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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIRIQU PROPIEDADES CUALITATIVAS DE

AMINOCIDOS Y PROTENAS
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y
EXACTAS Resumen
ESCUELA DE QUMICA El objetivo principal de este laboratorio fue
identificar aminocidos y protenas mediante
diferentes reacciones, y someter las
protenas a diferentes pruebas. Para
identificar aminocidos llevamos a cabo
INFORME DE LABORATORIO
primeramente la prueba con ninhidrina
PROPIEDADES CUALITATIVAS DE resultando positivo para todos los
AMINOCIDOS Y PROTENAS aminocidos: tirosina, triptfano, cistena y
glicina con un color morado indicando la
presencia del grupo amino; la segunda
prueba realizada fue la reaccin de cido
glioxlico (reaccin de Hopkins-Cole) donde
PRESENTADO POR result positivo solo el triptfano debido que
este aminocido posee un grupo indol,
SHARON CUBAS mostrando una interface color marrn; en la
(4-782-2072) prueba xantoproteica resultaron, con un
color naranja positivo, los aminocidos:
triptfano, tirosina ya que presentaban en su
ESTEBAN ARJONA estructura un anillo aromtico; la ltima
prueba para identificar aminocidos
(4-779-2316)
empleada fue reaccin con cistena
resultando positivo para cistena con un
precipitado negro de sulfuro de plomo, esto
es porque la cistena posee un grupo un tiol,
es decir azufre en su estructura. En la
PROFESORA segunda parte del laboratorio utilizamos el
reactivo biuret para identificar protenas en
Mgtra. ALBERTINA MONTENEGRO la albumina del huevo y leche, donde
observamos un color morado que indicaba
que la prueba era positiva para la presencia
de protenas. Se llev a cabo la
desnaturalizacin de las protenas por calor
y pH extremos con la leche y albumina,
obteniendo un precipitado blanco con HCl
11 DE ABRIL DE 2017 1M y un color amarillento con NaOH 1 M;
tambin se desnaturaliz la protena
albumina del huevo y casena de la leche por
metales pesados donde nuevamente se
observ la formacin de un precipitado
blanco, este precipitado indica que en estos
parmetros de pH y calor y al reaccionar carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y
protenas con metales pesados estn nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin
pierden su estructura y por tanto sus azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin,
funciones ptimas. Podemos decir, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (Y),
entre otros.
entonces, que cuando queremos determinar
un aminocido podemos emplear las Las protenas son molculas formadas por
diferentes pruebas realizadas en el aminocidos que estn unidos por un tipo de
laboratorio; adems de aprender los enlaces conocidos como enlaces peptdicos. Se
diferentes agentes que pueden causar la denomina enlace peptdico, al enlace que une
desnaturalizacin de las protenas. los dos aminocidos para formar el dipptido,
Cazaran (2012).
Objetivos Materiales y reactivos
Identificar mediante diferentes tipos de Goteros, tubos de ensayo, plancha bao
reacciones, los grupos qumicos caractersticos
mara, vasos qumicos papel indicador,
en aminocidos y protenas.
Someter soluciones de protenas a
probleta-10 ml. Soluciones al 1% de glicina,
desnaturalizacin con agentes fsicos y tirosina, triptfano, cistena, fenilalanina en
qumicos. HCl 1M, ninhidrina, cido ntrico
Analizar las propiedades generales de los concentrado, hidrxido de sodio 10M, cido
aminocidos y protenas. actico glacial, cido sulfrico concentrado,
acetato de plomo al 2%, reactivo de biuret,
Introduccin soluciones de albumina y casena al 1% HCl
Los aminocidos son compuestos orgnicos que 1M, NaOH 1M.
contienen las funciones cido carboxlico y
amino. Dos aminocidos se pueden unir en
Procedimiento
condiciones adecuadas, a travs de un enlace
I. Reacciones para identificar aminocidos
amida, formando un dipptido. El dipptido
A. ninhidrina
puede incorporar un tercer aminocido,
formando un tripptido. Cadenas con ms de 50
aminocidos se denominan protenas. Bohinski
(1991).
Los aminocidos se pueden clasificar
en a, b o g-aminocidos dependiendo de la
posicin del grupo amino en la cadena
carbonada. Van Holde (2004).
Los aminocidos desde el punto de vista
qumico son cidos orgnicos (RCOOH),
B. Reaccin de cido glioxilico (Reaccin de
portadores de un grupo amino (-NH2) y un
Hopkins-Cole).
radical variable R. Segn la naturaleza del grupo
R los aminocidos pueden ser clasificados en
cuatro grandes grupos: apolares, polares sin
carga, aninicos y catinicos. Fesenden &
Fesenden. (2002).
Las protenas son biopolmeros
(macromolculas orgnicas), de elevado peso
molecular, constituidas bsicamente por
C. Prueba xantoproteica. A. Pruebas cualitativas para aminocidos.
Cuadro 1. Identificacin de aminocidos.

D. Reaccin de la cistena.

Reaccin general con ninhidrina:

II. Reacciones para la identificacin de


protenas.

A. Prueba de Biuret.

B. Desnaturalizacin por calor y pH Reaccin con la ninhidrina con cada aminocido:


extremos.

C. Desnaturalizacin por metales pesados.

Resultados y discusin
Reacciones para la prueba xantoproteica.
Tirosina:

Triptfano:

Figura 2. Prueba xantoproteica, los aminocidos que


Reaccin de la prueba de cido glioxilico. dieron positivo se tornaron de amarillo a un color
Triptfano: anaranjado.

Reaccin de la prueba para cistena:

Figura 3. Prueba de Hopkins-Cole, fenilalanina (a la


derecha) y triptfano (a la izquierda), formacin de
anillo marrn en la zona de contacto de los dos
lquidos, Prueba positiva.

Figura 4. Prueba para cistena, formacin de un


precipitado de sulfuro de plomo da una prueba
positiva.

Cistena

Glicina
Figura 1. Prueba con ninhidrina, todos los
aminocidos en estudios cambiaron de incoloro a un
color morado - morado oscuro.
un aminocido no esencial, lo que significa que
puede ser sintetizado por los humanos.
Los codones que codifican la cistena son UGU
Tirosina y UGC.La cistena contiene un grupo tiol (-SH-)
en su cadena lateral que hace con que este
aminocido, en su totalidad, sea considerado
como polar e hidrofilo. La parte tiol de la cadena
suele participar en reacciones enzimticas,
actuando como nuclefilo.
Triptfano
En esta experiencia como primera prueba
cualitativa se utiliz la ninhidrina, segn
Figura 5. Estructuras qumicas de los aminocidos Armstrong (1982), la ninhidrina es un poderoso
utilizados en las pruebas de laboratorio. agente reactivo comn para observar las bandas
de separacin de aminocidos por
De acuerdo con Villarreal (2011), la glicina o
cromatografa o electroforesis, tambin es
glicocola (Gly, G) es uno de los aminocidos que
utilizada con fines cualitativos para la
forman las protenas de los seres vivos. En el
determinacin de aminocidos. Reacciona con
cdigo gentico est representada por los
todos los aminocidos alfa cuyo pH se
codones GGU, GGC, GGA o GGG. Es el
encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que
aminocido ms pequeo y el nico no quiral de
vara de azul a violeta intenso como se muestra
los 20 aminocidos presentes en la clula. Su
en la figura 1. Por otra parte, Garrido & Teijn
frmula qumica es NH2CH2COOH y su masa
(2006), expresan que la reaccin con la
es 75,07. La glicina es un aminocido no
ninhidrina tiene un gran inters, ya que da lugar
esencial. Otro nombre (antiguo) de la glicina es
a una reaccin coloreada de los aminocidos,
glicocola. La glicina acta como neurotransmisor
ampliamente utilizada para la identificacin y
inhibidor en el sistema nervioso central.
sobre todo para su determinacin cuantitativa y
La tirosina es uno de los 20 aminocidos que cualitativa.
forman las protenas. Se clasifica como un
Explican a su vez que la ninhidrina decarboxila y
aminocido no esencial en los mamferos ya que
desamina al aminocido gracias a su fuerte
su sntesis se produce a partir de la hidroxilacin
poder oxidante. La ninhidrina reducida formada
de otro aminocido: la fenilalanina. Como todos
reacciona con una molcula de ninhidrina no
los aminocidos est formado por un carbono
reducida y con el amoniaco resultante de la
central alfa (C) unido a un tomo de hidrgeno
desaminacin para formar un compuesto
(-H), un grupo carboxilo (-COOH), un grupo
complejo que presenta una coloracin violeta
amino (-NH2) y una cadena lateral. En la
(figura 6). De esta forma se pueden determinar
tirosina, la cadena lateral es un grupo fenlico.
cualitativamente la presencia de aminocidos.
El triptfano (abreviado como Trp o W) es un Existen algunos aminocidos en particular,
aminocido esencial en la nutricin humana. Es como la prolina y la hidroxipropolina, que dan
uno de los 20 aminocidos incluidos en el cdigo con la reaccin de ninhidrina una coloracin
gentico (codn UGG). Se clasifica entre los amarilla. Garrido & Teijn (2006).
aminocidos apolares, tambin llamados
Como podemos observar en el cuadro 1, todos
hidrfobos.
las muestras dieron positivo al reaccionar con la
Y por ltimo Villarreal (2011) extiende que la ninhidrina, ya que se evidenci la coloracin de
cistena es un -aminocido con la frmula color morado intenso, que es indicativo de la
qumica HS-CH2-CHNH2-COOH. Se trata de presencia de grupos amino libres de los
aminocidos, de los pptidos y las protenas. color de amarillo anaranjado, siendo este
Chacn & Guevara (2013). indicativo de una prueba positiva.
Un grupo amino, explica McGee (2010), es un Ruiz (2011), indica que esta reaccin se debe a
grupo funcional derivado del amonaco o alguno la formacin de nitroderivados aromticos por
de sus derivados alquilados por eliminacin de reaccin del cido ntrico sobre grupos
uno de sus tomos de hidrgeno. Se frmula bencnicos que poseen algunos aminocidos
segn su procedencia como -NH2, -NRH o - como la fenilalanina, la tirosina y el triptfano.
NR2. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas
protenas que tengan aminocidos aromticos
en su molcula. Si una vez realizada la prueba
se neutraliza con un lcali vira a un color
anaranjado oscuro.

Figura 7. Mecanismo de reaccin de la prueba


xantoproteica.

Esta reaccin Xantoproteica se puede utilizar


para determinar la presencia de protenas
solubles en una solucin, empleando cido
Figura 6. Mecanismo de reaccin de la ninhidrina con ntrico concentrado y tambin se puede
aminocidos. considerar como una sustitucin electroflica
En otra instancia tambin se realiz una prueba aromtica de los residuos de tirosina de las
llamada reaccin Xantoproteica de acuerdo con protenas por el cido ntrico dando un
Murcia (2010), explica que los compuestos que compuesto coloreado amarillo a pH cido.
presentan bencenos sustituidos (con grupos Segn las guas qumicas es una reaccin
unidos al anillo bencnico), al reaccionar con el cualitativa, ms no cuantitativa. Por ende
cido ntrico concentrado forman compuestos determina la presencia o no de protenas.
nitrados de color amarillo, el cual se intensifica a Sustenta Devlin (2004).
naranja en medio alcalino. Tambin indica que En cuanto a la prueba del cido glioxilico solo se
El aminocido fenilalanina tambin tiene en su llev a cabo con el aminocido triptfano y se
estructura un anillo aromtico pero no est obtuvo como resultado la formacin de un anillo
activado, por lo tanto el proceso de nitracin no marrn en la interface de los lquidos como se
se da fcilmente y no se puede percibir entonces muestra en la figura 3, dando as positiva la
la coloracin amarilla. prueba (cuadro 1), ya que como indica Rivera
Si observamos la figura 5 podemos ver que tanto (2010), el grupo indlico del triptfano reacciona
la glicina y la cistina no poseen un anillo con cido glioxilico en presencia de cido
bencnico por lo que la reaccin Xantoproteica sulfrico concentrado dando un complejo de
resulto verse un cambio muy leve de color dando color prpura. El cido actico glacial que ha
una prueba negativa (cuadro 1). Mientras que en sido expuesto a la luz contiene cido glioxilico,
el caso del triptfano y la tirosina si presenta en este caso el cido actico glacial solo estuvo
dicho anillo bencnico por lo que, como se ilustra expuesto al sol por aproximadamente una hora
en l figura 2, se logr observar un cambio de por lo que este hecho pudo influir al momento
que se obtuvo un anillo marrn y no violeta como negativa, ya que como vemos en la figura 5 este
debera ser. no posee un grupo sulfurado en su estructura;
Segn Lozano (2004), Los Aminocidos
Por otro lado Baquero (2012) expresa que esta
azufrados como Metionina, Cistina y Cistina se
prueba del cido glioxilico para triptfano es la
reconocen por la formacin de precipitados de
reaccin Adamkiewick, o tambin conocida
Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro
como reaccin de Hopkins-Cole en la cual los
que se forman cuando reacciona con Acetato de
derivados del indol dan productos de
Plomo en medio alcalino.
condensacin cuando se tratan con aldehdos
aromticos en presencia de cido sulfrico o Un tiol es un compuesto que contiene el grupo
clorhdrico, esta es una prueba especfica para funcional formado por un tomo de azufre y un
el triptfano , al ser el nico aminocido con el tomo de hidrgeno (-SH) como es el caso de la
grupo indol presente, la reaccin con dicho cistena. Siendo el azufre anlogo de un grupo
aminocido presenta un anillo violeta en la hidroxilo (-OH), este grupo funcional es llamado
interface. grupo tiol o grupo sulfhidrilo. Brenes (2010).
De acuerdo con Lee (2005), el indol es un El grupo tiol tambin tiene gran afinidad con los
compuesto orgnico heterocclico, con metales pesados, por lo que protenas que
estructura bicclica que consiste en un anillo de contienen cistena como la metalotionina que
seis miembros (benceno) unido a otro de cinco unir metales como el mercurio, plomo y cadmio
miembros (pirrol). La participacin de un par fuerte indica Karlson (1963). Por lo que la
aislado de electrones de nitrgeno en anillo cistena es reducida con facilidad.
aromtico refiere a que el indol no es una base
y no representa una amina simple. Es slido a
temperatura ambiente.

Figura 9. Reaccin para grupos tioles.

B. Pruebas cualitativas para protenas.

Cuadro 2. Prueba de Biuret.


Protena (+) morado
Albumina Morado
Leche Morado

Figura 8. Estructura de un grupo indol.

Por ltimo se llev a cabo la prueba para cistena


para esta prueba empleamos la muestra en
medio alcalino y tras adicionar el acetato de
plomo se produjo un precipitado de color negro
como muestra la figura 4, dando as la prueba
positiva (cuadro 1). Este precipitado
corresponde a sulfuro de plomo, lo que indica
Figura 1. Esquema reaccin biuret. Tomado de:
que la cistena presenta en su estructura azufre
Stryer, 2003.
(figura 5). En el caso del triptfano la prueba dio
Cuadro 3. Desnaturalizacin por calor y pH extremos. Est hecho de KOH y sulfato cprico (CuSO4).El
muestra reactivo evidencia reactivo, de color azul, cambia a violeta en
leche / precipitado presencia de protenas, y vira a rosa cuando se
HCl 1M
albumina blanco combina con polipptidos de cadena corta. El
leche / Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin,
NaOH 1 M color amarillo
albumina pero proporciona el medio alcalino necesario
para que tenga lugar. Los resultados obtenidos,
indican que la Albumina, la carne y la leche
presentan enlaces peptdicos por lo que se
observ un color violeta, esto confirma lo
establecido en la teora (Stryer, 2003).
La prueba de Biureth es una buena prueba
general para las protenas y la intensidad del
color violeta es una medida del nmero de
enlaces peptdicos. Algunas sustancias como la
oxamida pueden dar falsos resultados positivos
en ensayos cualitativos de protenas (Stryer,
2003).
Figura 11. Desnaturalizacin por calor y pH extremo. Como se observa en el cuadro 3 La casena es
una fosfoprotena (un tipo de heteroprotena)
Cuadro 4. Desnaturalizaciones por metales pesados presente en la leche se encuentra en la fase
(acetato de plomo). soluble asociada al calcio (fosfato de calcio), en
muestra observacin un complejo que se ha denominado
albumina (de la clara desnaturalizacin de la
caseingeno.
de huevo) protena (albumina)
precipitado, Los iones H+ (HCl) y OH- (NaOH) provocan
leche desnaturalizacin de la efectos parecidos, pero adems de afectar a la
protena casena envoltura acuosa de las protenas tambin
afectan a la carga elctrica de los grupos cidos
y bsicos de las cadenas laterales de los
aminocidos. Esta alteracin de la carga
superficial de las protenas elimina las
interacciones electrostticas que estabilizan la
estructura terciaria y a menudo provoca su
precipitacin. La solubilidad de una protena
(casena) es mnima en su punto isoelctrico, ya
que su carga neta es cero y desaparece
cualquier fuerza de repulsin electrosttica que
pudiera dificultar la formacin de agregados,
Figura 12. Desnaturalizacin con acetato de plomo.
(Adams, 1979).
Cuando la temperatura es elevada aumenta la
Cuadro 2, Es un mtodo general para la energa cintica de las molculas con lo que se
determinacin de protenas o pptidos. Se basa desorganiza la envoltura acuosa de la protenas
en la reaccin del sulfato de cobre con (casena), y se desnaturalizan. Asimismo, un
compuestos que tengan dos o ms enlaces aumento de la temperatura destruye las
peptdicos, en un medio alcalino. El producto es interacciones dbiles y desorganiza la estructura
un complejo color violeta cuya intensidad de
de la protena, de forma que el interior hidrfobo
color depende de la cantidad de enlaces
interacciona con el medio acuoso y se produce
peptdicos presentes (Stryer, 2003).
la agregacin y precipitacin de la protena Los aminocidos y las protenas que
desnaturalizada, (Adams, 1979). contiene azufre tienden a formar sulfuros
El huevo est constituido por 10.5% de cscara, cuando se calientan en medio fuertemente
58.5%de Albumen o clara y 31.0% de yema; los alcalino por lo que se pudo lograr la
slidos de su parte comestible, es decir albumen determinacin del grupo tiol en la cistena a
ms yema, estnintegrados bsicamente por travs de una prueba indicativa donde se
protenas y lpidos y entre ambos suman presenci la formacin de un precipitado
negro de sulfuro de plomo.
aproximadamente 95% de la materia seca.
Como se muestra en el cuadro 4 las protenas
Por medio de la utilizacin del reactivo de
cuando se encuentran en solucin a pH
Biuret es aquel que detecta la presencia de
superiores a su punto isoelctrico son capaces protenas, pptidos cortos y otros
de reaccionar con diferentes metales pesados compuestos con dos o ms enlaces
formando los correspondientes proteinados peptdicos, se logr identificar
insolubles, (Bates 1977). cualitativamente la presencia de protenas
en la clara del huevo (albumina) y la leche
Conclusiones (casena).
Por medio de la reaccin con ninhidrina que
es un agente reactivo que reacciona con Se pudo determinar la presencia de la
todos los aminocidos alfa cuyo pH se albumina y la casena que son protenas
encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin presentes en la clara de huevo y la leche a
que vara de azul a violeta intenso pudimos travs de la desnaturalizacin por pH, calor
determinar la presencia de grupos aminos y metales pesados. La desnaturalizacin es
libres en los aminocidos y protenas en un cambio estructural de las protenas o
estudio. cidos nucleicos, donde pierden su
estructura nativa, y de esta forma su ptimo
La reaccin xantoproteica es un mtodo que funcionamiento.
se puede utilizar para determinar la Bibliografa
presencia de protenas solubles en una -Bohinski. L. (1991). Bioqumica. 5ed., Mxico:
solucin, empleando cido ntrico Pearson.
concentrado. La prueba da resultado -Van Holde M. (2004) Bioqumica. 3ed, Espaa:
positivo en aquellas protenas con Pearson
aminocidos portadores de grupos -Fesenden & Fesenden. (2002). Qumica
aromticos, por lo que pudimos diferencia e orgnica. Mxico: Interamericana.
identificar cules de las muestras posea un -Cazaran, C. (2012). Protenas [Blog Spot].
anillo aromtico en su estructura. Recuperado el 9 de abril de 2017 de
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Se pudo determinar la presencia del grupo /proteinas.html
indol en la estructura del triptfano, ya que, -Lozano J. (2004). Ensayos para reconocimiento
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es una prueba estndar para el triptfano y de:http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/est
para las protenas que contienen triptfano, udiantes/ciencias_basicas/organica/guia_9_ami
debido que a solucin que se va a examinar noacidos.pdf&f=false.
se mezcla con cido glioxlico y se agrega -Karlson, P. (1963). Introduccin a la Bioqumica
cido sulfrico concentrado y se puede Moderna. Nueva York: Academic Press
observar un anillo entre violeta y rojo en la -Garrido, A. & Teijn, J. (2006). Fundamentos de
unin de los dos lquidos indica que la bioqumica estructural. 2 edicin. Madrid,
reaccin es positiva. Espaa: Tbar, S.L.
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aminocidos y protenas [Blog spot].
Recuperado el 9 de abril de 2017 de
http://biokimik2011.blogspot.com/2011/09/objeti
vos-aplicar-pruebas-cualitativas.html
En este caso, esta prueba se puede considerar
-Murcia, K. (2010). Pruebas generales para
como una reaccin de sustitucin electroflica
aminocidos y protenas [Academia].
aromtica, y la tirosina al presentar un grupo
Recuperado el 9 de abril de 2017 de aromtico permite que dicha reaccin se d
https://www.academia.edu/9554305/pruebas_g
produciendo un producto de color amarillo que
enerales_para_aminoacidos_y_proteinas
en medio alcalino se intensifica el color a un
-Ruiz, F. (2011). Reconocimiento de protenas.
amarillo oscuro o anaranjado.
Recuperado el 9 de abril de 2017 de
http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Recono 2. Si tienes tres muestras biolgicas no
cimiento%20de%20Protenas.htm
etiquetadas, en la cual una de ellas es un
-Devlin, T. (2004). Reaccin xantoproteica
carbohidrato, otra un lpido y otra una
[Wikipedia]. Recuperado el 9 de abril de 2017 de
protena; cul prueba usaras para
https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_
identificar rpidamente cual es la protena?
xantoproteica R: Utilizara la prueba con el reactivo de biuret,
-Brenes, B. (2010). Grupo tiol [Wikipedia].
debido que en esta prueba se detecta la
Recuperado el 9 de abril de 2017 de presencia de protenas ya que el reactivo
https://es.wikipedia.org/wiki/Tiol
contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina
-McGee (2010). Grupo amino [Wikipedia].
este reaccionara formando un complejo, de color
Recuperado el 9 de abril de 2017 de violeta, de coordinacin entre los iones Cu2+ y
https://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_amino
los pares de electrones no compartidos del
-Lee, D. (2005). Indol [Wikipedia]. Recuperado el
nitrgeno que forma parte de los enlaces
9 de abril de 2017 de
peptdicos por lo que podremos identificar
https://es.wikipedia.org/wiki/Indol
rpidamente la protena de los otros dos
-Baquero, E. (2012). Pruebas cualitativas para
compuestos, ya que al no poseer enlaces
aminocidos y protenas [Academia].
peptdicos no formaran el complejo color violeta
Recuperado el 9 de abril de 2017 de caracterstico. En algunos casos los
https://www.academia.edu/6410068/BIOQUIMI
carbohidratos reaccin con el reactivo de biuret
CA_INF_4
pero en ese caso la solucin se torna de color
-Chacn, O. & Guevara, V. (2013). Manual de
rojo.
laboratorio de Qumica orgnica 236. Pruebas
cualitativas para aminocidos. 3. Dibujar la estructura de los aminocidos
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tirosina, triptfano, fenilalanina y de los
Experiments in Organic Chemistry. 7 ed..
aminocidos ensayados.
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Revert.
-Bates, S. (1977). Tcnicas de Investigacin en
Qumica Orgnica Experimental. Madrid.
Alhambra

Cuestionario
1. Da un ejemplo (usando formulas qumicas)
de la reaccin que se lleva a cabo entre uno
de los aminocidos (cualquiera) que usaste
y los reactivos que usaste para identificarlos.