UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL DE

HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE BIOLOGA

MONOGRAFA

TRABAJO MONOGRFICO

TEMA: VIRUS DE LA HEPATITIS B

ASIGNATURA : Microbiologa General.

PROFESOR : Blgo. Rilder Gastel Quispe.

ESTUDIANTES : MARCAQUISPE CAPISO, Nelia

QUISPE QUISPE, Yeni

TELLO CANCHARI, Jhon

AO : 2016

FECHA DE ENTREGA : Mircoles 15 de junio

Agradecimientos

A la biloga del curso de Gentica

general quien con su colaboracin
sobre el tema que nos plante para
realizar la monografa
Dedicatoria

Dedicamos este trabajo en especial a

nuestros padres por su constante
apoyo incondicional que nos brindan
en nuestros estudios y por su aliento
que nos dan para seguir adelante.
 NDICE
I. INTRODUCCIN
II. OBJETIVOS
III. MARCO TERICO
3.1. VARIACIN GENTICA
FUENTES DE VARIACIN GENTICA
MEDIDAS DE VARIACIN GENTICA
POLIMORFISMO Y HETEROCIGOSIDAD
Polimorfismo:
3.2. DEPRESIN CONSANGUNEA
TIPOS DE CONSANGUINIDAD
LOS GRADOS DE CONSANGUINIDAD
GENES Y FAMILIAS
CONSEJO GENTICO
CUNDO SE DEBEN HACER LAS PRUEBAS DE ADN
3.3. UTILIZACIN DE TCNICAS MOLECULARES PARA EL ESTUDIO DE LA
EVOLUCIN
TCNICAS MOLECULARES
A) LA HUELLA DACTILAR DE PLASMIDOS (PF)
B) ANLISIS DE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIN DE ADN DE PLASMIDOS
(REAP).
C) ANLISIS DEL POLIMORFISMO DE LARGOS FRAGMENTOS AMPLIFICADOS
(AFLP)
D) TCNICA DE ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES (PFGE)
E) LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
F) LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA CON PRIMERS
ARBITRARIOS (AP-PCR)
G) ANLISIS DE LA SECUENCIA DE LOS NUCLETIDOS

TECNICAS MOLECULARES MAS UTLIZADAS EN LA ACTUALIDAD

1. LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

DESARROLLO DE LA TCNICA DE REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA
1) MARCADORES GENTICOS O MOLECULARES
IV. CONCLUSIONES
I. INTRODUCCIN

Dawkins, R. 1976.La variabilidad gentica es una medida de la tendencia de los

genotipos de una poblacin a diferenciarse. Los individuos de una misma especie no son
idnticos. Si bien, son reconocibles como pertenecientes a la misma especie, existen
muchas diferencias en su forma, funcin y comportamiento. En cada una de las
caractersticas que podamos nombrar de un organismo existirn variaciones dentro de la
especie.

Griffiths, A.J., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin, and W.M. GelbartEs. que toda
diferencia que se encuentre entre 2 o ms organismos de la misma especie, sea color,
forma, tamao, etc. Ser denominada variabilidad gentica.
Aunque la replicacin del ADN es muy precisa, no es perfecta. Muy rara vez se
producen errores, y el ADN nuevo contiene uno o ms nucletidos cambiados. Un error
de este tipo, que recibe el nombre de variacin, puede tener lugar en cualquier zona del
ADN.
Dawkins, R. 1976.. Esta modificacin puede alterar seriamente las propiedades de la
protena resultante. Cuando se produce una variacin durante la formacin de los
gametos, sta se transmitir a las siguientes generaciones. La mayora de las mutaciones
genticas son perjudiciales para el organismo que las porta. Una modificacin aleatoria
es ms fcil que deteriore y que no mejore la funcin de un sistema complejo como el
de una protena.

Fisher, Ford y Huxley . Es ms probable en la procreacin consangunea, en el

apareamiento de organismos muy relacionados que pueden haber heredado el mismo
gen mutante recesivo de un antecesor comn. Por esta razn, las enfermedades
hereditarias son ms frecuentes entre los nios cuyos padres son primos que en el resto
de la poblacin
Fisher, Ford y Huxley Polimorfismo en la biologa se produce cuando existen dos o ms
fenotipos claramente diferentes en la misma poblacin de una especie - en otras
palabras, la aparicin de ms de una forma o se transforman. Para ser clasificado como
tal, se transforma deben ocupar el mismo hbitat, al mismo tiempo y que pertenecen a
una poblacin panmctica.
El polimorfismo como se describe comprende transforma del fenotipo. El trmino
tambin se usa algo diferente por los bilogos moleculares para describir ciertas
mutaciones puntuales en el genotipo, tales como SNPs. Este uso no se discute en este
artculo.
El polimorfismo es comn en la naturaleza, sino que est relacionada con la diversidad
biolgica, la variacin gentica y la adaptacin, sino que por lo general funciona para
retener variedad de formas en una poblacin que vive en un entorno variado: 126 El
ejemplo ms comn es el dimorfismo sexual, que se produce en muchos organismos..
Otros ejemplos son las formas mimticas de mariposas, y la hemoglobina humana y
tipos de sangre.
Polimorfismo de los resultados de los procesos evolutivos, como lo hace cualquier
aspecto de una especie. Se heredable y es modificado por la seleccin natural. En
polifenismo, permite de un individuo gentica para diferentes morfos, y el mecanismo
de conmutador que determina qu se muestra morph es ambiental. En polimorfismo
gentico, la gentica determina la metamorfosis. Las hormigas presentan ambos tipos en
una misma poblacin.
I. OBJETIVOS
Conocer la variacin gentica que existente en varias poblaciones.
Conocer depresin consangunea.
Conocer utilizacin de tcnicas moleculares para el estudio de la evolucin

II. MARCO TERICO

2.1.VARIACIN GENTICA

Definicin:

La variabilidad gentica es una medida de la tendencia de los genotipos de una

poblacin a diferenciarse. Los individuos de una misma especie no son idnticos. Si
bien, son reconocibles como pertenecientes a la misma especie, existen muchas
diferencias en su forma, funcin y comportamiento. En cada una de las caractersticas
que podamos nombrar de un organismo existirn variaciones dentro de la especie.

Fuente: http://www.biodiversidad.gob.mx/genes/vargenetica.html

Segn Daniel Hartl (2000) La variacin gentica se encuentra entre individuos

dentro de las poblaciones y entre las poblaciones dentro de las especies. Las
diferencias genticas que ocurren naturalmente entre los organismos dentro de las
especies se llaman polimorfismos genticos, los cuales se acumulan hasta que se
tornan muy considerables entre las especies, en las cuales se denominan
divergencias genticas.
R.A. Fisher
Se refiere a la variacin en el material gentico de una poblacin o especie, e
incluye los genomas. Para que la seleccin natural pueda actuar sobre un carcter,
debe haber algo que seleccionar, es decir, varios alelos para el gen que codifica ese
carcter. Adems, cuanta ms variacin haya, ms evolucin hay. R.A.
Fisher demostr matemticamente que cuantos ms alelos existan para un gen, ms
probabilidad hay de que uno de ellos se imponga al resto (se fije). Esto implica que
cuanta ms variabilidad gentica exista en una poblacin, mayor ser el ritmo de la
evolucin. Esto se conoce como Teorema fundamental de la seleccin natural de
Fisher, que establece que:

El ritmo de aumento en adaptacin de un organismo en cualquier momento es igual

a su variacin gentica en adaptacin en ese momento.
Segn (A.W.F. Edwards 1994). Es el ritmo de aumento de aptitud media de
cualquier organismo en cualquier momento atribuible a la seleccin natural
actuando a travs de cambios en las frecuencias gnicas es exactamente igual a su
variabilidad gentica en aptitud en ese momento.

Segn: Luis E. Eguiarte, Instituto de Ecologa, UNAM

Es el primer paso en todo estudio Evolutiva.

Si no hay variacin, no pueden actuar las Fuerzas evolutivas.
Segn el tipo de variacin, se va a Determinar la evolucin adaptativa y/o
aleatoria de las poblaciones.

FUENTES DE VARIACIN GENTICA

Las dos fuentes principales de variacin gentica son las mutaciones y la

combinacin de genes que resulta de la reproduccin sexual.

Mutaciones: Una mutacin es cualquier cambio en una secuencia de ADN. Las

mutaciones pueden deberse a errores en la replicacin del ADN o a radiaciones o
sustancias qumicas del medio ambiente. Las mutaciones no siempre afecta el
 fenotipo de un organismo, es decir sus caractersticas fsicas, de conducta y
bioqumicas. Por ejemplo, un codn de ADN alterado de GGA a GGU codificara el
mismo aminocido, glicina. Esa mutacin no tiene efecto en el fenotipo. Sin embargo
en muchas mutacin si afectan el fenotipo. Algunas, incluso afecta la eficacia
biolgica de un organismo o la capacidad para sobrevivir y reproducirse en su medio
ambiente. Otras mutaciones pueden no afectar la eficacia biologa.

Fuente: http://docencia.udea.edu.co/cen/mecanismos-evolucion/origen_var2.html

Combinacin de genes: Las mutaciones no son la nica fuente de variacin hereditaria. La

mayora de las diferencias hereditaria se debe a la combinacin de genes que ocurre durante
la reproduccin de gametos. Hay que recordar que cada cromosoma de un par homologo se
mueve independiente durante la meiosis. Por ellos, los 23 pares de cromosomas que tienen
los humanos pueden reproducir 8.4 millones de combinaciones de genes, todas diferentes.
Tambin durante la meiosis ocurre otro proceso, el cruzamiento. El cruzamiento aumenta
an ms la cantidad de genotipos distintos que pueden aparecer en la descendencia. Cuando
los alelos se recombinan durante la reproduccin sexual, pueden reproducir fenotipos muy
diferentes. Por ellos, la reproduccin sexual es una fuente importante de variacin en
muchas poblaciones.
Fuente: http://docencia.udea.edu.co/cen/mecanismos-evolucion/origen_var2.html

MEDIDAS DE VARIACIN GENTICA

POLIMORFISMO Y HETEROCIGOSIDAD

Polimorfismo:

Es una medida til de la variacin gentica intrapoblacional, pero presenta dos defectos
principales: su arbitrariedad y su imprecisin.

El nmero de loci variables observados depende de cuantos individuos se

examinen.De esta forma, al analizar ms individuos podrn encontrarse nuevas variantes,
pero como media la proporcin de loci polimrficos no cambiar. Sin embargo, resulta en
cierto modo arbitrario el decidir que criterio de polimorfismo aplicar y, dependiendo del
criterio elegido, obtendremos diferentes niveles de polimorfismo.
Fuente: http://docencia.udea.edu.co/cen/mecanismos-evolucion/origen_var2.html

Heterocigosidad:

Una mejor medida de variacin gentica (porque no es arbitraria y es precisa) es

la frecuencia media de individuos heterocigotos por locus. Se calcula obteniendo primero la
frecuencia de individuos heterocigotos en cada locus y determinando, posteriormente, la
media de estas frecuencias para todos los loci.

Fuente: http://www.biologia.edu.ar/evolucion/evo2.htm
2.2. DEPRESIN CONSANGUNEA

Segn Barret y Kohn (1991), La depresin endogmica es la prdida de adaptacin

(vigor, viabilidad, fecundidad, etc) producida por la prdida de variacin gentica
debido a la homocigosidad, que impide la supervivencia de la especie., permite la
expresin de alelos recesivos perjudiciales procedentes de ambos progenitores, ya que
suele producirse por el cruzamiento gentico entre parientes prximos.

Segn Madsen, Thomas; Stille, Bo; Shine, Richard. En las poblaciones pequeas los
apareamientos entre parientes son frecuentes. Debido a esta endogamia, en la poblacin
disminuye la capacidad de sobrevivir y reproducirse, un fenmeno llamado depresin
consangunea

Ejemplo:
Una poblacin de 40 vboras europeas (Vipera berus, a la derecha) padeci una
depresin consangunea cuando las actividades agrcolas de Suecia la aislaron de otras
poblaciones de vbora europea. En la poblacin aislada nacan cras muertas o con
deformaciones en mayor proporcin que en las poblaciones ms grandes, y cuando los
investigadores introdujeron vboras europeas procedentes de otras poblaciones de
exogamia la poblacin aislada se recuper y produjo una mayor proporcin de
descendientes viables.

FUENTE: University of California Museum of Paleontology

En el libro Biological Conservation, La explicacin de la depresin consangunea se
encuentra en la historia evolutiva de la poblacin. Con el paso del tiempo, la seleccin
natural elimina los alelos deletreos de una poblacin, ya que cuando se expresan alelos
deletreos dominantes hacen que disminuya la eficacia biolgica del portador y, por
tanto, en la siguiente generacin habr menos copias. Pero los alelos no deletreos
dominantes esconden de la seleccin natural a los alelos deletreos recesivos. Un
individuo portador de un nico alelo recesivo deletreo estar sano y puede transmitir
fcilmente el alelo daino a la siguiente generacin.

Cuando la poblacin es grande, por lo general esto no es un problema: puede que

existan muchos alelos deletreos recesivos distintos en la poblacin, pero se expresan
con muy poca frecuencia. Sin embargo, cuando la poblacin se vuelve pequea, los
parientes cercanos terminan por aparearse entre s, y es probable que esos parientes
lleven los mismos alelos deletreos recesivos. Cuando los parientes se aparean, es
posible que los descendientes hereden dos copias del mismo alelo deletreo recesivo y
sufran las consecuencias de que el alelo deletreo se exprese.

Para las vboras europeas suecas, la solucin al problema de la depresin consangunea

fue sencillo: se introdujeron vboras europeas de otras poblaciones. Pero si el vombat de
Queensland sufre depresin consangunea, no hay ninguna otra poblacin que pueda
rescatarlo. La comprensin de la historia evolutiva de una poblacin y la probabilidad
de que existan alelos deletreos recesivos, nos indica que nuestras estrategias de
conservacin deberan impedir que el tamao de las poblaciones descienda demasiado
para evitar que la depresin consangunea haga peligrar la supervivencia de la especie.

TIPOS DE CONSANGUINIDAD

a. La consanguinidad lineal es la que existe entre dos individuos cuando uno desciende
del otro, como por ejemplo el hijo del padre o del abuelo, o ms hacia arriba en una
lnea directa ascendiente o viceversa en lnea descendiente. Este sistema natural ha
sido adoptado por las leyes civiles y eclesisticas.
b. La consanguinidad colateral es la relacin que subsiste entre las personas que tienen
un mismo ancestro pero de diferentes ramas familiares.
LOS GRADOS DE CONSANGUINIDAD

Los grados de consanguinidad se refieren al nmero de generaciones que han pasado

desde un antepasado comn hasta la pareja que est pensando en tener descendencia.

La relacin entre ellos existe aunque fuera un solo antepasado y no una pareja de
antepasados que los novios tengan en comn.

Para medir el parentesco tengo que tener presente la lnea y el grado.

Lnea: Conjunto de personas que provienen de un tronco comn.

Lnea recta: Son todas las personas que ascienden y descienden en la misma.
Lnea colateral: Son todas las personas que descienden de un tronco comn.
Grado: Es la distancia que hay entre el pariente ms prximo.

Cmo mido la lnea recta?: Los grados se cuentan subiendo hasta el ascendiente o
descendiente comn dependiendo de si la lnea es ascendente o descendente. As, en
lnea ascendente, el hijo dista un grado del padre, dos del abuelo y tres del bisabuelo;
en la lnea descendente, el abuelo dista un grado del padre, dos del nieto y tres del
biznieto.

Este es un parentesco consanguneo de 2do grado, ascendente legtimo y en lnea

recta. La lnea puede ser ascendente o descendente.

Cmo mido la lnea colateral?: Para medir la lnea colateral debemos determinar
primero el tronco de donde salen con quien me voy a medir. Ej. yo y mi to

Abuelos
2 3
Padres To
1
Yo

Este es un parentesco consanguneo, legtimo colateral de 3er grado. Esta regla se

extiende hasta los ms remotos grados de parentesco colateral.
 Fuente: http://www.infogen.org

Hasta aqu la mayora de nosotros no tiene problemas con el concepto. Pero el asunto parece
ser ms complicado cuando se trata de una consanguinidad mezclada de dos diferentes
grados tales como un segundo con tercer grado de consanguinidad.

Estos casos son muy frecuentes e implican que hubo un salto generacional. Un contrayente
es nieto del comn antepasado mientras el otro es bisnieto de este mismo antepasado. Esto
implica a su vez que el primer contrayente es primo hermano (en nuestros trminos) de uno
de los padres del otro contrayente.

GENES Y FAMILIAS

El genoma de un individuo est compuesto por una gran cantidad de genes que, si se ignoran
las mutaciones, se reproducen siempre igual. Cada una de las clulas del organismo contiene
los genes o las instrucciones para que la clula pueda fabricar todas las protenas
necesarias para que nuestros cuerpos puedas crecer y trabajar normalmente.
Aunque todos tenemos el mismo nmero de copias de genes, existen pequeas diferencias
en la informacin que llevan y es eso lo que nos hace diferentes y nicos.

Los genes forman parte de los cromosomas que se encuentran dentro de las clulas del
organismo y se ubican en un lugar especfico llamado locus. Todo individuo tiene, para
cada locus, dos genes, uno heredado de su padre y otro de su madre y l a su vez va a
transmitir a sus hijos una copia de sus propios genes.

FUENTE: www.infogen.org.mx

La consanguinidad o parentesco de dos individuos determinados, es la probabilidad de

encontrar en un locus establecido, dos genes idnticos.

ndice de riesgo gentico

Dado que hay dos copias de cada gen en las clulas, si hay algn cambio o mutacin en uno
de estos genes, generalmente no tendr un efecto directo en la salud del individuo; la copia
buena suplir totalmente el trabajo de la copia defectuosa.

Estos genes mutados se llaman recesivos y a la persona que las tiene se le

llama portador de un gen mutado. Estos cambios o mutaciones impiden que ese gen
trabaje como estaba programado y el resultado es que o produce una protena incorrecta o la
produce correctamente pero en cantidad limitada o de plano no la produce.

Esta circunstancia NO afectar su salud porque la otra copia suple totalmente la actividad
necesaria.

Pero si la persona ha heredado dos copias mutadas del mismo gen (el padre y la madre son
ambos portadores), la clula no recibir la instruccin correcta que le permita realizar esa
funcin especfica y esto puede dar como resultado que la persona tenga un problema
o padecimiento gentico o hereditario.
Es importante saber que TODOS llevamos alguna copia de gen mutada y sin embargo, no
tenemos ninguna repercusin en nuestra salud o desarrollo. En realidad, en nuestro genoma
existen muchos genes mutados, pero es muy probable que dos personas que no estn
relacionadas entre s, no tengan los mismos genes defectuosos.

Dado que nuestra informacin gentica ha sido transmitida a nosotros por nuestros padres,
abuelos, etc., los miembros de una familia tendrn ms similitudes que diferencias entre
ellos.

Los hijos de parejas no relacionadas por lazos de sangre, tienen un riesgo bajo, de 2 a
3%, de heredar la misma copia del gen mutado de cada uno de sus padres.

Los hijos de personas que son parientes cercanos, tienen un riesgo incrementado de heredar
de cada uno de ellos, la copia del mismo gen mutado y resultar esto en una condicin
gentica.

Los genetistas han clasificado cmo debe de considerarse qu tan cercano es un parentesco
basndose en la proporcin de genes que comparten. Mientras ms cercana es la relacin
biolgica, es mayor la probabilidad de que compartan el mismo gen mutado en su material
gentico o DNA.

Proporcin de genes que

Relacin de uno con otro Tipo de relacin
comparten
Gemelos idnticos 100%
Hermanos, gemelos no
Parientes en primer grado 50%
idnticos, padres e hijos
Tos y tas, sobrinos, abuelos
Parientes en segundo grado 25%
y medios hermanos
Primos hermanos, tos
Parientes en tercer grado 12.5%
medios y sobrinos medios

FUENTE: Infogen A.C. 2013, por la calidad de la salud

http://www.infogen.org.mx. La forma ms comn de unin consangunea es la que se da

entre primos hermanos en la cual ambos contrayentes comparten 1/8 de sus genes que
heredaron del ancestro comn. En estas parejas se incrementa la probabilidad de que sus
hijos sean homocigotos (que tienen dos genes iguales en un locus determinado).

Comnmente esto se expresa en porcentajes y se considera que los hijos tienen un 6.25% de
posibilidades de heredar copias idnticas de genes en algn locus, mientras que a los primos
en cuarto grado, algunas veces ya no se les puede detectar consanguinidad a nivel de DNA y
tendran un riesgo casi igual a la que se observa en la poblacin en general, o sea de 2 a 3 %.

Finalmente, los primos hermanos dobles (hijos de dos hermanos y dos hermanas) comparten
el doble de consanguinidad que los primos hermanos simples y se les considera relacionados
como medios hermanos. Los gemelos idnticos comparten todos sus genes.

Estas cifras pueden cambiar en las familias o comunidades donde hay un alto grado de
parentesco entre sus miembros.

Por qu es importante saber si la pareja son parientes consanguneos?

Como ya lo mencionamos anteriormente, la consanguinidad est relacionada con los

desrdenes genticos porque hay ms posibilidades de que se expresen los genes que tienen
alguna falla.

Si adems de la consanguinidad existe una enfermedad gentica en la familia, se incrementa

el riesgo de que esta pareja tenga un beb con un padecimiento gentico similar.

Patrones de herencia

El porcentaje de riesgo de tener hijos afectados con algn problema, depender tambin del
tipo de patrn de herencia (recesiva o dominante) de este padecimiento.

Cada patrn de herencia tiene un porcentaje bien definido de probabilidades de heredar el

gen defectuoso, y la enfermedad por lo mismo.

Se dice que es herencia recesiva cuando se necesita que el hijo herede las dos copias de un
gen mutado para que se presente el problema. Las probabilidades de que dos padres
portadores tengan un hijo afectado son del 25 por ciento, de que sea portador del 50 por
ciento, y de que sea completamente sano del 25 por ciento.
 FUENTE: http://www.infogen.org.mx

http://www.infogen.org.mx. Herencia dominante es cuando se necesita una sola copia de

cualquiera de los padres- para presentar el problema congnito. Las probabilidades de que
un padre afectado tenga un hijo afectado son del 50 por ciento, y de que sea completamente
sano el mismo 50 por ciento.

FUENTE: http://www.infogen.org.mx
Patrn de herencia ligado al cromosoma X

En una enfermedad gentica donde el gen defectuoso se localiza en el cromosoma X (que

forma parte del par que dicta el sexo), se considera que tiene un patrn de herencia ligado
al cromosoma X. En este patrn los varones son quienes padecen la enfermedad, mientras
que las mujeres son portadoras (sin sntomas).

En el caso que una mujer portadora conciba hijos, existe la posibilidad de tener hijos varones
afectados e hijas portadoras. Mientras que en el caso que un varn afectado conciba hijos,
todas las hijas sern portadoras, mientras que todos los hijos sern completamente sanos.

FUENTE: http://www.infogen.org.mx

CONSEJO GENTICO

http://www.infogen.org. Si t y tu pareja son parientes consanguneos y estn pensando en

tener hijos, es importante que acudan al consejo gentico (con un mdico especialista en
gentica) para que sepan cul es exactamente el grado de parentesco, les d informacin
actualizada y explore las opciones que tienen de reproduccin.

Usa nuestra seccin de directorio de Genetistas para localizar a un profesional

especializado en gentica en tu rea.

Qu pruebas se realizan para determinar el parentesco?

Para probar el parentesco se han empleado desde medios empricos como es la similitud de
rasgos fsicos o malformaciones congnitas heredadas por los padres a los hijos, hasta el uso
de testigos que aseguran la relacin sangunea entre ascendientes y descendientes.

A este respecto, la ciencia ha contribuido para determinar el parentesco consanguneo con

los estudios de gentica y biologa molecular practicados a pequeas muestras de tejido o
clulas las cuales permiten determinar si existe o no este vnculo con una alta probabilidad
de certeza.

Dichos estudios se centran en las llamadas pruebas de ADN (cido desoxirribonuclico) la

cual es una sustancia qumica contenida en la cadena de genes con informacin biolgica
heredada de padres a hijos. Permiten determinar la consanguinidad fraterna y se pueden
realizar tanto en hermanos de padre y madre, como entre medios hermanos. No obstante,
tambin se pueden hacer pruebas de segundo grado de parentesco o abuelidad, to, sobrino o
sobrina o primo.

Cada una de estas pruebas es llevada a cabo en laboratorios, los cuales requieren primero
una muestra de ADN de los dos (o ms) individuos, a los que les gustara determinar su
relacin biolgica. En la ciencia gentica contempornea, el mtodo preferido para recoger
estas muestras es que ambas partes aporten una muestra bucal.

CUNDO SE DEBEN HACER LAS PRUEBAS DE ADN?

http://www.infogen.org.mx. En la mayora de las familias en donde las parejas son parientes

cercanos y no existe historia de alguna condicin gentica especfica en la familia, no hay
ninguna prueba que se pueda hacer (excepto la determinacin del grado de parentesco) ya
que no existe ninguna indicacin que determine el riesgo para el beb.

Pero en las situaciones en las familias en las que se ha detectado la presencia de una
condicin gentica para la que la ciencia ha determinado el gen causante, entonces es
posible detectar, en el DNA, si alguno de los padres, o ambos, son portadores de este gen
mutado.

Existen algunas condiciones genticas que son ms comunes en algunos grupos

poblacionales que en otros. Si se conoce perfectamente la procedencia de los ancestros,
entonces se puede hacer alguna prueba gentica para determinar si son portadores de algn
gen mutado que sea causa de esta condicin.

Por ejemplo, si los ancestros vienen de Europa, tienen 1 en 25 de probabilidades de ser

portadores de un gen mutado que causa Fibrosis Qustica. Si vienen del sur de Europa, del
sub continente Indio, medio oriente, o de pases africanos o asiticos, tienen una posibilidad
semejante de ser portadores de un gen mutado que causa una de las formas de Talasemia. Y,
en algunos grupos tnicos, es necesario descartar la enfermedad de Canavan y la de
Gaucher.

2.3.UTILIZACIN DE TCNICAS MOLECULARES PARA EL ESTUDIO DE

LA EVOLUCIN

TCNICAS MOLECULARES

Las tcnicas moleculares actuales han sido desarrolladas, en solo pocos aos de
investigacin acadmica bsica en muchos campos de la ciencia, de tal manera que en los
ltimos aos, seis de stas tcnicas han surgido como los mtodos para el anlisis y
tipificacin de los aislamientos bacterianos.

Ellas son la huella dactilar de plasmidos o PF, el anlisis de endonucleasas de restriccin de

ADN de plasmidos o REA; el anlisis de endonucleasas de restriccin de ADN
cromosmico utilizando enzimas de corte y electroforesis convencional; el Polimorfismo de
largos fragmentos de restriccin o RFLP utilizando anlisis de pruebas de ADN; La
electroforesis en gel de campos pulsantes o PFGE; y el AP-PCR y otras tcnicas
relacionadas con la tipificacin basada en la amplificacin de cidos nucleicos (Tenover et
al., 1997).

La tipificacin puede proporcionar informacin sobre la distribucin de tipos microbianos

en poblaciones humanas y animales, lo cual puede ser aplicado en programas de vigilancia a
nivel local, regional, nacional o global. De especial inters pueden ser el monitoreo de
marcadores asociados con la patogenicidad, inmunogenicidad o resistencia a medicamentos,
como se demuestra por ejemplo en la vigilancia del clera con la emergencia de una nueva
cepa epidmica en Asia.
En sntesis, esta aplicacin puede incluir anlisis peridicos para la deteccin de grupos de
patgenos con tipos similares y de origen comn en espacio y tiempo, para mejorar las
advertencias anticipadas de brotes potenciales.

Asimismo, puede ayudar en la planeacin de servicios de salud e intervenciones preventivas

como desarrollo de vacunas y programas de inmunizacin.

Estas tcnicas tambin pueden ser usadas en estudios clnicos para la delineacin de
patrones de colonizacin y para la identificacin de fuentes de transmisin de
microorganismos infecciosos, lo cual puede contribuir a un entendimiento de la
epidemiologa y patognesis ayudando con ello al desarrollo de estrategias de prevencin de
enfermedades (Struelens y MESGEM, 1996).

A qu se denominan tcnicas de biologa molecular?

En principio se denomina as a todas las tcnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN
o extraerlo en alta pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (nacimiento de
la Ingeniera gentica), amplificar una regin en una enorme cantidad de molculas
(clonacin de fragmentos en bacterias u otros vectores como virus y PCR), corte de una
determinada regin con enzimas de restriccin para ver si por una mutacin se gana o se
pierde un sitio de restriccin (anlisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt
polymorphism), que significa: diferencias en los tamaos de los fragmentos de restriccin
debido a polimorfismos en el ADN entre otras.

H) LA HUELLA DACTILAR DE PLASMIDOS (PF)

La huella dactilar de plsmidos fue la primera tcnica molecular utilizada como una
herramienta de tipificacin. Los plsmidos son elementos de ADN extracromosmico que
estn presentes en muchos aislamientos clnicos y pueden ser identificados por simples
procedimientos de lisis de clulas seguidos de electroforesis en gel de los lisados. El nmero
y tamao de los plsmidos presentes es utilizado como base para la identificacin de cepas.
Esta tcnica de tipificacin de cepas ha sido utilizada con xito en el anlisis de brotes de
infecciones nosocomiales y en infecciones adquiridas en comunidad causadas por una
variedad de especies de bacterias gran-negativas (Tenover et al., 1997).
En general esta tcnica es ms utilizada para estudios epidemiolgicos que estn limitados
tanto temporalmente como geogrficamente y puede complementar otras tcnicas como la
PFGE, para proporcionar una base para diferenciar aislamientos que estn relacionados
genotpicamente pero que estn separados epidemiolgicamente por periodos moderados de
tiempo, como a varios meses (Tenover et al., 1997).
Tambin utilizada para casos de polimorfismos de determinadas especies.

I) ANLISIS DE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIN DE ADN DE

PLASMIDOS (REAP).

En la actualidad esta tcnica es utilizada principalmente como una alternativa para los
aislamientos de estafilococos que contienen frecuentemente plasmidos mltiples, y para
seleccionar especies de Enterobacteriaceae que tienen a menudo grandes plasmidos
caractersticos.

Algunas cepas de bacterias contienen solamente un plasmido grande, de un rango de tamao

de 100 a 150 Kilobases (kb). Debido a que es difcil de diferenciar plasmidos en este rango
de tamao, especialmente los que varan solamente de 10 a 15 kb, algunos investigadores
han adicionado una endonucleasa de restriccin para aumentar el poder de discriminacin de
la electroforesis en gel de agarosa. Esto puede ser til cuando los plasmidos grandes
producen muchos fragmentos de restriccin que puede hacer la interpretacin ms difcil,
especialmente cuando estn presentes plasmidos mltiples grandes (Tenover et al., 1997).

Actualmente, la REAP ha mejorado en su reproducibilidad y poder de discriminacin por lo

que es la tcnica preferida de tipificacin de plasmidos y es de particular inters para la
realizacin de estudios epidemiolgicos de infecciones institucionales con organismos
resistentes a mltiples antibiticos. Utilizado conjuntamente con delineacin clonal por
tipificacin de ADN cromosmico, es esencial para localizar la diseminacin de genes de
resistencia antibitica mviles como los que codifican los beta-lactamasa de amplio espectro
(Struelens, 2001).
 J) ANLISIS DEL POLIMORFISMO DE LARGOS FRAGMENTOS
AMPLIFICADOS (AFLP)

Una de las tcnicas nuevas y ms promisorias es el AFLP desarrollado por Keygene BV,
Wageningen, de Nueva Zelanda. Este mtodo combina una aplicabilidad universal con alto
poder de discriminacin y reproducibilidad. Un gran nmero de reportes describen el uso de
esta tcnica para plantas y mapeo gentico animal, diagnsticos clnicos, estudios
filogenticos, y tipificacin de bacterias (Savelkoul et al., 1999).

Est basada en la deteccin de fragmentos de restriccin genomica por amplificacin con

reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y puede ser utilizada para ADNs de cualquier
origen o complejidad. La tcnica comprende tres pasos: 1) la restriccin del ADN y la
ligazn de adaptadores oligonucletidos, 2) la amplificacin selectiva de juegos de
fragmentos de restriccin, y 3) anlisis del gel de los fragmentos amplificados (Vos et al.,
1995; Savelkoul et al., 1999; Struelens, 2001).

El ADN es cortado con enzimas de restriccin, y los adaptadores de la doble hebra estn
ligados al final de los fragmentos del ADN para generar la plantilla de ADN para
amplificacin. La secuencia de los adaptadores y el sitio de restriccin adyacente sirve como
sitios de unin de los primer para la subsecuente amplificacin de los fragmentos de
restriccin (Vos et al., 1995).

Para el anlisis del AFLP solamente se necesita una pequea cantidad de ADN genomico
purificado; este es digerido como ya se menciono con dos enzimas de restriccin , una con
una frecuencia media de corte (como la EcoRI) y una segunda con una alta frecuencia de
corte (como la MseI o TaqI) (Savelkoul et al., 1999). La infrecuente restriccin de los sitios
de amplificacin, o IRS-PCR, es otra variacin de esta propuesta que esta basada en la
amplificacin selectiva de secuencias de ADN con sitios de restriccin infrecuentes a los
lados.

Tiene un alto poder discriminatorio que se ajusta fcilmente y un muy buen nivel del patrn
de reproducibilidad para un amplio rango de bacterias patgenas tanto Gram positivas como
negativas (Struelens, 2001).
 K) TCNICA DE ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES
(PFGE)

La electroforesis en gel de campos pulsantes (PFGE por sus siglas en ingls) fue descrita en
1984 como una herramienta para examinar el ADN cromosmico de organismos eucariotas.
Ha sido uno de los progresos ms tiles de la epidemiologa molecular en las dcadas
pasadas; emerge en los 90s como una tcnica de la huella dactilar considerada el estndar
de oro para la tipificacin molecular de microorganismos, ya que ha demostrado que es
altamente efectiva para muchas especies bacterianas tanto gram-positivas como los
estafilococos, enterococos, y mycobacterias y gram-negativas como la E. coli, otras
Enterobacteriaceae, y pseudomonas (Maslow et al, 1993; Goering, 1993; Tenover et al.,
1994; Struelens y MESGEM, 1996; Tenover et al., 1997; Goering, 2000; Struelens, 2001;
Warner y Onderdonk, 2003).

En general, la PFGE es una de las tcnicas de tipificacin ms reproducibles y altamente

discriminatorias en comparacin con otras tcnicas moleculares (Maslow et al, 1993;
Goering, 1993; Tenover et al., 1994; Struelens and MESGEM, 1996; Tenover et al., 1997;
Warner and Onderdonk, 2003).

En esta tcnica, el genoma bacteriano, que tpicamente es de 2,000 a 5,000 pares de kb en

tamao, es digerido con una enzima de restriccin que es relativamente de pocos sitios de
reconocimiento y que genera aproximadamente de 10 a 30 fragmentos de restriccin que van
de 10 a 800 kb. Todos estos fragmentos pueden ser separados como un patrn de distintas
bandas por PFGE, usando una cmara diseada especialmente que cambia de posiciones en
el gel de agarosa entre tres juegos de electrodos que forman un hexgono alrededor del gel
(Tenover et al., 1997; Warner y Onderdonk, 2003).

La preparacin del ADN genomico y la macrorestriccin son llevados a cabo en bacterias

que se ensamblan en los pozos de agarosa. Utilizando unidades de electroforesis
programables especiales, los cambios de orientacin peridica de los campos elctricos o
electroforesis en gel de campos pulsantes, permiten la separacin y determinacin del
tamao de los fragmentos de macrorestriccin.

La PFGE escanea ms del 90% del cromosoma para reordenar fragmentos de gran tamao
tales como duplicaciones, cancelaciones, o inserciones de secuencias que se detectan como
un cambio en el tamao o nmero del fragmento (Struelens, 2001).
Los patrones de restriccin del ADN de los aislamientos en estudio son comparados unos
con otros para determinar sus relaciones. Algunos resultados con esta tcnica pueden llevar a
conclusiones diferentes entre laboratorios, como por ejemplo, que los aislamientos puedan
ser designados como relacionados con brotes o no relacionados con brotes de alguna
enfermedad (Tenover et al., 1995).

Las principales dificultades asociadas con esta tcnica son las relacionadas a las demandas
tcnicas del procedimiento y costos iniciales del equipo. La preparacin de ADN genomico
apropiado requiere de 1 a 3 das, dependiendo de los organismos a examinar, y los costos del
equipo requerido (incluyendo el aparato de electroforesis y el transiluminador) varia entre
10, 000 y 20,000 dlares. Sin embargo, el mtodo es operacional en el laboratorio, y puede
ser aplicado a un amplio rango de especies con solo un mnimo de modificaciones (Tenover
et al., 1997).

L) LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

La Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR por sus siglas en ingls) es una tcnica que se
utiliza comnmente en los laboratorios de investigacin mdicos y biolgicos para
amplificar (crear copias mltiples de) el ADN, sin utilizar un organismo vivo, tal como la E.
coli o una levadura. Asimismo, se emplea en una variedad de tareas, tales como la deteccin
de enfermedades hereditarias, la identificacin de huellas digitales genticas, diagnstico
clnico, anlisis forense del ADN, deteccin de patgenos en el hombre, animales, plantas, y
alimentos, e investigacin en biologa molecular (Saunders et al., 2001).

La PCR fue inventada a principios de los 80s por Kary Mullis, al cual le fue otorgado el
premio Nobel en qumica en octubre de 1993 por este logro, siete aos despus de haber
publicado sus primeras ideas. La idea de Mullis fue la de desarrollar un proceso a travs del
cual el ADN se pudiera multiplicar artificialmente a travs de ciclos repetidos duplicados
llevados a cabo por una enzima llamada ADN-Polimerasa.

La ADN-Polimerasa se produce naturalmente en los organismos vivos, donde funciona para

duplicar el ADN cuando las clulas se dividen. Trabaja unindose a una sola hebra de ADN
y creando una hebra complementaria.
El proceso original de PCR actualmente ha sido mejorado mediante el uso de la ADN-
Polimerasa que procede de una bacteria termofilica que vive a temperaturas arriba de 110 C
(en aguas termales). La ADN-Polimerasa o Taq polimerasa tomada de estos organismos es
termoestable (estable en las altas temperaturas).

Actualmente la Taq polimerasa se utiliza frecuentemente en la prctica de PCR. Una

desventaja de la Taq es que incurre a veces en equivocaciones al copiar el ADN,
conduciendo a mutaciones (errores) en la secuencia del ADN (Saunders et al., 2001).

La PCR que ha sido utilizada por varios aos para la deteccin directa de muchos tipos de
agentes infecciosos en muestras clnicas, ha sido adaptada para ser usada como una
herramienta de tipificacin. La ventaja de la PCR es su habilidad para producir literalmente
millones de copias de un segmento de ADN particular con alta fidelidad en un tiempo de 3 a
4 horas (Tenover et al., 1997).

El procedimiento requiere una plantilla de ADN que puede estar presente en la muestra en
pequeas cantidades; dos primers oligonucletidos que flanquean las secuencias de la
plantilla de ADN que va a ser amplificado; y una DNA-polimerasa estable al calentamiento.

Un ensayo tpico de PCR requiere aproximadamente de 3 horas para completar 30 ciclos,

donde cada ciclo consiste de una fase de desnaturalizacin, en donde la doble hebra de ADN
es fundida en hebras nicas; una fase de alineacin, en donde los primers se unen a las
secuencias blanco en las hebras separadas; y una fase de extensin, en donde la sntesis de
ADN procede de los primers a partir de cada hebra de la plantilla de ADN, generando dos
nuevas copias de la doble hebra de la plantilla original. Despus de cada 30 ciclos , una sola
copia inicial de la plantilla de ADN tericamente puede ser amplificado a 1 billn de copias
(Tenover et al., 1997; Saunders et al., 2003).

El uso vlido de esta tcnica es crtico para mantener la calidad de muchas bases de datos de
ADN producidas. Es un hecho establecido que diversos factores pueden influenciar la
validez de los resultados obtenidos por PCR, incluyendo la presencia de componentes
inhibitorios, la calidad de la plantilla de DNA, y la carencia de optimizacin con respecto a
componentes de la reaccin y las condiciones de los ciclos termales.

Todos estos factores pueden comprometer la especificidad y sensibilidad de la reaccin,

pudiendo llevar a resultados falsos-negativos, falsos-positivos, o no reproducibles. Pero
menos conocido, sin embargo, es la variacin de los resultados en la PCR atribuidos debido
al subptimo funcionamiento de los termocicladores, siendo este el aspecto particular de la
tcnica que constituye las bases de los estudios interlaboratorios (Saunders et al., 2003).

M) LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA CON PRIMERS

ARBITRARIOS (AP-PCR)

Esta tcnica simple y rpida ha sido sucesivamente aplicada para la delineacin de cepas
genotpicas y anlisis de poblaciones genticas de un amplio rango de patgenos
microbianos, incluyendo bacterias, hongos y protozoarios (Struelens, 1998).

La discriminacin es buena y puede correlacionarse con otras tcnicas de genotipificacin.

El poder discriminatorio es variable de acuerdo al nmero y secuencia de los primers
arbitrarios y a las condiciones de amplificacin. Aunque requiere de varios factores tcnicos
para ser estrictamente estandarizado para una reproducibilidad ptima.

La tipificacin con esta tcnica, y con mtodos similares como el RAPD y el DAF, estn
basados en la amplificacin por PCR de baja astringencia utilizando un primer simple de
secuencia arbitraria, tpicamente de 10 pares de bases. Despus de varios ciclos adicionales,
se obtiene una cepa especfica de segmentos de ADN amplificados de varios tamaos
(Struelens, 1998).

Los productos resultantes del PCR pueden representar una variedad de fragmentos de ADN
de diferentes tamaos que son visualizados a travs de electroforesis en gel de agarosa.
Reportes recientes han descrito condiciones y primers especficos para analizar aislamientos
de Staphylococcus aureus (Ternover et al., 1997).

En la actualidad es considerado el mtodo ms adecuado para una tipificacin comparativa

rpida, pero inadecuado para bibliotecas de tipificacin en programas de vigilancia
epidemiolgica.

N) ANLISIS DE LA SECUENCIA DE LOS NUCLETIDOS

La secuenciacin de nucletidos de genes amplificados por PCR es el medio ms preciso y

sensitivo de indexar el polimorfismo del ADN localizado para la tipificacin de cepas
bacterianas. Sin embargo, el tiempo requerido y los costos del procedimiento actualmente
limitan el uso de este mtodo cuando se ha aplicado a varios tipos de virus como el de la
hepatitis y el VIH, pero tambin a bacterias como los Streptococcus pyogenes. Con el rpido
progreso de la automatizacin, es probable que en los siguientes aos la resecuenciacin con
PCR pueda ser utilizada para la tipificacin epidemiolgica de virus, bacterias y otros
patgenos (Struelens, 1998).

TECNICAS MOLECULARES MAS UTLIZADAS EN LA ACTUALIDAD

2) LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

DESARROLLO DE LA TCNICA DE REACCION EN CADENA

DE LA POLIMERASA
En los aos setenta se desarrollaron los mtodos que permitieron de manera simple y
relativamente rpida para determinar la secuencia nucleotdica de cualquier
fragmento de DNA. Estos primeros intentos de secuenciar los cidos nucleicos
siguieron los pasos empleados en la secuenciacin de protenas: romper las
molculas en pequeos fragmentos, determinar su composicin de bases y deducir la
secuencia a partir de fragmentos solapantes. Este mtodo resulta mas o menos
sencillo para protenas que resultan de la combinacin de hasta veinte aminocidos
distintos, pero constituye un problema en el caso de los cidos nucleicos donde la
secuencia resulta de la combinacin de nicamente cuatro nucletidos diferentes.

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA

En Abril de 1983, Kary Mullis dio a conocer la Tcnica de reaccin en cadena de la
Polimerasa o PCR que es una tcnica para la sntesis "in Vitro" de secuencias
especficas de DNA con la cual la insuficiente cantidad de ADN ya no es un
problema en los procedimientos de Biologa Molcular ni en los procedimientos de
diagnstico basados en el estudio de DNA.
La tcnica se basa en la replicacin del ADN en los organismos eucariotas realizada
por la DNA polimerasa. Estas enzimas realizan la sntesis de una cadena
complementaria de DNA en el sentido 5-> 3 usando un molde de cadena sencilla,
pero a partir de una regin de doble cadena. Para crear esta regin doble cadena se
usan los denominados iniciadores (primers). Son una pareja de oligonucletidos
sintetizados de manera que sean complementarios a cada uno de los extremos 3 del
fragmento de DNA que se desea amplificar.
Partiendo de este principio, la reaccin en Cadena de la Polimerasa se basa en la
repeticin de un ciclo formado por tres etapas:
1 Desnaturalizacin del ADN doble cadena
2 Hibridacin de los iniciadores a la zona 3 especfica de cada una de las
hebras
3 Extensin del cebador por actuacin de la DNA polimerasa
En la primera etapa (desnaturalizacin) la doble hlice de ADN se separa en dos
hebras. Para ello se realiza una incubacin de la muestra a altas temperaturas (93-
97C). La renaturalizacin se producir cuando la temperatura disminuya.
En el segundo paso (hibridacin) los cebadores se unen a las zonas 3
complementarias que flanquean el fragmento que queremos amplificar. Se realiza
gracias a la bajada de la temperatura (50-65 C)
En la tercera etapa (elongacin) se produce la sntesis de una cadena sencilla
(producindose un fragmento de doble cadena por la complementariedad) en la
direccin 5-> 3 mediante la enzima DNA polimerasa, la cual incorpora los
desoxinucletidos fosfato presentes en el medio siguiendo la cadena molde. Todos
estos pasos se pueden apreciar grficamente en la Figura 1.
 3) MARCADORES GENETICOS O MOLECULARES

El estudio de la evolucin comprende dos reas: la historia evolutiva de la vida y los

mecanismos de evolucin. Las fronteras entre ambos empezaron a eliminarse cuando
los marcadores isoenzimticos y la secuenciacin de protenas se empezaron a usar en los
60 como fuente de informacin evolutiva. Pero en la prctica la mayora de los
evolucionistas slo se preocupaban de uno de estos problemas, incluso despus de estos
aos. Los evolucionistas 'bioqumicos' se interesaban principalmente en construir
rboles filogenticos entre organismos evolutivamente alejados mientras que los
genticos de poblaciones se preocupaban de medir los niveles de polimorfismo en y
entre poblaciones. La erosin real de estas fronteras comenz cuando las tcnicas de
secuenciacin de DNA y los marcadores moleculares se introdujeron en los estudios
evolutivos (Nei, 1987).

Durante la dcada pasada las estrategias clsicas para detectar polimorfismo como la
morfometra, la citologa, la gentica y la bioqumica, se han complementado con tcnicas
moleculares. Con el desarrollo de los llamados marcadores moleculares, se han facilitado las
investigaciones en disciplinas como taxonoma, ecologa y gentica.

Los marcadores moleculares se detectan a travs de una serie de mtodos que exploran la
variacin de los organismos a nivel de protenas o ADN globalmente y a nivel de un locus o
varios loci en particular.

A nivel de protenas los mtodos usados son :

las reacciones inmunolgicas,

la electroforesis de isoenzimas y la secuencia de aminocidos de las protenas.

A nivel del ADN (Fig. 1) las tcnicas mas comunes son:

la hibridacin de ADN.
los fragmentos de restriccin de longitud polimrfica ("RFLPs"),los mapas gnicos.
el polimorfismo del ADN amplificado al azar ("RAPDs").
la huella digital del ADN ("VNTRs" o "fingerprinting").
los microsatlites.
la conformacin polimrfica de cadena sencilla ("SSCP").
los mapas de sitios de restriccin polimrficos en productos de PCR ("MRSPs").
la amplificacin selectiva de fragmenos de restriccin ("AFLPs").
electroforesis de ADN en geles en gradientes desnaturalizantes ("DGGE") y la
secuencia de ADN, entre otros.

Fig. 1. Extraccin de ADN y dos vas alternativas para la bsqueda de marcadores

moleculares. El ADN extrado se purifica mediante varios mtodos (ultracentrifugacin,
columnas o geles). Este ADN purificado se recupera para examinar la variacin a nivel de
todo el genoma o para amplificar una regin especfica.
Las Aplicaciones

Los mtodos que exploran la variacin de los organismos a nivel de protenas o ADN han
ayudado a detectar polimorfismo a nivel individual, poblacional o especfico. Esto ha
favorecido la investigacin de problemas ecolgicos o sistemticos como paternidad,
diversidad gentica, heterocigosidad, variacin geogrfica, hibridacin, delimitacin
geogrfica de especies, especiacin y filogenias de especies entre otros.

Aunque es comn que en la literatura se promuevan ideas sobre la superioridad de un tipo de

marcador sobre otro. La realidad es que todos los tipos de marcadores (morfolgicos o
moleculares) proveen informacin til sobre algn nivel de la variacin de los organismos.
Lo importante es seleccionar el marcador apropiado para el nivel de variacin de inters
particular.

Por ejemplo, a nivel individual, los mtodos ms utilizados para detectar marcadores
moleculares son: los "RFLPs", los "RAPDs", los "SSCP" y la "DGGE". Tambin se ha
usado la electroforesis de isoenzimas, los mini y microsatlites y las reacciones
inmunolgicas. En cambio, a nivel poblacional los ms ampliamente utilizados son la
electroforesis de isoenzimas, los "RFLPs", los "RAPDs", los mini y microsatlites y los
"AFLPs". La hibridacin de ADN tambin ha sido usada a nivel de poblaciones. Sin
embargo, su mayor aplicacin ha sido en estudios taxonmicos que involucran niveles
taxonmicos ms inclusivos como familias y rdenes.

Los mtodos usados a nivel especfico son los ensayos inmunolgicos, la secuencia de
aminocidos, la electroforesis de isoenzimas, la hibridacin de ADN, los "RFLPs" y las
secuencias de ADN. Actualmente, los estudios comparativos de variacin basados en las
secuencias de ADN son muy utilizados sobre todo en el rea de la sistemtica. Sin embargo,
estos trabajos estn limitados, por ahora, a una regin pequea del genoma (usualmente un
gen, un intrn, una secuencia espaciadora o regiones intergnicas). No obstante, el continuo
desarrollo tecnolgico est haciendo posible el muestreo de un nmero cada vez mayor de
genes y taxa.

Perspectivas:

Desde la dcada pasada, muchos grupos de investigacin interesados en problemas

ecolgicos y sistemticos han incorporado en sus trabajos por lo menos alguno de los
mtodos disponibles para generar marcadores moleculares. Con los avances de la tecnologa
(equipo especializado, mejores reactivos, etc.) cada vez es ms fcil y rpido la obtencin de
muchos de estos marcadores. No es difcil anticipar que se continuarn usando estos
marcadores y que sin lugar a duda se desarrollarn nuevas metodologas para obtenerlos. Sin
embargo, es indispensable seleccionar el marcador apropiado para un problema particular.

Por ejemplo para la mayora de estudios a nivel intraespecfico la electroforesis de

isoenzimas y las enzimas de restriccin, particularmente los "RFLPs", estaran entre las
tcnicas a escoger pues a menudo se necesita examinar un gran nmero de individuos sobre
un gran nmero de loci, por lo tanto, escoger una tcnica tambin depender de la resolucin
requerida para el nivel taxonmico de inters. Adems, se debe tener presente que un
marcador molecular es til cuando presenta propiedades como polimorfismo, codominancia,
frecuencia en el genoma, distribuido en todo el genoma y ser selectivamente neutro.
Tambin, debe ser reproducible, de ensayo rpido y sencillo y de fcil acceso. Actualmente,
no existe algn marcador molecular que satisfaga todos estos criterios. Por lo tanto, para un
estudio comparativo de la variacin ya sea ecolgico o taxonmico, es necesario seleccionar
algn marcador que por lo menos combine algunas de estas propiedades.

2.4. ESTUDIOS MOLECULARES SOBRE LA EVOLUCIN HUMANA

Los estudios y afirmaciones acerca de la evolucin generalmente se refieren a uno de dos

aspectos distintos: (1) las investigaciones acerca del hecho de la evolucin y (2) las que se
refieren al mecanismo de la evolucin. Las primeras abarcan las disciplinas biolgicas, tales
como la paleontologa, la clasificacin, la biologa comparada, la biologa de poblaciones,...
que muestran de manera inequvoca el hecho de la evolucin. Las segundas, las
afirmaciones acerca del mecanismo de la evolucin, son el objeto principal de estudio de la
gentica de poblaciones, y nos informan de los factores, fuerzas o procesos que producen el
cambio evolutivo, es decir, los mecanismos naturales que causan la descendencia con
modificacin. Una analoga cotidiana que ilustra esta distincin es la del tiempo
meteorolgico. Las precipitaciones, los vientos, las gotas fras, los tifones, son las evidencias
que constituyen las afirmaciones de hecho del tiempo atmosfrico. Ahora bien, si queremos
explicar por qu se dan los diferentes fenmenos meteorolgicos, entonces nos tenemos que
introducir en el mbito de las afirmaciones del proceso o de los mecanismos meteorolgicos.
Debemos proponer los factores, tales como las diferencias de temperatura entre distintas
masas de aire, que producen los fenmenos meteorolgicos.

La biologa molecular ha suministrado la evidencia ms universal de homologa. Todos los

organismos vivos compartimos el mismo material hereditario, el DNA, una molcula
helicoidal cuya informacin se encuentra codificada en 4 letras o nucletidos distintos.
Igualmente, el cdigo gentico es prcticamente Universal, todos los organismos comparten
el mismo diccionario que da el significado a la secuencia de DNA. Ambos ejemplos son
pruebas muy robustas de la relacin ntima que existe entre lo viviente.
 El DNA es una molcula helicoidal que tiene informacin gentica codificada a partir de
cuatro letras o nucletidos distintos

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Los primeros estudios en los que se determinaron variaciones genticas entre los grupos
humanos se encaminaron a la deteccin de los grupos sanguneos ABO y la presencia de
variantes allicas que determinan el tipo de sangre. La importancia de estas investigaciones
se acentu an ms cuando Fisher mostr que poda trazarse la historia evolutiva, a travs de
estudios realizados, atendiendo a la expresin genotpica de diversos cromosomas presente
en poblaciones, donde dicha expresin se perpeta a travs de mecanismos hereditarios.

Cuando se compara la secuencia de aminocidos de la albmina o el citocromo c en diversos

animales, se puede observar que entre ms cercanas sean dos especies, ms parecidos son
sus protenas. Se pueden obtener medidas cuantitativas del parecido de unas especies con
otras de acuerdo con las alteraciones que sufren sus protenas en regiones o residuos
especficos. Se ha determinado que existe un cambio del 0,6 % cada milln de aos. As
pues, cuando se compara la secuencia de aminocidos de la albmina humana y del
chimpanc se obtiene una diferencia del 5 %, lo cual indica la presencia de un ancestro
comn hace 4 millones de aos.
Este tipo de estudios permiti el establecimiento de un conocimiento medio de las bases
moleculares del proceso evolutivo. Pero hasta que no se desarrollaron de manera adecuada
las metodologas de la Ingeniera Gentica y la Biologa Molecular, principalmente en
proyectos plurinacionales como el del Genoma Humano, la aplicacin de ellas en estudios
de evolucin no pudo encontrar un campo frtil. Al igual que en el caso de los relojes
protenicos, las diferencias comparativas en las secuencias de nucletidos se convierten en
distancias genticas y establecen relaciones entre especies emparentadas.

Al determinar las divergencias que se presentan en el ADN de mitocondrias, se ha

determinado que todos los grupos humanos actuales descendieron de un pequeo grupo que
habit frica hace 130 000 aos aproximadamente, aunque existen tambin investigadores
que manifiestan que la escisin de los grupos humanos fue apenas hace 60 000 aos. Se ha
llegado a determinar que los orgenes de la poblacin europea estuvo en un grupo escindido
que sali de frica hace aproximadamente 40 000 aos. Conjuntamente con los anlisis del
ADN mitocondrial, se han utilizado marcadores del cromosoma Y que han probado tener un
inestimable valor en la generacin de modelos utilizados para delinear cmo fue la
evolucin humana.

Adems del uso de las herramientas anteriores, utilizadas para tratar de identificar los
orgenes y la filogenia de los seres humanos, existe otra tcnica muy eficiente para trazar su
evolucin; esta tcnica est relacionada con la identificacin de los llamados SNP (single
nucleotide polymorphisms) o polimorfismos en un nucletido. Los SNP son el reflejo de
los cambios que pueden presentarse en el material hereditario a lo largo de la historia
evolutiva

Geovani Lpez-Ortiz* y Hctor Serrano

*Estudiante de la Licenciatura en Biologa Experimental. Catedrtico de Biologa y
Gentica Molecular. Depto. de Ciencias de la Salud, Universidad Autnoma
Metropolitana-Iztapalapa, Mxico, DF, Mxico
de una especie. Estos cambios pueden identificarse en las secuencias del ADN y proveen
informacin acerca de la historia evolutiva de las poblaciones humanas. Un SNP se presenta
cuando existe la sustitucin de un solo nucletido por otro en una regin especfica del
material gentico que puede pertenecer a un gen, el cual codificar una cadena polipeptdica
con caractersticas diferentes a la cadena original y, a su vez, presentar un posible cambio
en el fenotipo. Este tipo de variaciones puede formar parte de la regin no codificante del
gen como podra ser un intrn o un espacio intergnico pero cuya presencia puede asociarse
con una caracterstica especfica. Cabe mencionar tambin que los SNP tienen una gran
importancia en el avance de las nuevas metodologas mdicas, as como en la identificacin
y etiologa de diversas enfermedades.

El material gentico puede presentar cambios en sus constituyentes. Los nucletidos de

adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T) presentes en una secuencia cualquiera
pueden variar constituyendo esencialmente una mutacin. En la secuencia AGTGACTTAC
puede presentarse la variante AGTGACTTCA en la cual el nucletido resaltado muestra ese
cambio. Si al comparar varias muestras con la misma secuencia general se encuentra que
este cambio es frecuente, es posible utilizarlo como un marcador gentico. Esta es la forma
ms comn en que se presentan los SNP. Para ser considerado un SNP debe implicar la
alteracin de un nucletido determinado dentro de una regin especfica a nivel poblacional
mayor al 1 %.
La cantidad de SNP presentes en el genoma refleja en cierto grado las diferencias entre los
seres humanos. La forma a travs de la cual los investigadores se apoyan en los SNP para
establecer relaciones filogenticas en comn est ligada a demostrar que las mutaciones
pasadas han sido acumuladas a lo largo de la historia evolutiva de las especies y podran
conformar un rasgo nico.
A pesar de que la presencia de SNP a lo largo del genoma es totalmente aleatoria, la
existencia de SNP adicionales en la vecindad permite asociarlos a regiones especficas, con
lo que ahora esta regin delimitada por SNP puede servir como marcador y, si se encuentra
asociada a alguna caracterstica especfica, entonces su presencia determinara la misma
caracterstica en otra muestra del ADN. Obviamente, el grado de variacin entre regiones
que sirven como marcadores y que estn delimitadas por SNP especficos permite su uso
como reloj evolutivo. Con base en estas aseveraciones, se han construido mapas de
identificacin de SNP. Las caractersticas de historia evolutiva humana se pueden obtener
usando estos mapas, los cuales caracterizan la diversidad del haplotipo (combinacin
especfica de 2 o ms SNP) a travs del genoma.
Ciertos rasgos coheredados de los alelos en los SNP pueden llevar a distintas asociaciones
entre dichos alelos en determinada poblacin. A este hecho se le conoce como desequilibrio
en las proporciones de agrupamiento o LD, del ingls linkage disequilibrium. Por lo regular,
los SNP ms comunes en una poblacin determinada tienden a ser ms viejos que los SNP
particulares; los patrones de LD reflejan la mayora de las veces recombinaciones a lo largo
de la filogenia, aunque tambin muestran escisiones demogrficas. Algunos acontecimientos
en la recombinacin ocurren repetidamente en puntos preferentes. Se han registrado datos
donde los haplotipos y los patrones de LD son compartidos por cromosomas que no tienen
relacin alguna dentro de las poblaciones y generalmente entre poblaciones. Este fenmeno
indica que los cromosomas actuales son mosaicos de las regiones ancestrales de esos
cromosomas.
Gracias a los SNP se puede determinar que los genes humanos estn relacionados con
migraciones del Homo sapiens en frica. El conocimiento de estos datos es de gran ayuda
ya que a travs de los mismos se puede obtener informacin de las migraciones llevadas a
cabo por poblaciones humanas hasta constituir las diferentes poblaciones actuales. Tal es el
caso de la colonizacin de la Polinesia y Amrica. Las migraciones han jugado un papel
muy importante en la evolucin del Homo sapiens, debido a stas se han generado los
diversos fenotipos presentes en los grupos humanos. Las poblaciones africanas muestran
ligeras variaciones de SNP en comparacin con los europeos y asiticos, lo cual indica la
existencia de presiones selectivas que actan directamente sobre mutaciones y sugiere que
diferentes factores evolutivos son relevantes en continentes distintos.
La combinacin de SNP que posee un individuo puede determinarse a travs de micro
arreglos. Los microarreglos son superficies preparadas para mantener sobre ellas cadenas
pequeas de nucletidos capaces de formar dobles hlices (hibridar, en el lenguaje tcnico
de la Biologa Molecular) de tal suerte que con ellos se pueden detectar en un solo ensayo
los 30 000 genes humanos tomados como referencia, ordenados en filas y columnas. Su
funcionamiento se basa en la propiedad de los genes de pegarse entre s slo cuando son
complementarios. Cuando el ADN de una persona se hibrida con el biochip, se puede
observar que sus genes tienen una alteracin de una letra respecto a los genes de referencia.
Cuando no existe una compatibilidad pueden rastrearse escisiones a partir de diferencias
presentes en individuos o poblaciones.
Los estudios realizados en el gen FOXP2, uno de los factores determinantes que controla
una serie de mecanismos responsables de la evolucin del lenguaje y, por lo tanto, de la
humanidad, est relacionado directamente con un SNP presente en este gen. El
gen FOXP2 muestra una diferencia de slo 2 aminocidos en contraste con el que se
presenta en primates. El SNP del gen FOXP2, adems de diferir con los del gorila y el
chimpanc, difiere en 3 aminocidos con el del orangutn y en 4 con el del ratn. Lo anterior
es un claro ejemplo de cmo la expresin de un aminocido relacionado con el estudio de
los SNP, puede formar parte de un conjunto determinante en la filogenia de una especie. A
partir de este tipo de estudios se puede incrementar el conocimiento acerca del pasado
evolutivo del ser humano y responder de manera ms exacta a una de las interrogantes que
durante siglos han surgido en la mente humana y que es: de donde venimos?.
Cada da surgen nuevas tcnicas, las cuales tratan de sondear las profundidades del tiempo,
con la finalidad de develar los misterios de la evolucin. La potencialidad de los SNP como
marcadores evolutivos se ver favorecida en el futuro cercano, cuando nuevos
investigadores se conviertan en cronistas de la historia molecular del ser humano.

Geovani Lpez-Ortiz* y Hctor Serrano

 *Estudiante de la Licenciatura en Biologa Experimental. Catedrtico de Biologa y
Gentica Molecular. Depto. de Ciencias de la Salud, Universidad Autnoma
Metropolitana-Iztapalapa, Mxico, DF, Mxico

EVOLUCIN HUMANA: COMPROBANDO LAS BASES MOLECULARES

El ADN de cada organismo contiene informacin sobre su historia evolutiva antigua y

reciente. Estudiando los patrones y cambios en la secuencia de ADN, comparando
secuencias de diferentes individuos o especies- es posible descubrir que les pas. Podemos
saber que genes o fragmentos del genoma es ms probable que proporcionaran una ventaja a
estos individuos y especies, permitiendo una mejor supervivencia y reproduccin

Demostrar qu cambios genticos pueden haber sido beneficiosos es difcil, especialmente

en humanos, pero lo que supone un reto todava mayor es demostrar el mecanismo por el
cual estos cambios pudieron llegar a mejorar la supervivencia y la reproduccin de los
organismos.

los cientficos pueden usar para identificar inicialmente regiones de nuestro genoma
que pueden haber ayudado a sobrevivir y a reproducirnos, y despus probar cmo estas
regiones pueden haber supuesto una ventaja para nuestros ancestros.

Una manera de identificar regiones del genoma que pueden ser potencialmente beneficiosas
es comparar secuencias de DNA de muchos individuos de diferentes poblaciones. En el caso
ms simple, si una de estas poblaciones ha estado bajo una presin de seleccin (por ejemplo
alto grado de radiacin UV en una regin soleada) que no exista en otra poblacin la
secuencia de ADN responsable de la correcta adaptacin (por ejemplo, color de piel ms
oscuro) debera ser diferente.

Traducido por MariaRosa Quintero Bernabeu,articulo de Jarek Bryk

En la gran mayora de casos, las presiones de seleccin a las que fueron sometidas las
poblaciones en el pasado son desconocidas, as como las secuencias genticas responsables
de estas adaptaciones. Comencemos pues comparando secuencias de ADN entre poblaciones
humanas sin hacer suposiciones sobre qu resultados podemos obtener.

Si varios individuos presentan diferentes nucletidos en una posicin concreta de la

secuencia de ADN, esta diferencia se llama polimorfismo del nucletido nico (single
nucleotide polymorphism SNP, que se pronunciasnip). Tres millones de estas variantes
del genoma humano estn catalogadas en la base de datos pblica HapMap
Paneles A1, A2, y B1-B3 ilustran cada uno 10 individuos elegidos de cada una de 2
poblaciones de la misma especie. Para cada individuo se muestra un cromosoma (por
ejemplo, el cromosoma 9).
La poblacin A no est sometida a la presin de seleccin y se mantiene relativamente
constante a lo largo del tiempo, adems de adquirir algunos cambios genticos al azar que no
afectan a su eficacia biolgica inclusiva (los cuadrados naranjas en el panel A2; variantes
que reducen la eficacia biolgica

(Chunyan et al., 2008; Chang et al., 2009).

inclusiva son eliminadas de la poblacin). Comparando los paneles A1 y A2.

Sin embrago, la poblacin B se desplaza hacia un nuevo entorno, donde se enfronta a nuevas
presiones selectivas. En este nuevo entorno, un cambio gentico particular (el cuadrado azul
en el panel B1) proporciona una ventaja a los individuos que lo presentan y se expande
rpidamente a toda la poblacin (los individuos que la presentan dejan ms descendencia).
Las variantes genticas cercanas al SNP seleccionado se ven arrastradas con l (cuanto ms
cerca estn dos variantes, ms pequea es la posibilidad de que se separen durante la
recombinacin, cuando partes del ADN son intercambiadas entre los cromosomas paternos y
maternos.

El resultado de esta rpida expansin de la secuencia de ADN a travs de la poblacin es

una reduccin de la diversidad gentica en dicha regin. La mayora de individuos tendrn
un SNP ventajoso, as como las variantes genticas cercanas a l (comparando los paneles
B1 y B2). Este proceso se produce, rpidamente.
Al cabo de algn tiempo, sin embargo, nuevos cambios genticos y procesos de
recombinacin introducen nuevas variantes (rectngulos verdes y cuadrados naranjas en el
panel B3). Cuanto ms tiempo pasa desde la expansin de la variante seleccionada original,
ms difcil resulta de detectar, porque el patrn de diversidad reducida (B2) ser cubierto en
algn momento (B3)

No todos los cambios en las secuencias de ADN tienen un efecto en las secuencias de
protenas: la mayora de los SNPs catalogados en la base de datos HapMap se encuentran o
bien en partes del genoma no codificantes (es decir, entre genes) o son sinnimos, es decir,
estn localizados en regiones codificantes del genoma pero no producen cambios en la
secuencia de la protena codificada

No todos los cambios en la secuencia de ADN codificante producen un cambio en la

secuencia de la protena codificada. En este ejemplo, remplazar la guanina (G) por adenina
(A) en el codn AAG no produce ningn cambio en la
Bryk J (2010) Seleccin natural a nivel molecular

protena: tanto AAG como AAA codifican para el aminocido lisina (SNP1).Esto se conoce
como mutacin sinnima. En el caso del SNP rs3827760 (SNP2 en esta figura), la timina (T)
es remplazada por una citosina (C) en el codn GTT. Cambiar el codn de GTT a GCT
cambia el aminocido de valina (Val) a alanita (Ala). Esto se conoce como mutacin no
sinnima

En el caso de rs3827760 estamos de suerte, porque est localizado en la parte codificante del
gen, hacia el final de un gen llamado EDAR, el cual est involucrado en el desarrollo de los
folculos capilares, las glndula sudorparas y los dientes. Adems, el cambio de timina a
citosina en la secuencia de ADN resulta en un cambio en la secuencia de la protena: los
africanos y los europeo (que tienen la variante de SNP con timina) tienen el aminocido
valina en la posicin 370 de la protena, mientras que los asiticos del este y los americanos
(con el nucletido citosina) presentan el aminocido alanina. Esta parte de la protena est
relacionada con interacciones con otras protenas, y se sabe que mutaciones en esta zona
estn relacionadas con displasias ectodrmicas (desarrollo anormal de los dientes, el pelo y
las glndulas sudorparas) en humanos y en ratas (ver figura 5). Este hecho sugiere que el
cambio en el aminocido en la posicin 370 puede no tan slo cambiar la secuencia de la
protena sino cmo esta se comporta, afectando a las caractersticas fsicas del propio
organismo.
 Para comprobar si el cambio en la secuencia de la protena
afecta realmente a su funcin, debemos fijarnos en
experimentos en la ruta bioqumica en la que la protena
EDAR participa, una serie de reacciones que estn
involucradas en el desarrollo de folculos capilares,
glndulas sudorparas y dientes. Cuando estas reacciones
se realizaron en el laboratorio, se encontr que la variante
que contena alanina (que se encuentra en la poblaciones
de Amrica y del este de Asia, y que est codificada por
: Estructura hipottica de una parte citosina en la variante del SNP) volva la ruta bioqumica
de la protena EDAR. Las ms activa que la variante que contena valina (presente en
mutaciones marcadas en verde las poblaciones africana y europea, y codificada por una
causan displasia ectodrmica en timina en la variante SNP). Esto est relacionado con las
humanos. El SNP putativo comparaciones entre las estructuras del pelo, que
seleccionado se presenta en rojo mostraron que las personas que presentan la variante
alanina tienen un pelo ms grueso que las personas que
presentan la variante valina. Para obtener una
Adaptado con permiso de demostracin ms directa, se modificaron genticamente
Macmillan Publishers Ltd: Nature, ratones para aumentar la actividad de la ruta de EDAR.
Sabeti et al. (2007), 2007 Estos ratones presentaban un pelo visiblemente ms
grueso, as como glndulas salivares ms grandes, que los
ratones con una actividad EDAR normal.

Todos estos resultados sugieren que las dos variantes del SNP (que contienen bien timina
bien citosina) pueden afectar tanto a la estructura como a la funcin de la protena EDAR, y
pueden llevar a diferencias fsicas en humanos: diferencias en el grosor del cabello y,
potencialmente, en la talla de las glndulas salivales.

Las diferencias en las secuencias de ADN que podemos observar hoy en da son archivos
histricos de experimentos naturales, y slo podemos especular sobre cules de las presiones
selectivas a las que las poblaciones asiticas y americanas fueron sometidas fueron
responsables de la dispersin del alelo citosina. Pero la combinacin de estudios genticos,
experimentos de laboratorio y modelos animales hace posible examinar las diferentes
hiptesis sobre el papel funcional de las diferencias genticas entre poblaciones o especies.
Utilizando estas aproximaciones podemos descubrir las bases moleculares de adaptaciones
pasadas en nuestros ancestros y en otros organismos, destacando cmo nos adaptamos
constantemente a los cambios del entorno. Pocas ideas han cambiado tan profundamente
nuestra visin de la naturaleza como la misma idea de cambio que implica la evolucin de
los seres vivos. Los organismos biolgicos se agrupan en unidades naturales de
reproduccin que denominamos especies. Las especies que ahora pueblan la Tierra proceden
de otras especies distintas que existieron en el pasado, a travs de un proceso de
descendencia con modificacin. La evolucin biolgica es el proceso histrico de
transformacin de unas especies en otras especies descendientes, y su reverso es la extincin
de la gran mayora de las especies que han existido. Una de las ideas ms romnticas
contenidas en la evolucin de la vida es que dos organismos vivos cualesquiera, por
diferentes que sean, comparten un antecesor comn en algn momento del pasado. Nosotros
y cualquier chimpanc actual compartimos un antepasado hace algo as como 5 millones
aos. Tambin tenemos un antecesor comn con cualquiera de las bacterias hoy existentes,
aunque el tiempo a este antecesor se remonte en este caso a ms de 3000 millones de aos.

SALUD UNINORTE. Barranquilla (Col.) 2006

La idea de evolucin por modificacin y derivacin de nuevas especies implica la existencia
de antepasados comunes para cualquier par de especies. Hay un antepasado comn del
hombre y el chimpanc, y del hombre y las bacterias.

La evolucin es el gran principio unificador de la Biologa, sin ella no es posible entender ni

las propiedades distintivas de los organismos, sus adaptaciones; ni las relaciones de mayor o
menor proximidad que existen entre las distintas especies. La teora evolutiva se relaciona
con el resto de la biologa de forma anloga a como el estudio de la historia se relaciona con
las ciencias sociales. La famosa frase del gentico evolucionista Theodosius Dobzhansky
que abre este tema, no es ms que una aplicacin particular del principio ms general que
afirma que nada puede entenderse sin una perspectiva histrica.

BIOLOGA MOLECULAR Y EVOLUCIN

Como aparece en el epgrafe dedicado a las pruebas clsicas de la evolucin, una de las que
han aportado las nuevas ciencias (ya no tan nuevas) son las correspondientes a las
semejanzas bioqumicas. Se pueden mencionar muchos ejemplos de protenas, como la
hemoglobina o los citocromos, con los que se trazan rboles genealgicos entre especies, y
entre individuos de una especie, comparando protenas que desempeen la misma funcin.
Tambin se pueden comparar, con mayor fiabilidad, los mensajes que codifican a estas
protenas, es decir, sus genes. Sin ir ms lejos, cuando ocurren epidemias bacterianas o
vricas, se recurre a estudios de este tipo para conocer la filogenia que relaciona las
diferentes cepas infectivas y conocer cul ha sido la primera cepa y dnde ocurri la primera
infeccin.

La antropologa molecular fue prcticamente fundada por el investigador Luigi luca Cavalli-
Sforza, en los aos cincuenta, cuando se trabajaba con polimorfismos de protenas, los
llamados isoenzimas, diferentes formas moleculares de una enzima, en lugar de con los
polimorfismos de ADN. Fue uno de los fundadores del Human Genome Diversity
Project para coordinar la

SALUD UNINORTE. Barranquilla (Col.) 2006;

recogida y anlisis de muestras de ADN procedentes de diversos grupos tnicos del globo.
Pero su idea cay en embrollos ticos y polticos, y algunos grupos manifestaron su
oposicin a esta recogida, como la declaracin de los Pueblos Indgenas del Hemisferio
Oeste. Los participantes de HGDP han hecho un Propuesta de Protocolo tico Modelo para
la Recoleccin de Muestras de ADN, que te puedes leer en espaol, aunque no he podido
saber si ese protocolo est en uso o no.

LOS POLIMORFISMOS
Los denominados polimorfismos de nucletido nico (SNPs o single nucleotide
polymorphism) son otro objetivo importante de la biologa molecular aplicada al estudio de
la evolucin. Se trata de puntos concretsimos de los genomas en
los que un nucletido puede ser diferente en varios individuos, dando lugar a
caracteres diferentes, como el color de los ojos, de la piel, del pelo, la forma de la nariz, las
formas en que metabolizamos sustancias, etc. Un buen ejemplo de SNP son los alelos de los
grupos sanguneos humanos.
El gen de los grupos sanguneos consta de 1062 pares de bases, divididas en seis exones, en
el cromosoma 9. Este gen codifica una enzima denominada galactosil transferasa que tiene
la capacidad de aadir galactosa (un monosacrido) a una molcula, por ejemplo, una
protena. La diferencia entre el grupo A y el B es de siete pares de bases, de las que tres son
neutras (no afectan al aminocido codificado) y las otras cuatro son las que determinan la
diferencia: en las posiciones 523, 700, 793 y 800 de este gen, las personas de grupo A
poseen las letras C, G, C, G; las del grupo B, poseen G, A, A, C. An existen otras
combinaciones, por ejemplo, algunas personas del grupo A tienen letras del grupo B y
viceversa. En cuanto al grupo O, las personas que lo poseen slo tiene un nico cambio,
pero en este caso no se trata de una sustitucin, sino de una deleccin, es decir, de la
ausencia de la letra 258, que debera ser una G. En estas personas, la lectura del ADN se
desplaza una letra y el mensaje se cambia por completo y no se sintetiza esa enzima. En este
caso, el efecto de este cambio en las personas de grupo O no tiene mayores consecuencias,
aunque se ha encontrado una correlacin con la resistencia a ciertas enfermedades.
Los genes presentan numerosas formas allicas, de modo que los seres humanos nos
diferenciamos unos de otros en, al menos, 400 nucletidos (aunque puede que esta cifra se
haya quedado corta). (OJO! No todas las diferencias genticas se deben a SNP: estamos
hablando de diferencias que

SALUD UNINORTE. Barranquilla (Col.) 2006;

afectan a un solo nucletido, o a una pareja de bases nitrogenadas). Sin embargo, la mayora
de los SNP no producen efectos fenotpicos, ya que aparecen, generalmente, en regiones no
codificantes del genoma (los denominados intrones), pero el inters que tienen se debe,
sobre todo, a su relacin con la predisposicin a ciertas enfermedades y la susceptibilidad a
algunas drogas. Algunos de estos SNP aparecen juntos en un cromosoma y provocan
tendencia a la deleccin del cromosoma, un tipo de mutacin cromosmica, provocando
enfermedades. Ciertas personas comparten estos SNP y sirven para diagnosticar esa
tendencia a la enfermedad. Las combinaciones concreta de polimorfismos en un cromosoma
se denomina haplotipo.

Podemos tener cerca de 3 millones de estos SNP en nuestro genoma, de los que conocemos
casi 1'5 millones; slo 60.000 de estos aparecen en los exones o regiones codificantes.
Existe una base de datos pblica con todos estos polimorfismos, The SNP Consortium LTD,
a la que tambin ha contribuido International Human Genome Sequencing Consortium.
En evolucin, son buenos marcadores de la diversidad. Si seguimos un SNP concreto a
travs de diferentes grupos, podemos trazar la evolucin y dispersin de las diferentes razas
humanas. Se trata de observar "in situ" la variabilidad del genoma humano.

La existencia de polimorfismos genticos nos lleva de nuevo a un tema que ya se ha tratado

en otro documento, el relativo al debate entre seleccionista y neutralistas. Recordamos que
para la escuela seleccionista la mayora de los polimorfismos genticos tienen un valor
adaptativo (en aquel documento no los llambamos as todava), es decir, que los diferentes
alelos a que dan lugar los polimorfismos codifican protenas con diferente efectividad. De
esta manera, los polimorfismos se mantendran en la poblacin o no en funcin de su
eficacia. El punto de vista neutralista defiende que la mayora de los polimorfismos
existentes en un alelo son neutros para la seleccin, es decir, que no provocan mayor
beneficio ni perjuicio, no tienen valor adaptativo. Los neutralistas dicen que la evolucin
molecular es el resultado de la deriva gentica al azar de alelos prcticamente neutros. As,
las mutaciones ventajosas seran muy infrecuentes y a las no neutras les ocurrira lo mismo
que a las deletreas, es decir, se eliminaran por seleccin negativa.

SALUD UNINORTE. Barranquilla (Col.) 2006; 22 (2): 154-167

V. CONCLUSIONES

El continuo crecimiento exponencial de la comprensin de las bases genticas moleculares

de la enfermedad humana y animal ha sido apoyado por los progresos tecnolgicos en el
desarrollo de nuevas tcnicas moleculares que han venido a substituir los mtodos intensivos
de trabajo empleados previamente.

Estas nuevas tcnicas moleculares en la actualidad le han permitido a los cientficos tener un
gran avance en el rea de la medicina como de la investigacin, ya que gracias al desarrollo
de estas tcnicas es que se ha logrado llevar a cabo la produccin de medicamentos y
vacunas para combatir una serie de enfermedades, incluso incurables, que afectan desde
hace tiempo tanto al hombre como a los animales de manera individual como colectiva.

Si bien es cierto pues, los avances en la comprensin de las bases biolgicas de la

biodiversidad microbiana a nivel de subespecies puede mejorar el marco conceptual
requerido para una apropiada interpretacin epidemiolgica de los resultados de tipificacin.
Por lo que una adecuada y ms amplia aplicacin de estas tcnicas puede dar luz a la
epidemiologa de infecciones adquiridas por el hombre y/o animales, permitindole con ello
tener un control ms eficaz de estas, as como llevar a cabo mejores estrategias de
prevencin.