INVESTIGACION Y RECUENTO DE

CLOSTRIDIUM SULFITO - REDUCTORES

1.- OBJETIVOS

1.1.-OBJETIVO GENERAL

o Determinar la presencia o ausencia de Clostridium Sulfito-Reductores

en una muestra de carne molida

1.2.-OBJETIVO ESPECFICOS

o Determinar la existencia de clostridium sulfito -reductores en

alimentos como carne molida
o Conocer en que tipo de alimentos se desarrolla o crece los sulfitos
reductores, y si la carne molida es apto para su crecimiento y
desarrollo.
o Conocer cual es el medio adecuado para la determinacin de
Clostidium
o Conocer cuales son las caractersticas de los Sulfitos reductores
o Realizar el mtodo de dilucin y sembrado en el medio SPS. para la
deteccin de clostridium.
o Realizar el reporte de resultados contando el numero de colonias que
se tienen en cada tubo de ensayo

2.-MARCO TERICO:

Clostridium es un gnero de bacteriasanaerobias, bacilosgrampositivas,

parsitas y saprfitas algunas de ellas, que esporulan, y son mviles, en
general por intermedio de flagelosperitricos.
Toman la forma de fsforo, palillo de tambor o huso de hilar, de ah su
nombre griego "Klostro", que significa huso de hilar. Las especies ms
importante son el Clostridiumbotulinum productor del botulismo, el
Clostridiumnovyi, Clostridiumsepticum, Clostridiumperfringens productor de
la gangrena gaseosa y Clostridiumtetani productor del ttanos.
Los anaerobios sulfito-reductores constituyen un grupo asociado a los
Clostridiumsppy como tal se caracterizan por ser organismos Gram positivos,
anaerbicos, formadores de esporas, que estn normalmente en las heces,
aunque en nmero mucho ms reducido que E. coli. Su representante ms
caracterstico es Clostridiumperfringens(OMS, 1995) que, de acuerdo a un
estudio realizado en los sistemas hidrolgicos de Estados Unidos, fue
detectado en un 73% de las muestras, demostrando as su presencia en las
aguas naturales al igual que los coliformes (Francy y col., 2000). Son
deteriorantes, ya que producen malos olores y, con mucha frecuencia,
ennegrecimiento del producto cuando ste tiene hierro, formando un
precipitado oscuro de sulfuro de hierro (Merck, 2000). Estos
microorganismos tienen la capacidad de reducir los sulfitos a sulfuros a partir
de aminocidos y compuestos azufrados (Mac Faddin, 1980) y para su
deteccin se utiliza la evidente coloracin negra dada por la formacin del
precipitado (Merck, 2000).

El origen de los anaerobios sulfito-reductores no es exclusivamente fecal, ya

que pueden proceder de otras fuentes ambientales (OMS, 1995) como suelo,
sedimentos marinos, vegetacin en descomposicin, heridas infectadas de
hombre y animales (Sneath y col., 1986), aguas superficiales, como tambin
en los alimentos, especialmente cuando las condiciones de higiene en la
elaboracin son deficientes.

Debido a las caractersticas que poseen los anaerobios sulfito-reductores es

que se han propuesto como indicadores de contaminacin de alto riesgo del
agua. La ventaja ms importante es que sus esporas sobreviven en el agua
mucho ms tiempo que los organismos del grupo coliforme y son resistentes
a la desinfeccin, al punto que pueden ser detectados en algunas muestras
de agua despus de haber recibido predesinfeccin, floculacin,
sedimentacin, filtracin y la desinfeccin terminal (Payment, 1991). Por las
razones expuestas, el aislamiento de anaerobios sulfito-reductores se
propone para indicar el riesgo de sobrevivencia de agentes patgenos en
ciertos ecosistemas expuestos a contaminacin fecal remota, como tambin
que, por sus caractersticas de tamao y resistencia a la desinfeccin, logren
escapar a los tratamientos habitualmente aplicados al agua (Payment y
Franco, 1993; OMS, 1995; Cho y col., 2000).

Caractersticas
Los Clostridium son organismos que se observan solos, en parejas o a lo
mximo en cadenas cortas. Son mviles por flagelos peritrcos con la
excepcin de C. perfringes. Algunas especies producen cpsula y forman
esporas de aspectos esfricos u ovalados, situados en el centro del bacilo o
en un extremo subterminal y resistentes al calor.
A pesar de ser bacterias anaerobias obligadas, no todos tienen la misma
sensibilidad al oxigeno. C. tetani, por ejemplo, requiere total anaerobiosis y
C. perfringes tiende a ser menos exigente. Crecen a temperatura de 37C y a
un pH entre 7 y 7,4, de modo que son fcilmente inactivadas a pH cido o
bsico, como el cido estomacal, el de limpiadores y desinfectantes como el
cloro e incluso el pH de cidos orgnicos encontrados en el zumo de limn,
por ejemplo. Son fermentadoras de azcares, aspecto que resulta de utilidad
en la diferenciacin de las especies.
Poseen antgenos somticos y flagelares que permiten dividirlas en tipos y
subtipos. Producen exotoxinas de efecto necrosante, hemolticos y
potencialmente letales. Las toxinas son nombradas con letras, as por
ejemplo, la toxina necrosante es nombrada con la letra C y la enteritis en
animales es causada por las toxinas B, D y E.
Patologa
Los Clostridium incluyen bacterias comunes y libres en la naturaleza, as
como patgenos de importancia. Hay cuatro especies principales
responsables de enfermedades en humanos:
 C. botulinum, un organismo productor de una toxina alimenticia
causante de botulismo, un desorden neurolgico agudo
potencialmente letal.

C. difficile, el cual puede sobrepopular la flora saprfita intestinal

durante terapias con antibiticos, causando colitis seudomembranosa.

C. perfringens, causa un mplio rango de sntomas, desde intoxicacin

alimentaria hasta gangrena gaseosa. Es tambin causante de una
enterotoxemia, frecuentemente hemorrgica en carneros (en especial
corderos), novillos, ovejas y cabras.

C. tetani, el organismo causante de ttano (trismo).

Es conocido que la miel en ocasiones contiene bacterias de
Clostridiumbotulinum, lo cual puede causar botulismo infantil en humanos
menores de un ao. La bacteria produce una toxina botulinium, el cual
evenetualmente paraliza los msculos respiratorios del infante.8C. sordellii,
un habitante de la flora genital femenino, ha estado involucrado en las
muertes de ms de una docena de mujeres con sndrome de choque txico
despus del parto.
Medios de cultivo e incubacin
Para la recuperacin de bacterias del gnero Clostridium a partir de muestras
clnicas, se pueden utilizar los siguientes medios: agar sangre para
anaerobios, como agar Brucella, agar sangre PEA, agar Schaedler, agar sangre
para anaerobios CDC, etc. Es conveniente incluir un medio con yema de
huevo para investigar la produccin de lipasa y lecitinasa y un medio lquido
de enriquecimiento, como el tioglicolato. La incubacin se har a 35-37C en
anaerobiosis (cmaras, jarras o bolsas con generadores de atmsfera
anaerobia).
Identificacin de especies de Clostridium
El examen de la tpica morfologa tanto microscpica como de la colonia
permite una identificacin presuntiva y rpida de algunas especies de
Clostridium frecuentemente aisladas. Adems, junto con la utilizacin de
pruebas bioqumicas sencillas como el estudio de la produccin de lecitinasa
y lipasa en agar yema de huevo, la hidrlisis de la gelatina y de la urea y la
produccin de indol por el mtodo rpido (p-dimetil-amino-cinnamaldehdo),
constituyen un mtodo fcil y poco costoso para la identificacin, incluso
definitiva, de algunas de ellas.
3. MATERIAL Y MEDIOS:

Materiales Reactivos:

-4 tubos de ensayo -Desinfectante

-2frascos de plastico - agua de peptona
-gradilla -agar SPS
-6 pipetas de 2 ml y 2 de 10ml. - parafina
- 1 matraz Erlenmeyer , - Alcohol al 70%
-1 mechero
-1 bolsa de sachet Equipos:
-1balanza -Balanza analitica
-1 cucharilla -Jarra de Gas-Pak
-1 probeta (250 ml)
-1 matraz (500 ml)

4.- METODOLOGIA

1- Preparar la dilucin utilizando 25 gr de carne molida con 225ml de

agua de peptona homogenizar la muestra madre.
2.- Seguidamente realizamos las diluciones en los tubos de ensayo -1, -2 y -
3. Que contiene agar SPS

3-Seguidamente se debe aadir aadir parafina esterilhaciendo escurrir por

las paredes del tubo formando una pared para que no permita el ingreso de
oxigeno del aire,luego llevar a incubar a 46 C en la jarra Gas- Pak para
anaerobios durante un tiempo de 24 48 horas

5. DATOS, CALCULOS Y RESULTADOS

DATOS:

T=46C ; Tiempo de incubacion (24-48) horas.

o A las 24 horas

10-1 10-2 10-3

 10 0 0
o A las 48 horas

6.-OBSERVACIONES

o Se observ que a las 24 horas de incubacin en el tubo -1 estaba

negro y se poda contar esto indica que haba presencia de sulfitos
reductoresentonces eso quiere decir que esa muestra estaba
contaminada.
o en el tubo -1 se observ que haba 10 colonias de Clostridium y en el
tubo -3 no se observ ninguna colonia lo que indica que no realizo de
manera correcta las diluciones
o Finalmente a las 48 horas solo se observo colonias en el tubo -1 y no se
observo ninguna colonia en el tubo -3.asi que solo tomamos en cuenta
el tubo -1 ya que sus colonias si eran contables.
7.-CONCLUSIN

o Las caractersticas de las bacterias Clostridium son que crecen en un

medio anaerbico que en gran cantidad de este microorganismo
puede llegar hacer toxico.
o El medio para el crecimiento de Clostridium es Agar Sulfito
PolimixinaSulfadiazina (SPS).
o Si existe presencia de ClostridiumSulfios Reductores en la muestra de
carne molida:
Clostridium = 1.0 102 UFC / gr (carne molida).
 UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON
FACULTAD DE CIENCIAS Y TEGNOLOGIA
CARRERA DE ING. DE ALIMENTOS

INVESTIGACION Y RECUENTO DE CLOSTRIDIUM

SULFITO - REDUCTORES

MATERIA: MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS

DOCENTE: M.Sc.Lic.FLORES RIOS ABRAHAM
AUXILIAR:UNIVERSITARIO EDUARDO
ESTUDIANTE:
GRUPO: MARTES 8:15-12:00

FECHA: C/16/02/16