TRANSFORMACION DE BACTERIAS POR ADN PLASMIDICO

L. Narvez Urbano, M. Celi Hurtado, S. Valencia Vergara.

UNIVERSIDAD DEL QUINDIO
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS Y TECNOLOGIAS

METODOLOGIA

Para realizar la transferencia gentica por la Al cabo de este tiempo, utilizando dos cajas
inclusin de DNA libre en forma circular, de Petri, una con agar MacConkey, y la otra
conocido como plsmido, es pertinente seguir con agar MacConkey con el antibitico
unos pasos, para poder obtener unos ampicilina, se hizo una siembra con un
resultados, verdicos. En primer lugar tener hisopo de las muestras de E. Coli; y se le
aislada dos cepas bacterianas de E. Coli, adicionaron los plsmidos, esto con el fin de
previamente, de las cuales una pertenece a su reconocer las bacterias que fueron
condicin silvestre. Dicha cepa fue extrada transformadas con la inclusin del plsmido
de una lnea de crio preservados, resistente a la ampicilina y las bacterias que
almacenadas a una temperatura de 80 C. continuaron silvestres.
Luego de esto se realizaron cultivos de la
cepa silvestre.
Luego de esto, por medio de una micro pipeta
se midi un mililitro de DNA libre, y otro
mililitro de cultivo silvestre de E. Coli,
depositarlos en frascos de cuello de flauta, y
proceder a colocarlos al bao mara por un
tiempo de una hora, esto para llevar hasta una
temperatura de ebullicin de 120 C a las
bacterias, para desnaturalizar los compuestos
orgnicos, quedando solo el DNA libre,
debido a que este se puede re naturalizar.
Discusin y resultados
Figura 1. Cultivo de E. coli en agar
MacConkey con la ampicilina.
Figura 2. Cultivo de E. coli solo en agar
MacConkey.
Como se observa en los resultados, La E. Coli
silvestre es altamente sensible, porque la
produccin de Amp es insignificante y no
confiere resistencia, mientras que para la
modificada, presenta unos niveles de
produccin de Amp moderada que hace
referencia a una resistencia cromosmica
adquirida por medio de un plsmido, que le
confiere hper produccin de Amp
hacindola resistente.
La presencia en el plsmido del gen de
resistencia a ampicilina permite seleccionar
las bacterias que portan estos plsmidos,
gracias a su capacidad para crecer en
presencia de dicho antibitico (el gen de
resistencia codifica una beta lactamasa,
enzima que degrada la ampicilina).
La mayora de los plsmidos usados en
biologa molecular contienen el sitio de
clonacin mltiple dentro el gen de la -
galactosidasa lo que permite la interrupcin e
inactivacin de este gen cuando un DNA
inserto se clona en esta regin. En medios de
cultivo que contengan el anlogo de la lactosa
X-gal, esta estrategia permite distinguir las
colonias de bacterias, que contienen el vector
recombinante (con inserto), de aquellas que
han recibido un vector no recombinante (sin
inserto). Las bacterias que reciben el vector
recombinante no pueden utilizar lactosa ni su
anlogo y formar colonias blancas. Las
bacterias que reciben un vector no
recombinante s pueden utilizar la lactosa o
su anlogo y formarn colonias azules. (dptos
bioqumica, 2016).
Durante el proceso de transformacin los
genes se transfieren de una bacteria a otra
como DNA desnudo en solucin. Este
proceso se demostr por primera vez hace
ms de 70 aos. La transformacin no solo
demostr que el material gentico poda
transferirse de una clula bacteriana a otra
sino, que el estudio de este fenmeno
finalmente condujo a la conclusin de que el
DNA es el material genrico (Tortora.G et
al. 2007).
La bacteria E,Coli sobrevive por largos Los plsmidos utilizados para la
periodos de tiempo afuera de la clula transformacin de bacterias contienen en
husped. Esta bacteria crece fcilmente en el general, uno o varios genes de inters, un gen
laboratorio y por eso se escogi para realizar reportero (que permite visualizar la
la prctica, es la bacteria ms estudiada lleva transcripcin del plsmido), y un gen de
60 aos de investigacin, ya que tiene gran resistencia a un antibitico, que en nuestro
importancia para los campos de caso empleamos la ampicilina, permitiendo
biotecnologa y microbiologa donde ha de esta manera seleccionar a la bacteria
servido como organismo husped para transformada de otras, por su capacidad de
mejorar los trabajos con ADN recombinante crecer en medio que contiene el antibitico,
( vogt et dipold.2005). del que presenta resistencia, la cepa
bacteriana.
Para mover los genes de un organismo a otro
se necesita la ayuda de vectores, que son
molculas transportadoras para transferir y Las transformaciones tienen muchas
replicar fragmentos de ADN que llevan aplicaciones, como la produccin de
insertados mediante tcnicas de ADN protenas, la produccin de los mismos
recombinante. Para que sirva de vector, una plsmidos, la produccin de bacterias que
molcula debe ser capaz de replicarse junto consumen petrleo, entre otros. Sin embargo,
con el fragmento de ADN que transporta. deben manejarse de forma especial, tanto en
Tambin tiene que tener secuencias de el laboratorio, como el manejo de desechos,
reconocimiento que permitan la insercin del para evitar la diseminacin o liberacin al
fragmento de ADN a clonar. ambiente de los microorganismos que estn
genticamente modificados. (Citado de
Para insertar un fragmento de ADN al
Torres, 2011).
vector, se utiliza una enzima de restriccin,
y se mezcla con fragmentos de ADN
producidos con la misma enzima. (Tomado
deApuntesbiotecnologiageneral, 2016).
Los vectores que transportan un fragmento
insertado se denominan vectores
recombinantes. Los vectores ms utilizados
por cientficos se llaman plsmidos, aunque
tambin se puede utilizar los bacterifagos,
los csmidos (vectores de clonacin) y aun
otros virus. (Asamoah baah. 2005). En
nuestra prctica se utilizaron plsmidos, Los
plsmidos son fragmentos extra
cromosmicos de cidos nucleicos y poseen
la capacidad de transferir linajes
filogenticos distintos desarrollando
resistencia a antibiticos. (klug.2010).
Conclusiones
El paso inicial para realizar una adecuada
deteccin de la resistencia por parte del
laboratorio de microbiologa es la
interpretacin y el conocimiento de los
perfiles fenotpicos bacterianos. Esto
constituye una herramienta que puede brindar
un conocimiento preliminar acerca de los
mecanismos de resistencia moleculares
responsables.
La aparicin cada vez ms frecuente y
diversa de los mecanismos de resistencia a
nivel microbiano y sobre todo en aquellas
bacterias patgenas facultativas como la E.
Coli al ser una bacteria anaerobia facultativa
e incluso oportunistas, ha trado
consecuencias importantes en trminos de
morbilidad y mortalidad y millonarias
prdidas no slo humanas sino econmicas.
De acuerdo a nuestro estudio, y los
fundamentos encontrado en la teora, una
cepa de bacteria puede ser mutada mediante
la transformacin de su material gentico al
insertarle un plsmido como un agente que
contiene la informacin que se desea que se
exprese. Para este caso la cepa bacteriana fue
la E. Coli, y la informacin fue adoptar la
resistencia para la ampicilina.
Referencias bibliogrficas
Libros
----Asamoah baah. 2005. MANUAL DE
BIOSEGURIDAD EN EL
LABORATORIO.Ginebra 27, suiza.
Organizacin mundial de la salud.
----Tortora.G et al 2007.Introduccin a la
microbiologa novena edicin.
----vogt et dipold.2005. Esclerichia Coli 0157
H7 outbreak associated with consumption of
ground beef.
----William,S. Klug et al, 2010. Essentials of
genetics.
Fuentes electrnicas
----
Apuntesbiotecnologiageneral.blogspot.com.
co. (2016). Vectores de transformacin
gentica. [online] Available at:
http://apuntesbiotecnologiageneral.blogspot.
com.co/2015/02/vectores-de-
transformacion-genetica.html [Accessed 10
Oct. 2016].
----uco.es/dptos/bioquimica.
(2016). Aislamiento y purificacin del DNA.
[online] Available at:
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/AISLAMIENTO/Y/PURIFICACI
ONDE/DNA/DE/UN/PLASMIDO/RECOM
BINANTE.pdf [Accessed 10 Oct. 2016].
---- Torres, J. (2011). Transformacin
bacteriana. [online]
Seguridadbiologica.blogspot.com.co.
Available at:
http://seguridadbiologica.blogspot.com.co/2
011/02/transformacion-bacteriana.html
[Accessed 17 Oct. 2016].