Universidad Nacional de San Agustn 1

Evaluaci n de la Birremediaci n de suel cntaminad pr gaslina mediante la te cnica

de bilabranza cn micrrganisms mes fils aerbis

Evaluaci n de la Birremediaci n de suel

cntaminad pr gaslina mediante la te cnica de
bilabranza cn micrrganisms mes fils
aerbis

Trabajo de Investigacin Formativa, Microbiologa Industrial,

Escuela profesional de Ingeniera Qumica, Facultad de Ingeniera de Procesos,
Universidad Nacional de San Agustn, Arequipa Per 2017
Garcia Quispe Erick, Jara Huanca Ariela, Mullisaca Castro Mary, Villalva Pari Nataly, Yucra Chambilla Erika

RESUMEN

La biorremediacin de suelos contaminados por gasolina mediante la tcnica de biolabranza, consisti en utilizar
fertilizantes, abono y aserrines; como fuentes de microorganismos vivos; para el consumo de la gasolina en el suelo. Se
instal el experimento a nivel de bioensayo, en el Laboratorio de Microbiologia de la Escuela de Ingenieria Quimica de la
Universidad Nacional de San Agustin, aplicndose el modelo estadstico de Diseo Experimental Completamente al Azar
(DCA), se realizaron ocho tratamientos en macetas experimentales, para lo cual se emple fertilizantes, abono y
aserrines como sustrato a la planta indicadora de maz (Zea mays L.), sembrados y controlados por un periodo de tres
semanas. Comparando los tratamientos del experimento el que mejor ha remediado los suelos fue el tratamiento (T2)
suelo contaminado ms aserrn, siendo este tratamiento lo ms recomendable a usar.

Palabras clave: biorremediacion, gasolina, fertilizante, abono, aserrn

ABSTRACT

The bioremediation of soils contaminated by gasoline using the biolabranza technique consisted in using fertilizers,
compost and sawdust; As sources of living microorganisms; For the consumption of gasoline in the ground. The
experiment was installed at the level of bioassay in the Laboratory of Microbiology of the School of Chemical Engineering
of the National University of San Agustin, applying the statistical model of Experimental Design Completely al Azar (DCA),
eight treatments were carried out in experimental pots, For which fertilizers, manure and sawdust were used as substrate
to the maize (Zea mays L.) indicator plant, planted and controlled for a period of three weeks. Comparing the treatments
of the experiment the one that has better remedied the soils was the treatment (T2) contaminated soil plus sawdust, being
this treatment the most advisable to use

Keywords: bioremediation, gasoline, fertilizer,abon, sawdust

I. INTRODUCCIN industriales (grifos, cisternas y otros), que contaminan el

suelo y a pesar del cuidado que puede tenerse en su manejo
En el Per y en el mundo existen refineras de petrleo que y almacenamiento, existe la posibilidad de que estos
producen compuestos derivados que son producidos y compuestos ingresen al suelo en cantidades que superen el
transportados para su uso en diferentes actividades cinco por ciento que es el nivel establecido por el Ministerio

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de Energa y Minas. En el pas sobre estos suelos
contaminados, no existe informacin estadstica oficial sobre
la ubicacin y extensin de las reas afectadas y su
disposicin adecuada de los productos y residuos de la
industria del petrleo, a pesar de la lgida tarea del Ministerio
de Energa y Minas, autoridad ambiental competente para las
actividades petroleras en nuestro pas. Esto es un problema
muy importante que requiere que los suelos contaminados
con hidrocarburos sean remediados con tecnologas de bajo
costo y de fcil acceso y evitar la contaminacin de las aguas
subterrneas. El Ministerio de Energa y Minas a travs de su
Gua Ambiental para la Restauracin de Suelos en
Instalaciones de Refinacin y Produccin Petrolera y su
Gua para el Manejo de Desechos de las Refineras de
Petrleo, apoya y estimula el empleo de diferentes tcnicas
para la recuperacin de suelos contaminados con
hidrocarburos, entre las que se encuentran la
biorremediacin. Existen otras tcnicas biolgicas que se
basan en la capacidad de los microorganismos y las plantas
para degradar, transformar o remover compuestos orgnicos
txicos y transformarlos en productos metablicos inocuos o
menos txicos (Instituto Nacional de Ecologa, 2003). Estas
tcnicas de biorremediacion, no usan agentes qumicos y
tienen costos de implementacin ms bajos respecto a otras
tcnicas. Por estos motivos tienen una mayor aceptacin y
han sido empleadas con xito en otros pases. Navarro et al.
(2001) manifiestan que en nuestro pas ya se han empleado
tcnicas de remediacin, la refinera La Pampilla inici en
1999 un proyecto de remediacin empleando biopilas para
tratar los suelos del rea de playa afectados por la
disposicin de residuos de hidrocarburos y subproductos de
petrleo, mientras que en Lobitos (Talara), se ha reportado la
remediacin de suelos con concentraciones de TPH del
30,5% empleando la tcnica del Landfarming con buenos
resultados y costo alto. El mismo autor agrega que el nmero
de estudios de remediacin para determinar un estndar
ambiental para los hidrocarburos en el Per es muy limitado.
Pero se ha encontrado una mayor sensibilidad en los cultivos
alimentarios realizados en otros pases. En la mayora de los
casos para un suelo, dependiendo de su valor de uso debera
ser menor a 5% de slidos totales de hidrocarburos antes de
ser incorporado en algn ambiente. Por lo expresado la
tecnologa de la biorremediacin de suelos es factible
especialmente con materia prima simple como estircol,
aserrn, cuyos costos de remediacin son bajos.
Objetivo del estudio: Determinar la recuperacin de un suelo
contaminado con hidrocarburos, usando aserrn y abono o
fertilizantes, empleando como planta indicadora al maz (Zea
mays L.) de la variedad Marginal T-28.
II. MARCO TERICO
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La Gasolina de 90 octanos est constituida por una mezcla
de hidrocarburos saturados, olefinas, naftenos y aromticos,
en el rango aprox. de C5 a C12. (Petroper .2013). Frick et al.
(1999) afirman que las plantas que crecen en suelos
contaminados con hidrocarburos de petrleo pueden reducir
la concentracin de estos contaminantes mediante tres
mecanismos: degradacin, contencin o transferencia. Existe
poca evidencia sobre la degradacin directa de los
hidrocarburos de petrleo por las plantas. La va de
degradacin de alcanos en las plantas pueden ser
generalizada como:
CO2 + H2O: Son los productos de la degradacin del
hidrocarburo (Residual)
Arbaiza et al., (1999) consideran que el aserrn es una
materia orgnica de origen vegetal, derivado del aserro de
especies maderables duras y suaves, como la bolaina, el
pino, capirona y otros.
Juzcamaita (2009) refiere que la descomposicin microbiana
libera gran cantidad de energa en forma de calor, lo cual
incrementa la temperatura. Es necesario mantener una
temperatura del proceso en el rango adecuado (40 C - 60
C), por ello es importante la aireacin.
Segn la IFA (Asociacion Interncional de los Fertilizantes,
2002).Los fertilizantes proveen nutrientes que los cultivos
necesitan. Con los fertilizantes se pueden producir ms
alimentos y cultivos comerciales, y de mejor calidad. Con los
fertilizantes se puede mejorar la baja fertilidad de los suelos
que han sido sobreexplotados.
El abono orgnico a menudo crea la base para el uso exitoso
de los fertilizantes minerales. La combinacin de abono
orgnico / materia orgnica y fertilizantes minerales (Sistema
Integrado de Nutricin de las Plantas, SINP) ofrece las
condiciones ambientales ideales para el cultivo, cuando el
abono orgnico / la materia orgnica mejora las propiedades
del suelo y el suministro de los fertilizantes minerales provee
los nutrientes que las plantas necesitan
III. HIPTESIS

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Se espera reducir la contaminacin de suelos contaminados
con gasolina mediante la tcnica de biorremediacin
(Biolabranza), aplicando fertilizantes,abono; que es una
fuente de microorganismos a parte de los autctonos del
suelo; ms aserrines.
IV. OBJETIVO GENERAL:
Evaluacin de la Biorremediacin de suelo contaminado con
gasolina mediante la tcnica de biolabranza con
microorganismos mesfilos aerobios
OBJETIVO ESPECIFICO
Analizar los parmetros de pH y temperatura
Cuantificar y analizar los microorganismos de cada
tratamiento
Determinar la biorremediacion con respecto al
crecimiento del maz
VARIABLES
Variable dependiente (V.D)
Concentracin de gasolina en el suelo
Variable independiente (V.I)
Concentracin de fertilizante
Concentracin de abono
Concentracin de aserrn
Tiempo de biorremediacin
V. METODOLOGA
CONTAMINACION DEL SUELO
Se tom muestra de 8 kg de suelo el cual se contamino con
700 ml de gasolina de 90 octanos. Se dej secar al aire libre
por 24 horas
Muestreo, Preparacin y Caracterizacin Del Suelo
Contaminado
Asegurarse que el suelo este seco para proceder a realizar
los ensayos fisicoqumicos y anlisis microbiolgico.
El suelo recolectado debe pasar por un tamiz de 2mm para
ello es recomendable triturarlo.
Para la caracterizacin del suelo se determinar:
Temperatura
PH
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Anlisis cualitativo de la poblacin de
microrganismos
ANLISIS MICROBIOLGICO
CONTAJE DE BACTERIAS MESOFILAS AEROBIAS Y
ANAEROBIAS POR LA TCNICA DE DILUCIN EN
PLACA
Se pes 1 gr de muestra del suelo contaminado
sin remediar y se diluyo en un tubo con 9 ml de
suero fisiolgico (dilucin 10-1). Luego se tom 1
ml de la dilucin anterior y se le agrego 9 ml de
suero fisiolgico (dilucin 10-2), as sucesivamente
hasta la dilucin 10-5.
Para la siembra de microorganismos en superficie,
se tom 1 ml de la disolucin 10 -1 y se le coloco en
una caja Petri con 20 ml aproximadamente del
medio de cultivo Agar Nutritivo gelificado, se utiliz
el asa de Digralsky para diseminar la muestra. Se
empaqueto en posicin invertida y se incubo a
37C por 24 horas.
Para la siembra de microrganismos en
profundidad se tom 1 ml de la disolucin 10 -1 y
se coloc en una caja Petri estril y se procedi a
agregar agar Nutritivo fundido, se homogeneizo.
Se empaqueto en posicin invertida e incubo a
37C por 24 horas.
Pasadas las 24 horas se realiz el conteo eligiendo la
placa que tena entre 30 a 300 colonias.
TINCION GRAM
Se recogi una muestra de las siembra de microorganismos
la cual se extendi en un portaobjetos con la ayuda de un asa
de Kohle, se logr fijarlas mediante el mtodo de flameo.
Se agreg cristal violeta y se esper un minuto, se enjuago y
despus se le aadi el lugol por un tiempo de un minuto
aproximadamente, se enjuago y se agreg alcohol de 96%
durante un minuto, se enjuago y se agreg safranina por un
tiempo de un minuto. Se lav levemente con agua
Se observ en el microscopio ptico a 100X con aceite de
inmersin
Matriz de tratamientos planteada para la
biorremediacin:
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- Superficie

S: Suelo contaminado
A: Abono
Grafica N2: Siembras en superficie. Fuente elaboracin
R: Aserrn
propia
F: Fertilizante
Placa superficie 10-2 = 56 UFC/ml
TEMPERATURA
Placa profundidad 10-2 = 81 UFC/ml
Placa superficie 10-1 (vista de microscopio)
Se procedi a medir la temperatura colocando el
termmetro sobre las matrices.
En la muestra, por medio de tincin Gram se observan
POTENCIAL DE HIDROGENO (PH) Bacilos Gram + y Gram -, en su mayora.

Se pes 10 gr de suelo y se coloc en un vaso de La presencia de Cocos Gram- es muy baja

precipitado, luego se aadi 20 ml de agua destilada y
Placas con dilucin 10-2 y 10-3 son contables
se agito durante 3 min. En el extracto se medio el PH
con un PHmetro. Se registraron las lecturas obtenidas

VI. RESULTADOS

Conteo de colonias del suelo contaminado

- Profundidad

Grfica N3: Bacilos gram positivos y negativos. Vista 100X.

Fuente elaboracin propia

Grafica N1: Siembras en profundidad. Fuente elaboracin

propia
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Tabla N2: Resultados de pH y temperatura para los

tratamientos. Fuente elaboracin propia

TINCION GRAM

Tabla N 3: Tratamientos en diluciones y vistas de

microscopio. Fuente elaboracin propia

Anlisis de la altura de la planta de maz

TABLA N4: Altura de la planta de maz. Fuente elaboracin

propia

TRATAMIENTO Altura de la planta de maz

(cm)

T1 1.4
T2 2.7
T3 2.4
T4 0.6
T5 2.1
T6 0.9
T7 1.5
T8 1.9

Grafica N4: Altura planta de maz. Fuente elaboracin propia

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Segn el anlisis del promedio de altura de planta (cm), que

se aprecia en el cuadro de tratamiento. El T2 (suelo
contaminado, ms aserrn) tuvo un mayor crecimiento
(2.7cm), superior a los dems tratamientos. Lo cual se

8
s= 26.45
(13.5)2
8 (81)

presenta en el grfico de la altura de la planta de maz. s=1.4814

Coeficiente de variacin:

Modelo estadstico y anlisis de varianza

S
CV = 100
TABLA N5: Anlisis estadstico. Fuente elaboracin propia x

Altura de la 1.4814
planta CV = 100
TRATAMIENTO X 2 1.6875
de maz (cm)
CV =87.79
T1 1.4 1.96

T2 2.7 7.29

T3 2.4 5.76

T4 0.6 0.36

T5 2.1 4.41 Discusin sobre altura de planta.

T6 0.9 0.81 Cabe destacar que un buen parmetro para evaluar los
niveles de concentracin de hidrocarburos en suelos
T7 1.5 2.25 contaminados es la altura de planta, dado que el fertilizante y
el aserrn permitieron obtener un mejor crecimiento de las
T8 1.9 3.61
plantas de maz en 2.7 cm, por lo que tuvo efectos altamente
26.4 significativos. Lo cual coincide con Manrique et al (1988).
13.5
X 5

(X) 2 182.25
VI. CONCLUSIONES

Los microorganismos se encuentran en la etapa de

n: nmero de tratamientos: 8 adaptacin, puesto que los pH obtenidos varan en un rango
de 6 a 8, en este intervalo los microorganismos presentan un
Media aritmtica: mejor crecimiento. (Maroto A. 2004)

X Las bacterias son capaces de generar acidez en el medio por

X = la produccin de cidos orgnicos (B. 2008), pero no se
n
alcanz esta etapa. Aun presentan pH casi neutros.
13.5
X = =1.6875 El tratamiento de Biorremediacin aplicando la tcnica de
8 Bioestimulacin al rea impactada contaminada con gasolina,
el tratamiento 2 presenta brotes de la semilla de maz,
Desviacin estndar: indicando que la tierra presento una disminucin de
hidrocarburos.

n
s= X 2
( X )2
n(n1)
De acuerdo a los ensayos en laboratorio, los suelos
remediados presentan en su mayora bacilos Gram positivos
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Segn el anlisis del promedio de altura de planta (cm), el T2

(suelo contaminado, ms aserrn) tuvo un mayor crecimiento
(2.7cm), superior a los dems tratamientos. Lo cual se
presenta en el grfico de la altura de la planta de maz.

La planta de maz es un buen indicador para evaluar la

reduccin de la concentracin de hidrocarburos en los suelos
contaminados a travs de sus variables la altura de la planta

VII. REFERENCIAS

UNAM Mxico, Q.F.B. de Fes-Cuautitln,

morfologa de crecimiento de microorganismos en
placa.

Biodegradacin de asfaltenos y resinas por

microorganismos presentes en suelo contaminado
con hidrocarburos, Universidad de Carabobo

Aplicacin de sistemas de biorremediacin de

suelos y aguas contaminadas por hidrocarburos,
Maroto Arroyo Rogel Quesada

Remediacin de suelo contaminado con grasa del

agua residual de Industria Quesera. Mara
Saucedo, Instituto Politcnico Nacional - Mxico
2010

SciELO, Instituto de salud pblica de chile 2014