UNIVERSIDAD FRANZ TAMAYO

UNIFRANZ
FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD
BIOQUMICA Y FARMACIA

PRCTICA N 5 BILIRRUBINA

MATERIA: ANLISIS CLINICO II

NOMBRE COMPLETO:

SEMESTRE: 831
FECHA DE ENTREGA:

DOCENTE: DRA. NATTALY TORRICO V.

GESTIN II-2017

COCHABAMBA
 PRCTICA #5

DETERMINACIN DE BILIRRUBINA

i. Introduccin o Fundamento terico

La bilirrubina es un producto de desecho (concretamente, procede de la degradacin de los

glbulos rojos (degradacin de grupo hemo de la hemoglobina), mayoritariamente , en la
clulas del sistema retculo endotelial (mdula sea, bazo e hgado). La degradacin de la
cual surge en primera instancia la bilirrubina indirecta "o "no conjugada" , que el hgado se
encarga de eliminar por la bilis al intestino. Para ello, el hgado somete la bilirrubina a los
procesos de conjugacin (en el que se obtiene la bilirrubina "directa" o "conjugada") y
excrecin (proceso por el que la bilirrubina "conjugada" pasa a la bilis) y, a continuacin, la
bilis recorre una serie de conductos denominados "va biliar" que se encargan de conducirla
al intestino.

Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar

hiperbilirrubinemias

La hiperbilirrubinemia consiste en un aumento de la concentracin de bilirrubina en sangre,

que puede o no acompaarse de otras alteraciones de las pruebas de funcin heptica
segn el proceso en cuestin; cuando es de suficiente intensidad da lugar a una coloracin
amarillenta de la piel y las mucosas denominada "ictericia".

El aumento de bilirrubina en sangre puede deberse a un exceso de produccin de la misma

que sobrepasa la capacidad de eliminacin del hgado, a un fallo en los procesos hepticos
de conjugacin y/o excrecin o a algn problema que impida la llegada de bilis al intestino.

La produccin de bilirrubina se ve incrementada en todos aquellos procesos que cursan con

un aumento de la destruccin de glbulos rojos, como la hemlisis entre otras entidades.

El fallo en los procesos de conjugacin o excrecin puede darse de forma aislada en los
sndromes congnitos de Gilbert y Crigler-Najjar (conjugacin) y de Dubin-Johnson y Rotor
(excrecin), o bien como parte de un problema heptico mucho ms amplio, por ejemplo
dentro de una hepatitis aguda o en el curso de una cirrosis. Por ltimo, la obstruccin al
flujo de la bilis que impide su eliminacin al intestino se produce en trastornos como la
cirrosis biliar primaria, los tumores de la cabeza de pncreas, la presencia de clculos en la
va biliar, etc.
 El recin nacido, en general, tiene una predisposicin a la elaboracin excesiva de
bilirrubina, produciendo entre 8 a 19 mg/kg/dia de bilirrubina, dos a tres veces ms que el
adulto sano. El incremento de la produccin de bilirrubina est dado por un mayor volumen
de glbulos rojos circulante por kilogramo, la disminucin de la vida media de los glbulos
rojos ( 80 a 100 das en el recin nacido de trmino, 60 a 80 en el recin nacido de pre
trmino y 35 a 50 das en el Recin nacido de bajo peso extremo, contra 120 das en el
adulto), el incremento de las formas celulares inmaduras y el aumento de la bilirrubina
temprana. En el neonato, la proporcin de bilirrubina proveniente de estas ltimas fuentes
est aumentada, ya que el tejido eritropoytico fetal se destruye luego del nacimiento. El
incremento de bilirrubina tambin es causado por alteraciones en la conjugacin o
excrecin, la alimentacin inadecuada, el incremento del circuito enteroheptico,
deficiencias hormonales y desordenes en el metabolismo de la bilirrubina.

Por otra parte, La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una
patologa provocada por incompatibilidad materno fetal en la que se produce una
destruccin excesiva de glbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina
srica con el consecuente riesgo de difusin del pigmento al sistema nervioso central, por
lo que la determinacin de bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta sumamente
importante.

Fundamento del mtodo de determinacin de Bilirrubinay principio de la reaccin

La bilirrubina reacciona con el cido sulfanilico diazotado (DSA) formando un color rojo. La
absrobancia de este color a 546 nm es directamente proporcional a la concentracin de
bilirrubina en la muestra. Los glucoronidos de la bilirrubina solubles en agua reaccionan
directamente con DSA mientras la bilirrubina indirecta conjugada con albumina reacciona
solo en la presencia de un acelerados.

cido sulfanilico + nitrito de sodio DSA

Bilirrubina + DSA directa azobilirrubina DIRECTA
Bilirrubina + DSA + acelerador azobilirrubina TOTAL

ii. Objetivos
Determinar la concentracin de Bilirrubina en sangre

iii. Materiales y Reactivos

Micropipetas 100 ul y 1000 ul
Tips
Tubos de ensayo delgados (Espectrofotmetro)
Gasa
Marcador para vidrio
Cronometro
 Kit comercial determinacin de Bilirrubina (Prueba fotomtrica para bilirrubina
directa y bilirrubina total) mtodo modificado Jendrassik/ Grf
Suero o plasma heparinizado
Espectrofotmetro
Calculadora

iv. Procedimiento
1. Atemperar reactivos
2. Proteger las muestras de la luz
3. Preparar reactivos para el uso:
a. TBR reactivo de Bilirrubina total ( cido sulfanilico, cido clorhdrico, cafena
como acelerador y benzoato de sodio)
b. TNR Reactivo T nitrito para la determinacin de bilirrubina total ( nitrito
de sodio)
c. DBR reactivo de bilirrubina directa ( cido sulfanilico , cido clorhdrico)
d. TNR Reactivo D nitrito para la determinacin de bilirrubina directa (
nitrito de sodio)

Procedimiento para Bilirrubina Total

1. Identificar tubos de ensayo Blanco y Muestra

2. Pipetear 1000 ul de TBR en el Blanco y en la muestra
3. Agregar 1 gota ( 40 ul) de TNR en la muestra
4. Mezclar cuidadosamente
5. Incubar 5 minutos
6. Agregar 100 ul de suero o plasma (muestra) al Blanco y Muestra
7. Mezclar
8. Incubar a temperatura ambiente de 10 -30 minutos
9. Leer la absorbancia de la muestra, frente al blanco a una longitud de onda de 546 nm

Procedimiento para bilirrubina directa

1. Identificar tubos de ensayo Blanco y Muestra

2. Pipetear 1000 ul de DBR en el Blanco y en la muestra
3. Agregar 1 gota ( 40 ul) de DNR en la muestra
4. Mezclar cuidadosamente
5. Aadir muestra dentro de 2 minutos
6. Agregar 100 ul de suero o plasma (muestra) al Blanco y Muestra
7. Mezclar
8. Incubar a temperatura ambiente de 5 minutos exactamente
9. Leer la absorbancia de la muestra, frente al blanco a una longitud de onda de 546 nm
Clculos:

Calcular la concentracin de bilirrubina total y directa usando el factor 13, 0

C= Abs 546 x 13, 0 = mg/dl

Bilirrubina total= bilirrubina directa+ bilirrubina indirecta

Bilirrubina indirecta = Bilirrubina total Bilirrubina directa

Caractersticas de la prueba

Linealidad: El ensayo es lineal hasta 25 mg/ dl. Para concentraciones de bilirrubina que exceden 25
mg/ dl diluir la muestra.

Valores de referencia para el kit de Bilirrubina (Human)

Bilirrubina Total mg/dl

Recin nacido, hasta: 5

5 das , hasta 12

1 mes , hasta 1.5

Adultos, hasta 1.1

Bilirrubina directa

Adultos, hasta 0.25

v. Bibliografa

V.F Moreira. A. Lopez San Romn.Pruebas de funcin heptica: B, AST, ALT, FA y

GGT. Servicio de gastroenterologa. Hospial Universitario Ramn y Cajal. Revista
espaola de enfermedades digestivas. 2015. Espaa
Msc. Leticia Bequer. MSc Tahiry Gomez. Perfil Heptico en neonatos segn su peso
al nacer. Unidad de investigaciones biomdicas. Universidad de Ciencias mdicas de
Villa Clara. 2015.Cuba.
PRACTICA N 5
TITULO:
I. OBJETIVO GENERAL
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II. FUNDAMENTO QUMICO

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III. PROCEDIMIENTO

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Figura 1. Figura 2. Figura 3.

IV. CALCULOS Y RESULTADOS

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V. INTERPRETACIN DE RESULTADOS (Adems Incluir Valores de referencia)
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VI. CONCLUSIONES
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VII. CUESTIONARIO
1. Qu efectos podra tener la luz en la valoracin de Bilirrubina, si la muestra estara
expuesta a esta , previa su valoracin? Las concentraciones disminuiran,
aumentaran o no tienen efecto significativo este factor sobre la realizacin de este
anlisis?
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2. Por qu no se recomienda emplear muestras con hemolisis para la valoracin de
bilirrubina? Las concentraciones disminuiran, aumentaran o no tienen efecto
significativo este factor sobre la realizacin de este anlisis?
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3. Para qu se emplea la valoracin de bilirrubina en lquido amnitico?
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4. Cules son los valores normales de bilirrubina en lquido amnitico?

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5. Qu significacin clnica tiene los valores por encima de lo normal de bilirrubina
en lquido amnitico?

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6. En qu situaciones o padecimientos se incrementa los valores de bilirrubina

directa por disfuncin hepatocelular? Mencione 4 situaciones



7. En qu situaciones o padecimientos se incrementa los valores de bilirrubina
directa por obstruccin biliar? Mencione 4 situaciones



 8. En qu situaciones o padecimientos se incrementa los valores de bilirrubina
indirecta por defecto en la produccin? Mencione 4 situaciones


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9. En qu situaciones o padecimientos se incrementa los valores de bilirrubina
indirecta por defecto en la captacin y almacenamiento de bilirrubina? Mencione 4
situaciones
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10. Por qu en los recin nacidos los valores de referencia para bilirrubina son
superiores comparado con los valores de referencia con los adultos?

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BIBLIOGRAFA
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