ANALTICA AVANADA 2S 2011

Aulas 5 e 6

Espectrofotometria no UV
UV--Vis

Prof. Rafael Sousa

Departamento de Qumica - ICE

rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

 ESPECTROFOTOMETRIA
ABSORO molecular no UV
UV--Vis

FLUORESCNCIA molecular no UV
UV--Vis

Plano de aula:
aula:
- Definio de espectrofotometria
- Aspectos conceituais da ABSORO MOLECULAR
- Medidas de absoro e anlises quantitativas
- Instrumentos para anlises espectrofotomtricas
- Aspectos prticos
- A quimioluminescncia
- Espectrofluorimentria (princpios e aplicaes)
- Instrumentao para espectrofluorimetria
 Bibliografia

Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000

Vogel - Anlise Qumica Quantitativa

GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002

Anlise Qumica Quantitativa

D. Harris; 7a ed., 2008

Principles of Instrumental Analysis

Analysis
DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998

Tutoriais dos fabricantes de espectrofotmetros

 Espectrofotometria - DEFINIO

Espectrofotometria:
Espectrofotometria:
Medida da luz que absorvida ou emitida por uma espcie qumica

Espectro obtido para o -caroteno Espectro obtido para Ag coloidal

Espectrofotometria - APLICAES
 ANALITOS ORGNICOS

Alguns exemplos:
Compostos nitrogenados
Frmacos (c
(c.. acetil saliclico)
Fenis
Gorduras (colesterol)

 ANALITOS INORGNICOS

Alguns exemplos:
on cloreto
amnia, fosfato, nitrato e sulfaTO
Elementos metlicos em geral, As e B
ASPECTOS CONCEITUAIS
LUZ  O espectro eletromagntico

(nm)
 Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica

 Relao entre comprimentos de onda e energia

 Ondas com dif. comprimentos de onda ()  dif. cores (Vis)

 Anlises instrumentais: medidas de fraes especficas de luz

(visvel ou no)  MXIMOS DE ABSORO
Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica

Relao entre comprimentos de onda () e energia (E)

Modelo matemtico

h= constante de Planck (6,63 10-34 Js) hc

E=h=
c= veloc. luz no vcuo (2,99 108 ms-1)

 E inversamente proporcional ao
Na espectrofotometria os mximos de absoro so a principal
diferena que se observa no espectro de substncias diferentes:
fenmeno menos energtico

Espectro obtido para o -caroteno Espectro obtido para Ag coloidal

O que faz a absoro da luz
ser diferente ?
 As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos
Cromforos

Grupos cromforos:
So grupos funcionais que apresentam absoro caracterstica na regio do
ultra--violeta ou do visvel
ultra

Ex: Carboxila (- COOH):

Ex: COOH): 200 210 nm

Absorve em vrios
comprimentos de onda diferentes
(vrios grupos funcionais)
As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos
Outros grupos cromforos:

Carboxila (-
(- COOH): 200 210 nm

Aldedo (-(-CHO): 210; 280 300

Amino (-NH2): 195
Brometo (- (-Br
Br):
): 208
Dissulfeto (-S-S-): 194; 255  Substncias diferentes
ster (-
(-COOR): 205
ter (-
(-O-): 185  Diferentes grupos funcionais
Nitro (-
(-NO2): 210
Nitroso (-(-NO): 302
Tiocarbonila (=C=S
(=C=S--): 205
Tioeter (-S-): 194; 215
Tiol (-
(-SH): 195
As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos
Processo de absoro da radiao: diferentes tipos de transies eletrnicas

Cada transio eletrnica vem acompanhada de uma transio rotacional e

vibracional  Espectros na forma de banda

Nveis de energia
vibracional

Nveis de energia
eletrnicos
As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos

Exemplificando as diferenas entre as substncias:

substncias:
Composto Orbitais envolvidos na mx (nm)
transio eletrnica
CH4 * 122
CH3Cl n* 173
CH2=CH2 * 162
Me2C=O * 185
n* 277
H2C=CH-CH=CH2 * 180
* 200
* 255

Essas transies eletrnicas ocorrem entre nveis de energia que

diferem de 10 a 100x em energia
As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos
 Processo de absoro da radiao envolvem:
 Transies eletrnicas (UV
(UV--Vis
Vis))
 Transies vibracionais (Infravermelho
(Infravermelho mdio e prximo)
prximo)

Envolvem diferenas
energticas menores

Cada nvel de
ENERGIA VIBRACIONAL (e
(en):
Subnveis de
ENERGIA ROTACIONAL

Envolvem diferenas
energticas ainda menores
ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver
radio no UV
UV--Vis
Exemplos de medidas ESPECTROSCPICAS

EspectroMETRIA
EspectroMETRIA ATMICA

EspectroFOTO
EspectroFOTOMETRIA
METRIA MOLECULAR
ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver
radio no UV
UV--Vis
Representao das transies eletrnicas que podem ocorrer no tomo de sdio

 NaCl
Representao genrica para os eltrons que sofrem
transies em medidas espectroscpicas:

 NA PRTICA, a regio do UV-

UV-Vis importante para a
espectrofotometria no UV-
UV-Vis vai de 180 a 780 nm
 PARA CASA
1) Explicar porque os espectros abaixo apresentam perfis diferentes,
considerando que os espectros de absoro moleculares so geralmente bandas
e no picos estreitos.
O processo de absoro da luz no laboratrio

1 etapa:
etapa:
excitao eletrnica da molcula M

M + hv  M*

2 etapa:
etapa:
relaxao

M*  M + calor

M*  M + M (fotodecomposio
fotodecomposio))

M*  M + hv
hv (luminescncia)
Caracterstica dos processos de absoro na regio do visvel

 A cor de uma espcie em soluo a cor complementar

quela do comprimento de onda que absorve:

Soluo verde-
verde-amarelada absorve violeta
amarela violeta--azul
violeta
laranja azul
vermelha azul--verde
azul
prpura verde
violeta verde
verde--amarelo
violeta--azulado
violeta amarelo
azul laranja
azul--esverdeado
azul vermelho
verde prpura

 A regio que contem o de mxima absoro de uma espcie de

interesse pode ser prevista se a soluo da amostra for colorida...
 Medida de absoro e anlise quantitativa

Medidas de absoro (A):

- Obtidas a partir de medidas de transmitncia (T)

- Quanto maior a transmitncia,

menor a absorbncia

A= - log T= log P0/P

A absorbncia aumenta com a conc. da espcie absorvedora
- depende da substncia (absortividade molar)
- depende do espao fsico ocupado pela amostra (caminho ptico)
 Medida de absoro e anlise quantitativa

Representao grfica para solues de KMnO4 em = 545 nm e um caminho

ptico de 1 cm.

a) Em %Transmitnci
%Transmitnciaa versus c

a) b) Em Absorbncia versus c
Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA
(Lei de Lambert-
Lambert-Beer
Beer))

Johann Heinrich Lambert (1728 1777 1777)) observou que

a intensidade da luz transmitida por um meio absorvedor
era proporcional espessura do meio pelo qual a luz passava

August Beer (1825 1863

1863)) observou que a intensidade da
luz transmitida por um meio absorvedor era proporcional
concentrao da espcie absorvedora
 Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA
(Lei de Lambert-
Lambert-Beer
Beer))

 A=abC
a= absortividade molar (
(: L mol -1cm-1)
b= caminho ptico (cm)
C= concentrao em (mol L-1)
=ab

Concentrao

Relao linear entre A e Conc. se as medidas so feitas em

condio de caminho ptico constante 

 APLICAES DA equao da reta: A = C

- Concentraes desconhecidas
- OU determinar o valor de a para se obter o de
 Determinao da Concentrao
1) PREPARAR PADRES DE CALIBRAO  TCNICA INSTRUMENTAL

PADRES: Solues semelhante soluo de amostra

PADRES:
(ANALITO))
com concentrao conhecida da espcie de interesse (ANALITO

AMOSTRA ou SOLUO DE AMOSTRA ?

Geralmente a amostra analisada na forma de uma soluo aquosa

Ex: Determinao de Fe3+ em tecido animal

Ex:

amostra preparo (ou tratamento) soluo de amostra

laboratorial da amostra
 Determinao da Concentrao
2) Calcular os limites de deteco (LD) e de quantificao:
Menor quantidade que pode ser detectada com razovel certeza para um dado
procedimento analtico (IUPAC)

y = ybco + 3xSdbco em termos de sinal

LD = (C
(Cbco + 3xSdbco)/S em termos concentrao

LQ = (C
(Cbco + 10xSdbco)/S em termos concentrao

LD = limite de deteco

LQ = limite de quantificao (o INMETRO recomenda usar o primeiro ponto da curva analtica de calibrao)

y = menor sinal medido

ybco = sinal do branco

Cbco = concentrao do branco (considerado = zero)

Sdbco = desvio padro do branco (n= 10 no mnimo)

S = Sensibilidade do mtodo (coef

(coef.. angular da curva analtica (
())
 Determinando a Concentrao de Misturas
(Dois analitos
analitos:: M e N: ADITIVIDADE DA LEI DE BEER)

A  s devem ser conhecidos em

( e )
todos os comp. onda (
A

Considerar as espcies
independemente (no existe interao)

A = M . b . cM + N . b . cN

A = M . b . cM + N . b . cN

Resultado  clculos matemticos (resoluo de sistemas ou Quimiometria)

Quimiometria)
OUTROS ASPECTOS DA LEI DE LAMBERT
LAMBERT--BEER

Vlida para:
para:

- Solues diludas (C < 0,01 mol L-1)

- Radiao monocromtica
- Meio homognio e estvel

 Todas as medidas (padres e amostras) : celas o mais parecidas possveis

Para compensar perdas de potncia da radiao incidente por reflexo e espalhamento
 Desvios da Lei de Lambert-
Lambert-Beer ...

1) Interaes entre os centros absorvedores e instabilidade qumica

 DESVIO REAL DA LEI DE BEER

Ex de instabilidade qumica
qumica::

equilbrio entre os nions dicromato e cromato

Cr2O72- + H2O 2H+ + 2CrO

CrO42-
350 nm 373 nm

 Espcies que podem participar de equilbrio qumico em soluo

devem ser analisadas em um meio onde apenas uma espcie predomine
 PARA CASA

2) Suponha que a anlise de um frmaco deva ser feita em triplicata, por um

mtodo espectrofotomtrico e que a espcie absorvedora apresenta um mximo de
absorbncia que varia com o pH da soluo de amostra. Descreva
Descreva,, resumidamente,
como essa anlise deveria ser feita, considerando desde o preparo da amostra at a
obteno do resultado final.
 Desvios da Lei de Lambert-
Lambert-Beer
2) Influncia de erros instrumentais
( inadequado, radiao policromtica ou espria)
 DESVIO APARENTE

Ex de erro instrumental
instrumental::

I
II
I II

A A

Comprimento de onda Concentrao

Instrumentao (ESPECTROFOTOMETRIA = TCNICA INSTRUMENTAL)

FOTMETROS
(COLORMETROS) ESPECTROFOTMETROS

Visvel Ultra-violeta e visvel

Ultra-
-Filtros pticos (380 780 nm)
nm) - Monocromadores (200 1000 nm)
nm)

Componentes bsicos (duas configuraes: a e b):

Seletor de Detector Processador

Fonte de Amostra Comprimento a
Luz de Onda h Fotomtrico 0.102 UA

Seletor de Detector Processador

Fonte de Comprimento Amostra b
Luz de Onda h h Fotomtrico 0.102 UA
Instrumentao
1) FONTE DE LUZ

REGIO DO ULTRA-
ULTRA-VIOLETA REGIO DO VISVEL

200 nm 390 nm 800 nm

Lmpadas de Deutrio Lmpadas de filamento de Tungstnio

Lmpadas de Hidrognio
320 2500 nm
160 375 nm podem ser halgenas (W-I2)
- maior durabilidade

LEDs
(diodos emissores de luz)

Lmpadas de Xennio
FONTE DE LUZ

Emisses, por comprimento de onda, das principais lmpadas

para espectrofotometria
Instrumentao
2) SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

 Isolar faixas estreitas de comprimentos de onda

 Diferentes dispositivos - Filtros

complexidade e largura da faixa de - Monocromadores

FILTROS:

- Constitudos por uma ou mais substncias

- Isola bandas com no mn. 50 nm de largura
- Usado na regio do visvel
- Baixo custo
Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA
FILTROS:

 Fluoreto de clcio ou magnsio

 Constitudo por vrias camadas

Dieltrico com espessura de
mesma ordem do desejado
- Passa apenas 1 e seus mltiplos
- Isola bandas com at 10 nm de largura
- Pode ser usado tanto no UV como no visvel
- Custo maior que o filtro de absoro
t= espessura do dieltrico
= ndice de refrao
n= ordem de interferncia
Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

FILTROS

os de interferncia so mais eficientes:

(larguras a meia altura)

 Filtros servem para faixas especficas de

 Monocromadores: isolam bandas estreitas ao longo do espectro

- Mais versteis
- Custo mais elevado que os filtros
Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

MONOCROMADORES: PRISMAS E REDES (GRADES) DE DIFRAO

Diferenas entre os ndices de refrao Fenmeno da interferncia

n = d(sen
d(sen i + d sen r)

 300 2000 ranhuras

 ngulo de incidncia
FORMA DE USO

1) Prisma (instrumentos mais antigos)

2) Grade (custo menor, espectrofotmetros mais compactos)
Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

MONOCROMADORES: PRISMAS E REDES (GRADES) DE DIFRAO

 Dependendo dos demais componentes pticos: largura de banda de 1 20 nm

POSICIONAMENTO DA FENDA DE SADA

Isolar o comprimento de onda separado
Ex:
Ex:

 Monocromador de Czerny-Turner
Instrumentao
3) COMPARTIMENTO (OU SUPORTE) DA AMOSTRA
CELAS OU CUBETAS DE QUARTZO (UV-
UV-Vis
Vis)) face para
CELAS OU CUBETAS DE VIDRO (Vis) manipulao
CELAS OU CUBETAS DE ACRLICO (Vis)

 FACES PLANAS E PERPENDICULARES RADIAO

INCIDENTE

 CILNDRICAS
menor custo mas que conferem menor repetibilidade

CAMINHOS PTICOS VARIVEIS

mais comum: 1 cm

LIMPEZA:
1- gua e detergente diludo
2- enxague com gua purificada e, depois, com a prpria amostra
Instrumentao
4) DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL

 CONVERSO DA RADIAO EM SINAL ELTRICO

- Intensidade da corrente proporcional intensidade da radiao

- Fototubos
Fototubos,, fotomultiplicadoras e semicondutores de silcio
Juno pn

e- Anodo _ _
+ +

Catodo Feixe de Ftons + + _ _

Amplificador
- +

+ _
90 V DC
_ + + _

p n

 Fototubo < Sensibilidade que os semicondutores < Fotomultiplicadora

Instrumentao
DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL

Espectrofotmetro com arranjo linear de diodos

Instrumentao
 O FEIXE DE RADIAO UTILIZADO PARA A MEDIDA DO BRANCO E DA AMOSTRA
DEVEM TER A MESMA INTENSIDADE

INSTRUMENTOS FEIXE
FEIXE NICO
NICO E DUPLO
DUPLO FEIXE
FEIXE

cela do
solvente
ajuste 100% T
%T

a. fotmetro de feixe
nico

lmpada de espelho semi-prateado detector

filtro
tungstnio

b. Fotmetro de feixe duplo

cela do
solvente

detector

%T detector de zero
 ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-
UV-Vis
CONSIDERAES GERAIS

 Instrumentos atuais operam em transmitncia ou absorbncia

 Quando so utilizados outros solventes alm de gua os mesmos devem ser

de grau espectroscpio e inerte no meio

 Anlises de rotina: utilizar sistema de anlise por injeo em fluxo (FIA)

Pequenas quantidades de amostras e reagentes

= Menor custo e gerao de resduos
Maior preciso (repetibilidade
(repetibilidade)) e velocidade analtica

 Pode ser combinada com outras tcnicas analticas, instrumentais ou no,

geralmente como ferramenta de deteco

 Pode ser utilizada em anlises no quantitativas e diretamente sobre slidos

(reflectncia difusa em produtos acabados)
 ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-
UV-Vis

ANLISE DE SLIDOS POR REFLECTNCIA DIFUSA NA REGIO DO UV-

UV-Vis

- Utilizada para materiais opacos

Papis
Plsticos
Pigmentos para tintas
Filmes polimricos
Medicamentos
Alimentos (leite em p)
...

- Princpio: a radiao no absorvida refletida e detectada na forma

de um espectro

- Equipamentos de laboratrio e portteis

 REFLECTNCIA DIFUSA

Aplicaes importantes no setor de tintas para determinao de

parmetros de qualidade:

DETERMINAO DE OUTROS PARMETROS:

- ndice de brancura e amarelamento: ASTM E- E-313-

313-73
- ndice de brancura: ASTM E-
E-313-
313-CIE modification
- ndice de brancura: ASTM D-
D-1925
- ndice de amarelamento: ASTM E-E-313-
313-98
 REFLECTNCIA DIFUSA

Tipos de equipamentos

Portteis De bancada

Anlise de materiais/ produtos acabados

Anlise quantitativas tambm so possveis a partir de calibrao

 PARA CASA

3) Ao desenhar a curva analtica de um mtodo espectrofotomtrico o analista

atribuiu ao branco (reagentes utilizados em gua) o valor de transmisso
100%. Voc concorda com esta atribuio? Justifique.

4) Em termos de configurao instrumental, comente sobre as vantagens de se

utilizar um espectrofotmetro com um detector do tipo arranjo de diodos.
 Bibliografia utilizada

Principles of Instrumental Analysis
Analysis
DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998

Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000

Vogel - Anlise Qumica Quantitativa

GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002

Anlise Qumica Quantitativa

D. Harris; 7a ed., 2008

Tutoriais de fabricantes de espectrofotmetros

Slides didticos fornecidos pelo Prof. Dr. Jlio C. J. Silva (UFJF)

Figuras da Apostila didtica da disciplina QA 581, do IQ - Unicamp