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IDENTIFICACIN DE AZCARES

Los hidratos de carbono actan como fuente esencial de energa a corto plazo y como unidades
estructurales de las clulas. Todos los azcares constan de un esqueleto carbonado que contiene
un grupo carbonilo y varios grupos hidroxilo. En estos grupos funcionales se centra su reactividad.
Estn divididos en tres grupos principales: monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Esta
prctica consiste en estudiar algunas reacciones qumicas en las que participan estos hidratos de
carbono y que se pueden utilizar para su identificacin

Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomolculas ms abundante sobre la superficie


terrestre, representando aproximadamente el 75 % de la materia orgnica existente. En ocasiones,
se denominan tambin carbohidratos, azcares, sacridos o glcidos. Todos son trminos que
hacen referencia a su sabor dulce, o a que poseen la composicin Cn(H2O)n. Aunque dicha
nomenclatura subsiste, no todos los glcidos tienen sabor dulce ni responden a tal composicin.
En los animales los carbohidratos son esenciales desde el punto de vista energtico, ya que
muchos rganos y clulas del cuerpo humano, como el cerebro y los glbulos rojos, obtienen su
energa principalmente de la glucosa.
Pero sus funciones no se restringen a ser nicamente fuente de energa, sino que tambin pueden
desarrollar funciones estructurales, de reconocimiento celular y adhesin. Estructuralmente, un
hidrato de carbono tpico es una cadena hidrocarbonada con varios grupos alcohol y un carbono
ms oxidado, en forma de grupo carbonilo. Este grupo oxidado puede situarse en el extremo de la
cadena (aldehdo), o adyacente, en posicin 2 (cetonas). A partir de esta estructura bsica, existen
otros hidratos de carbono con alguna modificacin qumica.
Los carbohidratos presentan tamaos moleculares muy diferentes. En funcin de ello, se clasifican
en monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los monosacridos contienen de 3 a 8 tomos
de carbono. Son las unidades bsicas y no pueden hidrolizarse para dar azcares ms sencillos.
Los oligosacridos son compuestos formados por uniones de algunos monosacridos. Los ms
importantes tienen slo 2 unidades y reciben el nombre de disacridos. Por ltimo, los
polisacridos estn constituidos por un alto nmero de unidades de monosacridos. Son largas
cadenas lineales o ramificadas, dependiendo del tipo de unin entre las unidades. Se dividen en
homopolisacridos y heteropolisacridos segn estn formados por el mismo tipo de monosacrido
o por varios diferentes.
I. REACCIN DE FEHLING

Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azcares reductores.


El poder reductor que pueden presentar los azcares proviene de su
grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes
oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no
puede presentar este poder reductor.
Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el
in Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo
del azcar se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente bsico
como en nuestro caso el NaOH el in Cu2+ formara Cu (OH)2
insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.

2 Cu 2+ + R-CHO Cu2O + R-COOH

(Azul) ( Rojo)

Procedimiento:

1. Mezclar en un tubo de ensayo:


Fehling A (CuSO4) 2 ml
Fehling B (Tartrato/NaOH) 2 ml
2. Agitar y calentar a ebullicin (aproximadamente 1 min).
3. Aadir 1 ml de la disolucin de azcar y hervir durante un
minuto.
Si se reduce el cobre se forma un precipitado de Cu2O de
color rojizo.
Fehling positivo: color rojizo.

III. REACCIN DE BENEDICT

Esta prueba sirve para el reconocimiento de azcares reductores.


Se basa en la reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil.
Aunque es similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil
(HNaCO3) y el estabilizante (citrato sdico) usados hacen que este
test sea ms sensible y estable.

Procedimiento:

1. Pipetear en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de


Benedict
2. Calentar a ebullicin.
3. Aadir 1 ml de la solucin de azcar, mezclar bien y se
volver a calentar a ebullicin.
Si la reaccin es positiva aparece un precipitado rojizo,
aunque si la cantidad de azcar es pequea puede dar color
anaranjado o verdoso

IV. REACCIN DE BRAUN

Esta reaccin sirve para el reconocimiento de azcares


reductores. Los azcares reductores en medio alcalino pueden reducir
el picrato, de color amarillo, a picramato, de color rojo en medio
alcalino (Na2CO3).

Procedimiento:

1. Aadir en un tubo de ensayo:


- Disolucin de azcar 4 ml
- cido pcrico saturado 2 ml (OJO, MUY VENENOSO)
- Na2CO3 1M 2 ml
2. Calentar a ebullicin.
Si el test es positivo, el color amarillo pasa a rojo.

V. PRUEBA DE BARFOED

Esta prueba sirve para el reconocimiento de monosacridos.


En medio cido, tan slo los monosacridos son capaces de reducir el
Cu2+ a Cu+. El Cu+ as producido reduce al cido fosfomolbdico a un
complejo de intenso color azul oscuro.

Procedimiento:

1. Pipetear en un tubo de ensayo:


- Disolucin de azcar 1 ml
- Disolucin cida de cobre 1 ml
2. Calentar a ebullicin durante 3 minutos.
3. Enfriar en agua durante 2 min
4. Aadir 1 ml del reactivo de fosfomolibdato.
Si la prueba es positiva aparece un color azul oscuro muy
intenso.

VI. PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA

Esta prueba sirve para el reconocimiento de monosacridos.


Los monosacridos son capaces de reducir, en medio amoniacal, el
in Ag+ a Ago (plata metlica), que se deposita en las paredes del tubo.
Ag+ + 2 NH3 Ag (NH3)2+ + R-CHO Ag0 + R-COONH4

Procedimiento:

1. Aadir en un tubo de ensayo:


- AgNO3 1% 1 ml
- NH3 30% 1 ml
- Disolucin de azcar 1 ml
2. Mezclar bien y se calentar durante 2 minutos.
3. Sacar y dejar reposar.
Si el ensayo es positivo la plata metlica, que precipita, se va
depositando en la pared del tubo formando un espejo (espejo de
plata).

VII. PRUEBA DE SELIVANOFF

Esta prueba es especfica para las cetosas. Las cetosas se deshidratan


ms rpidamente que las aldosas, dando furfurales. Estos se
condensan con el resorcinol produciendo un complejo coloreado. Si el
tiempo de ebullicin se prolonga, puede dar tambin positivo para
otros azcares.
Procedimiento:

1. En un tubo de ensayo pyrex se aadir:


- Reac. Selivanoff (resorcinol/HCl) 1 ml
- Disolucin de azcar 1 ml
2. Hervir durante 1 minuto en el bao a ebullicin.
La aparicin de un color rojo o un precipitado rojo es indicativa
de la presencia de cetosas.

VIII. PRUEBA DE TOLLENS

Esta prueba es anloga a la de Selivanoff, pero para el reconocimiento


de galactosa y sus derivados. La galactosa, algunas pentosas y el
cido glucurnico dan un color rojo con el HCl y floroglucina. La
glucosa da tambin un color rojo con la floroglucina, pero muy
opaco, en contraste con el color rojo transparente de la galactosa.

Procedimiento:
1. Aadir en un tubo:
- Disolucin de azcar 2 ml
- HCl (concentrado) 2 ml
- Floroglucina (Tollens) 0,1 ml
2. Calentar a ebullicin. El color puede aparecer hasta 5 minutos
despus de calentar.

IX. HIDRLISIS CIDA DE UN DISACRIDO

En el caso de que la disolucin problema de azcar fuese sacarosa o


lactosa se hace una comprobacin. En primer lugar se hidroliza el
disacrido en sus componentes (sus dos monosacridos) mediante una
hidrlisis cida

Procedimiento:

1. En un tubo de ensayo limpio aadir:


- Disolucin problema 1 ml
- HCl 0,1N 1 ml
2. Hervir durante 1 minuto.
3. Realizar la prueba de Selivanoff si se trata de sacarosa o la
reaccin de Barfoed si se trata de lactosa.

X. PRUEBA DEL AZUL DE METILENO


A una solucin de glucosa en medio bsico (20 g de glucosa y 25 g de
KOH en 1 l ) se le agregan unas gotas de azul de metileno al 1%.
Agitar, observar su coloracin y dejar reposar unos minutos. Observar
el cambio de color y agitar nuevamente. Repetir el proceso numerosas
veces.