Biologa molecular y gentica Humana

Escuela de Medicina
Facultad de Medicina Universidad Finis Terrae

Bases metodolgicas de los estudios citogenticos

Los cromosomas humanos

OBJETIVO
El objetivo de esta prctica es el estudio del cariotipo humano. Se pretende que el
alumno aprenda a elaborar cariogramas y a distinguir el cariotipo normal de aquellos que
posean alteraciones cromosmicas.

MARCO TERICO

La citogentica es la rama de la gentica que estudia los cromosomas visualizados con el

microscopio ptico. Desde 1956 en que Tjio y Levan demostraron que el nmero exacto
de cromosomas de las clulas somticas del hombre era de 46, y Ford y Hamerton que el
nmero en el esperma era de 23, grandes progresos se han realizado tanto en el aspecto
tcnico como en su aplicacin a la medicina.

Cada clula somtica humana contiene 6x109 pares de bases, que equivalen a unos dos
metros de DNA estirado; este DNA est enrollado y plegado entre protenas nucleares
(histonas y no histonas) formando nucleosomas (estructura bsica de la cromatina) y
estructuras secundarias (solenoides) las cuales se empaquetan a su vez en asas o
dominios entre las protenas, quedando de esta forma empaquetado el DNA en el
cromosoma que vemos en la metafase. As el DNA del cromosoma 1 que extendido
tendra una longitud de 15 cm, en el cromosoma 21 solo mide 1,5 cm.

El cariotipo es la disposicin ordenada de los cromosomas del ncleo de una

clula de un individuo y viene definido por el nmero y morfologa de los cromosomas en
la metafase mittica. En la especie humana la dotacin cromosmica es de 2n = 46 (22
pares de autosomas y un par de cromosomas sexuales). Utilizando tcnicas de tincin
estndar los cromosomas aparecen uniformemente teidos en metafase y se clasifican en
7 grupos de la A a la G atendiendo a su longitud relativa y a la posicin del centrmero
que define su morfologa. Los autosomas se numeran del 1 al 22 ordenados por tamaos
decrecientes y por la posicin del centrmero. Los cromosomas sexuales X e Y
constituyen un par aparte, independientemente del resto (por su tamao, el cromosoma X
se incluira en el grupo C, y el Y, en el grupo G). De esta forma el cariotipo humano queda
constituido as:

Prof. Eva Villarroel Candia

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Grupo Pares cromosmicos Caractersticas

A 1, 2 y 3 Cr. muy grandes casi metacntricos (1 y 3
metacntricos, pero 2 submetacntrico)
B 4y5 Cr. grandes y submetacntricos, con dos brazos
muy diferentes en tamao
C 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12 Cr. medianos submetacntricos
D 13, 14 y 15 Cr. medianos acrocntricos con satlites
E 16, 17 y 18 Cr. pequeos, metacntrico el 16 y
submetacntricos 17, 18
F 19 y 20 Cr. pequeos y metacntricos
G 21 y 22 Cr. pequeos y acrocntricos, con satlites.
X, Y El cr. X es parecido al 6. El Y, al grupo G, pero sin
satlites.

(Todos los cromosomas autosmicos estn ordenados en orden decreciente de tamao,

excepto el cromosoma 21 que ahora se sabe que es ms pequeo que el 22)

Sin embargo, atendiendo solamente a

estos parmetros no es posible identificar
inequvocamente cada par de cromosomas.
Para ello es necesario utilizar diferentes
tcnicas de bandeo cromosmico. Los
distintos patrones de bandas que se
consiguen son constantes y especficos de
cada tcnica y determinan la distribucin de
regiones cromosmicas que se revelan
positiva o negativamente segn el mtodo
utilizado.

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Metodologa habitual en la obtencin del cariotipo

Es preciso partir de clulas que contengan cromosomas que sean susceptibles de

divisin. Tras varios das de cultivo en presencia de estimulantes mitticos, son tratadas
con colchicina para detener a los cromosomas en metafase. Luego las clulas son
tratadas con solucin hipotnica para romper las membranas y permitir que los
cromosomas se extiendan. A continuacin se procede a la fijacin cromosmica con
fijador de Carnoy (Metanol-Actico 3:1). Finalmente las clulas se extienden sobre un
portaobjeto en unas condiciones que permiten que los ncleos se lisen y sus cromosomas
se peguen extendidos sobre la superficie. Para visualizar los cromosomas se procede a la
tincin, con Giemsa como uno de los colorantes ms utilizados. El bandeo oscuro en esta
tincin correspondera a la heterocromatina intercalar cuyo DNA es rico en uniones A-T.
Luego de esto se procede a la fotografa para obtener el cariotipo.

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Citogentica clnica

En 1959 Lejeune describi la primera cromosomopata o enfermedad originada por

una alteracin cromosmica, el sndrome de Down producido por una trisoma del
cromosoma 21. Desde entonces, la Citogentica Humana ha ido desarrollndose como
una ciencia mdica.

Hay dos tipos fundamentales de cromosomopatas:

- Variaciones cromosmicas estructurales: afectan a la estructura del

cromosoma en cuanto a la ordenacin lineal de los genes. Aqu se incluyen deleciones,
duplicaciones, inversiones y translocaciones.
- Variaciones cromosmicas numricas: afectan al nmero de cromosomas.
Incluyen las poliploidas (triploida: 3n; tetraploida: 4n) y los diversos tipos de aneuploida
(trisomas: 2n+1; monosomas: 2n-1).
Por otra parte, las anomalas cromosmicas pueden afectar a los autosomas o a
los cromosomas sexuales.

Las alteraciones cromosmicas ms frecuentes en humanos son:

Anomalas autosmicas:
Sndrome de Down, por trisoma del cromosoma 21, translocacin 21/21 o translocacin
14/21.

Sndrome de Patau, por trisoma del par 13.

Sndrome de Edwards, por trisoma del par 18.

Sndrome Cri du Chat, por delecin parcial del brazo corto del cromosoma 5 (5p).

Sndrome de DiGeorge, por delecin parcial del brazo largo del cromosoma 22 (22q11).

Cromosoma Filadelfia, formado por una translocacin entre los cromosomas 9 y 22.

Anomalas de los cromosomas sexuales:

Sndrome de Klinefelter, por una constitucin XXY, XXXY, XXXXY.
Sndrome XYY, cromosoma Y extra en varones.
Sndrome de Turner, constitucin X0.

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Sndrome XXX, cromosoma X extra en mujeres.

Actualmente se ha llegado a profundizar bastante en el conocimiento del cariotipo

humano y se sabe que es relativamente frecuente la aparicin de anomalas
cromosmicas. Por ejemplo, cerca de un 25% de los abortos ocurridos antes de la octava
semana de gestacin tienen cariotipos anormales y un 0,5% de los recin nacidos
presentan aneuploidas.

Estas alteraciones no slo pueden producir anomalas en el propio individuo

portador sino que, por tratarse de anomalas genticas, pueden transmitirse a la
descendencia en el caso de que afecten a las clulas germinales. La deteccin anticipada
de anomalas cromosmicas permite dictaminar las posibilidades de que la descendencia
de una pareja portadora de una de ellas pueda presentarla o no. Para ello es preciso
conocer el cariotipo de cada progenitor, lo que permite emitir un diagnstico de su posible
descendencia, con lo que el individuo ser consciente de sus posibilidades.

El estudio del cariotipo tiene tambin su aplicacin en el diagnstico prenatal. Es posible

determinar la constitucin cromosmica del feto antes de su nacimiento pudiendo as
observarse si presenta alguna anomala cromosmica detectable. Hoy en da, el
diagnstico prenatal se practica a posteriori del inicio de la gestacin y los resultados
positivos suelen plantear conflictos ticos y emocionales.

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Actividad prctica
Una de las actividades que realizan los citogenetistas es la de confeccionar un cariotipo a
partir de los cromosomas en metafase.
Para ello completa los cariotipos del siguiente link
http://www.biologia.arizona.edu/human/act/karyotyping/karyotyping.html
Para completar los cariotipos, habr que ordenarlos cromosomas entregados
considerando su tamao, la posicin del centrmero y las bandas.
Para cada paciente responda lo siguiente:

PACIENTE A
Caractersticas del paciente?
Es un feto casi al trmino de su gestacin, de madre de unos 40 aos.
De dnde se obtuvo la muestra para el cariograma?
De clulas epiteliales, por amniocentesis (obtencin de lquido amnitico).
Qu notacin usaras para caracterizar el cariotipo del Paciente A?
47,XX,+21
Qu nombre recibe esta enfermedad?
Sndrome de Down
Indique el fenotipo potencialmente asociado a este sndrome
e incluya una foto
Cabeza puede ser ms pequea de lo normal y anormalmente
formada, orejas pequeas, boca pequea, ojos inclinados hacia
arriba, manos cortas y anchas con dedos cortos, baja estatura,
PACIENTE B
Caractersticas del paciente?
Hombre de 28 aos, infrtil.
De dnde se obtuvo la muestra para el cariograma?
Clulas nucleadas de su sangre.
Qu notacin usaras para caracterizar el cariotipo del Paciente A?
47,XXY

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Qu nombre recibe esta enfermedad?

Sndrome de Klinefelter
Indique el fenotipo potencialmente asociado a este sndrome e incluya una foto
Proporciones corporales anormales (piernas largas, tronco corto,
hombro igual al tamao de la cadera), agrandamiento anormal de las
mamas (ginecomastia), infertilidad, Vello pbico, axilar y facial menor
a la cantidad normal, testculos pequeos y firmes, estatura alta.

PACIENTE C
Caractersticas del paciente?
Paciente muerto tras nacer, con polidactilia y labio leporino.
De dnde se obtuvo la muestra para el cariograma?
Tejido post-mortem.
Qu notacin usaras para caracterizar el cariotipo del Paciente A?
47,XY,+13
Qu nombre recibe esta enfermedad?
Sndrome de trisoma 13 o de Patau
Indique el fenotipo potencialmente asociado a este sndrome e incluya una foto.
Labio leporino (paladar hendido), manos empuadas, ojos muy
juntos o fusionados (1 solo), polidactilia, coloboma (agujero en
iris), orejas de implantacin baja, microcefalia, micrognacia
(mandbula pequea), criptorquidia (testculo no descendido).

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