en el centro de nuestro planeta, debido a las grandes temperaturas y
reacciones qumicas de las rocas. Otra hiptesis ms reciente sostiene que naci en una poca
primitiva de la Tierra, cuando constantemente caan meteoritos, mismos que con el tiempo
formaron depsitos de petrleo y gas natural (Pmex, 1988). Sin embargo, la teora ms
aceptada es la orgnica, la cual supone que se origin por descomposicin de los restos de
animales y algas microscpicas acumulados en el fondo de las lagunas y en el curso inferior de
los ros. La materia orgnica se cubri paulatinamente con capas cada vez ms gruesas de
sedimentos, al abrigo de las cuales, en determinadas condiciones de presin, temperatura y
tiempo, se trasform lentamente en hidrocarburos (Tissot y Welte, 1982).
A medida que se perfeccionaron las tcnicas de anlisis geolgico y se acumul

informacin al respecto, se ha dado paso a teoras de formacin orgnica que determinan que
el petrleo es producto de la descomposicin de organismos vegetales y animales existentes en
ciertos perodos de tiempo geolgico, sometidos a enormes presiones y elevadas temperaturas
(Botello, 1996).
3. Componentes del petrleo
La voz petrleo proviene del latn petroleum (petra, piedra; oleum, aceite), y significa Aceite
de piedra. Es un compuesto de hidrocarburos, bsicamente una combinacin de carbono e
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hidrgeno (Pmex, 1988). Corresponde a un grupo de sustancias bituminosas muy abundantes

en la naturaleza, que se encuentran en formas variadas y reciben diversas denominaciones
como: en bruto, aceite de piedra, nafta, asfalto; o bien se halla mezclado con materias
minerales, como ocurre en las bituminosas.
En general existen dos tipos de crudo: ligero y pesado, considerando que a mayor
gravedad y menor densidad es ms ligero el crudo y, por el contrario, a menor densidad es ms
pesado. De esta manera la gama de tipos de crudo se ampla de forma significativa,
utilizndose categoras que giran en torno a los dos tipos genricos: extraligero, ligero dulce,
ligero amargo y extrapesado, entre otros (American Petroleum Institute, 1992).
4. Tipos de hidrocarburos
4.1. Clasificacin de los hidrocarburos
Hidrocarburos acclicos saturados. Llamados tambin parafnicos, del griego parum,

pequea, y affinis, afinidad. Se les nombra as porque no reaccionan fcilmente con otros
compuestos. Su frmula general es CnH2n+2. Hidrocarburos de esta serie son el metano (CH4),
el etano (C2H6) y el butano (C4H10), y son los principales componentes de los gases del
petrleo (Atlas y Bartha, 1998).
Hidrocarburos cclicos saturados o naftnicos. De frmula general CnH2n; ejemplos: el

ciclopentano (C5H10) y el ciclohexano (C6H12) (Chow, 1987). La gran mayora de estos
compuestos tienen una serie de constituyentes de importancia menor y, a semejanza de los
isoprenoides, tambin estn formados por precursores especficos, sea de plantas o de
animales. Adems, son empleados como marcadores moleculares, de gran uso e importancia
en estudios geoqumicos y de comportamiento de derrames (Atlas y Bartha, 1998).
Hidrocarburos cclicos no saturados. Mejor conocidos como hidrocarburos

aromticos, cuya frmula general es CnH2n-6. El compuesto ms simple de esta serie es el
benceno (C6H6), que tiene seis tomos de carbono unidos por dobles ligaduras alternadas
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formando un anillo. Estos hidrocarburos por lo general estn constituidos por poliaromticos,
que son varios anillos bencnicos unidos entre s y se encuentran principalmente en las
fracciones pesadas, por ejemplo en asfaltenos y parafinas (Donker et al., 1994).
Hidrocarburos acclicos no saturados. Llamados tambin etilnicos u olefinas, de

frmula general CnH2n, las diolefinas CnH2n-2, los acetilnicos CnH2n-2, adems de otros
hidrocarburos formados por la combinacin de anillos y cadenas que pueden semejarse a
varias de las series precedentes (Chow, 1987).
4.2. Composicin qumica del petrleo y sus caractersticas fsicas y qumicas
Al analizar petrleo de diversas procedencias, puede decirse de manera general que lo forman
los siguientes elementos qumicos: de 76 a 86% de carbono y de 10 a 14% de hidrgeno; a
veces contiene oxgeno, azufre y nitrgeno. Tambin se han encontrado huellas de compuestos
de hierro, nquel, vanadio y otros metales (Chang y Tsao, 1984; Pavia et al., 1990).
El petrleo se encuentra en el subsuelo, impregnado de formaciones de tipo arenoso y

calcreo. Segn su composicin, temperatura y presin a que se encuentre, asume alguno de
los tres estados fsicos de la materia: slido, lquido y gaseoso. Su color vara entre mbar y
negro; su densidad es menor que la del agua en estado gaseoso; y es inodoro, incoloro e
inspido (Pmex, 1988).
A temperatura ambiente, los hidrocarburos con cuatro tomos de carbono son de

estados gaseosos, de cinco a veinte tomos de carbono son de estados lquidos, y con ms de
veinte tomos de carbono son de estados slidos (Tissot y Welte, 1982).
5. Contaminacin por hidrocarburos en el suelo
La palabra contaminacin significa Accin de contaminar, y contaminar quiere decir

Alterar nocivamente una sustancia u organismo por efecto de residuos procedentes de la
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actividad humana o por la presencia de determinados grmenes microbianos; tambin significa

ensuciar, manchar o contagiar (El pequeo Larousse ilustrado, 1996).
5.1. Estado de los hidrocarburos en el suelo
Las fuentes principales de contaminacin por hidrocarburos fsiles en los suelos, son las fosas
de pozos petroleros y deficiencias en su mantenimiento, la descarga de instalaciones de
procesamiento y petroqumicas, y la rotura de oleoductos. En menor cantidad, existe
contaminacin en el suelo por desechos municipales, los transportados por va atmosfrica, y
los producidos por organismos. Se conoce que en las zonas donde las lluvias son frecuentes e
intensas existen acarreos de hidrocarburos derivados del petrleo (Trujillo et al., 1995b).
El destino de los hidrocarburos en el suelo fue descrito por McGill et al., 1981 (Figura
1). Ellos explicaron que los hidrocarburos pasan primero por dos procesos: la volatilizacin y
la fotooxidacin. Posteriormente, atraviesan por un proceso de descomposicin biolgica,
donde los microorganismos, los nutrimentos, el oxgeno, la textura y el pH van a ser
fundamentales. Como resultado de este ltimo proceso, se obtienen productos intermedios,
clulas microbianas y CO2 que se va a la atmsfera. Por ltimo, los productos derivados de la
descomposicin biolgica siguen dos caminos: 1) se incorporan al humus del suelo, o 2) se
lixivian. McGill et al., 1981, describieron de la siguiente manera los componentes del petrleo
que se encuentran adheridos al suelo.
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Volatilizacin
Hidrocarburos
derivados del Fotooxidacin
petrleo
Lentamente Degradables
degradables n-alcanos, isopropinoides
(aftanos) mono, di y tri aromticos
cclicos
Microorganismos
Nutrientes
Oxgeno
Textura y pH
Productos intermediarios + Clulas microbianas + CO2
Incorporacin en el humus Lixiviacin

del suelo
Figura 1. Destino de los hidrocarburos en el suelo. McGill et al., 1981.
5.2. Suelos de Mxico contaminados por petrleo y sus derivados
Existen muchos suelos potencialmente contaminados que a simple vista no son visibles, como
en el caso de las fugas de tanques de almacenamiento de diesel y gasolina presentes en
gasolineras, lo que representa un peligro latente de contaminacin del subsuelo y manto
fretico. Desafortunadamente, en nuestro pas existe escasa informacin sobre la evaluacin
de las diferentes clases de hidrocarburos, as como la concentracin de stos en las reas
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contaminadas (Informes tcnicos IMP, 1999a y 1999b). Sin embargo, en los estados de
Tabasco, Veracruz, Sonora y Oaxaca, algunos investigadores han iniciado la caracterizacin
de suelos y sedimentos contaminados por hidrocarburos en las zonas petroleras.
Fernndez et al., 2001, al evaluar diferentes sitios de muestreo, estudiaron el potencial

de la fitorremediacin en suelos del sureste de Mxico contaminados con petrleo y
encontraron una concentracin mxima de hidrocarburos totales del petrleo de 367 000 partes
por milln (ppm). En el mismo estado, Zermeo et al., 2000, caracterizaron suelos afectados
con hidrocarburos, y hallaron que el suelo presentaba contaminacin con 188 680 ppm de
hidrocarburos totales del petrleo, de los cuales el 33.8% (63 773.84 ppm) pertenecan a la
fraccin aliftica, 15.7% (29 622.76 ppm) a la fraccin aromtica, 23.2% (43 773.76 ppm) a la
fraccin polar, y 27.3% (51 509.64 ppm) a asfaltos.
Zavala et al., 1996, estudiaron la contaminacin de tierras por hidrocarburos derivados

del petrleo en el campo petrolero Samaria, Tabasco. Los investigadores encontraron dos
clases de suelos, denominados por los productores arenillas y barrial; y concluyeron que
los suelos de barrial donde se encontraba la mayora de las instalaciones petroleras eran los
que presentaban la contaminacin ms alta por hidrocarburos alifticos, aromticos y totales,
en tanto que los suelos de arenilla presentaban los ms bajos niveles de contaminacin por
hidrocarburos.
Botello y Ponce, 1998, reportaron que en los sedimentos de la plataforma continental

del golfo de Mxico exista contaminacin por hidrocarburos aromticos en cantidades de 189
a 680 ppm, concentraciones mayores a las que permite la norma establecida por la UNESCO
para zonas no contaminadas, la cual fue de 70 ppm.
El Instituto Mexicano del Petrleo, 1999a y 1999b, realiz un estudio para determinar
la concentracin de cada uno de los hidrocarburos poliaromticos presentes en suelos y
subsuelos contaminados con diesel, ubicados muy cerca de tanques de almacenamiento en dos
terminales de distribucin y almacenamiento de Pmex, mismas que se encuentran en
Hermosillo, Sonora, y Salina Cruz, Oaxaca. De sus resultados observaron que el subsuelo
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aledao a dichas terminales de almacenamiento se encontraba contaminado por hidrocarburos

polinucleo aromticos (PAH), lo cual representaba un grave problema al ambiente dado que
algunos de los compuestos son txicos para el hombre, animales y plantas. Encontraron 16
PAH diferentes y conocieron que en el suelo existan concentraciones de 1.5 a 23.5 partes por
billn (ppb) de los PAH en la terminal de Salinas Cruz y de 13.5 a 623.8 ppb de los PAH en la
terminal de Hermosillo.
Trujillo et al. (1995b) realizaron un estudio en suelos de los campos petroleros Cinco
Presidentes, Castarrical y Cunduacn en el estado de Tabasco, para cuantificar los contenidos
totales de compuestos. El trabajo consisti en la toma de muestras de suelo de los tres sitios de
estudio, a una profundidad de 0-30 cm, y en los mismos evaluaron las concentraciones de PAH
mediante cromatografa de gases de acuerdo con el mtodo 8270 de la EPA. Sus resultados
arrojaron que las propiedades fsicas y qumicas encontradas indicaban que los tres sitios
presentan diferentes contenidos de arcillas, de manera que diferan en su comportamiento ante
los derrames y la exposicin al petrleo. Encontraron tambin que de los tres suelos
evaluados, en el que perteneci al campo Castarrical (suelo fluvisol) existan los contenidos
ms altos de fenantreno y antraceno. De acuerdo con sus interpretaciones, los investigadores
reportaron contenidos de PAH de bajos a medios (0.35 a 4.15 mg kg-1).
Zavala et al., 1995, evaluaron los niveles de PAH en suelos del Plan Chontalpa donde se
ubican los campos petroleros Crdenas y Paredn, en los municipios de Crdenas y
Huimanguillo, Tabasco. Los suelos predominantes son vertisoles, fluvisoles y gleysoles. El
trabajo de los investigadores consisti en colectar muestras compuestas de suelo a una
profundidad de 0-30 cm, mismas que se utilizaron para determinar la concentracin de PAH
segn mtodos propuestos por la EPA y CARIPOL. Encontraron que los PAH en el campo
petrolero Paredn representaban una contaminacin de ligera a crtica (de 0 a 32 ppm), debido
a concentraciones altas de criseno y fluoranteno derivadas de la combustin de hidrocarburos.
En el campo Crdenas se presentaron dos sitios con niveles crticos de hidrocarburos
aromticos totales y contaminacin ligera a media (de 0 a 23 ppm) por criseno y fluoranteno.
Detectaron tambin que los sitios restantes contenan niveles ligeros o nulos de aromticos
totales que no representaban un problema para el ambiente. Conocieron que los suelos
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contaminados, los cuales se localizan en depresiones topogrficas y microcuencas

semicerradas que favorecen la acumulacin de hidrocarburos por escorrentas superficiales, se
caracterizaban por tener un contenido medio de materia orgnica y pH ligeramente cido a
neutro. Y concluyeron que los suelos vertisoles eran los ms contaminados por PAH (criseno y
fluoranteno), debido a su alto contenido de arcilla.
Trujillo et al., 1995c, compilaron datos sobre los contenidos totales de PAH, fenantreno,
pireno, fluoranteno, antraceno y criseno en suelos de tipo fluvisol, gleysol, vertisol, regosol e
histosol, de trece campos petroleros de Tabasco. Los investigadores encontraron que los PAH
totales en el vertisol mostraban niveles altos y valores medios a altos de criseno y fluoranteno
(de 3.6 a 23.9 ppm); el gleysol tuvo contaminacin media de PAH totales (de 14 a 146 ppm);
en el fluvisol encontraron contaminacin alta de PAH totales (394 ppm) y en algunos sitios
niveles altos de pireno (30.6 ppm) y fluoranteno (32.9) y valores medios de fenantreno (4.15
ppm) y antraceno (2.85); en la unidad histosol cuantificaron contaminacin media de PAH,
mientras en la unidad regosol hallaron valores de contaminacin ligeros de PAH (2.8) y

fenentrano (2.0). De acuerdo con lo anterior, los suelos mostraron la siguiente secuencia de
acumulacin de PAH totales: histosol > vertisol > gleysol > gluvisol > regosol. Concluyeron
que los sitios ms contaminados con PAH estaban asociados con microcuencas artificiales o
reas receptoras de derrames y contenidos moderados a altos de materia orgnica y arcilla.
Trujillo et al., 1991, estudiaron la contaminacin por hidrocarburos aromticos y

metales pesados en suelos inundables de Tabasco. Analizaron 4 600 ha en donde se encuentra
establecido el campo petrolero Brasillo. Las muestras de suelo que tomaron fueron a dos
profundidades: 0-15 y 15-30 cm. Determinaron hidrocarburos aromticos totales (HAT) y
metales pesados, y encontraron niveles bajos a medios de los agentes contaminantes derivados
del petrleo, los cuales son txicos para determinadas plantas y animales. Tambin hallaron
que al aumentar la profundidad de muestreo la concentracin de metales pesados tenda a
incrementarse.
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6. Biorremediacin y fitorremediacin: alternativas para la limpieza de los suelos

Dada la problemtica de la contaminacin por petrleo y sus derivados en los suelos de
Mxico, se han buscado alternativas que solucionen dicha situacin. Existen tecnologas de
remediacin, fsicas y qumicas, que tal vez resulten ms prcticas y efectivas desde el
punto de vista de tiempos, los cuales son ms cortos para remediar sitios contaminados. Sin
embargo, en los ltimos diez aos, las tecnologas de biorremediacin y fitorremediacin se
estn aplicando en suelos afectados por petrleo y sus derivados (Fiorenza et al., 2000). Para
entender estos conceptos, a continuacin se definen.
Biorremediacin. Tcnica utilizada en la limpieza de suelos, lodos, sedimentos y aguas

contaminadas por compuestos orgnicos e inorgnicos, mediante el uso de organismos vivos
(v.gr.: microorganismos y plantas) o de sus enzimas, las cuales son capaces de acumular,
trasformar o degradar bioqumicamente contaminantes hasta concentraciones que no
produzcan efectos nocivos a la salud humana y en general al ambiente.
Las tcnicas de biorremediacin pueden clasificarse en funcin del lugar donde se

realizan: a) in situ, en el mismo sitio contaminado, sin excavar, y disponer del suelo para su
tratamiento, modificando de forma mnima la estructura del suelo; b) ex situ, operaciones que
requieren que el suelo contaminado sea excavado y transportado a otro sitio para ser sometido
a un tratamiento de remediacin: y c) on situ, donde el suelo contaminado se excava y el
tratamiento de remediacin se realiza en la superficie, a un lado o sobre la excavacin; en el
caso de agua subterrnea contaminada, sta se extrae y es tratada en la superficie (Fernndez,
2000).
6.1. Tecnologas de biorremediacin
Biolabranza. Es el arado del suelo contaminado, de la misma forma que se trabaja un suelo
para cultivo, con el fin de airear y homogeneizar el suelo contaminado para estimular la
actividad microbiana (Fernndez, 2000).
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Composteo. Proceso de degradacin que se lleva a cabo en una biopila por la accin de
microorganismos aerobios (Fernndez, 2000).
Bioestimulacin. En este proceso, la flora microbiana autctona es estimulada

mediante la adicin de oxgeno, agua y nutrientes minerales, para estimular su actividad
degradativa y facilitar la degradacin del contaminante (Korda et al., 1997).
Bioaumentacin. Supone la aplicacin directa de microorganismos, los cuales pueden

ser: a) del sitio de remediacin, b) exgenos, y c) obtenidos de la ingeniera gentica, todo ello
con la finalidad de aumentar la biodegradacin o biotrasformacin de los contaminantes
(Korda et al., 1997).
Bioventeo. Es el suministro de aire a un suelo o cuerpo de agua contaminado, para

satisfacer los requerimientos de oxgeno de los microorganismos encargados de la
biodegradacin (Saval, 1995).
Atenuacin natural. Se efecta sin la intervencin del hombre, por procesos naturales
que incluyen mecanismos fisicoqumicos, como la dilucin, dispersin y adsorcin del
contaminante; y mecanismos biolgicos, como el crecimiento de plantas y degradacin
microbiana (EPA, 2000).
6.2. Fitorremediacin
La aplicabilidad de la biorremediacin de suelos contaminados por petrleo radica en que es

una tecnologa barata y efectiva; y aunque existe el inconveniente de que en los experimentos
a escala stos no son fcilmente controlables, se logra tener xito si se consideran y llevan al
ptimo los factores fsicos, qumicos, biolgicos, analticos e incluso estadsticos (Blackburn
et al., 1993).
La implementacin de la fitorremediacin para la limpieza de los suelos contaminados con
compuestos orgnicos, segn Cunningham Lee, (1995) se lleva a cabo por que la planta es
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Capaz de absorber contaminantes al interior de las races y traslocarlos a las hojas, donde de
alguna manera quedan retenidos (Figura 2).
Figura 2. Esquema de la fitorremediacin como un sistema de contenedor de

contaminantes (Cunninham y Lee, 1995).
A continuacin se explican las diferentes tecnologas de fitorremediacin que pueden aplicarse

a sitios contaminados.
6.2.1. Tecnologas de fitorremediacin
Fitoextraccin. Es la absorcin de contaminantes por las races de las plantas y su traslocacin

al interior de las mismas, donde los contaminantes son removidos al momento de la cosecha
(Gleba et al., 1999). Esta tecnologa se aplica frecuentemente a suelos y lodos contaminados
con metales: Ag, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Mn, Mo, Ni, Pb, Zn (Kumar et al., 1995; Ebbs et al.,
1997). Generalmente las plantas que pertenecen a la familia Brassicaceae son las ms
utilizadas en la extraccin de metales, por ejemplo Brassica juncea, la cual tiene la capacidad
de acumular plomo en tallos (de 0.04 a 3.5%) y races (7 a 19% ) (Cunningham y Ow, 1996).
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Rizofiltracin. Es la adsorcin sobre las races de las plantas y la absorcin por las
races de las plantas, de contaminantes que estn en la solucin del suelo circundante a la zona
radical. Esta tcnica suele aplicarse en aguas subterrneas, aguas superficiales y desechos de
agua (Smith, 1997; Schnoor, 1997). Segn el tipo de contaminante, pueden ocurrir los
procesos de adsorcin, concentracin o traslocacin. Algunos sitios contaminados con plomo,
cadmio, cobre, nquel, zinc, cromo, uranio, cesio y estroncio, son tratados siguiendo esta
tecnologa. Las plantas de girasol pueden utilizarse con el fin de adsorber y absorber algunos
de los contaminantes antes mencionados: cadmio, nquel, cobre, uranio, etctera (Salt et al.,
1995).
Fitoestabilizacin. Inmovilizacin de un contaminante en el suelo a travs de la

absorcin y acumulacin por races, adsorcin sobre las races o precipitacin dentro de la
zona radical de las plantas (Cunningham et al., 1995). Tcnica aplicada en suelo, sedimento y
lodos afectados por contaminantes como arsnico, cadmio, cromo, cobre, plomo y zinc
(Cunningham et al., 1996). Algunas de las plantas que pueden llevar a cabo los procesos antes
citados son mostaza (Brassica juncea), cauela (Festuca rubra) y soya (Glycine max) (Salt et
al., 1995; EPA, 2000).
Figura 3. Esquema de cmo actua una planta en la descontaminacin del suelo

por metales (Cunningham y Lee, 1995).
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Rizodegradacin. Es el rompimiento de la estructura molecular de un contaminante

orgnico en el suelo a travs de la actividad microbiana, la cual es incrementada por la
presencia de la zona radical (Schnoor et al., 1995). Algunos contaminantes que pueden ser
tratados mediante esta tecnologa son hidrocarburos totales del petrleo, benceno, tolueno,
etilbenceno y xileno (Schnoor, 1997), as como petrleo crudo, diesel, pesticidas y disolventes
clorados (EPA, 2000). La mora (Morus rubra), la manzana silvestre (Malus fusca), la naranja
china (Maclura pomifera), la alfalfa (Medicago sativa), la soya (Glycine max), el frijol
(Phaseolus vulgaris) y ciertos pastos (ej: Panicum virgatum), son plantas utilizadas en esta
tecnologa (Frick et al., 1999).
Figura 4. Descontaminacin de un suelo contaminado con compuestos orgnicos

mediante el uso de plantas fitodegradadoras (Cunningham y Lee, 1995).
Fitodegradacin. Se le conoce tambin como fitotrasformacin. Rompimiento de

contaminantes tomados por las plantas a travs de procesos metablicos, los cuales ocurren
dentro de la planta; o rompimiento de contaminantes externos a la planta a travs del efecto de
compuestos producidos por microorganismos y por las plantas. Esta tecnologa es aplicada en
suelos, sedimentos, lodos y agua subterrnea (EPA, 2000). Los sitios contaminados con
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disolventes clorados, tricloroetileno, herbicidas, insecticidas, municiones y fenoles pueden ser

tratados mediante la fitodegradacin; para ello se utilizan plantas como papagayo
(Myriophyllum aquaticum), sauce (Salix nigra), lamo (Populus deltoides) y lamo amarillo
(Liriodendron tulipifera) (EPA, 2000).
Fitovolatilizacin. Es la absorcin y traspiracin de un contaminante por una planta,

con la liberacin del mismo o una forma modificada de l a la atmsfera (Simonich y Hites,
1995), mediante los procesos de: a) obtencin del contaminante, b) metabolismo en la planta,
y c) traspiracin de la planta. Comnmente es aplicada en agua subterrnea, pero tambin
puede hacerse en suelos, sedimentos y lodos contaminados por compuestos orgnicos e
inorgnicos. Algunas plantas reportadas como funcionales para estos procesos son lamo
(Populus deltoides), alfalfa (Medicago sativa) y mostaza (Brassica juncea) (Salt et al., 1998).
En el ao 2000 la EPA y Hansen mencionaron las siguientes nuevas tecnologas de

Fitorremediacin:
Control hdrico. Es el uso de plantas para remover agua subterrnea a travs de su

obtencin y consumo, con el fin de contener o controlar la migracin de contaminantes. Se le
conoce tambin como control fitohidrulico o control hidrulico de la pluma. Se aplica en
aguas subterrneas y aguas superficiales contaminadas con compuestos orgnicos e
inorgnicos solubles en agua. El lamo (Populus deltoides) es frecuentemente utilizado en la
tecnologa del control hidrulico (EPA, 2000).
Sistemas de cubierta vegetal. Consiste en una cubierta de plantas que minimiza la

infiltracin de agua, auxilia en la degradacin de desechos subyacentes y en el aislamiento de
contaminantes, con la finalidad de reducir la lixiviacin o movimiento del contaminante. Los
mecanismos incluyen obtencin del agua, microbiologa de la zona radical y metabolismo de
la planta. Se utiliza en aguas superficiales, suelos, lodos y sedimentos contaminados con
compuestos orgnicos e inorgnicos. Los lamos y los pastos pueden utilizarse como cubiertas
vegetales (EPA, 2000).
17
Zonas buffer (ribereas). Consiste en el establecimiento de plantas a lo largo de arroyos

y ros para controlar y remediar aguas subterrneas o superficiales de ros contaminados con
compuestos orgnicos e inorgnicos solubles. Estos sistemas tambin pueden aplicarse con la
finalidad de evitar la migracin de la pluma en aguas subterrneas. Los mecanismos de
remediacin incluyen la obtencin del agua, obtencin del contaminante y metabolismo de la
planta. Los lamos pueden ser utilizados para lograr la remediacin mediante la tecnologa de
zonas buffer (Hansen, 2000).
6.3. Procesos fsicos, qumicos y biolgicos de degradacin o trasformacin de

hidrocarburos en la rizosfera
Se han hecho diferentes clasificaciones de los procesos fsico-qumicos y biolgicos de

degradacin o trasformacin de hidrocarburos, con la finalidad de entender cmo es posible
que exista degradacin o remocin de hidrocarburos en el suelo. Por ejemplo, Suthersan,
1997, divide los procesos en abiticos y biticos, los cuales pueden ocurrir en la rizosfera.
Dentro de los procesos abiticos se consideran los siguientes:
Adsorcin. Proceso en el cual los compuestos qumicos comienzan a asociarse con la

fase slida. La adsorcin ocurre cuando hay una unin entre la matriz del suelo
(sorbente) y los contaminantes (soluto).
Intercambio de iones. Cada slido presenta una carga superficial a la solucin acuosa; si
esta superficie cargada es de signo opuesto al exhibido por un grupo funcional de los
contaminantes, entonces habr una atraccin electrosttica entre el soluto, la solucin del
suelo y la superficie de las partculas slidas. Tales solutos se acumularn en la capa fina
de agua alrededor de la partcula como parte de la poblacin de cargas en la solucin,
balanceando las cargas sobre la superficie slida. Las arcillas minerales son
frecuentemente la fuente dominante del intercambio de iones en el suelo y, en menor
grado, la fraccin orgnica (ej.: materia orgnica y humus).
18
Hidrlisis. Es definida como una trasformacin qumica en la cual los orgnicos (RX)
reaccionan con el agua, resultando en la formacin de nuevos enlaces covalentes con el
OH y la escisin (divisin) del enlace covalente con X de la molcula original. La
reaccin neta es el desplazamiento de X por el OH.
Reacciones de oxidacin y reduccin (reacciones REDOX): 1) Oxidacin. Es definida

como la prdida de electrones. La oxidacin puede estar asociada con la introduccin de
oxgeno en una molcula o con la conversin de una molcula para un estado de
oxidacin mayor. 2) Reduccin. Se define como la ganancia de electrones. Ocurre
cuando hay una trasferencia de electrones de un electrn donador o reductor a un
electrn aceptor u oxidante, donde la molcula o compuesto es reducido.
Por su parte, los procesos biticos son una serie de trasformaciones que remueven los
compuestos orgnicos del ambiente, donde las reacciones son mediadas por los
microorganismos. Se consideran los siguientes:
Mineralizacin. Se refiere a la conversin completa de un compuesto orgnico a formas

inorgnicas tales como el CO2 y H2O (Atlas y Bartha, 1998).
Detoxificacin. Trasformacin del compuesto txico a algunas formas de intermediarios
metablicos que no son txicos o son menos txicos para el ambiente.
Activacin. Es el proceso de formacin de txicos, productos finales o productos

intermediarios durante los procesos de degradacin.
Catabolismo microbiano. Procesos donde los microorganismos son capaces de catalizar

una variedad de reacciones: dehalogenacin, hidrlisis, escisin, oxidacin y reduccin,
dehidrogenacin, dehidrohalogenacin, sustitucin (Cookson, 1995).
19
Cometabolismo. Alexander, 1999, la define como la trasformacin de un compuesto

orgnico por un microorganismo incapaz de utilizar al sustrato como fuente de energa.
Al respecto, Schneider y Billingsley, 1990, mencionan que algunos microorganismos
incapaces de crecer en compuestos aromticos clorados, pueden ser capaces de llevar a
cabo trasformaciones de estos compuestos en presencia de compuestos anlogos no
clorados. Schnoor, 1997, esquematiza al cometabolismo como un proceso biolgico de
degradacin de hidrocarburos en la rizosfera.
Siciliano y Germida, 1998, citaron que los mecanismos de fitorremediacin ocurridos

entre plantas y bacterias biodegradadoras de contaminantes orgnicos son: cometabolismo,
mutualismo, procesos reductivos, solubilizacin y biodisponibilidad. Schnoor et al., 1995,
incluyeron la mineralizacin como un proceso biolgico rizosfrico de degradacin de
contaminantes orgnicos. Cunningham et al., 1996, mencionaron que en los procesos de
fitodegradacin de contaminantes orgnicos, la adsorcin, absorcin y metabolismo de los
mismos ocurre mediante la interaccin planta-microorganismo-suelo, es decir en la rizosfera.
El trmino absorcin en fitorremediacin es definido como la entrada del contaminante al
interior de la raz, donde puede existir una traslocacin del contaminante a las partes
superiores de las plantas (hojas y tallos) (Frick et al., 1999).
Bossert y Bartha, 1984, sealaron que la volatilizacin (evaporacin de contaminantes

orgnicos al ambiente) y degradacin qumica y fotoqumica (una autooxidacin de
compuestos orgnicos cuyos productos son compuestos oxigenados) son procesos fsico-
qumicos de degradacin o trasformacin de hidrocarburos que ocurren en el suelo. McGill et
al., 1981, apuntaron que la fotooxidacin (reaccin que propicia la destruccin de compuestos
orgnicos) puede ser el primer paso en la biodegradacin de fracciones del petrleo en suelo y
sedimentos.
20
6.4. Fitorremediacin de hidrocarburos del petrleo
En la limpieza de suelos contaminados mediante tecnologa de fitorremediacin es importante

conocer algunos aspectos que implican la funcin de la misma. Tales conceptos son: a) efecto
rizosfera, b) el papel de las plantas en la degradacin, c) el papel de los microorganismos en la
degradacin, d) influencia de los factores fsico-qumicos y ambientales sobre la
fitorremediacin, y e) aspectos a considerar en la prctica de la fitorremediacin. Dichos
conceptos se mencionan a continuacin.
6.4.1 Efecto rizosfera
Existen tres mecanismos por los cuales las plantas y los microorganismos remueven suelos y
aguas subterrneas contaminadas por petrleo. Estos mecanismos incluyen la degradacin,
contencin y trasferencia de los hidrocarburos del suelo a la atmsfera (Cunningham et al.,
1996). En la degradacin de hidrocarburos del petrleo, las plantas y los microorganismos
estn directa e indirectamente implicados. Aunque la degradacin puede llevarla a cabo cada
uno de manera independiente, la literatura sugiere que la interaccin entre plantas y
microorganismos es el mecanismo primario responsable para la degradacin de petroqumicos
(Frick et al., 1999).
Al respecto, Manan, 1999, mencion que en la zona rizosfrica puede incrementarse
hasta diez veces la biomasa microbiana por unidad de volumen en comparacin con el suelo
no rizosfrico, por lo que los contaminantes pueden ser degradados con ms rapidez.
La rizosfera es la regin del suelo que comprende las races de las plantas y es influida
por el sistema radical. Las plantas proveen exudados radicales, carbn, energa, nutrientes,
enzimas y algunas veces oxgeno a las poblaciones microbianas en la rizosfera (Cunningham
et al., 1996). Los exudados de azcares, alcoholes y cidos pueden aumentar anualmente de 10
a 20% la fotosntesis en las plantas y proveerlas de suficiente carbono y energa para mantener
un gran nmero de microorganismos (por ejemplo, de 1x108 a 1x109 microbios vegetativos
por gramo de suelo en la rizosfera). Debido a estos exudados, las poblaciones microbianas y
actividades son de cinco a cien veces ms grandes que en el suelo no rizosfrico. Este
21
incremento de las poblaciones microbianas en la planta es conocida como efecto rizosfera, y

se cree que existe un aumento en la degradacin de contaminantes orgnicos (Anderson et al.,
1993).
Existen varios estudios que muestran mayores poblaciones y actividad microbiana en

suelos rizosfricos en comparacin con aquellos que no presentan plantas, como resultado del
efecto rizosfrico en la fitorremediacin de hidrocarburos de sitios contaminados con petrleo
(Frick et al., 1999). Se sugiere que las races de las plantas estimulan a la flora microbiana
para que stas incrementen la degradacin de los hidrocarburos. As, Jordahl et al., 1997,
reportaron que las poblaciones de microorganismos capaces de degradar benceno, tolueno y
xileno fueron cinco veces ms abundantes en la rizosfera de rboles de lamo (Populus
deltoides) que en suelos no rizosfricos. Radwan et al., 1998, mencionaron que la rizosfera de
muchas plantas contienen un gran nmero de bacterias hidrocarbonoclastas, y ello se observa
ms cuando las plantas crecen en suelos contaminados con hidrocarburos en comparacin con
suelos que no lo estn. Estas investigaciones sugieren que la fitorremediacin puede ser una
estrategia aprovechable para la limpieza de suelos contaminados.
6.4.2 El papel de las plantas en la degradacin
La habilidad para asimilar n-alcanos y liberar CO2 se identific en hojas y races de plantas.
En general, las rutas metablicas de conversin de alcanos en las plantas es la siguiente: n-
alcano = alcohol primario = cidos grasos = acetil CoA = varios compuestos (Durmishidze,
1997). Por tal motivo las plantas indirectamente participan en la degradacin de hidrocarburos
del petrleo: a) suministrando exudados radicales, los cuales originan el efecto rizosfrico y
aumentan la degradacin cometablica; b) por la liberacin de enzimas asociadas con las
races, capaces de trasformar compuestos orgnicos; y c) por los efectos fsicos y qumicos de
las plantas y su sistema radical sobre las condiciones del suelo (Gunther et al., 1996).
Los exudados son el enlace entre las plantas y los microorganismos que conducen al
efecto rizosfrico. El tipo y cantidad de exudados radicales dependen de la especie de planta y
del estado del desarrollo de la misma; as, se ha encontrado que las plantas de mora (Morus
22
rubra) liberan mayor cantidad de compuestos fenlicos cuando la planta es joven en

comparacin con la liberacin que ocurre durante su estado senescente (Hegde y Fletcher
1996). El lugar y los factores del tiempo, adems del tipo de suelo, nivel de nutrimentos, pH,
disponibilidad de agua, temperatura, estado de oxgeno, intensidad de luz y concentracin de
CO2 en la atmsfera, afectan significativamente el tipo y cantidad de exudados radicales
(Gleba et al., 1999).
El tipo de exudado radical puede influir en el tipo de interaccin entre plantas,

microorganismos y suelo. Estas interacciones pueden ser especficas y no especficas,
dependiendo de los exudados. Las interacciones especficas ocurren cuando las plantas exudan
un(os) compuesto(s) especfico(s) en respuesta a la presencia de un contaminante. Las
interacciones no especficas suceden cuando normalmente los exudados de las plantas son
qumicamente similares a los contaminantes orgnicos, lo que resulta en un incremento de la
actividad microbiana y por tanto en la degradacin de los contaminantes. Por ejemplo, las
races de mora (Morus rubra) exudan compuestos fenlicos en su rizosfera, los cuales
auxilian a crear un ambiente favorable para la biodegradacin de bifenilos policlorados y de
algunos hidrocarburos poliaromticos, para promover selectivamente el crecimiento de ciertos
microorganismos degradadores de bifenilos policlorados como las bacterias Alcaligenes
eutrophus H850, Corynebacterium sp. MB1 y Pseudomonas putida LB400 (Frick et al.,
1999).
Enzimas de las plantas implicadas en la degradacin. Las enzimas excretadas en la rizosfera
de las plantas fitorremediadoras juegan un papel fundamental en la degradacin de los
compuestos orgnicos (Adler et al., 1994). La dehalogenasa, nitroreductasa, lacasa y nitrilasa
pueden degradar contaminantes de origen orgnico (Cuadro 1). Las enzimas peroxidasas
tambin degradan contaminantes, pero no existen reportes que indiquen cul tipo de
contaminante degradan (Boyajian y Carreira, 1997).
Estos hallazgos sugieren que las enzimas de las plantas pueden tener efectos
significantes mientras la planta esta viva, y an despus de que sta muere (Cunningham et al.,
1996). Al respecto, Yee et al., 1998, mencionaron que el trigo es capaz de estimular a la
enzima tolueno-o-monooxigenasa por su expresin mediante la bacteria Pseudomonas
23
fluorescens y degradar compuestos como el tricloroetileno. Este proceso se le conoce como

rizorremediacin y lo definieron como la degradacin de contaminantes recalcitrantes por
bacterias en la rizosfera.
Cuadro 1. Enzimas excretadas por las plantas y los contaminantes que pueden degradar
(Boyajian y Carreira, 1997).
Enzima
excretada Estado de desarrollo Contaminante degradado
por la planta
Ensayos en campo
Nitroreductasa TNT, dinitromonoaminotolueno y
mononitrodiaminotolueno.
Plantas crecidas en sustratos
Nitrotolueno, dinitrotolueno,
a nivel laboratorio
nitrofenoles, dinitrofenoles,
trinitrofenoles, nitrobenzanos,
nitrobenzenos clorinados, RDX.
Ensayos en campo
Lacasa Triaminotolueno.
Plantas crecidas en sustratos a nivel
Dehalogenasa Etileno, metileno, hexacloroetano,
laboratorio
percloroetileno, TCE, dicloroetileno,
cloroformo.
Plantas crecidas en sustratos a nivel
Nitrilasa 4-clorobenzonitrilo
laboratorio
Efectos de las plantas sobre las condiciones fsico-qumicas del suelo. Las plantas y sus races
pueden influir indirectamente en la degradacin de contaminantes, alterando las condiciones
fsicas y qumicas del suelo. La exploracin del suelo permite una mayor interaccin
(contacto) entre las plantas, los microorganismos y los contaminantes. Las plantas tambin
proveen de materia orgnica al suelo, aun despus de morir (Cunningham et al., 1996).
Especies vegetales utilizadas en estudios de fitorremediacin. Son varias las especies de

plantas que los investigadores han utilizado para entender los procesos de fitorremediacin.
Algunas especies utilizadas en estudios de degradacin de petrleo o sus componentes, as
como las concentraciones en las cuales se han crecido, se mencionan en el Cuadro 2.
24
Cuadro 2. Especies vegetales utilizadas en la degradacin de petrleo y sus derivados.
Nombre Nombre cientfico Petrleo o derivado y su Referencia

comn concentracin
Pasto Panicum miliaceum Petrleo 20 000 mg kg-1 Breus et al. (2001)
Pasto alemn Echinochloa polystachya Petrleo 115 211 a 322 841 mg Rivera (2001)
kg-1
Maz Zea mays Petrleo crudo 25 000 mg kg-1 Quiones et al. (2001)
Pasto Panicum sp. Petrleo 1 500 a 3 500 mg kg-1 Hernndez et al. (2000)
Rbano Raphanus sativus Pireno 81 mg kg-1 Hangs-Holger y
Alexander (2000)
Mimosa Chamaecrista nictitans Hidrocarburos totales del Hernndez et al.
petrleo (2000b)
Fescue Festuca arundinacea Naftaleno 0.5 a 5 mg kg-1 Schwab et al. (1998)
Alfalfa Medicago sativa Petrleo 20 g kg-1 Wiltse et al. (1998)
Frijol Phaseolus vulgaris keroseno (0, 500, 2 500 y 5 000 Hernndez et al.(1998a)
mg kg-1
Girasol Helianthus annus Petrleo 6 000 a 12 000 mg kg-1 Chaneau et al. (1997)
Trigo Triticum aestivum
Trbol Trifolium repen
Frijol Phaseolus vulgaris
Maz Zea mays Petrleo 10 000 a 30 000 Nichols et al. (1996)
-1
mg kg
Ryegrass Lolium perenne Mezcla de hidrocarburos 5 000 Gnther et al. (1996)
mg kg-1
Cebada Hordeum vulgare Petrleo 55 g kg Xu y Johnson (1995)
Chcharo Pisum arvense
Soya Gyicine max Benzo(a)Pireno y antraceno Goodin y Webber
Col Brassica oleracea 2 a 10 mg kg-1 (1995)
Zanahoria Daucus carota PAH totales 17.2 mg kg Wild y Jones (1992)
Tubrculo de olanum tuberosum 30 g PAH Wild et al. (1992)
papa
Pastos Andropogon gerardi Mezcla de hidrocarburos Aprill y Sims (1990)

Sorghastrum nutans 0.0005 a 0.014 mg L-1
Panicum virgatum
Elymus canadensis
Schizachyrium
scoparius
Bouteloua curtipendula
Agropyron smithii
Crisantemo Chrysanthemun vulgare PAH 12, 300 g Kg Edwards (1983)
Haya Fagus sp. PAH 66 a 2,230 g Kg
Avena Avena sativa PAH 8 a 1,324 g Kg
Tabaco Nicotiana tabacum Benzo(a)pireno 12 a 20 g Kg
Espinaca Spinacea oleracea
Lechuga Lactuca sativa
25
6.4.3 El papel de los microorganismos en la degradacin

Daubaras y Chakrabarty, 1992, mencionaron que los microorganismos son los responsables de
la biodegradacin de qumicos txicos y no txicos; muchos de ellos son conocidos por tener
la capacidad de habitar esos nichos ecolgicos para proliferar y colonizarlos. Existe una gran
diversidad de microorganismos implicados en la degradacin del petrleo y sus derivados.
Algunos de estos microorganismos se menciona n en el Cuadro 3.
Cuadro 3. Especies microbianas utilizadas en la degradacin de petrleo o de sus
derivados.
Grupo microbiano / especies Sustrato Referencia bibliogrfica

Bacterias Pseudomonas Petrleo Walton et al. (1994a)
Arthrobacter Bossert y Bartha (1984)
Alcaligenes
Corynebacterium
Flavobacterium
Achromobacter
Micrococcus
Mycobacterium
Nocardia
Acinetobacter calcoaceticus Asfalto Neufeld et al., 1983
Pseudomonas Diesel Wilson y Bradley (1996)
Arthrobacter nicotianae n-octacosaco Radwan et al. (1996)
Pseudomonas aeruginosa n-hexadecano Chayabutra y Lu-Kwang (2000)
Pseudomonas paucimobilis fenantreno Weissenfels et al. (1990)
Pseudomonas vesicularis fluoreno
Alcaligenes denitrificans fluoranteno
Bacillus sp. Petrleo Radwan et al. (1995)
Streptomyces sp.
Acinetobacter sp. Sugiura et al. (1997)
Foght et al. (1989)
Hongos Aspergillus Petrleo Oudot et al. (1993)
Penicillum Radwan et al. (1995)
Gliocladium Aprill et al. (2000)
Emericella
Graphium
Acremonium
Eupenicilium
Talaromyces
Rivera (2001)
Trichoderma Petrleo y BaP
Paecilomyces
Yadav y Reddy (1993)
Cunninghamella elegans Hidrocarburos
Phanerochaete chrysosporium Polinucleo aromticos
Kstner et al. (1994)
Actinomicetos Gordona sp. Petrleo
Mycobacterium sp
Cianobacterias
Sorkhoh et al. (1992)
Petrleo
26
Degradacin de contaminantes orgnicos. La degradacin microbiana de contaminantes

orgnicos ocurre normalmente como resultado de la utilizacin del contaminante por parte de
los microorganismos para su propio crecimiento y reproduccin (Smith, 1997).
Recientemente, el concepto inmovilizacin en el suelo se ha introducido a los trminos de
degradacin para definir el papel de los microorganismos degradadores de contaminantes en la
captura de partculas del suelo dentro de su membrana slida (Karamanev et al., 1998).
Los contaminantes orgnicos no slo proveen de carbono a los microorganismos, sino

tambin de electrones que los mismos utilizan para obtener energa. El metabolismo
microbiano de los contaminantes implica la respiracin aerbica; otros metabolismos pueden
ser: respiracin anaerbica, cometabolismo, fermentacin, dehalogenacin reductiva, y el uso
de compuestos inorgnicos como electrones donadores. Una caracterstica importante de las
bacterias es que tienen la capacidad de adaptarse rpidamente a cambios ambientales bruscos,
como su exposicin a los contaminantes (Bollag et al., 1994).
En general, los procesos metablicos por los cuales los microorganismos actan sobre
un amplio rango de compuestos, implican reacciones de degradaciones difciles y complejas
por las cuales los contaminantes son trasformados en compuestos ms simples para las plantas.
Sin embargo, no todos los microorganismos degradan contaminantes orgnicos de la misma
manera. Las rutas metablicas de degradacin de los PAH por microorganismos procariticos,
entre stos las bacterias, implican la enzima dioxigenasa, la incorporacin de dos tomos de
oxgeno molecular en el contaminante, y la produccin de compuestos menos txicos tales
como cidos, alcoholes, dixido de carbono y agua. Por lo contrario, la degradacin por
eucariticos, como los hongos, inicialmente implica la incorporacin de un solo tomo de
oxgeno en el PAH. Aunque muchas de las trasformaciones ocurridas por hongos resultan en
compuestos menos txicos, en menor grado algunos metabolitos producidos durante la
degradacin de PAH originan compuestos ms txicos que el compuesto original (Higson,
1991). Por ejemplo, durante la biodegradacin bacteriana del tricloroetileno (TCE) puede
formarse el compuesto vinil clorado, que es ms txico (cancergeno) que el TCE (Alexander,
1999).
27
7. Rutas metablicas implicadas en la degradacin de algunos componentes del petrleo
Existen diversos mecanismos bioqumicos por los cuales los microorganismos pueden llegar a
degradar compuestos orgnicos, donde la participacin de enzimas especficas de cada
hidrocarburo representa un papel importante. A continuacin se ilustran las rutas metablicas
de algunos componentes del petrleo.
Ruta metablica de los alcanos. Atlas y Bartha, 1998, describen la degradacin de los alcanos
de la siguiente manera: El ataque inicial en los alcanos ocurre por enzimas que tienen un
estricto requerimiento de oxgeno molecular; esta enzima es la oxigenasa (mezcla de funcin
de oxidasas) o dioxigenasas. Un tomo de O2 es incorporado dentro del alcano, produciendo
un alcohol primario; el otro es reducido a agua, con la forma reducida de nicotinamida
dinucletido fosfato (NADPH2) sirviendo como electrn donante (Ecuacin 1).
Ecuacin 1.
R- CH2 - CH3 + O2 + NADPH2 R - CH2 - CH2 - OH + NADP + H2O
alcano alcohol primario
Ambos tomos de O2 son trasferidos al alcano, produciendo un hiperxido intermedio lbil

que es reducido por NADPH2 a un alcohol y agua (Ecuaciones 2 y 3).
Ecuacin 2.
R- CH2 - CH3 + O2 R - CH2 - CH2 - OOH
alcano hiperxido
Ecuacin 3.
R- CH2 - COOH - OOH + NADPH2 R - CH2 - CH2 - OH + NADP + H2O

hiperxido + NADPH2 alcohol + agua
El ataque inicial es directo al grupo metil terminal, formando un alcohol primario que es
oxidado a un aldehdo y cido graso. Una vez que el cido graso es formado, un nuevo
catabolismo ocurre, la -oxidacin sucesiva. La cadena larga del cido graso es convertida a
su forma acil-coenzima A (Ecuacin 4), y es accionada por una serie de enzimas (Figura 5).
28
Ecuacin 4. R - CH2 - CH2 - CH2 - COOH (cido graso +CoA)
Graso acil CoA

deshidrogenasa
-cetoacil
CoA tiolasa Enol CoA
hidrasa
-hidroxiacil CoA
deshidrogenasa
Figura 5. Esquema helicoidal de la -oxidacin (Conn et al., 2000).

Esta secuencia es repetida. Las unidades de acetil CoA son convertidas a CO2 a travs
del ciclo del cido tricarboxlico. Los productos finales de la mineralizacin de los
hidrocarburos entonces son CO2 y H2O. Frecuentemente, el ataque inicial es directamente al
grupo metil terminal, formando un alcohol primario que sucesivamente es ms oxidado a un
aldehdo y cido graso. Ocasionalmente ambos grupos metil terminal son oxidados, y de esta
manera resulta la formacin de un cido dicarboxlico. Esta variacin describe cmo la -
oxidacin terminal es uno de varios caminos para evitar un bloqueo de la -oxidacin, debido
a una rama de la cadena de carbono.
Microorganismos degradadores de alcanos: Mycobacterium lacticolum,

Mycobacterrium smegmatis, Corynebacterium sp, Pseudomonas aeruginosa, Pichia
polymorpha, Candida lipolytica, Candida rugosa, Arthrobacter sp., Mycobacterium
rhodochrous (Atlas, 1984).
Ruta metablica del benceno. Milcic, 1998, mencion que la degradacin del anillo aromtico
la llevan a cabo las enzimas oxigenasas que catalizan la introduccin del oxgeno molecular al
sustrato, en donde se forma el intermediario catecol que contiene dos grupos hidroxlicos en
29
dos tomos adyacentes de carbono. Posteriormente, el catecol es convertido a 2 hidroxi-cis,cis

mucnico semialdehdo y ste a 2 ceto-4-ac. pentenoico, mismo que se trasforma en
acetaldehdo y cido pirvico (Figura 6). Pseudomonas rhodochrous y Pseudomonas
aeruginosa son excelentes degradadoras del benceno.
O2 OH
Catecol
OH
O2
Benceno
CHO
COOH 2 hidroxi-cis,cis mucnico
semialdehdo
OH
H2O
HCOOH
COOH 2 ceto-4-ac. pentenoico
CH3 - CH + CH3 - C -COOH

acetaldehdo cido pirvico
O
Figura 6. Ruta metablica del benceno (un anillo aromtico).
Ruta metablica del naftaleno. La va metablica que sigue el naftaleno en su biodegradacin

se ha estudiado principalmente en bacterias del gnero Pseudomonas y puede dividirse en dos
etapas principales: la trasformacin de naftaleno a salicilato y la degradacin de salicilato a
travs de catecol hasta los productos finales (Milcic, 1998) (Figura 7).
30
Naftaleno Cis-1,2-dihidroxi 1,2-dihidro

naftaleno
H
OH
Naftaleno 1,2 H
dioxigenasa OH
NADH + O2 + H+ NAD+
Cis-1,2-dihidroxi
1,2-dihidro naftaleno
dehidrogenasa
OH
OH
1,2 dihidroxi naftaleno

dioxigenasa O2
1,2- Dihidroxi-naftaleno
O OH
COO-
2 hidroxicromeno
2-carboxilato (HCCA)
HCCA
isomerasa
OH H2O OH
NAD+ Salicilaldehdo
-
COO dehidrogenasa
(tHBPA) CHO
hidratasa aldolasa
Salicilaldehdo NADH+H+
O
Trans-o-hidroxibenzil OH NADH+H+ + O2 NAD+ + H2O
idenopiruvato (tHBPA) OH
OH Salicilato COO-
hidroxilasa
Catecol Salicilato
Figura 7. Ruta metablica del naftaleno (dos anillos aromticos).
31
Microorganismos degradadores del naftaleno: bacterias: Streptomyces achromogenes,

Nocardia opaca, N. coeliaca, Pseudomonas fluorescens, P. desmolyticum, P. aeruginosa, P
cepacia, Corynebacterium renale, Acinetobacter calcoaceticus, Alcaligenes desnitrificans,
Mycobacterium sp., Rhodococcus sp., Moraxella sp., Bacillus cereus;.y hongos: Absidia
glauca, Aspergillus niger, Basidiobolus ranarum,Candida utilis, Choanephora campincta,
Circinella sp., Claviceps paspali, Cokeromyces poitrassi, Conidiobolus gonimodes,
Cunninghamella bainieri, Cunninghamella elegans, Cunninghamella japonica, Emericellopsis
sp., Epicoccum nigrum, Gilbertella persicaria (Cerniglia, 1984).
Enzimas que participan en la degradacin: Naftaleno-1,2-dioxigenasa, 1,2-dihidroxi-

1,2-dihidronaftaleno dehidrogenasa, 1,2-dihidroxi-naftaleno dioxigenasa, 2-hidroxicromeno-2-
carboxilato isomerasa, tHBPA hidratasa-aldolasa, Salicilaldehdo dehidrogenasa, Salicilato
hidroxilasa (Figura 8).
Ruta metablica del antraceno. Es un compuesto aromtico policclico, componente del

petrleo y sus derivados. La importancia otorgada a la degradacin de este hidrocarburo radica
principalmente en que es un compuesto txico con actividad carcingena y mutgena. Se
conoce un gran nmero de bacterias que pueden llevar a cabo la degradacin de estos
compuestos (Cerniglia et al., 1984; Cerniglia et al., 1992). En la Figura 5 se presenta la ruta
metablica que sigue el antraceno.
Microorganismos degradadores del antraceno: bacterias: Corynebacterium sp.,

Pseudomonas aeruginosa, Beijerinckia sp., Mycobacterium sp., Pseudomonas putida, P.
cepacia, Rhodoccus sp., Flavobacterium sp., Arthrobacter sp.; y hongos: Cunninghamella
elegans, Phanerochaete chrysosporium, Ramaria sp, Rhizoctonia solani, Trametes
versicolum, Helicostrylum piriforme, Hyphochytricum catenoides, Lynderina pennispora,
Mucor hiemalis, Neurospora crassa, Panaeolus cambodginensis, Panaeolus subbalteatus,
Penicillium chrysogenum, Pestalotia sp., Phylctochytrium reinboldtae, Phycomyces
blakesleenaus, Phytophthora cinnamomi, Psilocybe subaeruginascens, Rhizophyctis harderi,
Psilocybe cubensis, Rhizophlyctis rosea, Rhizopus oryzae, Rhizopus stolonifer, Saccharomyces
32
cerevisiae, Saprolegnia parasitica, Smittium culicis, Smilttium culisetae (Cerniglia, 1984;

Harayama y Timmis, 1989).
Antraceno
H
OH
OH
H
Cis-1,2-Dihidroxi
1,2 dihidroantraceno
OH
OH OH
COOH
C=O
Cis, 4-(2 hidroxinaft-3-il 1,2 dihidroxiantraceno

ac. 2-oxobut-enoico)
OH
OH OH
COOH COOH OH
2, 3- Dihidroxinaftaleno cido Saliclico Catecol
Figura 8. Ruta metablica del antraceno (tres anillos aromticos).
Ruta metablica del benzo(a)pireno. El benzo(a)pireno es metabolizado por mamferos va

citocromo P450 dependiente de monooxigenasa y un epxido hidrolasa para varios
metabolitos primarios y secundarios, incluyendo epxidos, fenoles, quinones, trans-
diehidrodiols, epxidos dihidrodiol, tetraoles, sulfato glutatione y glucorinados conjugados
(Cerniglia y Gibson, 1980).
No se ha reportado la habilidad de los microorganismos para utilizar hidrocarburos

aromticos que tengan ms de tres anillos como la nica fuente de carbono y energa. Sin
33
embargo, los microorganismos pueden oxidar PAH cuando crecen en un sustrato alternativo de
crecimiento. Varios hongos se han reportado como oxidadores del benzo(a)pireno (BaP):
Saccharomyces cerevisiae, Neurospora crassa, Cunninghamella bainieri, C. elegans,
Aspergillus ochraceus. Cerniglia, 1984, mencion que esta actividad la realizan mediante la
enzima benzo(a)pirenohidroxilasa. A continuacin se presenta la oxidacin del BaP y BaP 7,8
diol por Cunninghamella elegans (Figura 9).
Benzo (a) pireno BaP 7,8 oxido BaP 7,8 diol
HO
O HO
HO
HO
BaP epoxido-2
O Cis Tetraol 2
HO
HO
HO OH
HO HO
Trans Tetraol 2
HO
HO
Figura 9. Ruta metablica del benzo(a)pireno (cinco anillos aromticos).
Existen varias consideraciones durante la fitorremediacin de compuestos orgnicos;

por ejemplo, la composicin y tamao de la comunidad microbiana en la rizosfera dependen
de las especies de plantas, edad de la planta y tipo de suelo (Frick et al., 1999).
34
La comunidad microbiana tambin puede variar con el tiempo al cual se expondr al

contaminante presente en el suelo (Anderson et al., 1993). Por otro lado, existen especies de
bacterias que tienen la capacidad de degradar una amplia variedad de contaminantes y ste es
un paso importante de adaptacin al contaminante por parte del microorganismo; un ejemplo
es Pseudomonas. Otras evidencias sugieren que la degradacin de ciertos contaminantes puede
tomar lugar slo si existe un consorcio microbiano especfico en el sitio contaminado
(Anderson, et al., 1993).
Se tiene conocimiento de que los microorganismos reducen la fitotoxicidad de las

plantas en suelos donde las condiciones son adversas y existe una estimulacin de la
degradacin de otros contaminantes no-fitotxicos. Al respecto, Walton et al., 1994b,
mencionaron que las defensas de las plantas a los contaminantes pueden mejorarse a travs de
la degradacin externa de los contaminantes por los microorganismos rizosfricos. Los
microorganismos benefician a las plantas al degradar a los compuestos txicos y por tanto al
destoxificar contaminantes en la rizosfera, lo cual implica que las plantas sobrevivan en los
suelos contaminados.
8. Influencia de los factores fsico-qumicos y ambientales sobre la fitorremediacin
Una variedad de factores fsicos, qumicos y ambientales afectan o alteran los mecanismos de
la fitorremediacin. A continuacin se mencionan algunos:
Temperatura. Este factor es importante porque se conoce que afecta las velocidades a
las cuales son llevados a cabo varios procesos (Haines et al., 1994). En general, la velocidad
de degradacin microbiana o trasformacin se eleva al doble por cada 10C de incremento de
temperatura (Eweis et al., 1998). Schneider y Billingsley, 1990, mencionaron que
temperaturas de 15 a 35C pueden ser las ptimas para llevar a cabo procesos de degradacin
de compuestos orgnicos. Simonich y Hites, 1995, registraron que, en un pantano, el promedio
de degradacin de hidrocarburos fue de 72% durante el verano, comparado con 56% durante
el invierno. Se sabe tambin que durante el verano, cuando las temperaturas ambientales son
altas, existen concentraciones bajas de PAH en las plantas. Al respecto, Erikson et al., 1999,
35
apunta que la degradacin aerbica de una mezcla de hidrocarburos por microorganismos

nativos del suelo es degradada a temperaturas de 6 a 20C.
pH. En general, se conoce que las bacterias biorremediadoras prefieren un pH neutro o

alcalino, mientras que los hongos son ms tolerantes a condiciones cidas. Segn Kstner et
al., 1998, el rango ptimo de pH para llevar a cabo los procesos de biorremediacin es entre 6
y 8.
Tipos de suelo. Son importantes tres conocimientos:
1. Estructura del suelo. Esta caracterstica puede influir negativamente porque se ha
identificado que algunos compuestos (por ejemplo el fenantreno) pueden quedar
atrapados y adsorbidos en la superficie de nanoporos (con dimetro < 100 nm),
los cuales son inaccesibles para los organismos que llevan a cabo los procesos de
biodegradacin (Frick et al., 1999).
2. Textura del suelo. Puede afectar la fitorremediacin por su influencia en la
disponibilidad de contaminantes; por ejemplo, las arcillas son mucho ms
capaces de unir molculas ms rpidamente que las arenas, y esto provoca que la
biodisponibilidad del contaminante pueda ser baja en suelo con alto contenido de
arcillas (Huang, 1990; Van y Wit, 1993). En general, los suelos con partculas
ms grandes, como los PAH, tienen mayor mineralizacin de hidrocarburos que
los suelos que presentan pequeas partculas (Schneider y Billingsley, 1990).
3. Materia orgnica. Puede provocar la disminucin en los procesos de degradacin
de contaminantes porque se une a compuestos lipoflicos. Cuando existe un alto
contenido de carbono en el suelo, usualmente existe una fuerte adsorcin y
entonces hay una baja disponibilidad, mientras que un contenido moderado de
carbono orgnico (1-5%) puede permitir una disponibilidad limitada (Senesi,
1993).
Disponibilidad de nutrientes. Puede influir en la velocidad y extensin de la

degradacin en el suelo contaminado. Se sabe que cantidades adecuadas de nutrientes en el
suelo son requeridas para mantener el crecimiento de las plantas y sus asociaciones
microbianas. Los hidrocarburos del petrleo pueden reducir la disponibilidad de nutrientes a
36
las plantas en el suelo. La baja disponibilidad resulta del hecho de que los hidrocarburos del
petrleo tienen alto contenido de carbono, pero son pobres suministradores de nitrgeno y
fsforo (Xu y Johnson, 1997). Como los microorganismos del suelo degradan hidrocarburos,
ellos usan o inmovilizan la disponibilidad de nutrientes principalmente nitrgeno y fsforo,
creando deficiencias en el suelo contaminado. Los hidrocarburos del petrleo tambin pueden
limitar el acceso de nutrientes a las plantas y a microorganismos, al reducir la disponibilidad
de agua en la cual los nutrientes son disueltos. Las deficiencias nutrimentales en el suelo
causadas por los hidrocarburos del petrleo pueden ser contrarrestadas con aplicaciones de
fertilizantes o abonos verdes (Rosenberg et al., 1992; Amadi et al., 1993).
Disponibilidad de agua y oxgeno. Dado que el agua es el mayor componente de

organismos vivos, si llega a faltar existir una prdida de la actividad microbiana y
deshidratacin de plantas. Por otro lado, demasiada humedad limita el intercambio de gas y la
creacin de zonas anxicas donde la degradacin ser dominada por microorganismos
anaerbicos. Se recomienda mantener el agua en el suelo por arriba de 1 bar (Schneider y
Billingsley, 1990) o entre 50 y 80% de saturacin (Bossert y Bartha, 1984). El oxgeno puede
ser proporcionado a la rizosfera como un exudado de la planta, dependiendo del tipo de planta.
Se conoce que las herbceas de clima hmedo tienen una alta capacidad de transportar
oxgeno de sus hojas a sus races y entonces entrar a la rizosfera. Por lo contrario, las plantas
leosas y de climas no hmedos tienen una baja capacidad para transportar oxgeno hacia
abajo. Las plantas que retienen humedad mantienen una alta poblacin de bacterias en la
rizosfera, la cual puede auxiliar a la degradacin de contaminantes orgnicos.
Radiacin solar. Es capaz de trasformar a los contaminantes en otros compuestos, los

cuales pueden ser diferentes al compuesto original en su toxicidad y biodisponibilidad. Por
ejemplo: el aumento en los efectos de toxicidad (tal como la reduccin del crecimiento de la
planta) podra resultar de la penetracin de radiacin ultravioleta en los tejidos de las plantas,
seguido por fotomodificaciones y fotosensibilizaciones de PAH acumulados dentro de estos
tejidos (Duxbury et al., 1997).
Los procesos del tiempo. Los procesos de volatilizacin, evapotraspiracin,
fotomodificacin, hidrlisis, lixiviacin y biotransformacin del contaminante, pueden reducir
37
la concentracin de contaminantes fcilmente degradables con los compuestos ms

recalcitrantes que quedan en el suelo (Bossert y Bartha, 1984; Cookson, 1995).
Tipos de contaminantes y su grado de toxicidad. En muchos casos el contaminante

atacable puede tener una alta toxicidad intrnseca para los microorganismos o estar presente a
concentraciones que son txicas. La toxicidad de los contaminantes a los microorganismos
surge de dos mecanismos: 1) el contaminante acta como un agente con superficie activa, la
cual daar la membrana plsmica de los microorganismos; o 2) puede ser una toxina
metablica para la bacteria. Se conoce que los compuestos aromticos son ms resistentes a la
biodegradacin que los compuestos alifticos. Un compuesto recalcitrante es un qumico que
tiene una resistencia inherente a cualquier grado de biodegradacin; por ejemplo, los bifenilos
policlorinados y polinucleares aromticos (Schneider y Billingsley, 1990).
9. Aspectos a considerar en la prctica de la fitorremediacin
Establecimiento de microorganismos apropiados. Despus del anlisis de algunos trabajos

realizados en campo, Saval, 1995, recomienda estimular la microflora nativa de los sitios
afectados para obtener mejores resultados en la biodegradacin de contaminantes. Se han
modificado genticamente especies de Pseudomonas (P. putida y P. aureofaciens), las cuales
son caracterizadas por su excelente capacidad en la degradacin de naftaleno en rizosferas de
sitios contaminados. Sin embargo, sus creadores Kochetkov et al., 1997, advirtieron que existe
dificultad en su aplicabilidad, debido al desconocimiento de las consecuencias que pueden
ocurrir en el ambiente.
Por circunstancias como stas, Riser-Roberts, 1998, sugiere trabajar con

microorganismos nativos de los sitios contaminados. Cunningham et al., 1996, mencionaron
que existen riesgos asociados al uso de microorganismos no nativos y especies genticamente
modificadas en la prctica de la fitorremediacin, principalmente porque los microorganismos
introducidos en ambientes diferentes a los cuales se trabaj deben adaptarse a suelos y climas
que en muchas ocasiones resultan adversos para su crecimiento.
38
Establecimiento de plantas apropiadas. Las plantas elegidas para llevar a cabo la

fitorremediacin deben estar bien adaptadas al suelo y clima de la regin, considerando las
caractersticas del suelo, el crecimiento estacional, la temperatura requerida para su
crecimiento y la pluviosidad anual. Una ventaja del uso de las plantas nativas es que estn
preadaptadas a las condiciones de clima y suelo del sitio. Otros aspectos a considerar con
respecto a las plantas son el tipo de raz, la profundidad de la misma y su velocidad de
crecimiento. En general, se requieren sistemas radicales fibrosos, pivotante y numerosas races
finas (v.gr.: las races de alfalfa). Tambin se recomienda utilizar rboles de lamo por su
rpida velocidad de crecimiento (Burken y Schnoor, 1998; Newman et al., 1998).
Germinacin de la semilla y trasplante. La germinacin aumenta cuando el suelo esta hmedo

y no es txico a la semilla, y cuando la temperatura es apropiada. Una manera de conocer cul
tipo de plantas puede utilizarse para la fitorremediacin, es que debe tener una buena
germinacin. Se conoce que la germinacin del trigo y la soya en suelo contaminado con
keroseno en un porcentaje de 0.34 w/w fue retrasada cuando se compar con un suelo no
contaminado; sin embargo, el porcentaje de germinacin despus de diez das fue similar,
tanto en el suelo contaminado como en el no contaminado. Los autores sugirieron que la
velocidad lenta en la germinacin del suelo contaminado con keroseno pudo deberse a un
decremento en la disponibilidad de oxgeno y, en consecuencia, a un incremento en la
competencia por el oxgeno entre la germinacin de semillas y los microorganismos. La alfalfa
puede germinar en suelos contaminados con 50 g de petrleo crudo por kg (5% w/w) (Frick et
al., 1999).
Concentraciones de hidrocarburos del petrleo. Dentro de ciertos rangos de concentraciones,
las plantas y los microorganismos toleran hidrocarburos del petrleo. La fitorremediacin de
los hidrocarburos puede ser inefectiva si las concentraciones de los contaminantes son muy
altas, lo que causa toxicidad; tambin puede reducir o impedir el crecimiento de nueva
biomasa microbiana necesaria para incrementar o mantener la degradacin; concentraciones
de contaminantes bajas provocan una pobre biodisponibilidad. Si la obtencin microbiana y
metabolismo de compuestos orgnicos cesa cuando la concentracin del contaminante est a
un cierto nivel, los microorganismos no podrn ser fisiolgicamente capaces de reducir la
concentracin del contaminante (Frick et al., 1999).
39
Algunas concentraciones de compuestos orgnicos pueden ser toleradas por las plantas;
por ejemplo, se conoce que la avena no presenta severos daos cuando crece en suelos
contaminados con petrleo (a un volumen de 3% por peso de suelo), que la alfalfa crece en
presencia de agua saturada con tolueno a 500 mg kg-1, y que el pasto azul, pasto canario y
trbol rojo crecen bien en suelos contaminados con 2 000 mg Kg-1 de una mezcla de qumicos
orgnicos. El petrleo afecta la salud de las plantas: la clorosis en las hojas, la deshidratacin
de las plantas, poco crecimiento y muerte son algunos de los efectos de exponer plntulas a
concentraciones de petrleo crudo (Amakiri y Onofeghara, 1984; Frick et al., 1999).
Consideraciones del sitio. Al respecto, se requiere saber su localizacin, extensin, grado de

concentracin y edad del contaminante y la forma o existencia de vegetacin. Las actividades
futuras planeadas para el sitio pueden impactar en la seleccin de la tecnologa de
fitorremediacin; as, es necesario conocer si el sitio ser industrial, residencial o parque
recreativo, por ejemplo un parque ecolgico (Schnoor, 1997).
Condiciones climticas. Un sistema de fitorremediacin puede ser severamente impactado por

eventos extremosos de tiempo, por lo que esta posibilidad debe ser considerada durante la
planeacin de la tecnologa. Algunos problemas que se provocaran por condiciones climticas
son los siguientes: 1) la cantidad y tiempo de pluviosidad determinar cuando preparar el
suelo, plantar y aplicar riegos; 2) la temperatura del aire y la sombra pueden afectar la
habilidad de las plantas para tener un buen crecimiento; 3) la cantidad de luz de sol afecta el
crecimiento de las plantas, la temperatura del aire y la evapotraspiracin; y 4) la cantidad de
viento afecta la evaporacin, causando dao a las plantas y dispersando voltiles (EPA, 2000).
10. Tcnicas utilizadas para aumentar la fitorremediacin
Se llevan a cabo con la finalidad de agilizar los procesos de fitorremediacin, y son las
siguientes:
1. Aplicacin de fertilizantes. Aunque un suelo contaminado no est limitado de nutrimentos,
la disponibilidad de stos en el suelo puede ser rpidamente utilizada o inmovilizada cuando
40
las poblaciones microbianas degradan hidrocarburos del petrleo, lo cual tpicamente sirve
como una fuente rica de carbono, pero son pobres suministradores de nutrientes. La aplicacin
de fertilizantes puede aumentar la degradacin de hidrocarburos del petrleo porque evita la
competencia entre las plantas y los microorganismos, sobre todo cuando los nutrimentos son
limitados en los suelos contaminados (Brimecombe et al., 2001).
Steffensen y Alexander, 1995, mencionaron que aun entre especies microbianas puede
existir competencia por nutrimentos; por ejemplo, la competencia entre dos especies de
bacterias (Pseudomonas putida y P. aeruginosa) por fsforo, limit la cantidad de compuestos
orgnicos degradados por las bacterias, y sin embargo, la velocidad y extensin de
degradacin increment cuando se suministraron cantidades adecuadas de fsforo.
2. Aplicacin de abonos verdes. Biederbeck et al., 1996, mencionaron que los residuos de
leguminosas aplicadas como abonos verdes en suelos contaminados con petrleo tienen la
propiedad de incorporar N (debido a que en estas plantas se fija N atmosfrico como
consecuencia de la simbiosis Rhizobium-leguminosa) al suelo mejorando su fertilidad.
Indirectamente sta es una manera de estimular los procesos de fitorremediacin. Al respecto,
Amadi et al., 1993, estudiaron la remediacin de un suelo contaminado con petrleo crudo con
suministros de nutrimentos orgnicos donde crecieron plantas de maz, y observaron que el
suministro de los mismos aumentaba las variables: porcentaje de germinacin del maz, altura
de la planta, rea foliar y materia seca. Tambin observaron que la aplicacin de abonos
verdes al suelo modificaba de manera positiva las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas,
las cuales promovan un mejor crecimiento de las plantas.
3. La labranza. Se aplica en biorremediacin para estimular el crecimiento de los

microorganismos que se encargan de degradar los contaminantes orgnicos presentes en el
suelo. Esta prctica tiene la finalidad de favorecer la aireacin del suelo y mezclar los
fertilizantes incorporados dentro del sitio contaminado. Se sabe que los objetivos de la prctica
de labranza pueden alcanzarse si se llevan a cabo antes del establecimiento de la planta
fitorremediadora en el suelo afectado por los contaminantes (Frick et al., 1999).
41
4. Aplicacin de riego. Debido a que las plantas que crecen en los suelos contaminados
manifiestan sntomas de estrs hdrico, es recomendable la aplicacin de riegos constantes
durante la permanencia de la planta en el sitio a remediar, con el objetivo de cubrir sus
requerimientos fisiolgicos. Se conoce que el agua facilita el transporte de nutrimentos al
interior de la planta y que ello repercute en su sanidad y vigor (EPA, 2000). Al respecto,
Hernndez, 1997, observ que como efecto de la presencia de un complejo de hidrocarburos
en el suelo, las plantas de frijol solan manifestar sntomas de estrs hdrico, probablemente
porque los hidrocarburos ocasionaban dao a la raz. Lo anterior indica que en sitios
contaminados de manera natural por compuestos orgnicos, la planta sufre de estrs por falta
de agua y nutrimentos, estas situaciones demuestran la importancia del suministro de agua a
las plantas.
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13. CASOS DE ESTUDIOS
13.1 BACTERIAS DE VIDA LIBRE FIJADORAS DE NITRGENO ATMOSFRICO

EN RIZOSFERA DE FRIJOL CONTAMINADA CON KEROSENO
Nitrogen Fixing Free Living Bacteria in Bean Rizosphere polluted with kerosene
Elizabeth Hernndez Acosta1., Ronald Ferrera-Cerrato 2 y Refugio Rodrguez Vzquez3.

1
Universidad Autonoma Chapingo, elizahac@yahoo.com.mx; 2Colegio de Postgraduados, 3Centro de
Investigacin de Estudios Avanzados del Instituto Politcnico Nacional
rrodrig@mail.cinvestav.mx
RESUMEN
Pocos informes muestran el comportamiento de poblaciones de bacterias fijadoras de
nitrgeno atmosfrico de vida libre (BFNA) en suelos contaminados por combustibles como el
keroseno. Se desconoce si el hidrocarburo afecta la actividad de este grupo bacteriano y por
tanto la incorporacin de N atmosfrico. As, en esta investigacin se evalu la influencia del
keroseno sobre la capacidad de fijar N atmosfrico por BFNA y BFNA hidrocarbonoclastas
(HCs) establecidas en Phaseolus vulgaris L. Se consideraron dos factores: presencia de planta
(con y sin planta) y cuatro concentraciones de keroseno (0, 500, 2500 y 5000 mg kg-1). En
invernadero se estableci un diseo experimental completamente al azar que consisti de ocho
tratamientos con seis repeticiones. Se analizaron muestras de raz (para evaluar poblaciones
del rizoplano) y muestras de suelo (para evaluar poblaciones de rizosfera y suelo sin planta)
19, 47 y 83 das despus del trasplante. Se estim la actividad de reduccin de acetileno en
BFNA-HCs para conocer su potencial en la fijacin de N atmosfrico. La presencia del
keroseno no afect drsticamente las poblaciones de BFNA y BFNA-HCs; al evaluar la
fijacin de N atmosfrico, se encontr que las bacterias podan llevar a cabo esta funcin. Las
mayores poblaciones fueron: para BFNA (410 x 104 UFC g-1 raz) en el rizoplano en la
concentracin 2500 mg kg-1 de keroseno y para BFNA-HCs (299 x 104 UFC g-1 suelo) en la
rizosfera, en la concentracin 500 mg kg-1 de keroseno. Se aislaron 21 cepas de BFNA-HCs
de las cuales 29% mostraron actividad de la enzima nitrogenasa. Estos resultados muestran
67
que las BFNA-HCs pueden ser una opcin para biorremediar suelos contaminados por
keroseno y que su aplicacin inducir la incorporacin de N en los suelos afectados.
Palabras clave: Suelos contaminados, hidrocarbonoclastas, Phaseolus vulgaris L., biorremediacion.
SUMMARY
There are only few reports on free living bacteria population in soils polluted by fuels like
kerosene. At present, it is unknown if the presence of a hydrocarbon affects, the activity of this
group of soil microorganisms and therefore, the incorporation of atmospheric nitrogen to the
soil. In the present research, the effect of kerosene on the nitrogen fixing ability by this
bacterial group, including free living (FLB) and free living hydrocarbonoclast bacteria
(FLHB) in Phaseolus vulgaris L was evaluated. Two factors were considered: presence of
plant (with and without plant) and four concentrations of kerosene (0, 500, 2500 and 5000 mg
kg-1). In greenhouse, the experiment involved therefore, eight treatments completely
randomized with six replications. Roots and soils were sampled 19, 47 and 83 days after
transplanting for evaluated populations in the rizoplane, rizosphere and soil without plant.
The acetylene reduction of FLHB was also evaluated in order to have an estimation of the
possible atmospheric nitrogen fixation. The presence of kerosene did not dramatically affect
neither the growth of FLB and FLHB nor the atmospheric nitrogen fixation. The highest
population of FLB, 410 x 104 CFU g-1 root, was present in the rhizoplane with 2500 mg kg-1 of
kerosene, while the highest population of FLHB, 299 x 104 CFU g-1 soil, was recorded in the
rhizosphere, with 500 mg kg-1 of kerosene. Twenty one FLHB strains were isolated and 29%
of the isolates showed nitrogenase enzyme activity. These results show that the FLHB could
be an option for the bioremediation of polluted soils by kerosene and induce the incorporation
of N in the soil.
Index words: polluted soils, hydrocarbonoclast, Phaseolus vulgaris L., bioremediation.
68
INTRODUCCIN
En Mxico, la contaminacin del suelo por compuestos derivados del petrleo como el
keroseno, ocurre durante su transporte, por rupturas de los ductos; los derrames de estos
combustibles ocasionan graves problemas sobre todo si el suelo es permeable porque la
contaminacin puede extenderse rpidamente (Saval, 1997; Saval, 1998). Como alternativa de
limpieza de los suelos contaminados, la fitorremediacin utiliza microorganismos y plantas
eficientes en la degradacin de compuestos orgnicos. Se ha sealado (Fletcher, 1994) que las
bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico de vida libre ej: especies del gnero Pseudomonas
pueden utilizarse para este fin; en cuanto a las plantas, algunos autores utilizan al frijol
(Anderson et al., 1993).
Se conoce que la degradacin de materiales orgnicos en ambientes naturales es mediada

principalmente por dos grupos de microorganismos: bacterias y hongos. Las bacterias
representan el grupo de microorganismos con mayor diversidad y se encuentran en todos los
ambientes vivos (Walton et al., 1994). Adems, tienen un crecimiento y metabolismo rpido,
plasticidad gentica y se ajustan rpidamente a una gran variedad de ambientes, caractersticas
que hacen que sea este el grupo microbiano ms utilizado en los procesos de biorremediacin
(Baker y Herson, 1994).
Entre los gneros bacterianos ms conocidos en cuanto a su eficiencia en la degradacin de

combustibles derivados del petrleo se encuentran Pseudomonas, Acinetobacter,
Agrobacterium, Flavobacterium, Arthrobacter (Riser-Roberts, 1998), Aeromonas,
Corynebacterium y Bacillus (Atlas, 1984). De stos, Pseudomonas, Agrobacterium y Bacillus
se caracterizan, adems, por tener la capacidad de fijar N atmosfrico (Rodrguez, 1995).
Estos gneros se estudian como microorganismos biodegradadores de petrleo o sus
derivados, o como bacterias fijadoras de N atmosfrico (BFNA), pero son pocos los informes
que los refieren como microorganismos que realizan ambas funciones al mismo tiempo. Es
importante conocer si este grupo de bacterias puede fijar N atmosfrico en suelos
contaminados por productos derivados de petrleo, ya que la incorporacin de este elemento al
suelo servira como nutrimento para otros microorganismos degradadores y, en el caso de
presencia de plantas, tambin les sera til (Frick et al., 1999).
69
En relacin con lo anterior, Perez-Vargas et al. (2000) estudiaron la capacidad de las BFNA
en la utilizacin de keroseno como nica fuente de carbono y encontraron que stas lograban
reducir hasta en 75% el total de los hidrocarburos del keroseno. Supieron que este grupo de
bacterias fijaba de 4 a 183 nmol N2 3E09-1 bacteria-1 da-1 (nanomoles de nitrgeno
atmosfrico fijado por un exponencial de bacterias 1x109 por da). Algunos reportes indican
que las BFNA de vida libre se encuentran ampliamente distribuidas en muchos ecosistemas de
suelo (Knowles y Barriquio, 1999). Aos atrs, Bossert y Bartha (1984) reportaron que los
suelos crnicamente contaminados con petrleo crudo son capaces de sostener abundantes
poblaciones de bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre.
Para obtener ms datos sobre el comportamiento de las BFNA de vida libre en un suelo
contaminado y conocer si su facultad de fijar N atmosfrico no es impedida, el presente
trabajo estudi el efecto que el keroseno (un complejo de hidrocarburo derivado del petrleo)
tiene sobre la actividad de las poblaciones de BFNA de vida libre en la rizosfera de frijol.
MATERIALES Y MTODOS
Sustrato y macetas utilizadas e incorporacin del keroseno al suelo.
El suelo utilizado present las siguientes caractersticas fsicas y qumicas: pH, 8.3;
conductividad elctrica, 0.18 dS m-1; materia orgnica, 0.41%; nitrgeno total, 0.04%; fsforo
Olsen, 16 mg kg-1; potasio intercambiable, 0.55 meq/100 g suelo; y textura franco-arcilloso-
arenosa. Se utilizaron macetas de plstico con capacidad de 4 kg de suelo, las cuales no se
perforaron para evitar la prdida del keroseno en el momento del riego. El suelo no se
esteriliz para asegurar la presencia de los microorganismos que se encuentran de manera
natural. Al mismo, se le aplic un complejo de hidrocarburos (keroseno) en concentraciones
de 0, 500, 2500 y 5000 mg kg-1 de suelo, el cual se mezcl con agua (el keroseno y el agua se
sometieron a agitacin rpida para lograr una mezcla homognea y formar una emulsin). Las
diferentes concentraciones de keroseno se aplicaron con la finalidad de observar si ste,
afectaba en nmero a las poblaciones de las bacterias en estudio.
70
Trasplante y riego. Se utiliz la variedad de frijol Michoacn 12-A3, caracterizada por su

resistencia a la sequa y por ser una variedad rendidora (Benitez y Ferrera, 1990). Las
plntulas de frijol se trasplantaron a los ocho das de edad, al centro de la maceta. El riego se
aplic cada tercer da, durante los 83 das que permanecieron las plantas en invernadero.
Diseo experimental y anlisis estadstico. El experimento consisti de ocho tratamientos.

En los primeros cuatro, se evaluaron poblaciones de BFNA y BFNA-HCs en la zona del
rizoplano y la rizosfera; en los cuatro restantes, se evaluaron poblaciones de BFNA y BFNA-
HCs en suelo sin planta (Cuadro 1). Para cuantificar los microorganismos del rizoplano, se
muestrearon las races de las plantas junto con el suelo fuertemente adherido a ella; en tanto
que para la cuantificacin de microorganismos de la rizosfera se muestre el suelo cercano a la
raz de la planta de frijol. Cada tratamiento tuvo seis repeticiones.
Cuadro 1. Tratamientos y repeticiones establecidos para el experimento.
_______________________________________________________
Descripcin del tratamiento Repeticiones
_______________________________________________________
1. Sin keroseno con planta 6
2. 500 mg kg-1 de keroseno con planta 6
5. Sin keroseno sin planta 6
6. 500 mg kg-1 de keroseno sin planta 6
-1
7. 2500 mg kg de keroseno sin planta 6
8. 5000 mg kg-1 de keroseno sin planta 6
_______________________________________________________
71
El diseo experimental fue completamente al azar. Durante el experimento se realizaron tres

muestreos: para evaluar BFNA de vida libre a 19, 47 y 83 das despus del trasplante (ddt), y
para evaluar BFNA-HCs a 47 y 83 ddt. Los muestreos se realizaron de la siguiente manera:
en las macetas que presentaron planta, primero se tom suelo circundante a la raz para
determinar en ste las poblaciones de bacterias de la rizosfera. Posteriormente, se cosecharon
las plantas de frijol y despus se separ la raz del tallo, evitando la prdida del suelo
fuertemente adherido a la misma (en esta raz se determinaron las poblaciones del rizoplano).
Por ltimo, en las macetas sin planta, se tom suelo para determinar poblaciones de bacterias
no rizosfricas. Para la realizacin del anlisis estadstico y la comparacin de medias, se
utiliz el programa Statistical Analysis System (SAS Institute, 1989).
Determinacin de poblaciones de BFNA y BFNA-HCs.
Las evaluaciones se realizaron cuantificando el nmero de unidades formadoras de colonias

por gramo de raz (UFC g-1 raz) para el caso de poblaciones de bacterias del rizoplano, y por
gramo de suelo (UFC g-1 suelo) para el caso de poblaciones de bacterias de la rizosfera y suelo
sin planta, de acuerdo con la tcnica de dilucin y conteo en placa, propuesta por Clark (1965)
y Parkinson (1982). Para el crecimiento de BFNA se utiliz el medio de cultivo Rennie (1981)
y para el crecimiento de BFNA-HCs, el medio de cultivo modificado Rennie (1981), cuya
fuente de carbono se sustituy por keroseno (Cuadro 2).
La incorporacin del keroseno (como fuente de carbono) a la caja de Petri que ya contena
medio de cultivo Rennie modificado, se realiz impregnando un disco de papel filtro con 2.5
mL de keroseno, despus se coloc en la tapa de la caja de Petri y se procedi a colocar la tapa
de la caja de Petri sobre la contratapa (Figura 1). La siembra se realiz por triplicado; al centro
de cada una de las cajas de Petri se agreg 0.1 mL de las diluciones 10-4, 10-5 y 10-6 y se
dispers con un tringulo de vidrio estril. El conteo de poblaciones de BFNA se hizo a los
cuatro das y el de BFNA-HCs a los ocho das de incubacin de las cajas Petri a 28 C.
Posteriormente, las colonias de bacterias que presentaron mejor crecimiento se aislaron y
purificaron hasta obtener la presencia de colonias multiplicadas procedentes de una sola clula
(Granados y Villaverde 1997; Velzquez, 1998).
72
Cuadro 2. Medios de cultivos utilizados para evaluar poblaciones de BFNA y BFNA-

HCs.
Medio de cultivo Rennie (1981) BFNA Medio de cultivo Rennie modificado (1981) BFNA-
HCs
Solucin A Solucin A
K2HPO4 0.8 g K2HPO4 0.8 g
KH2PO4 0.2 g KH2PO4 0.2 g
NaCl2 0.1 g NaCl2 0.1 g
NaFeEDTA 0.028 g NaFeEDTA 0.028 g
Na2MoO4.2H2O 0.025 g Na2MoO4.2H2O 0.025 g
Extracto de levadura* 0.025 g Agua destilada 900 mL
Manitol* 5.0 g Agar 15 g
Sacarosa* 5.0 g
Lactato de sodio (60% v/v)* 0.5 mL
Agua destilada 900 mL
Agar 15 g
Solucin B Solucin B
MgSO4.H2O 0.2 g MgSO4.H2O 0.2 g
CaCl2 0.06 g CaCl2 0.06 g
Agua destilada 100 mL Agua destilada 100 mL
pH del medio de cultivo 7.0 pH del medio de cultivo 7.0
Fuente de carbono en el medio de cultivo, Incorporar como fuente de carbono 2,5mL de

keroseno impregnado en papel filtro (Figura 1).
73
Tapa de la caja de Petri con el papel filtro

impregnado con 2.5 mL de keroseno.
Base de la caja de Petri con 20 mL de

medio mineral Rennie, modificado
(1981).
Figura 1. Incorporacin del keroseno a la caja de petri que contena el medio de Rennie,
modificado (1981).
Estimacin de la actividad nitrogenasa por el mtodo de reduccin de acetileno in vitro

en los aislamientos de bacterias.
La estimacin de la actividad de la enzima nitrogenasa por el mtodo de reduccin de
acetileno se realiz de la siguiente manera: en tubos que contenan 2 mL de medio lquido de
carbn combinado se introdujo una asada de las cepas aisladas y purificadas, luego, los tubos
se incubaron a 28 C durante 24 a 48 h en agitacin constante a 240 rpm. Posteriormente, se
ajust el nmero de bacterias a una concentracin de 1.2x109 bacterias mL-1 de acuerdo con la
escala de McFarland (Campbell et al., 1970). Despus, se prepararon viales de 30 mL de
capacidad con 5 mL de medio de cultivo semislido de carbn combinado. Se inocularon tres
viales por cepa (representando tres repeticiones) que se taparon con tapones de algodn e
hilaza, cada uno con 0.2 mL de la suspensin bacteriana obtenida en el cultivo anterior; a
continuacin, se incubaron a 28 C por 48 h. A continuacin, se cambio el tapn de algodn
por uno de hule, sellado a presin con un anillo de aluminio, y con una jeringa se extrajo 10%
del volumen de aire interno, el cual se reemplaz con acetileno.
Los viales se incubaron a la misma temperatura por 24 h y, finalmente, se extrajo de cada vial
una muestra de 5 cm3 del gas, el cual se deposit en tubos al vacio (vacutainer) (Hardy et al.,
1973). Las muestras obtenidas (por cada cepa tres repeticiones) se analizaron inyectando 0.5
mL de stas a un cromatgrafo de gases Varian modelo 1440, con detector de ionizacin de
74
flama de hidrgeno y columna de acero inoxidable de 2 m de largo y 1/8 pulgadas de

dimetro, empacada con Porapak N, para medir la cantidad de acetileno reducido y de esta
forma estimar la actividad y presencia de la enzima nitrogenasa. Para conocer cual aislamiento
present mayor actividad y presencia de la enzima, se analizaron estadsticamente los
resultados obtenidos de cada cepa mediante una comparacin de medias, utilizando el
programa Statistical Anlysis System (SAS Institute, 1989).
RESULTADOS Y DISCUSIN
Poblaciones de Bacterias Fijadoras de N Atmosfrico de vida libre (BFNA). Los anlisis

estadsticos mostraron diferencias altamente significativas entre tratamientos (Tukey, p =
0.05). De las cuatro concentraciones de keroseno incorporadas al suelo, la de 2500 mg kg-1
present las mayores poblaciones de BFNA en los tres muestreos evaluados y fueron las zonas
del rizoplano y la rizosfera las que presentaron las ms altas poblaciones de este grupo
microbiano (Figura 2). Esta conducta es muy conocida, Darrah (1991) mediante una
simulacin realiz un modelo de la rizosfera para conocer la dinmica de poblaciones
alrededor de las races y la liberacin de exudados solubles; encontr que las poblaciones en la
rizosfera de una raz en crecimiento podan variar considerablemente con la distancia a lo
largo de la misma, dependiendo de la liberacin de los exudados radicales. Brimecombe et al.
(2001) mencionaron que por efecto de los exudados radicales, las poblaciones microbianas
tienden a habitar en mayor nmero cerca de la raz, ya que favorecen a que todas las sustancias
que excreta la raz sean utilizadas por los microorganismos en el suelo para su crecimiento.
En cuanto a los muestreos realizados, se supo que a 19 ddt las poblaciones de BFNA eran
mayores en las tres zonas de la raz estudiadas, respecto a las obtenidas en los muestreos
realizados a 47 y 83 ddt en las mismas zonas de la raz; y que al paso del tiempo disminuan
considerablemente al aumentar la concentracin del keroseno, hasta llegar a desaparecer en la
concentracin ms alta 83 ddt. En lo referente a la zona de la raz estudiada, se not que la
zona del rizoplano y la rizosfera presentaron las mayores poblaciones de este grupo de
bacterias y se observ tambin que en general las poblaciones aumentaban al crecer la
75
concentracin de keroseno, sobre todo en el primer muestreo para la zona del rizoplano
(Figura 2).
450 500 mg kg-1 keroseno Rizoplano

450 0 mg kg-1 keroseno Rizoplano Rizosfera
400 ab
400 Rizosfera Suelo no
Suelo no 350
350 rizosfrico
1 x 10 4 UFC
abc
rizosfrico 300
300
1 x 104 UFC
de
250 def
cde
250 efg de de
def
hijk
fg
def 200 gh fg def fg
200 ghij hi
g hi ghij h
fg efg 150
150 fgh jk k
h hijk
ijk 100 ghi
100 ijk jk jk
hijk 50 k
50
0
0
19 47 83
19 47 83
Das despus del trasplante Das despus del trasplante
-1
2500 mg kg keroseno 5000 mg kg-1 keroseno Rizoplano
450 Rizoplano 450
a
Rizosfera a Rizosfera
400 ab 400 Suelo no
Suelo no
350 350 abc rizosfrico
rizosfrico
1 x 10 4 UFC
1 x 10 4 UFC
300 bcd 300

250 250 cd
de cde de
ef de def ef
200 fg
fg 200 fg
g ghij
hi
150 hij hi 150 jk
jk
100 gh
100
i
50 ijk ijk
k 50 k
0 0
19 47 83 19 47 83
Diferencia mnima significativa = 131

Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey, p = 0.05)
UFC = Unidades Formadoras de Colonias
Figura 2. Bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre en un suelo contaminado con
keroseno.
76
Por el nmero de unidades formadoras de colonias obtenidas, se concluye que la incorporacin

del complejo de hidrocarburo al suelo no limit el nmero de poblacin de BFNA, a 19 ddt.
Esta conclusin se obtuvo despus de analizar algunos resultados de investigadores como
Tuhzxlaacute et al., 2000; quienes al evaluar poblaciones microbianas hidrocarbonoclastas
obtuvieron 6.6 x 103 a 1.2 x 105 UFC por g-1 de suelo seco y en este trabajo se obtuvieron
poblaciones hasta de 4 x 106 (representado en la Figura 2 como 409 x 104 UFC g-1 de suelo).
Poblaciones de Bacterias Fijadoras de N Atmosfrico de Vida Libre Hidrocarbonoclastas

(BFNA-HCs).
Al analizar estadsticamente las poblaciones de BFNA-HCs, se obtuvieron diferencias
altamente significativas entre tratamientos (Tukey, p = 0.05). Al igual que con el grupo de
BFNA, el anlisis estadstico mostr que la concentracin de 500 mg kg-1 del complejo de
hidrocarburos present las mayores poblaciones de BFNA-HCs en los dos muestreos. Con
respecto al tiempo, a 47 ddt las poblaciones fueron mayores que las obtenidas a 83 ddt donde,
stas disminuyeron considerablemente en el suelo sin planta.
En lo referente a la zona de la raz estudiada, la zona del rizoplano y la rizosfera

presentaron mayores poblaciones de BFNA-HCs con respecto a la zona del suelo sin planta.
Las poblaciones de este grupo de bacterias se incrementaron con la incorporacin del
complejo de hidrocarburos a 47 ddt en la zona del rizoplano y la rizosfera (Figura 3). Al
respecto, Perez-Vargas et al. (2000) mencionaron que las BFNA tienen la caracterstica de
fijar nitrgeno atmosfrico y de utilizar el complejo de hidrocarburos como nica fuente de
carbono. Estos investigadores encontraron que las BFNA-HCs reducan hasta 75% del total
de los hidrocarburos que forman al keroseno.
Se sabe que las BFNA-HCs logran vivir en suelos contaminados con hidrocarburos
ms txicos que el keroseno; as, Hernndez et al. (2000a), al estudiar las poblaciones de
BFNA-HCs en suelos que presentaron 2500 mg kg-1 de petrleo crudo, encontraron
poblaciones hasta de 65 x 106 UFC g-1 de suelo, superiores a las reportadas en este ensayo. Al
respecto, Bossert y Bartha (1984) mencionaron que suelos de Nigeria contaminados con
77
petrleo crudo deficientes en nitrgeno, son capaces de sostener abundantes poblaciones de

microorganismos asimbiticos fijadores de nitrgeno atmosfrico. Esta conclusin la
obtuvieron despus de realizar conteos y aislamientos de poblaciones microbianas en dos
suelos agrcolas uno contaminado crnicamente y el segundo recientemente contaminado, en
el primero encontraron 83% de colonias de BFNA y en el segundo 40% de colonias de BFNA.
Los autores tambin citaron que el establecimiento de este grupo microbiano en los suelos
afectados por petrleo mejora significativamente la cantidad de nitrgeno presente en el suelo.
450 Rizoplano Rizoplano

0 mg kg-1 keroseno 450 500 mg kg-1 keroseno
400 Rizosfera Rizosfera
400
Suelo no Suelo no
350 350
rizosfrico a rizosfrico
300
1 x 104 UFC
1 x 104 UFC
abcd 300
250 bcde
250
200 de 200 def
fgh def
150 f 150
100 100 ghi
i i
50 i 50 i
0 0
47 83 47 83
450 Rizoplano
450 Rizoplano 5000 mg kg-1 keroseno
2500 mg kg-1 keroseno 400 Rizosfera
400 Rizosfera
Suelo no
Suelo no 350
350 rizosfrico
rizosfrico ab
1 x 10 UFC
abc 300
1 x 104 UFC
300
abc 250 abcd
250 cdef
4
200
200
efg 150
150
100 i
100 hi i
i 50
50 i
0
0
47 83
47 83
Das despus del trasplante
Das despus del trasplante
Diferencia mnima significativa = 78

Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey, p = 0.05)
UFC = Unidades Formadoras de Colonias
Figura 3. Bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre hidrocarbonoclastas en un

suelo contaminado con keroseno.
78
En general, se obtuvieron mayores poblaciones de BFNA que de BFNA-HCs; sin duda

una de las causas fue que las BFNA-HCs se sometieron a mayores cantidades de keroseno,
principalmente cuando se evaluaron las poblaciones en el medio de cultivo Rennie modificado
(1981), donde la nica fuente de carbono fue el complejo de hidrocarburos.
En comparacin con el suelo sin planta; la zona del rizoplano y la rizosfera presentaron las
mayores poblaciones, tanto de BFNA como de BFNA-HCs. Lo anterior ocurre porque en las
zonas ms cercanas a la raz, los microorganismos aprovechan eficientemente los compuestos
orgnicos producidos en los exudados radicales, entre los que se encuentran carbohidratos,
vitaminas, enzimas, aminocidos, etc. (Schnoor et al., 1995), los cuales proporcionan el
carbono suficiente para mantener poblaciones microbianas hasta de 1 x 109 g-1 en el suelo
rizosfrico (Paul y Clark, 1989). Cuando se evalan poblaciones microbianas en las zonas de
influencia de la raz (rizoplano, rizosfera y suelo sin planta) contaminadas por compuestos
orgnicos, los resultados muestran que las zonas ms cercanas a la misma son las que
presentan poblaciones ms altas (Lee y Banks, 1993; Haby y Crowley, 1996; Hernndez et al.,
2000 b).
Actividad de la nitrogenasa de los aislamientos de las BFNA hidrocarbonoclastas.
El anlisis estadstico mostr diferencias altamente significativas entre tratamientos

(Tukey, p = 0.05). A 21 cepas se les aplic la actividad de la enzima nitrogenasa; de ellas,
29% present actividad en la fijacin de nitrgeno con una alta variabilidad entre cepas, desde
0.0033 hasta 19.106 nmol de etileno producido por da (Cuadro 3).
Perez-Vargas et al. (2000) obtuvieron resultados superiores cuando estudiaron la

capacidad de BFNA, aisladas de rizosfera de frijol, al utilizar keroseno (complejo de
hidrocarburos) como nica fuente de carbono; dichos autores encontraron una actividad de la
enzima nitrogenasa que fluctuaba de 4 a 183 nmol N2 3E09-1 bacteria-1 da-1. La diferencia que
existi en el estudio realizado por Perez-Vargas et al. (2000), con respecto a este ensayo, fue
que calcularon la actividad de la nitrogenasa de ocho consorcios microbianos y en este trabajo
se valor la actividad de la nitrogenasa por cepas, es decir, por especie; lo anterior sugiere que
79
los consorcios de bacterias fijan con mayor eficiencia nitrgeno atmosfrico que una sola
especie de bacteria.
Cuadro 3. Actividad de la nitrogenasa de aislamientos de BFNA hidrocarbonoclastas.
____________________________________________________________________________
Cepas nmoles C2H4 24 h-1 vial-1 Cepas nmoles C2H4 24 h-1 vial-1
____________________________________________________________________________
BFNAH5 a 19.1060 BFNAH9 d INSIG.
BFNAH6 b 15.1335 BFNAH12 d INSIG.
BFNAH7 c 12.2064 BFNAH14 d INSIG.
BFNAH10 d 0.1024 BFNAH15 d INSIG.
BFNAH1 d INSIG. BFNAH18 d INSIG.
BFNAH8 d INSIG.
____________________________________________________________________________
Medias con igual letra no difieren estadsticamente (Tukey, p = 0.05). DMS = 0.9344, C2H4= Etileno
BFNA HCs = Bacteria fijadora de nitrgeno atmosfrico hidrocarbonoclastas.
INSIG. = Insignificante (menor que 0.0033 nmoles)
La importancia de estas cepas estudiadas en el presente trabajo, es que tienen un alto

potencial para utilizar a los hidrocarburos como fuente de carbono, por lo cual son muy tiles
en los programas de biorremediacin. En relacin con este tema, Bossert y Bartha (1984)
mencionaron que las bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre presentes en los suelos
contaminados proveen significantes cantidades de nitrgeno a suelos que carecen de este
nutrimento y, como consecuencia, provocan incrementos en las poblaciones de otros
microorganismos biodegradadores, lo cual favorece la biorremediacin del suelo contaminado.
80
CONCLUSIONES
Las bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico hidrocarbonoclastas son capaces de

fijar N atmosfrico en suelos contaminados con keroseno, por lo que se sugiere incorporar a
este grupo microbiano en los suelos afectados por este hidrocarburo.
Las poblaciones de bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico y bacterias fijadoras de

nitrgeno atmosfrico hidrocarbonoclastas son mayores en la zona rizosfrica que en el suelo
sin planta. Lo cual indica que, en suelos contaminados por keroseno, es importante incorporar
plantas al sistema para estimular a mayores poblaciones en el sitio afectado.
En la rizosfera de frijol contaminada con keroseno se encuentran numerosas

poblaciones de bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico y bacterias fijadoras de nitrgeno
atmosfrico hidrocarbonoclastas, mismas que actan como microorganismos biodegradadores.
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85
13.2 BACTERIAS Y HONGOS HIDROCARBONOCLASTAS DE RIZOSFERA

FRIJOL Y MAZ, EN UN SUELO CONTAMINADO CON PETRLEO
Hidrocarbonoclast Bacterias And Fungi Of The Rhizosphere Of Bean And Corn, In a
Soil With Petroleum Pollution
Elizabeth Hernndez Acosta1, Ronald Ferrera-Cerrato2, Mara del Carmen Gutirrez

Castorena3, Refugio Rodrguez Vzquez4 , Juan Enrique Rubios Panta 2y Luis
Fernndez Linares4
1
Universidad Autnoma Chapingo, elizahac@yahoo.com.mx; 2 Colegio de
Postgraduados,castor@colpos.mx,jerpkike@colpos.mx; 3 Centro de Investigacin de Estudios
Avanzados-Instituto Politcnico Nacional, rrodrig@mail.cinvestav.mx.4Instituto Mexicano del
Petrleo.
RESUMEN
Cuando la planta se encuentra presente en suelos contaminados con petrleo se crea un
hbitat ideal para los microorganismos que utilizan al compuesto como fuente de carbono,
necesario para sus funciones metablicas. Las poblaciones microbianas se multiplican
rpidamente en la zona rizosfrica, aumentando las posibilidades de desaparicin del
contaminante. Con la finalidad de abundar ms en este tema, el presente trabajo tuvo como
objetivo estudiar la relacin de bacterias hidrocarbonoclastas (HCTs) y hongos HCTs
aislados de rizosferas de plantas que crecen en los suelos de la Refinera de Minatitln
Veracruz (Chamaecrista nictitans y Panicum sp) despus de ser incorporadas en un suelo
contaminado con 25 000 mg kg-1 de petrleo crudo donde posteriormente se crecieron plantas
de frijol (Phaseolus vulgaris L.) y maz (Zea mays L.). Tambin se estudio la desaparicin del
contaminante por efecto de la interaccin frijol-maz-bacteria y hongo hidrocarbonoclastas. En
invernadero, se establecieron tres experimentos (frijol (F), maz (M) y frijol-maz (FM)
asociados) distribuidos en un diseo experimental completamente al azar; cada experimento
tuvo seis tratamientos: a) bacteria + planta, b) bacteria + hongo + planta, c) sin
microorganismos + planta, d) bacteria sin planta, e) bacteria + hongo sin planta y f) sin
microorganismos, sin planta), con seis repeticiones. Se evaluaron poblaciones microbianas y la
desaparicin de petrleo a 28 y 48 das despus de la siembra (dds). Los resultados mostraron
mayores poblaciones de bacterias HCTs (6.03 x 108) y hongos HCTs (2.75 x 105) as como
86
el mayor porcentaje de desaparicin del petrleo (49.16%) en la rizosfera frijol-maz +

bacteria + a 48 dds. Se mostr la importancia que tienen los microorganismos
hidrocarbonoclastas rizosfricos en la desaparicin de petrleo.
Palabras clave. Suelos contaminados, rizosfera, Chamaecrista nictitans, Panicum sp., Phaseolus
vulgaris L. Zea mays L.
SUMMARY
When the plant is growing in soils contaminated with petroleum it is created an ideal
habitat for the development of microorganisms that uses petroleum as source of carbon,
necessary for their metabolic functions. Microorganisms multiply quickly in the rizosphere,
increasing the possibilities of disappearance of the pollutant. With the purpose of knowing
more about this topic, the present work had the objective of studying the relationship of
hidrocarbonoclast (HCTs) bacteria and fungi HCTs isolated from rizosphere of plants
(Chamaecrista nictitans and Panicum sp) growing in a polluted soils in the oil refinery
Minatitln, Veracruz. The hidrocarbonoclast (HCTs) bacteria and HCTs fungi were
incorporated in a polluted soil with 25 000 mg kg-1 of crude petroleum which plants of bean
(Phaseolus vulgaris L) and corn (Zea mays L.) were sowed. The disappearance of the
pollutant by effect of the interaction bean-corn- hidrocarbonoclast (HCTs) bacteria and
HCTs fungi were studied. Three experiments greenhouse were stabilised (bean (F), corn (M)
and bean-corn (FM) associates) and arranged in an experimental design completely at random.
Each experiment had six treatments: a) bacteria + plant, b) bacteria + fungi + plant, c) without
microorganisms + plant, d) bacteria without plant, e) bacteria + fungi without plant and f)
without microorganisms, without plant), everything was replicated six times. Microbial
populations were evaluated and the disappearance of petroleum at 28 and 48 days after sowing
(das). The results showed the higher populations of HCT's bacteria (60.3 x 107) and HCT's
fungi (27.5 x 104) as well as the higher percentage of disappearance of the petroleum (49.16%)
in the rizosphere of bean-corn + bacteria to 48 das. The importance of hydrocarbonoclast
microorganisms in the rizosphere for disappearance of petroleum in contaminated soils it was
demonstrated.
Index words. Soils polution, rizosphere, Chamaecrista nictitans, Panicum sp, Phaseolus vulgaris L.,
Zea mays L.
87
INTRODUCCIN
En suelos contaminados con hidrocarburos, la biorremediacin puede llevarse a cabo

con los microorganismos que habitan el suelo, en la rizosfera de plantas ah establecidas, esto
ltimo es mejor conocido como fitorremediacin. Durante la prctica de la fitorremediacin se
utilizan plantas para recuperar suelos contaminados por compuestos orgnicos como el
petrleo; ya que stas remueven y destruyen a los contminantes (Anderson y Walton, 1995).
Lo anterior sucede debido a que en las races de las plantas ( zona rizosfrica) existe una
proliferacin de microorganismos del suelo para llevar a cabo la degradacin de compuestos
orgnicos. As se ha demostrado la capacidad que tienen las plantas y su rizosfera en la
remocin de contaminantes, como los insecticidas y herbicidas, presentes en el suelo ( Walton
y Anderson, 1990)
La fitorremeiacin se aplica en pases desarrollados, como Estados Unidos y Canad

y los resultados muestran la capacidad de la planta, en asocacin con la microflora del suelo,
para eliminar la contaminacin, pirncipalmente de compuestos orgnicos ( Cunningham er al.,
1996; Siciliano y Germida, 1998). Se han desarrollado experimentos en laboratorio (Boyajian
y Carreira, 1997) semillero e invernadero (Radwan et al., 1995; Wilstse et al., 1998) con
plantas de importancia agrcola, como el maz (Amadi et al., 1993; Hernandez, 2002) y frijol
(Hernndez et al., 2003), para mostrar como se recuperan suelos contaminados con petrleo y
sus derivados. Los resultados muestran la existencia de microorganismos rizosfricos
altamente biodegradadores.
En Mxico, esta lnea de investigacin se inici recientemente y no se encontraron

artculos formales donde la comunidad cientfica de a conocer que es lo que se ha estudiado y
cuales son los objetivos alcanzados. El grupo de investigacin sobre aspectos de
fitorremediacin del Colegio de Postgraduados inicia la publicacin de sus resultados
obtenidos en los trabajos experimentales y ste es uno de ellos. sta investigacin tuvo como
objetivo estudiar la interaccin de bacterias y hongos hidrocarbonoclastas (HCTs) en las
rizosferas de frijol y maz, en la desaparicin de petrleo crudo en un suelo, para proponer una
tecnologa de limpieza que pueda aplicarse en las zonas petroleras de Mxico.
88
89
90
cabo dos veces: en cada prueba se realizaron observaciones a 3, 9, 14, 30 y 60 das despus de
la inoculacin. Se aplic una escala subjetiva (la cual consisti de evaluar a los 3, 9, 14 y ms
de 14 das despus de la siembra visualmente la desaparicin de petrleo crudo),
posteriormente se seleccionaron los mejores aislamientos, de acuerdo con el estado de
degradacin del petrleo utilizando los parmetros siguientes: a) excelente (a tres dds), b)
buena (a nueve dds), c) mediana (a 14 dds), y d) mala (ms de 14 dds).
Caracterizacin de los Aislamientos de Bacterias y Hongos Hidrocarbonoclastas.

El grupo de bacterias HCTs aisladas se le aplic la tcnica de tincin de Gram
(Velzquez et al., 1998), despus se evalu: morfologa colonial, morfologa
microscpica, movilidad (Milln y Gama et al., 1998) y cintica microbiana (Granados y
Villaverde, 1997). Adems al grupo de hongos HCTs aislados se le evalu la morfologa
colonial (Chvez y Gama, 1998) y se caracterizaron a nivel gnero con la tcnica de Ridell
(Ridell, 1950).
Preparacin de Inculo de VBacterias Hidrocarbonaclastas y Hongos

Hidrocatbonaclastas.
Se utiliz el sistema estandarizado API 20 NE sistema de identificacin de bacilos Gram
negativos que no pertenecen a la familia de las Enterobacterias, el cual combina ocho tests
convencionales y 12 tests de asimilacin (API 20 EN, 2000). Cada aislamiento de bacterias
HCTs y hongos HCTs fueron sembradas en tres frascos de vidrio con capacidad de 250 mL,
los cuales adems contenan 50 mL de medio de cultivo mineral (en estado lquido) especfico
y petrleo crudo maya como fuente de carbono. En los aislamientos de bacterias HCTs, se
consider el tiempo de generacin (22 horas en promedio), para obtener al inculo en la mayor
fase de crecimiento, posteriormente se volvi a colectar el medio de cultivo para utilizarlo en
el experimento de invernadero. Los aislamientos de hongos HCTs permanecieron en
incubacin por ocho das, tiempo necesario para que germine un nmero significativamente
alto de esfrulas o hifas, despus se colect el medio de cultivo y, al igual que en las bacterias
HCTs, se utiliz en la etapa experimental. A los dos inculos se les realizaron diluciones(
colectados y homegeneizados),se les realizaron diluciones y se sembraron en cajas de Petri
91
para conocer las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) mL-1, de acuerdo con la tnica de
dilucin y conteo en placa propuesta por (Clark,1965; Parkinson,1982).
Preparacin del sustrato.

Debido a la dificultad de obtener nuevamente muestras de suelo de la refinera de
Minatitln, Veracruz por ser una zona federal; se utiliz como sustrato un suelo con textura
migajn arenosa, con un pH 7.8, M.O. extremadamente pobre (0.459 %), pobre contenido de
N (0.040 %), rico contenido de fsforo (11.04 mg kg-1), bajo contenido de potasio (0.340
meq/100 g), y con una capacidad de intercambio catinico de 9.15 meq/100 g, propiedades
que presentan los suelos contaminados de la Refinera.
Macetas, Preparacin del Sustrato y Llenado de las Macetas.

Las macetas que se utilizaron fueron envases de cerveza de 940 mL, cortados a la altura
del cuello, posteriormente se le agregaron 700 g de suelo. El petrleo crudo se mezcl con el
suelo y se utiliz un recipiente de peltre y un tenedor de aluminio. Una vez obtenida la mezcla
uniforme, se coloc en la maceta de vidrio.
Siembra del Material Vegetal, Inoculacin y Cuidado de las Plantas en Invernadero.

Se sembraron semillas de frijol var. Negro INIFAP y una colecta de maz criollo
(MV06), por ser un material vegetal que crece adecuadamente en los suelos de Minatitln,
Veracruz. Al centro de cada maceta se sembraron las semillas, a una profundidad del doble de
su tamao. Posteriormente, se aplicaron 5 mL de inculo de bacterias HCTs con una carga de
50 x 109 UFC mL-1 y 5 mL de hongos HCTs con una carga de 40 x 107 UFC mL-1. Durante el
tiempo de estancia de las plantas en invernadero, stas se regaron con agua destilada de
acuerdo con el requerimiento de cada planta. Despus de 28 y 48 dds se realizaron muestreos
de suelo y raz para evaluar poblaciones microbianas y porcentajes de hidrocarburos totales no
degradados. La cosecha de experimentos se realiz a 48 dds.
92
Diseo Experimental y Anlisis Estadstico.

Se estableci un diseo experimental factorial 4 x 3 completamente al azar. Los
tratamientos se muestran en el Cuadro 1. Los ltimos tres tratamientos fueron los testigos para
los tres experimentos. Para la realizacin del anlisis estadstico y la comparacin de medias
se utiliz el programa Stadistical Analysis System (SAS Institute, 1989).
Cuadro 2. Tratamientos implemantados para el experimento en Invernadero

____________________________________________________
Tratamiento Repeticiones
____________________________________________________
1) frijol + bacteria 6
2) frijol + bacteria + hongo 6
3) frijol sin microorganismos 6
4) frijol suelo no contaminado 6
5) maz + bacteria 6
6) maz + bacteria + hongo 6
7) maz sin microorganismos 6
8) maz suelo no contaminado 6
9) frijol-maz + bacteria 6
10) frijol-maz + bacteria + hongo 6
11) frijol-maz sin microorganismos 6
12) frijol-maz suelo no contaminado 6
____________________________________________________
Anlisis Microbiolgico.
Se evaluaron poblaciones de bacterias y hongos HCTs a 28 y 48 dds en la rizosfera de

las plantas. Se utilizaron medios de cultivos minerales especficos para el crecimiento de
ambos grupos microbianos. El petrleo crudo se incorpor a la caja de Petri impregnando al
papel filtro, despus este se coloc en la tapa de la caja. Se hicieron diluciones decimales para
la siembra en cajas de Petri.
93
Las siembras en placa se realizaron a los 12 tratamientos y se analizaron

microbiolgicamente tres repeticiones. Cada repeticin se sembr por triplicado. Las cajas
sembradas se colocaron en bolsas de plstico para incubarlas a 28 C por ocho das y,
posteriormente, se llev a cabo el conteo.
Extraccin y Cuantificacin de Hidrocarburos Totales del Petrleo no Degradados.

Se utiliz el Mtodo EPA 3540A (modificado) extraccin soxhlet (EPA, 1994) para
obtener los hidrocarburos totales del petrleo (HTP) no degradados. Los hidrocarburos totales
del petrleo se determinaron con el Mtodo EPA 418.1 espectofotometra en infrarrojo
modificado (EPA, 1986). Las muestras se leyeron en el equipo infrarrojo Nicolet Nexus 470
FT-IR y se utiliz el programa de cmputo EZ OMNIC E. S. P. versin 5.1, perteneciente al
Instituto Mexicano del Petrleo.
Caracterizacin Morfolgica y Fisiolgica de bacterias HCTs y hongos HCTs.

Se obtuvieron 34 cepas de bacterias HCTs y 29 cepas de hongos HCTs, dando un
total de 63 cepas purificadas. stas fueron sometidas a pruebas de induccin a una mayor
degradacin y sumaron 30 cepas de bacterias HCTs y 16 de hongos HCTs; en la segunda
seleccin se obtuvieron cinco cepas de bacterias HCTs y cuatro de Hongos HCTs. Las nueve
cepas fueron las mejores degradadoras de petrleo crudo. De los cinco aislamientos de
bacterias tres se clasificaron como Pseudomonas sp. (bacilos Gram negativo, colonias de
borde redondo entero, forma circular, color crema, colonias pequeas (0.5 mm de dimetro),
alta movilidad y tiempo de generacin de 22 horas) y dos como Agrobacterium sp. (bacilos
Gram negativo, colonias de borde redondo y entero, forma circular convexa, color crema,
textura mucoide (0.2 a 4 mm de dimetro), alta movilidad, con un tiempo de generacin de 20
horas).
Especies de Pseudomonas sp. se reconocen como excelentes degradadoras de petrleo

crudo (Bundy et al., 1999; Mrquez-Rocha, 1999), hidrocarburos aromticos del petrleo y
compuestos aromticos halogenados (Walton et al., 1994a). Seabra (1999) mencion que la
94
adicin de bacterias del gnero Pseudomonas degradadoras de petrleo en un suelo

contaminado lleva a cabo eficientemente los procesos de biodegradacin, adems, son capaces
de realizar conversiones cometablicas (Cookson, 1995) en donde las reacciones pueden ser
hidroxilaciones, oxidaciones, denitrataciones, deaminaciones e hidrlisis (Alexander, 1999).
Una de las explicaciones que existe sobre las numerosas posibilidades de sobrevivencia
de Pseudomonas en ambientes adversos se relacionan con las poblaciones abundantes de este
grupo microbiano en el suelo (Walton et al., 1994a).
En el caso de Agrobacterium sp., en condiciones aerbicas, es capaz de degradar

hidrocarburos, compuestos aromticos halogenados e hidrocarburos aromticos (Walton et al.,
1994a; Walton et al., 1994b; Schneider y Billings, 1990). Sin embargo, su capacidad de
degradacin es superada por el gnero Pseudomonas.
En lo referente a los aislamientos de hongos, dos se identificaron como Trichoderma

sp. (borde irregular, forma circular, color verde, textura dura, colonia de 2.5 a 8.5 cm de
dimetro), uno Aspergillus sp. (borde ondulado, forma ondulada e irregular, color amarillo en
la fase inicial y caf en la etapa de madurez, textura spera, colonias hasta de 8 cm de
dimetro) y el ltimo, Mucor sp. (borde circular, forma redonda, color crema, textura suave,
elevacin acolchada, en ocho das invade la caja de Petri).
De los tres gneros identificados, Aspergillus sp. y Trichoderma sp. son los ms
reconocidos como hongos hidrocarbonoclastas. Cookson (1995) los identific como
degradadores de orgnicos contaminantes mediante el fenmeno de cometabolismo. Adems,
Paul y Clark (1996) los describen como microorganismos frecuentemente utilizados en la
biorremediacin de suelos. Por otra parte, se sabe que el gnero Aspergillus tiene la
particularidad de crecer rpidamente en petrleo crudo, y en algunos casos formar hifas muy
densas (April, 2000). Ms an Oudot et al., 1993 indican que ste gnero es capaz de degradar
de 30 a 35 % de hidrocarburos saturados y aromticos y 13% de resinas y asfaltenos
constituyentes del petrleo crudo.
95
Al igual que en este estudio, Radwan et al. (1995) aislaron, purificaron e identificaron
bacterias y hongos hidrocarbonoclastas de la rizosfera y suelo no rizosfrico de maz crecido
en un suelo arenoso contaminado con petrleo. stos investigadores tambin encontraron los
gneros Pseudomonas y Trichoderma como degradadores de petrleo crudo y mencionan que
estos pueden acumular en sus lpidos (cidos grasos) lo equivalente a una cadena larga del
sustrato alcano constituyente del petrleo y que son capaces de metabolizar los constituyentes
del petrleo an despus de asimilarlos.
En este estudio se conoci que Pseudomonas sp., Agrobacterium sp., Trichoderma

sp., Aspergillus sp. y Mucor sp. habitan los suelos de la Refinera de Minatitln, Veracruz. En
su mayora los autores citados reportan sus investigaciones en Estados Unidos y Canada donde
las condiciones de clima son diferentes a las del sureste de Mxico; por lo esta investigacin
aporta al conocimiento que las cepas mencionadas aisladas de la rizosfera de Chamaecrista
nictitans y Panicum sp. degradan petrleo crudo en suelos contaminados del trpico hmedo
de Mxico (Minatitln, Veracruz) y en rizosfras de plantas como el maz y frijol cuando son
inoculadas en suelos contaminados con petrleo crudo.
Poblaciones Microbianas de Bacterias y Hongos Hidrocarbonoclastas.

Las poblaciones resultantes de cada uno de los experimentos se analizaron
estadsticamente y se encontraron diferencias altamente significativas (Tukey p = 0.05) para el
grupo de bacterias HCTs y hongos HCTs. Las poblaciones ms altas de bacterias HCTs
(60.3 x 107 UFC g-1 de suelo) se encontraron a 48 dds en el tratamiento frijol-maz + Bacteria
+ Hongo, (Figura 1). A 28 dds, la poblacin ms alta (30.5 x 107 UFC g-1 de suelo) de este
grupo microbiano ocurri en el tratamiento maz + bacteria + hongo (Figura 2). Estos
resultados muestran que la presencia de la planta es fundamental en la estimulacin de altas
poblaciones microbianas hidrocarbonoclastas en suelos contaminados con petrleo crudo a
pesar de que el suelo era pobre en nutrimentos.
La poblacin de los hongos HCTs fue mayor (40.3 x 104 UFC g-1 de suelo) a 28 dds
en el tratamiento maz + bacteria + hongo; en tanto que a 48 dds, la poblacin ms alta (2.5 x
105 UFC g-1) se encontr en el tratamiento frijol-maz + bacteria + hongo (Figura 3). Lo
96
anterior indica que los hongos hidrocarbonoclastas fueron estimulados por la rizosfera de frijol
y maz provocando un aumento en las poblaciones a diferencia de los tratamientos que no
presentaron planta, donde sin duda la fuente de carbono proporcionada por el petrleo fue de
gran importancia. Al respecto Shann y Boyle 1994, mencionaron que el habitat de la rizosfera
del suelo generalmente sostiene el crecimiento de microorganismos logrando formar
ecosistemas ideales para la degradacin de xenobioticos orgnicos como el petrleo.
70
a DMS 28 dds = 60
60 a DMS 48 dds = 32
a
50
UFC x 10 7 g-1
ab
ab ab
40
a
30
b b b
b b
20 b
cd b c b
de cde de
10 cde cd
e e
0
Frijol + Frijol + Frijol Maz + Maz + Maz Frijol- Frijol- Frijol- Suelo Suelo Suelo
Bacteria Bacteria Testigo Bacteria Bacteria Testigo maz+ maz + maz Sin Sin Sin
+ Hongo + Hongo Bacteria Bacteria Testigo Planta + Planta+ Planta
+ Hongo Bacteria Bacteria Testigo
Tratamientos
28 dds 48 dds
Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey p=0.05)
Figura 2. Poblaciones de bacterias hidrocarbonoclastas en la rizosfera de frijol y maz en

un suelo contaminado con petrleo crudo. UFC= Unidades formadoras de colonias.
En general, se observa en la Figura 2 y 3 que las poblaciones de bacterias HCTs fueron

superiores a las obtenidas por el grupo de hongos HCTs. Este comportamiento comnmente
se encuentra en el suelo y se debe a que las bacterias son el grupo microbiano ms numeroso,
adems; sta particularidad les da la ventaja de tolerar a los contaminantes y, por lo tanto de
actuar como mejores degradadores de compuestos orgnicos txicos como el petrleo (Walton
et al., 1994a).
97
45
a
40
DMS 28 dds = 9.4 28 dds
35 DMS 48 dds = 9.9 48 dds
-1
g
30 a
4
a a b
UFC X 10
25 a
20 bc
c b
15 c
10
bc
c c
5 d c
0
Frijol + Frijol Maz + Maz + Frijol- Frijol- Suelo Suelo
Bacteria Testigo Bacteria Testigo maz + maz + Sin Sin
+ Hongo + Hongo Bacteria Testigo Planta + Planta +
+ Hongo Bacteria Testigo
Tratamientos
Figura 3. Poblaciones de hongos hidrocarbonoclastas en la rizosfera de frijol y maz en

un suelo contaminado con petrleo crudo. UFC= Unidades formadoras de colonias.
Los resultados presentados en este escrito fueron superiores a los obtenidos por
Amadi et al. (1993), quienes estudiaron la remediacin de un suelo contaminado con 10% de
petrleo crudo en presencia de maz. stos investigadores obtuvieron una poblacin de
bacterias HCTs de 23 x 103 UFC g-1 suelo y de hongos HCTs de 37.8 x 102 UFC g-1 de
suelo. Por otro lado, Radwan et al. (1995), Obtuvieron resultados superiores que los
encontrados en este trabajo, stos autores tuvieron poblaciones de bacterias HCTs (3.0 x 108
clulas por gramo de races frescas) y hongos HCTs (4.4 x 105 propagulos por gramo de
races frescas) en la rizosfera de maz de un suelo arenoso contaminado con 10% de petrleo
crudo, a 28 das despus de la siembra de la planta.
98
Las diferencias en poblaciones encontradas en los trabajos anteriores se deben al tipo de

planta, tipo y cantidad del contaminante y a la capacidad biodegradadora de los
microorganismos presentes (Schneider y Billingsley, 1990).
Las poblaciones de bacterias y hongos HCTs obtenidas en este estudio fueron altas y se
consideran microorganismos valiosos por que crecieron en un nmero exponencial
significativamente alto aunque el suelo en el que se desarrollaron present deficiencias
nutrimentales principalmente de nitrgeno y fsforo, elementos indispensables para el
crecimiento microbiano (Granados y Villaverde, 1997).
Hidrocarburos Totales del Petrleo no Degradados en el Suelo.

Al determinar las tasas de degradacin de HTP removidos, se conoci que el
tratamiento que mayor tasa de degradacin present a 28dds fue frijol-maz testigo(317.28
mg/kg da HTP removidos y a 48 dds el tratamiento de frijol-maz bacteria) (256.08 mg/kg da
HTP removidos) (Figura 4). Lo anterior indic que a 28 dds, los factores ambientales
influyeron en la remocin de los hidrocarburos ms difciles de degradas, considerando que
existi ms tiempo para que los procesos de biodegradacin se pudiesen llevar a cabo. Al
respecto, Schneider y Billingsley (1990) y Eweis et al. , (1998) mencionaron que la
degradacin microbiana se duplica cuando factores como temperatura y humedad del suelo
son adecuados, sobre todo en los hidrocarburos ms fcilmente degradables( por ejemplo,
hidrocarburos lineales).
Se observ tambin que, a 48dds, los tratamientos inoculados con bacteria

hidrocarbonaclastas fueron los que presentaron las tasas de degradacin ms altas, lo cual
indica que stas tuvieron mayor particicin en la remocin de hidrocarburos del petrleo. Al
respecto, Atlas y Bartha (1998) encontraron que en la degradacin de petrleo crudo las
bacterias hidrocarbonaclastas son ms eficientes en la remocin del mismo porque el
hidrocarburo puede sostener nmeros altos (poblaciones altas) de este grupo microbiano.
99
35000
DMS 28 dds = 11001

30000 DMS 48 dds = 20984
25000
a a a a
-1
a a a a
a
HTP mg kg
a
20000 a a
a a a a
a a a a
a a a
15000
a
10000
5000
0
Frijol + Frijol + Frijol Maz + Maz + Maz Frijol- Frijol- Frijol- Suelo Suelo Suelo
Bacteria Bacteria Testigo Bacteria Bacteria Testigo m az+ m az + m az Sin Sin Sin
+ Hongo + Hongo Bacteria Bacteria Testigo Planta + Planta+ Planta
+ Hongo Bacteria Bacteria Testigo
Tratamientos
28 dds 48 ddds
Figura 4. Hidrocarburos totales del petrleo no degradados en el suelo.
Tambin se conoci que la rizosfera de maz permito mayores tasas de degradacin en

comparacin con la rizosfera de frijol. En relacin con este puntom, Cunningham et al.
(1996) mencionaron que las plantas y sus races pueden influir indirectamente en la
degradacin de contaminantes, alterando las condiciones fsicas y qumicas del suelo. Por
ejemplo, al explorar la raz mayor rea en el suelo, existir una mayor interaccin entre las
plantas, los microorganismos y los contaminantes. Este fundamento fue el soporte de lo escrito
por Qui et al. (1994) aos atrs cuando mencionaron que la preferencia de las plantas de maz
para trabajar en la fitorremediacin de suelos contaminados existe porque tienen un sistema
radical fibroso y extenso.
100
CONCLUSIONES
Las especies de bacterias y hongos hidrocarbonaclastas: Pseudomonas sp., Agrobacterium sp.,

Trichoderma sp., Aspergillus sp. y Mucor sp. son microorganismos que se presentan en la
rizosfera de Chamaecrista nictitans y Panicum sp. y son degradadoras de hidrocarburos en
suelos contaminados de la Refinera de Minatitln, Veracruz.
Las rizosferas frijol, maz y frijol-maz inoculadas con Pseudomonas sp., Agrobacterium sp.,
Trichoderma sp., Aspergillus sp. y Mucor sp presentaron las mayores poblaciones
hidrocarbonoclastas.
En general, las tasas de remocin de hidrocarburos totales del petrleo fueron mayores en la
rozosfera maz inoculada con bacterias hidrocarbonaclastas.
La incorporacin de plantas y microorganismos hidrocarbonoclastas a suelos contaminados

con petrleo crudo hace posible la desaparicin de cantidades importantes del contaminante.
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106
13.3 REMOCIN DE HIDROCARBUROS TOTALES DEL PETRLEO POR

MICROORGANISMOS HIDROCARBONOCLASTAS Y BIOESTIMULACIN DE
LA RIZOSFERA MAZ
Removal of Totals Petroleum Hydrocarbons by Hydrocarbonoclats Mycroorganisms and

Bioestimulation of the Rizosphere Corn
Elizabeth Hernndez Acosta1, Mara del Carmen Gutirrez Castorena2, Juan Enrique Rubios
Panta2, Refugio Rodrguez Vzquez3
1
Universidad Autnoma Chapingo elizahac@yahoo.com.mx, 2Colegio de Postgraduados,
castor@colpos.colpos.mx. , jerpkike@colpos.colpos.mx, 3Centro de Investigacin y de Estudios Avanzados-
IPN, rrodrig@mail.cinvestav.mx.
RESUMEN
Las actividades relacionadas con la explotacin del petrleo han generado problemas
de contaminacin en grandes extensiones de suelos y aguas. Una manera de recuperar y
limpiar dichos sistemas es mediante la fitorremediacin. En el suelo, para lograr mayor xito
con dicha prctica, se recomienda la adicin de nutrimentos, porque stos estimulan la flora
microbiana rizosfrica, que es indispensable para la degradacin de hidrocarburos y el
crecimiento de las plantas. Este trabajo tuvo como objetivo estudiar la efectividad de
organismos hidrocarbonoclastas (HCT) y de la bioestimulacin de la raz para remover
hidrocarburos totales del petrleo (HTP) en suelos contaminados. Se establecieron dos
experimentos cuyos tratamientos incluan la interaccin de la planta-petrleo crudo-
microorganismos HCT y la adicin de nutrimentos al suelo. En el primero se evalu la
presencia de poblaciones de bacterias y hongos HCT, y el porcentaje de remocin de HTP a
28 y 48 das despus de la siembra (dds); en el segundo a 17, 31 y 41 das despus de la
resiembra de maz (ddr), nuevamente se evaluaron dichas variables. Los resultados mostraron
que las poblaciones de bacterias y hongos HCT aumentaron en nmero al transcurrir el
tiempo, como resultado de la adicin de nutrimentos al suelo. Tambin se conoci que existi
un porcentaje de remocin de HTP, por accin de los microorganismos HCT, de 34% a 48
dds; como resultado de la bioestimulacin existi un porcentaje de remocin total de HTP de
76%, a 41 ddr. El porcentaje de remocin final de HTP en el suelo, 89 das despus de la
107
primera siembra, fue 84%. Lo anterior resalta la importancia de la bioestimulacin de los

microorganismos en la rizosfera de plantas que se utilizan con fines de fitorremediacin.
Palabras clave: Contaminacin, Fitorremediacin, Suelos, Rizosfera, Zea mays L.
ABSTRACT
The activities related to the operation of petroleum have generated contamination
problems in great extensions of grounds and waters. A way to recover and to clean these
systems is through phytoremediation. To achieve greater success in this practice, the addition
of nutrients in the ground is recommended, because these stimulate the microbial flora
rizospherica, indispensable for the degradation of hydrocarbons and the growth of the plant.
This work had the objective of studying the effectiveness of hydrocarbonoclasts (HCT)
organisms and the bioestimulation of the root to remove totals petroleum hydrocarbons (TPH)
from contaminated ground. Two experiments were settled down and their treatments
considered the interaction of the plant-crude petroleum-HCT microorganisms and the addition
of nutrients to the ground. In the first experiment the presence of populations of bacteria and
fungi HCT, and the percentage of removal of TPH to 28 and 48 days after seedtime (das) were
evaluated; in the second test, to 17, 31 and 41 days after reseed of corn (dar), these variables
were evaluated again. The results showed that the populations of bacteria and fungi HCT
increased in number while time was passing, as result of the addition of nutrients to the
ground. Also it was determined if a percentage of TPH removal existed, by action of HCT
microorganisms, from 34% 48 das; as result of the bioestimulation existed a percentage of
total removal of TPH of 76% 41 dar. The percentage of final removal of TPH in the ground, to
89 days after the first sowing, was 84%. This emphasizes the importance of microorganisms
bioestimulation in the rizosphere of plants that are used with aims of phytoremediation.
Key words: Contamination, phytoremediation, grounds, rizosphere, Zea Mays L.
108
INTRODUCCIN
Debido al crecimiento de la industria petrolera en Mxico, las actividades de

exploracin, explotacin, refinacin, transporte y consumo de productos derivados del
petrleo van en aumento da con da; de estas actividades se han generado problemas de
contaminacin en grandes extensiones y volmenes de suelo y agua superficiales y
subterrneas (Saval, 1998). Muchos sitios afectados son habitados por un nmero considerable
de personas cuya salud est en riesgo.
Las tecnologas de biorremediacin y fitorremediacin se han propuesto como

opciones para recuperar suelos contaminados. Ambas transforman mediante la actividad
microbiana, a los contaminantes en compuestos inocuos, como el dixido de carbono y agua
(Cunningham y Ow, 1996). La fitorremediacin implica la descontaminacin de suelos y
aguas mediante la interaccin rizosfera-agua-suelo-contaminante (Siciliano y Germida, 1998).
Aunque existen algunas contradicciones cientficas para definir si es la planta o el
microorganismo asociado con la raz quien lleva a cabo los procesos de descontaminacin, sin
embargo la sola presencia de la planta en un sitio contaminado mejorar mucho ms las
condiciones ambientales, puesto que su raz permitir el aumento de las poblaciones
microbianas y, por lo tanto, la degradacin del contaminante.
La velocidad de biodegradacin de diversos hidrocarburos en el suelo es influenciada

por factores ambientales como: disponibilidad de nutrimentos, oxgeno, pH, salinidad,
temperatura, contenido de agua (Riser-Roberts, 1998), cantidad y biodisponibilidad de
contaminantes (Haines et al., 1994). En muchas reas contaminadas las condiciones para la
degradacin microbiana son limitadas, por lo que las tcnicas de biorremediacin pueden
acelerar estos procesos al optimizar las condiciones para la biodegradacin mediante la
aireacin, adicin de nutrimentos, control de pH y temperatura (Buzea y DeStefanis, 1999).
Para mantener el crecimiento de las plantas y sus poblaciones microbianas, se requieren
cantidades adecuadas de nutrimentos en el suelo, aspecto que debe considerarse,
especialmente, si se pretende fitorremediar un suelo (Brimecombe et al., 2001).
109
Los hidrocarburos del petrleo reducen significativamente la disponibilidad de

nutrimentos para la planta en el suelo (Xu y Jhonson, 1997); tambin se sabe que los
microorganismos del suelo que degradan hidrocarburos utilizan e inmovilizan los nutrimentos,
por ejemplo: nitrgeno y fsforo (Badalucco y Kuikman, 2001). De ah que la incorporacin
de nutrimentos esenciales en el suelo sea necesaria, para el crecimiento de la planta y de los
microorganismos. En el presente trabajo se estudi la remocin de hidrocarburos totales del
petrleo, en un suelo contaminado, por efecto de microorganismos hidrocarbonoclastas y
como resultado de la bioestimulacin en rizosfera de maz, mediante la incorporacin de
nutrimentos al suelo.
MATERIALES Y MTODOS
Preparacin de inculo de bacterias y hongos hidrocarbonoclastas.

Se utiliz como inculo un consorcio microbiano formado por cinco bacterias HCT
representadas por los gneros Pseudomonas sp. y Agrobacterium radiobacter, y tres especies
de hongos HCT (Trichoderma, Aspergillus y Mucor). Cada aislamiento de bacterias HCT y
hongos HCT se sembraron en tres frascos de vidrio de 250 mL, los cuales contenan 50 mL de
medio de cultivo mineral lquido; carbn combinado, modificado por Hernndez et al. (2003)
para el crecimiento de bacterias HCT; y medio Eggins y Punhg, para el crecimiento de
hongos HCT (Leander y Curl 1972); a los medios de cultivo se les agreg 2 mL de petrleo
crudo maya como fuente de carbono. Posteriormente, se colect el medio de cultivo para
utilizarlo en el experimento de invernadero, como inculo. Los aislamientos de hongos HCT
permanecieron en incubacin por ocho das, tiempo necesario para la produccin de un
nmero alto de esporas o hifas. Despus, se colect el medio de cultivo y, al igual que en las
bacterias HCT, se utiliz como inculo en la etapa experimental. A los dos inculos se les
realizaron diluciones y se sembraron en cajas de Petri para conocer las unidades formadoras de
colonias (UFC) mL-1.
Preparacin del suelo y llenado de las macetas.

Se utiliz suelo con textura migajn arenosa, con pH de 7.8, contenido de materia
orgnica extremadamente pobre (0.459 %), bajo contenido de nitrgeno (0.040 %), alto
contenido de fsforo (11.04 mg kg-1), bajo contenido de potasio (0.340 meq/100 g) y con
110
capacidad de intercambio catinico de 9.15 meq/100 g. Antes de inocular y sembrar el suelo

se esteriliz; luego se le agregaron 25 000 mg kg-1 de petrleo crudo y se pasaron 700 g de
ste a recipientes de vidrio de 14 cm de dimetro por 22 cm de altura.
Siembra del material vegetal, inoculacin y cuidado de las plantas en invernadero.

Se sembraron semillas de maz criollo (MV06), al centro de cada maceta a una
profundidad del doble de su tamao. Enseguida se aplicaron 5 mL de inculo de bacterias
HCT con una carga de 5.0 x 1010 UFC mL-1 y 5 mL de inculo de hongos HCT con una carga
de 4.0 x 108 UFC mL-1. Las plantas permanecieron en invernadero hasta 48 das despus de la
siembra (dds), durante este tiempo se regaron con agua destilada. Una vez terminado este
periodo las plantas se cosecharon y se trabajaron para evaluar la remocin de petrleo crudo.
Despus de la cosecha se resembraron semillas de maz en el suelo (el cual tena
concentraciones de HTP de 15 678 a 16 710 mg kg-1) y se incorpor sulfato de amonio en
concentraciones de 0, 120, 240 y 360 kg de N ha-1 a 0, 20 y 35 das despus de la resiembra
(ddr) y fosfato de potasio monobsico (12.5 kg de P ha-1) al momento de la resiembra.
Despus de permanecer en invernadero por 41 das, se evaluaron a 0, 17, 31 y 41 ddr
poblaciones de bacterias y hongos HCT, as como los HTP removidos en el suelo.
Anlisis microbiolgico.
Para conocer las poblaciones HCT antes y despus de la bioestimulacin, stas se
evaluaron a 28 y 48 das despus de la siembra, en el primer ensayo, y a 17, 31 y 41 das
despus de la resiembra en el segundo ensayo. Se utilizaron medios de cultivos minerales
especficos para el crecimiento de hongos y bacterias HCT. El petrleo crudo se incorpor a la
caja de Petri impregnando al papel filtro y ste se coloc en la tapa de la caja. Se hicieron
diluciones decimales para la siembra en cajas de Petri. Las siembras en placa se realizaron en
todos los tratamientos y se analizaron microbiolgicamente tres repeticiones. Cada repeticin
se sembr por triplicado. Las cajas sembradas se colocaron en bolsas de plstico para
incubarlas a 28 C por ocho das; posteriormente, se llev a cabo el conteo.
111
Extraccin y cuantificacin de hidrocarburos totales del petrleo removidos en el suelo.

Se utiliz el Mtodo EPA 3540A (modificado) extraccin soxhlet (EPA, 1994) para
obtener los hidrocarburos totales del petrleo (HTP) removidos en el suelo. Los hidrocarburos
totales del petrleo se determinaron con el Mtodo EPA 418.1 espectofotometra en infrarrojo
(EPA, 1986). Las muestras se leyeron en el equipo infrarrojo Nicolet Nexus 470 FT-IR y se
utiliz el programa de cmputo EZ OMNIC E. S. P. versin 5.1, perteneciente al Instituto
Mexicano del Petrleo. Para conocer la remocin de los HTP por efecto de los
microorganismos hidrocarbonoclastas, stos se determinaron a 28 y 48 dds en el primer
ensayo; para conocer la remocin de los HTP como resultado de la bioestimulacin de la
rizosfera, stos se determinaron a 17, 31 y 41 ddr en el segundo ensayo.
Diseo experimental y anlisis estadstico.

Para conocer la remocin de HTP por efecto de microorganismos hidrocarbonoclastas,
se estableci un experimento completamente al azar con tres tratamientos y seis repeticiones
(Cuadro 1).
Cuadro 1. Descripcin de los tratamientos establecidos en el experimento para conocer la

remocin de HTP por efecto de microorganismos HCT.
__________________________________________________________________________________
Tratamientos Repeticiones
____________________________________________________________________________
Maz, suelo con 25 000 mg kg-1 petrleo, sin microorganismos hidrocarbonoclastas 6
-1
Maz, suelo con 25 000 mg kg petrleo, con microorganismos hidrocarbonoclastas 6
Maz suelo no contaminado 6
Suelo sin planta con 25 000 mg kg-1 petrleo, con microorganismos hidrocarbonoclastas 6
Suelo sin planta , sin Petrleo, sin microorganismos hidrocarbonoclastas 6
__________________________________________________________________________________
Una vez concluido el primer ensayo en invernadero y para conocer la remocin de HTP por
efecto de la bioestimulacin de la rizosfera de maz, se estableci un segundo experimento con
un diseo completamente al azar, con cuatro tratamientos y cuatro repeticiones (Cuadro 2).
112
Para la realizacin del anlisis estadstico y la comparacin de medias en cada uno de los
tratamientos, se utiliz el programa Stadistical Analysis System (SAS Institute, 1989).
Cuadro 2. Descripcin de los tratamientos establecidos en el experimento para conocer la

remocin de HTP por efecto de bioestimulacin en la rizosfera
__________________________________________________________________________________
Tratamientos Repeticiones
____________________________________________________________________________
Maz DIF con petrleo (16,710 mg kg-1) con microorganismos hidrocarbonoclastas 4
Maz D2F con petrleo (15, 678 mg kg-1) con microorganismos hidrocarbonoclastas 4
Maz D3F con petrleo (16, 454 mg kg-1) con microorganismos hidrocarbonoclastas 4
-1
Maz D4F con petrleo (16,710 mg kg ) con microorganismos hidrocarbonoclastas 4
Suelo sin fertilizante, sin petrleo

DIF = 0 de nitrgeno y 12.5 kg de P por ha, D2F = Dosis con base a 120 kg de nitrgeno ha-1 y 12.5 kg de P

por ha-1, D3F = Dosis con base a 240 kg de nitrgeno ha-1 y 12.5 kg de P por ha-1, D4F = Dosis con base a 360
kg de nitrgeno ha-1 y 12.5 kg de P por ha-1.
Remocin de hidrocarburos totales del petrleo por microorganismos

hidrocarbonoclastas.
Antes de conocer el porcentaje de remocin de HTP como resultado de la degradacin

microbiana, se obtuvieron las poblaciones de bacterias y hongos HCT. Las poblaciones
microbianas mostraron diferencias altamente significativas (Tukey, p = 0.05). La rizosfera de
maz inoculada y en presencia de petrleo crudo tuvo las poblaciones ms altas en ambos
grupos microbianos. En comparacin con los tratamientos a los cuales no se adicion petrleo,
planta o consorcio microbiano, se detect que el nmero de bacterias (4.15 x108 UFC g-1 de
suelo) fue mayor que el de hongos HCT (4.05 x 105 UFC g-1 de suelo) a 28 y 48 dds (Figura
113
1). Comnmente este tipo de microorganismos viven en suelos con pH neutro o alcalino,
particularidad que les permite tolerar contaminantes y por lo tanto, de actuar como los mejores
degradadores de compuestos orgnicos txicos, como el petrleo (Walton et al., 1994a).
BACTERIAS HCT DMS = 28 DMS = 60

28 dds HONGOS HCT DMS = 28 DMS = 9 28 dds
DMS = 48 DMS = 32
48 dds DMS = 48 DMS = 10
48 dds
45 ab
45 a
40
40
1x108 UFC g-1 de suelo
1x105 UFC g-1 de suelo

35 a
35
30
b b b 30 a
25
25
20
20 c b
15
cd cd 15
10 e
10
5 c d c
5
0
0
Maz+ Maz sin Suelo sin Suelo sin
petrleo +CM petrleo planta + planta , sin Maz+ Maz sin Suelo sin Suelo sin
petrleo +CM petrleo, sin petrleo +CM petrleo planta + planta, sin
CM petrleo +CM petrleo, sin
Tratamientos CM
Tratamientos
CM = Complejo microbiano Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey p= 0.05)
Figura 1. Poblaciones de bacterias y hongos HCT en un suelo contaminado con 25 000

mg kg-1 de petrleo crudo, a 28 y 48 das despus de la siembra (dds).
Lo anterior tambin indic que las poblaciones fueron estimuladas por la rizosfera de
maz, donde, sin duda, la fuente de carbono proporcionada por el petrleo fue de gran
importancia. Al respecto, Shann y Boyle (1994) mencionaron que el hbitat de la rizosfera del
suelo generalmente sostiene el crecimiento de microorganismos y lograr formar ecosistemas
ideales para la degradacin de compuestos orgnicos, como el petrleo.
114
Los resultados de este trabajo fueron similares a los obtenidos por Radwan et al.
(1995a), quienes reportaron poblaciones de bacterias HCT (3.0 x 108 clulas por gramo de
races frescas) y hongos HCT (4.4 x 105 propgulos por gramo de races frescas) en rizosfera
de maz de suelo arenoso contaminado con 10% de petrleo crudo, a 28 das despus de la
siembra de la planta. Schneider y Billingsley (1990) sugirieron que las diferencias en
poblaciones encontradas en los trabajos relacionados con fitorremediacin se deben al tipo de
planta, tipo y cantidad del contaminante y a la capacidad degradadora de los microorganismos.
Resultados de Radwan et al. (1995b) mostraron poblaciones de bacterias HCT mayores a las
presentadas en este trabajo y poblaciones similares de hongos HCT. Los investigadores
estudiaron la biodegradacin de hidrocarburos en un desierto Kuwait contaminado con
petrleo, y reportaron poblaciones de 1 x1010 a 1 x 1011 de bacterias HCT por gramo de suelo
y de 1 x 104 a 1 x 105 de hongos HCT por gramo de suelo. Entre sus aislamientos reportaron
los gneros Pseudomonas y Aspergillus.
Las poblaciones de bacterias y hongos HCT obtenidas en este estudio fueron altas y se
consideran microorganismos valiosos porque crecieron en un nmero exponencial alto,
aunque el suelo en el que se desarrollaron present deficiencias nutrimentales, en especial de
nitrgeno y fsforo, elementos indispensables para el crecimiento microbiano (Granados y
Villaverde, 1997) y para la degradacin microbiana del petrleo (Berwick, 1984).
Porcentaje de hidrocarburos totales del petrleo HTP removidos en el suelo.
El mayor porcentaje de hidrocarburos totales del petrleo removidos en el suelo por

ambos grupos microbianos fue de 27 a 28 dds y de 34% a 48 dds (Cuadro 3). Los datos del
Cuadro 3 reflejan un comportamiento irregular en los porcentajes de HTP removidos en el
suelo. As, a 28 dds se observ que el mayor porcentaje de HTP removidos se encontr en el
tratamiento donde interactu la planta y el petrleo, pero no los microorganismos; lo anterior
indic que la desaparicin del petrleo ocurri por efecto de la planta. Sin embargo, a 48 dds
se not que los porcentajes de remocin de HTP podan ocurrir con o sin presencia de la
planta.
115
Cuadro 3. Porcentaje de remocin de HTP por efecto de microorganismos HCT en un

suelo contaminado con 25 000 mg kg-1 de petrleo crudo a 28 y 48 dds de maz.
Tratamiento % HTP removidos en el suelo

28 dds 48 dds
____________________________________________________________________________
Maz, suelo con 25 000 mg kg-1 petrleo, sin microorganismos HCT 27 33
-1
Maz, suelo con 25 000 mg kg petrleo, con microorganismos HCT 6.5 3
Suelo sin planta, con 25 000 mg kg-1 petrleo, con microorganismos HCT 9 15.5
Suelo sin planta, con 25 000 mg kg-1 petrleo, sin microorganismos HCT 21.6 34
____________________________________________________________________________
HTP= Hidrocarburos totales del petrleo, HCT= Hidrocarbonaclastas
Aunque muchas investigaciones reportan que los porcentajes de degradacin y

remocin de hidrocarburos son mayores cuando se tiene vegetacin, que las capacidades de las
bacterias y hongos HCT en los ecosistemas contaminados minimizan el potencial de los
qumicos peligrosos liberados al ambiente y que el uso de la vegetacin aumenta la
degradacin microbiana en el suelo (Reilley et al., 1996); estos resultados mostraron que la
remocin de HTP puede ocurrir de igual manera en suelo rizosfrico y no rizosfrico.
Remocin de hidrocarburos totales del petrleo como resultado de la bioestimulacin de

la rizosfera.
Antes de conocer el porcentaje de remocin de HTP como resultado de la degradacin

microbiana, se obtuvieron las poblaciones de bacterias y hongos HCT. El anlisis de varianza
mostr diferencias altamente significativas entre tratamientos (Tukey, p = 0.05) cuando se
evaluaron las poblaciones de bacterias hidrocarbonoclastas (Figura 2).
116
En la Figura 2 se observa que la mayor poblacin en este grupo microbiano se obtuvo

en el tratamiento Maz D4F (360 kg de N ha-1 + 12.5 kg de P ha-1) con petrleo (16 710 mg kg-
1
) a 0 ddr. Se not que al transcurrir el tiempo (a 17, 31 y 41 ddr), las poblaciones de bacterias
HCT tendieron a disminuir y luego se incrementaron. A este comportamiento microbiano se le
conoce como adaptacin o aclimatacin; se sabe que una vez que los microorganismos se
habitan a las condiciones que se presentan en el medio, se puede disparar en nmero
poblacional (Schneider y Billingsley, 1990). Tambin se observ que los tratamientos con
fertilizante+planta tuvieron mayores poblaciones que cuando ambos elementos estuvieron
ausentes.
Se not que a travs del tiempo las poblaciones tendan a disminuir o aumentaban, por
lo cual su comportamiento en nmero de poblaciones fue irregular en todos los tratamientos.
Sin embargo, al final del experimento (41 ddr) se encontr la mayor poblacin de bacterias
HCT en el tratamiento Maz D2F (120 kg de N ha-1 + 0.00035 g de P por kg-1 de suelo) con
petrleo (15 678 mg kg-1) con 2.26 x 107 UFC g-1 de suelo; este resultado indica que la
aplicacin de fertilizante al suelo estimul la poblacin de dicho grupo microbiano.
Estos resultados fueron similares a los obtenidos por Hernndez et al. (2000) quienes
evaluaron poblaciones de bacterias HCT en la rizosfera de Chamaecrista nictitans
desarrollada en un suelo contaminado con 2 500 mg kg-1 de petrleo crudo; estos autores
reportaron una poblacin de bacterias HCT de 5.2 x 107 UFC g-1 de suelo. Breus et al. (2001)
obtuvieron resultados inferiores a los encontrados en este trabajo, al evaluar poblaciones de
microorganismos heterotrficos totales en un suelo contaminado con 20 000 mg kg-1 de diesel;
las poblaciones mximas que dichos autores reportaron fueron 1 x 103 UFC por g-1 de suelo.
117
400
350 Bacterias HCT
Suelo
a
300
-1 ab
250 a
bc
1 x 10 UFC g
ab
200 a
c ab
bc
5
150 a b b
b c c
b c b
100
50 d c c d
0
S SF SP Maz DIF CP Maz D2F CP Maz D3F CP Maz D4F CP
Tratamientos
0 ddr 17 ddr 31 ddr 41 ddr

DMS = 78 DMS = 88 DMS = 38 DMS = 60
45
Hongos HCT
40
a
35
1 x 10 3 UFC g-1 Suelo
30
a
25
a a ab
20
a b
15 b
b b ab
10 b b b
b b b
b b
5 b
0
S SF SP Maz DIF CP Maz D2F CP Maz D3F CP Maz D4F CP
Tratamientos

DMS = 14 DMS = 10 DMS =8 DMS = 10
Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey p= 0.05)

Figura 2. Poblaciones de bacterias y hongos hidrocarbonoclastas como resultado de la
bioestimulacin de la rizosfera de maz contaminada con petrleo. DIF CP = con fertilizante,
con petrleo, D2F CP = con fertilizante, con petrleo, D3F CP = con fertilizante, con petrleo, D4F CP =
con fertilizante, con petrleo, S SF SP = suelo sin fertilizante, sin petrleo. ddr = das despus de la
resiembra; UFC= Unidades formadoras de colonias.
118
Respecto a las poblaciones de hongos HCT obtenidas en este estudio, existieron

diferencias altamente significativas entre tratamientos (Tukey, p = 0.05). En la Figura 2 se
observa que la mayor poblacin de hongos HCT se present en el tratamiento Maz D4F (360
kg de N ha-1 + 12.5 kg de P por ha-1) con petrleo (16 710 mg kg-1) a 31 ddr, con 3.48 x 104
UFC g-1 de suelo. En general, con este grupo microbiano se observ una tendencia de aumento
de poblaciones a travs del tiempo. El tratamiento Maz D3F (240 Kg N ha-1 + 12.5 kg de P
por ha-1) con petrleo (16 453 mg kg-1); tuvo las poblaciones ms altas a 0, 17 y 41 das
despus de la resiembra, con una poblacin mxima de 2.36 x 104 UFC g-1 de suelo (Figura 2).
Estos resultados fueron superiores a los reportados por Amadi et al. (1993), quienes evaluaron
poblaciones de hongos HCT en suelos contaminados por petrleo, a los cuales suministraron
nutrimentos orgnicos e inorgnicos. Sus poblaciones mximas, para este grupo microbiano,
fueron de 37.8 x 102 UFC g-1 de suelo. Los investigadores observaron decrementos en las
poblaciones de hongos HCT con el suministro de estircol de aves; y un aumento en las
mismas con el suministro de fosfato de amonio, por lo que recomendaron la aplicacin de
fertilizantes inorgnicos, que la aplicacin de orgnicos. Los autores argumentaron que la
relacin C:N en los estircoles o abonos era mayor que la requerida por los microorganismos
en el suelo.
Porcentaje de remocin de los hidrocarburos totales del petrleo (HTP) en el suelo

contaminado con 15 678 a 16 710 mg kg-1 de petrleo a 41 das despus de la resiembra
de maz.
Aunque el anlisis de varianza no mostr diferencias significativas entre tratamientos.

Se observ una remocin de 76% de petrleo crudo al final del experimento en el tratamiento
Maz D4F (360 kg N ha-1 + 12.5 kg de P por ha-1) con petrleo (16 710 mg kg-1). Tambin se
observ que el aumento de la remocin de HTP ocurra con el incremento en la dosis de
fertilizante a travs del tiempo (Figura 3).
119
Hidrocarburos Totales del Petrleo 20000
18000 a a
16000 a a
a
14000 a
a
(mg kg )
-1
12000 a a M a z D1F
a DM S = 36 381
a a
10000 a
M a z D2F
a DM S = 17 847
8000
6000 a M a z D3F
DM S = 36 381
4000 a
M a z D4F
DM S = 36 381
2000
0
Tiempo
Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey p= 0.05)

DMS = Diferencia mnima significativa
Figura 3. Remocin de hidrocarburos totales del petrleo (HTP) como resultado de la

bioestimulacin de la rizosfera de maz contaminada con petrleo. DIF CP = con
fertilizante, con petrleo, D2F CP = con fertilizante, con petrleo, D3F CP = con fertilizante, con
petrleo, D4F CP = con fertilizante, con petrleo, S SF SP = suelo sin fertilizante, sin petrleo; S SF
SP= Suelo sin fertilizante, sin petrleo; ddr= das despus de la resiembra.
El porcentaje de remocin de petrleo crudo en el suelo fue significativo, de acuerdo

con los datos obtenidos por Hutchinson et al. (2001), quienes estudiaron la fitorremediacin
de un sedimento de petrleo al cual aplicaron fertilizante inorgnico a base de N y P,
utilizando al pasto bermuda (Cynodon dactylon) y a cauela o fescue (Festuca arundinacea).
Despus de un ao de estudios, los investigadores encontraron una declinacin en los HTP de
68% en el pasto bermuda, y que el porcentaje de decremento en los HTP era menor cuando el
N y P no se agregaba al sedimento, ya que el crecimiento de la planta disminua. Tambin
encontraron que los porcentajes eran bajos (57%) cuando la planta no exista. Radwan et al.
(1995a) obtuvieron resultados inferiores a los presentados en este trabajo, estos autores
120
lograron un porcentaje de desaparicin de 65%, como efecto de la biodegradacin de bacterias

y hongos HCT en el desierto de Kuwait contaminado con petrleo, al cual incorporaron nitrato
de potasio en solucin. Esto corrobora lo mencionado por Berwick (1984), quien indic que en
la degradacin microbiana la incorporacin de fertilizantes a partir de N y P.
Porcentaje de remocin final de los HTP en el suelo contaminado con 25 000 mg kg -1 de

petrleo crudo por efecto de la inoculacin de microorganismos hidrocarbonoclastas.
Con la finalidad de conocer la remocin total de petrleo crudo en el suelo
contaminado, se obtuvieron los porcentajes de remocin de los HTP, una vez terminado el
segundo experimento. En la Figura 4 se muestra la dinmica de remocin final de los HTP en
el suelo contaminado; la evaluacin se realiz en un tiempo de 89 das despus de dos
siembras de maz.
Al observar la Figura 4, se nota que la cantidad de HTP disminuy con el tiempo,

adems, la remocin de los mismos fue mayor (84%) a medida que aument la dosis de
fertilizacin y el tratamiento MD4F (360 kg N ha-1 + 12.5 kg de P ha-1) present la cantidad de
HTP ms baja al final de los experimentos. Este comportamiento es resultado de la
bioestimulacin (adicin de nutrimentos para estimular la actividad de los microorganismos
que realizan la transformacin de los contaminantes) efectuada en el suelo contaminado, de
acuerdo con Alexander (1999).
El anlisis del porcentaje de remocin de los HTP permiti referir que un suelo
contaminado con petrleo, sujeto a la remediacin biolgica, debe ser enriquecido con
adiciones de nutrimentos, adems de que los factores ambientales sean favorables, para lograr
una mayor velocidad de remocin de hidrocarburos. Al respecto, se conoce que la adicin de
nutrimentos al suelo a partir de N y P estimula la flora microbiana presente, debido a que
ambos nutrimentos son utilizados durante su metabolismo y crecimiento microbiano (Riser-
Roberts, 1998). Como consecuencia, los microorganismos responden de manera favorable a
los procesos de biodegradacin (Buzea y DeStefanis, 1999).
121
Remocin de petrleo Remocin de petrleo crudo por efecto de

30000 crudo por efecto de microorganismos HCT y fertilizante
microorganismos HCT
Hidrocarburos Totales del Petrleo
25000 a Aplicacin de fertilizante

a
a a
(mg kg-1)
20000
a
a a
a a
15000 a
a a
a a
a
a a
10000 a a
a
5000
a
0
0 dds 28 dds 48 dds 65 dds 79 dds 89 dds
M CM +DIF M CM +D2F M CM +D3F M CM +D4F

Tratamientos
Figura 4. Remocin final de HTP en un suelo contaminado con 25 000 mg kg-1 de petrleo
crudo. M = maz, CM = consorcio microbiano, HCT= hidrocarbonoclastas, DIF CP = con
fertilizante, con petrleo, D2F CP = con fertilizante, con petrleo, D3F CP = con fertilizante, con
petrleo, D4F CP = con fertilizante, con petrleo, S SF SP = suelo sin fertilizante, sin petrleo.
CONCLUSION
La bioestimulacin de la rizosfera de maz contaminada con 25 000 mg kg-1 de petrleo crudo,
a partir de fertilizantes a base de nitrgeno y fsforo; permiti 84% de remocin de
hidrocarburos totales de petrleo en un periodo de 89 das. Por lo que se recomienda agregar
nutrimentos en la rizosfera de plantas contaminadas, utilizadas con fines de fitorremediacin.
122
LITERATURA CITADA
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126
13.4. CARACTERIZACIN DE SUELOS Y PLANTAS DE UN SITIO

CONTAMINADO DE MINATITLN, VERACRUZ
Characterization of soils and plants in a place polluted of Minatitln, Veracruz
Elizabeth Hernndez Acosta1, Mara del Carmen Gutirrez Castorena2, Juan Enrique
Rubios Panta2, Refugio Rodrguez Vzquez3.
1
Universidad Autnoma Chapingo elizahac@yahoo.com.mx,2 Colegio de Postgraduados
castor@colpos.mx, jerpkike@colpos.mx, 3Centro de Investigacin y de Estudios Avanzados-IPN
rrodrig@mail.cinvestav.mx
RESUMEN
Uno de los primeros trabajos que se deben realizar en los suelos contaminados que
pretenden biorremediarse es la caracterizacin del sitio, la cual incluye el anlisis qumico,
fsico y biolgico. De acuerdo con los resultados obtenidos de los anlisis se podr definir la
estrategia a seguir para remediar el sitio contaminado. Con el objetivo de caracterizar suelos y
plantas de un suelo contaminado de Minatitln, Veracruz, en este trabajo se realizaron
determinaciones qumicas, fsicas y biolgicas a los mismos. Se muestrearon suelos y plantas
en 9 sitios de muestreos diferentes seleccionados al azar y se realiz un perfil de suelo del cual
se describi su morfologa. Los resultados mostraron que las plantas que crecen en los suelos
contaminados con hidrocarburos son Chamaecrista nictitans, Panicum sp, Cynodon sp. y
Andropogon sp. Las propiedades qumicas y fsicas del suelo fueron: fraccin arena
predominante, contenido de materia orgnica de pobre a media, bajo contenido de sales y
capacidad de intercambio catinico y por ciento de saturacin de bases bajos; caractersticas
que permiten que estos suelos contaminados sean factibles de remediar biolgicamente. En
cuanto a las concentraciones de hidrocarburos totales del petrleo en el suelo, stos variaron
de 400 a 367,000 mg kg-1; y los anlisis microbiolgicos mostraron poblaciones ms altas de
hongos HCs en la rizosfera de Panicum sp, en tanto que las poblaciones ms altas de
bacterias fijadoras de N atmosfrico (BFNA) y BFNA HCs en la rizosfera de Chamaecrista
nictitans.
127
Palabras clave: Suelos contaminados, biorremediacin, Chamaecrista nictitans, Panicum sp, Cynodon
sp. y Andropogon sp.
SUMMARY
Chemical, physical and biological characterization is very important to define the

bioremediation strategy to be used in contaminated soil and to determine the plants growing in
the area, a site in Minatitln, Veracruz, was selected. Nine sampling points were randomly
selected and chemical, physical and morphological characterization was carried out in them.
Chamaecrista nictitans, Panacicum sp., Cynodon y Andropogon sp. Were the main plants
identified in the area. The soil showed the following characteristics: i) the predominant
fraction was sand, ii) the organic matter contents ranged from por to mdium , and iii) the salt
contents, exchange capacity and concentration of total hydrocarbons ranged from 400 to 367
-1
000 mg kg . Microbilogical analysis showed that the hightest populations of
hydrocarbonoclast fungi were located in the rhizosphere of Panicum sp., while the highest
populations of nitrogen- fixing bacteria and nitrogen-fixing hidrocarbonaclast bacteria were
present in the rizosphere of Chamaecrista nictitans.
Key words: contaminated soils, bioremediation, Chamaecrista nictitans, Panicum sp, Cynodon
sp. y Andropogon sp.
128
INTRODUCCIN
Un suelo se puede biorremediar solamente si se tiene una caracterizacin del mismo pues
la estrategia para su limpieza es especfica en cada tipo de suelo. Dada la importancia de la
caracterizacin de un sitio, no se debe considerar que sta sea slo un requisito administrativo,
sino que es una verdadera necesidad tcnica en la que no se deben escatimar recursos y donde
se deben involucrar expertos en el rea. El xito de la biorremediacin depender de los
resultados que se obtengan de la caracterizacin del sitio (Banks et al., 2000).
Existe mucha informacin sobre los datos que se deben considerar para estudiar un sitio
que se pretenda remediar por cualquiera de las alternativas que ofrecen los procesos fsicos,
qumicos y biolgicos. En cuanto a fitorremediacin se refiere, varios casos de estudios
muestran la importancia de considerar la informacin previa, que se tiene que utilizar para la
aplicacin de la tecnologa (Fiorenza et al., 2000); sin embargo, estos datos surgen de
investigaciones realizadas en pases desarrollados. En Mxico, se han iniciado algunos
trabajos de caracterizacin de sitios afectados por hidrocarburos, en donde el suelo es el factor
ms estudiado.
Se conoce que: 1) la textura del suelo indica la capacidad de almacenamiento del agua,
2) que saber el contenido de la materia orgnica puede auxiliar en el balance de la textura de
los suelos con partculas gruesas, 3) que la conductividad elctrica indica los contenidos de
sales en los suelos, 4) que la capacidad de intercambio catinico refleja los contenidos de
arcillas, y 5) que un estado nutrimental del suelo puede indicar los requerimientos de algunos
nutrimentos (Braddock et al., 1997). Godbout et al. (1995) mencionaron que tales
caractersticas pueden afectar la biodegradacin de compuestos xenobiticos por la influencia
que tienen sobre el sustrato, la disponibilidad de nutrientes y la solucin del suelo.
La caracterizacin microbiolgica es poco considerada, a pesar de que es determinante

para definir la aplicabilidad de la biorremediacin; sta consta de dos estudios, la
cuantificacin de los microorganismos presentes incluyendo las pruebas de biofactibilidad y;
129
los estudios de biodegradabilidad en laboratorio; estos ltimos indispensables para predecir el

tiempo que tomar la biodegradacin en campo (Finn, 2000).
En este estudio, se realiz una caracterizacin de suelos y plantas en un sitio

contaminado por hidrocarburos en Minatitln, Veracruz y; un estudio microbiolgico para
determinar si es posible aplicar en ellos la tecnologa de fitorremediacin.
MATERIALES Y MTODOS
Marco geogrfico de Minatitln, Veracruz.
El rea de estudio se encuentra en el municipio de Minatitln, Veracruz cuyas
coordenadas geogrficas son: Al norte 18 04, al sur 17 06 de latitud norte, al este 93 45 y
al oeste 94 39 de longitud oeste. El municipio de Minatitln representa el 4.26% de la
superficie del estado de Veracruz y colinda al norte con los municipios de Cosoleacaque,
Ixhuatln del Sureste, Moloacn y Las Choapas; al este con las Choapas y el estado de
Chiapas; al sur con los estados de Chiapas y Oaxaca, y el municipio de Hidalgotitln, y al
oeste con Hidalgotitln, Jltipan y Cosoleacaque. (INEGI, 1995).
Muestreo de suelos y plantas e Identificacin taxonmica de las plantas.

Se seleccionaron nueve sitios de muestreo al azar en un suelo contaminado con
hidrocarburos. Se colectaron plantas gramneas y leguminosas que crecan sobre stos sitios,
con el fin de identificarlas, anotando los datos referentes a la ubicacin del lugar en que se
encontr. Posteriormente, se tomaron muestras de raz y suelo rizosfrico de cada sitio de
muestreo para realizar anlisis fsicos, qumicos y microbiolgicos. Adems, se realiz un
perfil de suelo, al cual se describi su morfologa de acuerdo con Cuanalo (1975) y se
colectaron muestras del mismo por capas para su caracterizacin fsica y qumica. En
laboratorio, las plantas colectadas se secaron en una estufa durante 72 horas a 72C; una vez
secas, se realiz la identificacin de las mismas. Los sitios de muestreo se ilustran en la Figura
1.
130
131
Anlisis fsicos y qumicos realizados: a) al perfil de suelo.

Al suelo de cada horizonte se le determin: textura, pH, materia orgnica, carbonato de
calcio, capacidad de intercambio catinico y por ciento de saturacin de bases y
conductividad elctrica, metodologas extradas del manual de Van Reeuwijk (ISRIC, 1995).
b) sitios de muestreo. A este tipo de material que se muestreo, se les determin la
concentracin de hidrocarburos totales del Petrleo (HTP) no degradados siguiendo el Mtodo
de extraccin 3540 de la EPA y por cromatografa de gases. Las determinaciones fsicas y
qumicas que se les realiz fueron: 1) pH, 2) contenido de materia orgnica, 3) contenidos de
nitrgeno, fsforo y potasio intercambiable y 4) textura (ISRIC, 1995).
Anlisis microbiolgicos de los suelos.

Las evaluaciones de las poblaciones microbianas se realizaron siguiendo las
metodologas propuestas por Clark (1965) y Parkinson (1982). Se pesaron 10 gr. de raz,
despus se vaciaron a botellas que tenan 90 mL de agua estril, stas se agitaron
vigorosamente durante 10 minutos. Despus con una pipeta estril, se transfiri 1 mL de la
dilucin a un tubo de ensayo que contena 9 mL de agua estril. A partir de este tubo se
continuaron haciendo diluciones decimales 10-2, 10-3 y 10-4 para poblaciones de hongos
hidrocarbonoclastas (HCs) y 10-4, 10-5, 10-6 y 10-7 para poblaciones de BFNA y BFNA HCs.
Por triplicado se colocaron las cajas de Petri con su respectivo medio de cultivo, se
agreg al centro de cada una de las cajas 0.1 mL de las diluciones y se dispers por toda la
superficie del medio de cultivo. Despus, las cajas se incubaron a 28C hasta que se
desarrollaron las colonias (6 das para BFNA y BFNA HCs y 2 das para el caso de hongos
HCs). Los medios de cultivos utilizados fueron: 1) para BFNA el medio Rennie (1981); y 2)
para BFNA HCs el medio Rennie (1981) modificado por Hernndez et al. (2003a). En cuanto
al crecimiento de hongos HCs, se utiliz el medio Eggins y Pugh (Leander y Curl, 1972) al
cual se le excluy la fuente de carbono.
132
Anlisis Estadsticos.
Los resultados microbiolgicos de los sitios de muestreo fueron analizados
estadsticamente utilizando el programa Stadistical Analysis System (SAS Institute, 1989).
Identificacin taxonmica de las plantas.

En los sitios muestreados se encontraron cuatro plantas diferentes: Chamaecrista
nictitans un arbusto de la familia leguminoseae; Panicum sp. Cynodon sp. y Andropogon sp.,
pastos tropicales que pertenecen a la familia gramineae. Las dos primeras especies fueron
dominantes en los sitios estudiados (Cuadro 1).
Cuadro 1. Identificacin de las plantas crecidas en los sitios de muestreo estudiados.

___________________________________________________________________________________
Sitio de Muestreo Planta
____________________________________________________________________________
Sitio 1, 2, 3 y 4 Panicum sp.
Sitio 5, 6 y 7 Chamaecrista nictitans
Sitio 8 Andropogon sp.
Sitio 9 Cynodon sp.
___________________________________________________________________________
Caractersticas qumicas y fsicas del perfil de suelo.

Siguiendo los criterios de interpretacin de Vzquez y Bautista (1993) se supo que la
textura prevaleciente en el perfil de suelo es migajn arenoso, que existe un pH muy cido, un
contenido de materia orgnica medio, conductividad elctrica baja con efecto de salinidad casi
nulo, capacidad de intercambio catinico baja y un porcentaje de saturacin de bases de medio
a alto (Cuadro 2).
En lo referente a la textura, la fraccin arena son las partculas que predominaron en el
suelo, en donde domin principalmente el cuarzo (Cuadro 2). Se conoce que cuando existe en
el suelo mayor porcentaje de arena, los procesos de biorremediacin pueden llevarse a cabo
133
con ms xito. Al respecto, Lser et al. (1999) encontraron que un suelo arenoso contaminado
con 3,000 mg kg-1 de una mezcla de hidrocarburos present una intensa biodegradacin,
debido a que la textura del suelo favoreci los procesos de biorremediacin. Por el contrario
Van Der Zee y Wit (1993) mencionaron que los suelos con altos contenidos de arcillas limitan
los procesos de biorremediacin, ya que en stas se adsorben los hidrocarburos, quedando de
esta manera inaccesible a los microorganismos del suelo que favorecen la biodegradacin de
los contaminantes. Los resultados de pH cido (< 4.5) indicaron que es limitante para los
procesos de biodegradacin, ya que el valor ptimo debe ser lo ms cercano al neutro o
encontrarse en rangos de 6 a 8 (Block et al., 1993).
Cuadro 2. Resultado de los anlisis qumicos y fsicos realizados al perfil del suelo.
____________________________________________________________________________
Nmero de Anlisis del tamao Clasificacin pH Materia Carbonato
horizonte de partculas (%) textural H2O KCl Orgnica de calcio
Arena Limo Arcilla 1:1 1:1 % %
____________________________________________________________________________
1 38.2 39.01 22.70 Franco 4.20 3.80 2.10 0.45
2 67.1 19.71 13.10 Migajn arenoso 4.40 3.90 2.10 0.42
3 73.6 15.61 10.70 Migajn arenoso 4.50 3.90 3.50 0.53
4 64.8 17.21 17.90 Migajn arenoso 4.30 3.80 1.05 0.49
5 68.6 13.41 17.90 Migajn arenoso 4.30 3.80 0.58 0.45
Nmero de CE CIC Cationes PSB

+ -1
horizonte dS/m cmol kg suelo intercambiables %
++ ++ + +
Ca Mg K Na
1 0.05 11.37 1.50 1.00 0.02 0.06 22.61
2 0.02 6.53 2.00 0.50 0.00 0.02 38.61
3 0.02 8.90 1.00 1.50 0.00 0.12 29.40
4 0.05 11.77 2.50 0.00 0.00 0.02 21.41
5 0.04 11.67 2.00 0.50 0.00 0.09 22.15
_________________________________________________________________________
CE = Conductividad elctrica, CIC = Capacidad de Intercambio Catinico, PSB = Porcentaje de
Saturacin de Bases
134
Los contenidos de materia orgnica variaron en los horizontes del perfil (Cuadro 2),
stos datos indicaron que la profundidad a la cual puede ocurrir con mayor xito la
biorremediacin, es hasta 59 cm debido a que se presentan contenidos de medio a pobre de
materia orgnica (caracterstica que favorece los procesos de biorremediacin). Se conoce que
los suelos con altos porcentajes de materia orgnica son ms difciles de biorremediar, al
respecto, Senesi (1993) mencion que los suelos que tienen altos porcentajes de materia
orgnica presentan una mayor afinidad de los contaminantes orgnicos de la materia orgnica
y minerales como las arcillas, situaciones que dificultan la biorremediacin de un suelo.
La conductividad elctrica indic que el suelo puede ser biorremediado con xito, ya
que los contenidos de sales fueron muy bajos. Leahy y Cowell (1990) mencionaron que la
velocidad del metabolismo de los hidrocarburos decrece cuando se incrementan los contenidos
de sales, como consecuencia de una reduccin en las velocidades metablicas microbianas. La
salinidad es una de las contradicciones ms comunes en la actividad biolgica de los suelos
contaminados; una conductividad elctrica mayor que 4.0 mmhos cm-1 es indicativo de un
suelo salino en el cual los procesos de biorremediacin disminuyen. (Block et al. 1993)
La capacidad de intercambio catinico (CIC) y por ciento de saturacin de bases (PSB)

son dos determinaciones que se encuentran relacionadas. Se conoce que mientras mayor sea el
contenido de arcillas (2:1), la CIC aumentar y es que la CIC significa la suma total de
cationes intercambiables que un suelo puede adsorber (Ortiz y Ortz, 1990). Adems de las
arcillas, la materia orgnica representa un papel fundamental. Los valores obtenidos en el
perfil de suelos para CIC indicaron que es baja, caracterstica de los suelos arenosos
cuarzosos, lo que significa que si no hay cargas en las partculas esto genera que los cationes
sean eliminados del perfil.
En la clasificacin de suelos, el porcentaje de saturacin de bases (PSB) es importante,

s es mayor que 50% se le denomina como suelo Etrico (frtil) y si es menor que 50% como
suelo Dstrico (infrtil) (Ortiz y Ortz, 1990). Los datos obtenidos en el anlisis del perfil de
suelo indicaron que el PSB fluctuaba entre los rangos bajo y medio (Vzquez y Bautista,
1993). Lo anterior significa que es necesario agregar al suelo fertilizantes a base de Ca++,
135
Mg++ y K+, ya que se requiere que el suelo est nutrido para que los microorganismos y las
plantas acten eficientemente en los procesos de biorremediacin (Frick et al., 1999).
Descripcin del perfil de suelo.

Al realizar el perfil de suelo, se distinguieron cinco horizontes. En general, la textura
que prevalece en las capas fue migajn arenosa, caracterstica fsica del suelo que favorece la
biodegradacin (Banks et al., 2000). Las caractersticas de cada uno de los horizontes se citan
en el Cuadro 3.
Cuadro 3. Descripcin del Perfil del suelos del sitio contaminado en Minatitln,
Veracruz.
____________________________________________________________________________
No. de Profundidad Descripcin
capa (cm)
____________________________________________________________________________
A 0-25 Color en seco pardo amarillo (YR 5/6); Textura migajn arenosa; Estructura
granular simple; Consistencia suelta; Seco; Pocas races; Pocos canales (galeras por
hormigas); Permeabilidad rpida; Sin plasticidad; Drenaje rpido; Transicin
horizontal y abrupta.
2C 25-54 Color en seco amarillo parduzco (YR 10/8); Textura migajn arenosa;
Estructura granular simple; Consistencia en seco suelta; Seco; Pocas races
(finas); Pocos canales (galeras por hormigas); Permeabilidad rpida; Sin
plasticidad; Drenaje rpido. Transicin horizontal y abrupta.
3C 55-59 Color en seco rojo amarillo (YR 5/8); Textura no se pudo determinar por la
presencia de hidrocarburo; Estructura granular simple; Consistencia en seco
suelta; Seco; Pocas races (finas); permeabilidad lenta; Sin plasticidad; Drenaje
rpido; Transicin horizontal y abrupta.
4C 59-75 Color en seco pardo amarillo (YR 5/8); Textura arenosa; Estructura granular
simple; Consistencia en seco suelta; Hmedo; Pocas races (finas); Permeabilidad
rpida; Sin plasticidad; Drenaje rpido; Transicin horizontal y abrupta.
5C 50-65 Color en seco Pardo amarillo (YR 5/8) con motas oscuras; Textura Arenosa;
Estructura granular simple; Consistencia en hmedo suelta; Humedo; Pocas races
(finas); Permeabilidad rpida; Sin plasticidad; Drenaje rpido; Presencia de motas
formadas por empobrecimiento de fierro; Transicin tenue separacin arbitraria.
__________________________________________________________________________________
136
En la figura 2 se ilustra el perfil de suelo realizado en el sitio contaminado
Capa A
Capa 2C
Capa 3C
Capa 5C
Figura 2. Perfil de suelo realizado dentro de los sitios de muestreo en suelos contaminados de
Minatitln, Veracruz.
137
Anlisis fsicos y qumicos en el suelo contaminado.

Los datos mostraron una heterogeneidad en los resultados obtenidos de los anlisis
fsicos y qumicos en los sitios de muestreo (Cuadro 4).
Cuadro 4. Resultados de los anlisis fsicos, qumicos y florsticos de los sitios de

muestreo.
__________________________________________________________________________
__
Sitio de muestreo HTP mg kg-1 Suelo pH % de
Rizosfrico H2O (1:2) KCl (1:2) materia orgnica
____________________________________________________________________________
Sitio 1 Panicum sp. 184 170 3.70 3.50 7.26
Sitio 2 Panicum sp. 367 000 6.70 6.40 19.18
Sitio 3 Panicum sp. 600 4.20 3.80 1.45
Sitio 4 Panicum sp. 400 4.50 4.00 1.50
Sitio 5 Chamaecrista nictitans 4 600 7.90 7.60 4.00
Sitio 8 Cynodon sp. ND 5.25 4.55 7.50
Sitio 9 Andropogon sp. 7 500 5.40 4.80 8.30
N P K Tamao de las Partculas Clasificacin

% mg/kg meq/100 g % Arena % Limo % Arcilla Textural
Sitio 1 0.45 4.10 1.11 37.60 36.41 25.99 Franco

Sitio 2 1.34 1.30 0.13 15.90 74.91 9.19 Migajn Limoso
Sitio 3 0.45 8.02 0.19 87.20 10.01 2.79 Arena
Sitio 4 0.60 2.98 0.22 79.10 17.31 3.59 Arena Migajosa
Sitio 5 0.60 1.86 0.32 74.90 18.31 6.79 Migajn Arenoso
___________________________________________________________________________
HTP= Hidrocarburos totales del petrleo, N = nitrgeno P = fsforo K = potasio
138
Oliver et al. (1993) mencionan que los lmites permisibles de contaminantes en los
suelos van de 100 a 1000 mg kg-1 (aunque es un dato que se basa en estudios realizados en las
ciudades de Arkansas y Alabama en Estados Unidos, en Mxico no existe informacin de este
tipo. El rango establecido por los autores es superado por los datos obtenidos en este estudio,
ya que los valores fluctan entre 400 a 367,000 mg kg-1 de HTP en el suelo. Por el contrario,
segn Gnther et al. (1996) los sitios de muestreo que presenten valores de 400 a 5000 mg
kg-1 de HTP, pueden ser tratados siguiendo las tecnologas de fitorremediacin.
Los valores de pH fueron diferentes en todos los sitios de muestreo (Cuadro 4), desde
muy cidos hasta ligeramente alcalinos. De acuerdo con los criterios de clasificacin de pH de
Vzquez y Bautista (1993), los sitios R2, R6, R7 y R8 presentaron pH adecuados para el
crecimiento de plantas. Adems, como son valores cercanos al neutro son favorables para las
poblaciones microbianas que se encargan de biodegradar contaminantes orgnicos (Block et
al., 1993). Una caracterstica muy particular que se noto con el valor de pH en los suelos, fue
que la especie Panicum sp. se desarroll en suelos cidos y la especie Chamaecrista nictitans
en suelos alcalinos (Cuadro 4).
El contenido de materia orgnica vari en todos los sitios de muestreo de

medianamente pobre a extremadamente rico (1.45 a 19.18%) (Cuadro 4). La literatura reporta
que los suelos que contienen altos porcentajes de materia orgnica presentan problemas
cuando se pretenden biodegradar porque tienen alta afinidad a las partculas orgnicas del
suelo (Raber et al., 1998).
De acuerdo con el criterio de clasificacin de Moreno (1978), todos los sitios de

muestreo fueron ricos en contenido de nitrgeno y bajos en fsforo (Cuadro 4). El nitrgeno y
fsforo son los dos nutrimentos ms importantes para el crecimiento microbiano (Margensin et
al., 2000) y de las plantas, por lo que deben estar en cantidades adecuadas para suministrar a
ambos organismos. Dado que los resultados mostraron deficiencias en fsforo (en promedio
2.06 mg/kg) y en potasio (0.43 meq/100 g) en todos los sitios de muestreo, para fines de
fitorremediacin se recomienda realizar aplicaciones de estos nutrimentos.
139
En lo referente a la textura del suelo, en general la mayora de los sitios de muestreo

(Cuadro 4) presentaron mayor porcentaje de arena que de limos y arcillas, situacin que
favorece los procesos de biorremediacin. Como se ha mencionado en prrafos anteriores, si
en los suelos existiesen contenidos altos de arcillas, habr problemas de adsorcin de los
contaminantes hacia stas partculas del suelo, lo cual afectara la biodegradacin de los
mismos ya que no estaran al alcance de los microorganismos ni de las plantas (Del Arco y
Franzxlcoedil, 2001).
Segn las caractersticas fsicas y qumicas de los sitios de muestreo, el sitio 2 (donde
creci Panicum sp.) presenta mayores problemas para ser biorremediado, principalmente por
la concentracin alta de HTP; en tanto que, el sitio 6, (donde creci Chamaecrista nictitans) es
el ms apropiado para aplicar las tecnologas de fitorremediacin (Margensin et al., 2000). En
los dems sitios de muestreo se pueden practicar algunas tcnicas agrcolas que favorezcan las
condiciones del suelo como por ejemplo: llevar a cabo la prctica del encalado en los sitios
donde el pH sea muy cido (sitios 1 y sitio 3) (Brady y Well, 1999) estimular la actividad
microbiana en el suelo aplicando nutrimentos o incorporando oxgeno para que stos degraden
mayores cantidades de materia orgnica (sitio 2) (Frick et al., 1999).
De acuerdo con el Cuadro 4, la rizosfera de Panicum sp (sitio 3) present una

concentracin de HTP alta, un pH bajo (3.80); con el cual se dificultan los procesos de
biorremediacin, porcentaje de materia orgnica alta, contenido rico de nitrgeno, pero pobre
en fsforo y potasio, as como una textura migajn limoso, donde los porcentajes de limo son
altos. Lo anterior indica que este sitio es poco favorable para biorremediar siguiendo las
tecnologas de fitorremediacin. Por otro lado, Korda et al., (1997) seal que las prcticas
agronmicas tales como la incorporacin de fertilizantes, aplicacin de riego y el laboreo del
suelo pueden estimular las poblaciones microbianas y a las plantas, para que los procesos de
biodegradacin tambin se favorezcan.
Segn el Cuadro 4, y las recomendaciones de Gnther et al. (1996), de los nueve sitios de
muestreo, el sitio 5 present caractersticas qumicas y fsicas favorables para los procesos de
biodegradacin: concentracin media de HTP (con respecto a la concentracin ms alta), pH
140
cercano al neutro, contenidos de nitrgeno y potasio suficientes para los requerimientos

microbianos y plantas y por ltimo una textura migajn arenosa. Las caractersticas adversas
fueron: contenido alto de materia orgnica y contenido pobre de fsforo, mismas que pueden
ser corregidas aplicando prcticas agrcolas o de bioestimulacin microbiana (Korda et al.,
1997).
Anlisis microbiolgicos. Poblaciones rizosfricas de hongos HCs, BFNA, BFNA HCs.
Al evaluar los resultados de las poblaciones de hongos HCs, los anlisis estadsticos
mostraron diferencias altamente significativas (Tukey p = 0.05) entre los sitios de muestreo.
Las rizosferas de Panicum sp. en los sitios 1 y 3 mostraron los valores ms altos, seguidas por
la rizosfera de Andropogon sp. en el sito 9. En general, se observ que las plantas gramneas
permitieron las poblaciones ms numerosas de este grupo microbiano (Figura 3).
200
180 DMS = 67.17

a
160
1 x 10 UFC g suelo
140
ab ab
-1
120
100
bc bc
3
80
bc bc
60 c
40
20 c
0
Sitio 1 Sitio 3 Sitio 5 Sitio 7 Sitio 9

Panicum sp. Panicum sp. Chamaecrista Chamaecrista Andropogon
nictitans nictitans sp.
Medias con la misma letra no son estadsticamente diferentes (Tukey p = 0.05)
Figura 3. Nmero de hongos hidrocarbonoclastas en la rizosfera de plantas gramneas y

leguminosas que crecen en suelos contaminados con petrleo. UFC= unidades
formadoras de colonias
141
Se conoce la capacidad de los hongos para degradar hidrocarburos del petrleo es

conocida, se sabe que el potencial de biodegradacin es favorable en las zonas tropicales y que
son capaces de biodegradar petrleo en las zonas que rodean a las races (Radwan et al.,
1995). Lo anterior fundamenta los resultados obtenidos en este trabajo, en los nueve sitios de
muestreo analizados en la zona trpico-hmedo de Mxico (Minatitln, Veracruz).
En el sitio 5 la rizosfera de Chamaecrista nictitans present las poblaciones ms altas

de BFNA (208 x 105 UFC g-1 de suelo) (Figura 4), a diferencia de las poblaciones obtenidas
con los hongos HCs las cuales fueron favorecidas por la rizosfera de la planta gramnea
(Figura 3). Los resultados obtenidos en esta investigacin, fueron superiores a los obtenidos
por Hernndez et al., (2003a) en estudios previos cuando estudi las poblaciones de BFNA en
la rizosfera de la leguminosa frijol contaminada por un complejo de hidrocarburos donde
obtuvo una poblacin de 18.7 x 104 UFC g-1 de raz.
250
a DMS = 93.18
200
1 x 10 UFC g suelo
150
-1
ab ab
ab
100
ab
5
ab
ab
50
c c

Panicum sp. Panicum sp. Chamaecrista Chamaecrista Andropogon
Figura 4. Nmero de bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico en la rizosfera de

plantas gramneas y leguminosas que crecen en suelos contaminados con petrleo.
UFC= Unidades Formadoras de Colonias.
142
200
180 a DMS = 96.66

160 ab
1 x 10 UFC g suelo
140 abc
abc
-1
120
abc abc
100 abc
80
c
5
60
40
c
20

'Panicum sp. Panicum sp. Chamaecrista Chamaecrista Andropogon
Figura 5. Nmero de bacterias fijadoras de nitrgeno atmosfrico hidrocarbonoclastas

en la rizosfera de plantas gramneas y leguminosas que crecen en suelos
contaminado con petrleo. UFC= Unidades formadoras de colonias.
Las mayores poblaciones de hongos HCs las present la rizosfera Panicum sp. del
sitio 3, donde se encontr la concentracin ms baja de hidrocarburos (600 mg kg-1). En tanto
que, las poblaciones ms altas de BFNA y BFNA HCs se tuvieron en el sitio 5 donde se
encontr la leguminosa Chamaecrista nictitans y una concentracin de hidrocarburos mayor
(4 600 mg kg-1) a donde crecieron las poblaciones ms altas de hongos HCs. Al respecto,
algunos autores indican que en la rizosfera de maz contaminada con petrleo existen mayores
poblaciones de bacterias que de hongos (Radwan et al., 1995) (Cuadro 5).
143
Cuadro 5. Poblaciones rizosfricas de hongos HCs, BFNA y BFNA- HCs de plantas que
crecen en suelo contaminado con petrleo.
Sitio de muestro HTP mg kg-1 UFC g-1 Suelo UFC g-1 Suelo UFCg-1 Suelo
Suelo rizosfrico rizosfrico rizosfrico
rizosfrico 1 x 10 HHCs
3 5
1 x 10 BFNA 1 x 105 BFNAHCs
Sitio 1 Panicum sp. 184 170 123 121.4 91.78
Sitio 2 Panicum sp. 367 000 13.78 58.89 122.2
Sitio 3 Panicum sp. 600 162.8 105.1 108.7
Sitio 4 Panicum sp. 400 60.67 119.2 148.7
Sitio 5 Chamaecrista 4 600 63.33 208.1 164.4
Nictitans
Sitio 6 Chamaecrista 4 800 71.67 92.11 87
Nictitans
Sitio 7 Chamaecrista 24 000 48 24.22 30
Nictitans
Sitio 8 Cynodon sp. ND 72.89 76.44 61.11
Sitio 9 Andropogon sp. 7 500 122.9 24.67 83.56
HHCs = Hongos HCs, BFNA = bacterias fijadoras de N atmosfrico, BFNAHCs =

bacterias fijadoras de N atmosfrico HCs.
CONCLUSIONES
En los suelos estudiados de Minatitln, Veracruz crecen las especies Chamaecrista

nictitans, Panicum sp, Cynodon sp. y Andropogon sp; mismas que mantienen poblaciones
HCs de bacterias fijadoras de N atmosfrico y hongos.
De acuerdo a las concentraciones de hidrocarburos totales del petrleo (4 600 mg kg-1)

presente en los suelos y a las propiedades qumicas y fsicas de los mismos; el sitio de
muestreo cinco present condiciones favorables para lograr disminuir la concentracin de
hidrocarburos mediante la aplicacin de tcnicas de fitorremediacin.
144
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Restauracin de suelos contaminados con

Book January 2004

Elizabeth Hernndez Acosta

Remediacin de suelos contaminados por hidrocarburos View project

Fitorremediacin de Jales de minas View project

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RESTAURACIN DE SUELOS CONTAMINADOS CON

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