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TAMIZAJE FITOQUIMICO DE HOJAS Y SEMILLAS DE (Bixa

Orellana)
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
Av. Universitaria S/n Telef.: 561647, E-mail ciunas@ciunas.edu.pe

TANIA GUERRERO VEJARANO 1/

JOSE LUIS PAREDES SALAZAR 2/
1/ Ingeniero Qumico, Docente Asociado de la Facultad de Recursos Naturales Renovables
2/ Ingeniero Quimico Jefe de Control de Calidad de MTC Internacional

RESUMEN

En el presente trabajo de investigacin se ha realizado el reconocimiento de

Metabolitos Secundarios (Tamizaje Fitoquimico) de hojas y semillas de Bixa

Orellana, utilizando la metodologa descrita por (Miranda, 2003) en donde se

encontr que las hojas presentaron escasos alcaloides, cantidad moderada de

flavonoides, abundantes leucoantocianidinas,y una cantidad moderada de

tainos; no se encontr cardiotnicos, saponinas y quinonas, presento una

reaccin dudosa para esteroles y/o triterpenos. En las semillas se encontraron

escasos flavonoides, moderada cantidad de leucoantocianidinas y escasos

taninos, presento una reaccin dudosa frente a la prueba de alcaloides y de

esteroles y/o triterpenos no se encontr saponinas, quinonas y cardiotnicos

ABSTRACT

In the present work of investigation the recognition of Secondary Metabolitos

(Tamizaje Fitoquimico) of leaves and seeds has been made of Bixa Orellana,

using the methodology described by (Miranda, a 2003) in where was that the

leaves presented displayed little alkaloids, moderate amount of flavonoides,

abundant leucoantocianidinas, and moderate amount of taninos; one was not

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cardiotnicos, saponinas and quinonas, I present/display a doubtful reaction for

esteroles and/or triterpenos. In the seeds were little flavonoides, moderate

amount of leucoantocianidinas and little tannins, I present/display a doubtful

reaction forehead to the test of alkaloids and of esteroles and/or triterpenos it

was not saponinas, quinonas and cardiotnicos

PALABRAS CLAVE: Metabolitos Secundarios, flavonoides, alcaloides,

leucoantocianidinas, cardiotnicos, esteroles, triterpenos, taninos, Bixa orellana

I. INTRODUCCION:

La medicina tradicional, una de las expresiones mas importantes

de la memoria ancestral de los pueblos amaznicos, hace uso, entre otras

prcticas, de gran nmero de especies vegetales para curar enfermedades y

sndromes.

El achiote es una de las plantas medicinales utilizadas en la

medicina popular para infecciones en la piel, infecciones respiratorias,

desinflamacin de la prstata, etc. Su uso esta restringido a las personas que

creen en la medina natural, de tal manera que un estudio fitoquimico contribuye

a validar la especie sobre los metabolitos secundarios presentes, los cuales

ayudaran a posteriores estudios farmacolgicos, toxicolgicos, preclnicos y

clnico de la especie.

Para el presente trabajo de investigacin se presento la siguiente

interrogante Cules son los metabolitos secundarios que presenta en tamizaje

fitoquimico de la especie Bixa orellana?, con los siguientes objetivos:

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OBJETIVO GENERAL:

Encontrar que tipo de metabolitos secundarios contiene la

especie Bixa Orellana.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Determinacin de la presencia de alcaloides

Determinacin de la presencia de flavonoides

Determinacin leucoantocianidinasy cardiotnicos

Determinacin de saponinas y triterpenos

Determinacin de quinonas y taninos

Determinacin de antocianidinas

II. REVISION DE LITERATURA:

2.1 GENERALIDADES:

El achiote es un rbol originario de la Amrica Tropical donde

crece en forma espontnea, es de rpido desarrollo y alcanza de 3 a 4 metros

de altura y tiene 20 a 30 cm. de dimetro en la base del tallo. Su raz es

pivotante y bien desarrollada, las hojas son cordiformes y las flores

hermafroditas de un color rosado a blanco, dispuestas en panojas terminales.

El fruto es una cpsula que contiene de 30 a 60 semillas, las mismas que estn

cubiertas de una pulpa rojiza y cerosa que constituye el tinte llamado achiote.

Este rbol se lo cultiva bien entre los 300 a 1.000 metros de altura, aunque se

adapta bien desde el1 nivel del mar.

El achiote crece en ptimas condiciones en un amplio margen de

suelos, desde los francos arenosos hasta los arcillosos; pero, los mejores
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resultados se han conseguido en suelos francos con un marcado ndice de

fertilidad y si bien es cierto que crece en todo tipo de suelo, tambin es cierto

que es muy exigente en cuanto al drenaje, ya que su desarrollo en suelos mal

drenados es deficiente y an improbable. En lo que se refiere al agua, el

achiote es muy resistente a las sequa, y se ha observado que a pesar que

durante el periodo seco sufre ciertos trastornos fisiolgicos como es la fuerte

defoliacin, se repone rpidamente despus de caer las primeras lluvias. Las

plantaciones establecidas en buenas condiciones de humedad durante todo el

ao, producen excelentes rendimientos. La temperatura vara de los 24 a los 30

grados centgrados. (MOSQUERA,1989)

Bsicamente tiene la siguiente clasificacin: (VILLA, 1995)

Subdivisin : agiosperma

Clase : dicotiledoneas

Orden : parietales

Familia : Bixaceas

Genero : bixa

Especies: Bixa orellana linneo, B. sphaerocarpa Triana, B. urucurana willd,

B. purpurea hort, etc.

2.2 COMPOSICION QUIMICA:

Las investigaciones fitoqumicas anteriores han revelado presencia de varios

derivados del carotenoides incluyendo el bixina y norbixina (Satyanarayana y

otros., 2003), algunos terpenoides, tocotrienoles, y flavonoides (luteolina

incluyendo y apigenina) en Orellana de Bixa semillas (Jondiko y Pattenden,

1989; Frega y otros., 1998; Pino y Correa, 2003), citado por Ahmad et.al., Otras
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investigaciones han revelado que las hojas Orellana de Bixa presentan

flavonoides bisulfatos (Harborne, 1975) y de abarcar del aceite esencial

principalmente sesquiterpenes con el ishwarane como el compuesto principal

(Lorenzo y Hogg, 1973). Se han encontrado las races para contener el cido

tomentosico del triterpeno

Contiene dos principios colorantes, uno de los cuales es la

"bixina". - rojo-anaranjado -, una sustancia algo cristalina de color rojo oscuro.

El otro, que tambin es un elemento colorante, es la "nor-bixina" (orellina) -

amarillo -. La bixina es soluble en alcohol, ms lo es en alcohol hirviente, ter y

cloroformo, aceites y grasas; es poco soluble en agua. La nor-bixina, en

cambio, es insoluble en ter, pero soluble en agua y alcohol.

El principal constituyente colorante de la semilla del achiote es la bixina,

que se encuentra en la cubierta exterior de la semilla de l fruto,

representa mas del 80% de los pigmentos presentes, lo cual facilita su

extraccin los componentes principales de la semilla del achiote

son(Crdoba,1987; Mosquera, 1989; Jaramillo, 1992; CNP, 2001; SDIC,2001).

Resina

Orellina (materia colorante amarilla)

Bixina(materia colorante roja)(80%)

Aceite voltil y aceite graso.

Segn diferentes fuentes, la composicin tanto qumica como

nutricional de la semilla del achiote es muy variada, como puede observarse

en las tablas 1 y 2 (Crdoba,1987; ; Jaramillo, 1992; CNP, 2001; SDIC,2001).

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Tabla1. Composicin qumica de la semilla del achiote

Composicin qumica (%)

Humedad 8.00 -13.00
Protena 13-14.24
Celulosa 13.8
Fibra Cruda 18.48
Almidones 11.45
Carbohidratos totales 39.91
Ceniza 4.50-7.97
Energa 54 Kcal

Tabla 2. Composicin nutricional de la semilla del achiote

Composicin( mg/100g)
Calcio 7
Fsforo 10
Hierro 1.4
Vitamina A 45 mg
Riboflavina 0.2
Niacina 1.46
Tiamina 0.39
cido Ascrbico 12.5

Tabla 3. Composicin del pigmento del achiote

Composicin (g/100g)
Protenas 12.3-13.2
Pectina 0.23
Carbohidratos 39.91-47.90
Ceniza 5.44-6.92
Taninos 0.33-0.91
Pentosanos 11.35-14.97
Carotenoides 1.21-2.30
- Carotenos 6.8-11.30 mg
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El colorante. El principal componente colorante de la semilla es la

bixina, de color rojo oscuro. Qumicamente es un cido caretonoico de frmula

emprica C25H30O4, que se presenta como ismero geomtrico del tipo cis, pero

que puede convertirse a su forma trans, mas estable(Jaramillo, 1992). Es

insoluble en y en cloroformo, aceites vegetales, acetato de etilo y propilenglicol.

En la figura 1 aparece su formula estructural (Mosquera, 1989; Kalsec, 2001).

El pigmento de la semilla de achiote, que se encuentra en la parte ms externa,

tiene diferentes compuestos segn se muestra en la Tabla 3 (Cordoba,1987;

Bernal, 1989; Jaramillo, 1992).

Al hervir la bixina en una solucin de lcali, se forma una molcula de

metanol y una sal dipotsica que por acidificacin, produce el cido dibsico

norbixina, C24H26O4 (Figura 2), pigmento carotenoide soluble en

agua(Bernal,1989; Jaramillo,1992)

Figura 1. Acido cis-polieno monometilester dicarboxilico

CH3 CH3
CH3

H3COOCHC
CHCOOH

CH3

Figura 2. Estructura de la norbixina (Kalsec, 2001)

CH3 CH3
CH3

HOOC HC
CHCOOH

CH3

III- MATERIALES Y METODOS:

3.1 MATERIALES Y REACTIVOS:

3.1.1 Materiales para colectar la muestra:

Bolsas de papel
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Registro de campo
3.1.2 Materiales del laboratorio:
Material de uso comn de laboratorio
3.1.3 Equipos utilizados
Balanza analtica
Estufa
Molino
Centrfuga
Espectrofotmetro UV- Visible
3.1.4 Reactivos y soluciones
Agua destilada
Metanol
Ferrocianuro de potasio
Cloruro de Fierro
Acido Clorhidrico
Cloroformo
Diclorometano
Etanol
Sulfato de sodio anhidro
Hidroxido de amonio cc.
Cloruro de Sodio
Acetato de Plomo
Limaduras de Magnesio
Alcohol amilico
Cloruro frrico
Acido Tnico
Acido Sulfurtico
Anhidrido actico
Benceno
Tolueno
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Agua oxigenada
Hidroxido de Sodio
Hidroxido de potasio
Reactivo de Dragendorff
Reactivo de Mayer
Reactivo de Malser
Reactivo de Reineckato de amonio
Sulfato de quinina
Reactivo de ninhidrina

3.2 METODOLOGIA:

Se va utilizar la metodologa descrita por (MARTINEZ, et.al, 2003

y MIRANDA, 2000)

a) Recolectar y preparar las muestras frescas

b) Reconocimiento de Alcaloides:

Desmenuzar finamente unos 10 g de muestra fresca y colocarlos

en un erlemeyer. Aadir un volumen suficiente de HCl al 5% para que toda la

muestra este en contacto con la solucin cida. Calentar con agitacin al bao

Maria durante 5 minutos. Enfriar y Filtrar. Colocar en 4 tubos de ensayo 2 ml de

filtrado cido. Aadir a cada uno dos gotas de los reactivos de Dragendorff,

Mayer, Valser y Reineckato de amonio. Si observa turbidez o precipitados por

lo menos en tres tubos, se considera que la muestra contiene alcaloides.

c) Reconocimiento de Flavonoides, leucoantocianidinas y

Cardiotnicos:

En un erlemeyer colocar 10 g de muestra fresca finamente

desmenuzada. Aadir un volumen suficiente de alcohol etlico que cubra toda la

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muestra y le confiera fluidez. Calentar al bao maria durante 5 minutos, con

agitacin. Enfriar, Filtrar. Al filtrado aadirle un volumen igual de solucin de

acetato de plomo al 4 % que contenga cido actico al 0.5 %. Agitar. Dejar en

reposar 15 minutos. Filtrar. Con el filtrado realizar ensayos de reconocimiento

de flavonoides, leucoantocianidinas y cardiotnicos.

Ensayo para flavonoides: Colocar varias limaduras de magnesio en un

tubo de ensayo. Aadir 2ml del filtrado y por la pared del tubo, gota a gota

dejar caer varias gotas de HCl cc. La aparicin de colores naranja,

rosado, rojo, o violeta es prueba positiva para la existencia de flavonoides

en la muestra.

Ensayo para leucoantocianidinas: colocar 2ml del filtrado en un tubo de

ensayo.Aadir 1 ml de cido clorhdrico cc. calentar en bao de agua

hirviendo durante 15 minutos. La aparicin de coloraciones rojas es

prueba positiva de la existencia de leucoantocianidinas en la muestra.

Ensayo para cardiotnicos: en un tubo de ensayo colocar 1 ml del filtrado.

Aadir 0.5 ml de reactivo de Kedde (mezclar 1 ml de solucin A con 1 ml

de solucin B, para preparar el reactivo antes de su uso). La aparicin de

coloraciones violetas o prpuras es prueba positiva de la existencia de

carditnicos.

d) Reconocimiento de Saponinas, Taninos, Esteroles y/o

Triterpenoides y quinonas:

En un erlemeyer colocar unos 75 g de muestra fresca

finamente desmenuzada. Aadir un volumen suficiente de alcohol. Calentar al

bao mara durante unos 10 minutos con agitacin. Filtrar en caliente.

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Concentrar hasta la mitad del volumen en el filtrado. Trasvasar a un embudo de

separacin. Extraer con dos porciones de 20 ml c/u de diclorometano. Si es

necesario, aadir un volumen de agua para que se formen las dos fases.

Recuperar ambas fases. La fase acuosa se filtra y con el filtrado obtenido se

realizan ensayos para taninos, saponinas y quinonas.

La fase orgnica se recupera, se seca con sulfato de sodio anhidro y se filtra,

con el filtrado realizar el ensayo para triterpenoides o esteroides.

Ensayo para saponinas: agitar en un tubo de ensayo tapado, unos 4 ml

del filtrado acuoso, vigorosamente durante 1 minuto. La formacin de

espuma abundante y estable es prueba presuntiva de la presencia de

saponinas en la muestra.

Ensayo para Taninos: Tomar 1 ml del filtrado acuoso en un tubo de

ensayo, aadir 1 ml del reactivo de gelatina-sal. Si se forma un

precipitado, centrifugar a 2000 RPM durante 5 minutos. Desechar el

sobrenadante. Redisolver el precipitado en 2 ml de urea 10 M. aadir 2-3

gotas de cloruro ferrico al 10 %. La formacin de un precipitado al agregar

el reactivo de gelatina, y la aparicin de colores o precipitados verdes,

azules o negros es prueba positiva de la presencia de taninos en la

muestra.

Ensayo para Triterpenos y/o esteroides: En un tubo de ensayo limpio y

completamente seco, colocar 1 ml del filtrado orgnico. Aadir 1 ml de

anhdrido actico. Por la pared del tubo y con mucha precaucin, dejar

rebalsar 1-2 gotas de cido sulfrico concentrado. La formacin de

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colores azules, violetas, rojos o verdes es prueba positiva de que la

muestra contiene esteroidesy/o Triterpenoides.

Ensayo para quinonas: ENSAYO CON UNA FRACCION: Colocar en un

tubo de ensayo unos 5 ml de filtrado acuoso. Aadir 1 ml de perxido de

hidrgeno al 20 % y 1 ml de cido sulfrico al 50 %. Calentar la mezcla en

un bao de agua hirviendo durante 15 minutos. Enfriar. Aadir 5 ml de

tolueno. Agitar sin emulsionar. Recuperar la fase tolunica. Trasvasar 2ml

fase toluenica a un tubo de ensayo. Aadirle 1 ml de una solucin de

NaOH al 5 % con amoniaco. Agitar sin emulsionar. Si la capa acuosa

toma una coloracin rosada a roja a roja intensa es prueba positiva de la

presencia de quinonas en la muestra. ENSAYO DIRECTO: colocar g

demuestra fresca (o 1 g de muestra seca y molida), en un sistema de

reflujo, agregar 5 ml de HCl al 5%. Reflejar 5 minutos. dejar enfriar y filtrar.

Con el filtrado acuoso proceder como se describe para el ensayo con una

fraccin acuosa

e) Reconocimiento para Antocianinas:

En un erlemeyer colocar unos 100 g de muestra fresca finamente

desmenuzada. Aadir unos 200 ml de agua. Calentar a ebullicin durante unos

5 minutos, filtrar. Ensayo: en un tubo de ensayo colocar 2 ml de filtrado. Aadir

1 ml de NaOH diluido. Observar el color formado. En otro tubo de ensayo

colocar 2 ml de filtrado. Aadir unas gotas de acido mineral diluido. Observar el

color formado. Las antocianinas se reconocen por formar diferentes colores a

diferentes pH.

IV.- RESULTADOS
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Cuadro N4: Determinacin de Metabolitos Secundarios presentes en las

hojas y semillas de Bixa Orellana

Metabolito Secundario Hojas Semillas

Alcaloides +
Flavonoides ++ +
Leucoantocianidinas ++++ ++
Cardiotonicos - -
Saponinas - -
Taninos ++ +
Esteroles y/oTripernos
Quinonas - -
Antocianidinas + +
++++ Abundante ++ Moderado + Escaso Dudoso

V.- DISCUSIN:

Como se muestra los resultados en el cuadro N1 las hojas

presentan escasos alcaloides, ya que dio un escaso precipitado con los

reactivos de Mayer, Wagner y Dragendorf, presentando reaccin positiva con

los tres reactivos: y para las semillas la reaccin fue dudosa, debido a la gran

cantidad de colorante presente en las semillas.

Para la determinacin de Flavonoides en las hojas se Bixa

orellana se utilizo la reaccin de Shinoda, la cual presento reaccin positiva

dando una coloracin rosado claro, este resultado es un indicativo de que

puede tener una buena capacidad antioxidante, dependiendo de la

concentracin de flavonoides y de otros polifenoles presentes en la especie; y

en las semillas tambin s encontr una escasa presencia de flavonoides. Como

reporta (Harbone JB 1975, Li PV 1999) la especie Bixa orellana contribuye al

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efecto antiinflamatorio por contener flavonoides, taninos, esteroides, lo cual

esta corroborado en el presente anlisis

Tanto las hojas como las semillas de Bixa Orellana presentaron

leucoantocianidinas, aunque las hojas en una cantidad abundante y las

semillas en cantidad moderada tal como lo reporta (Harbone, 1975)

La presencia de taninos fue tanto en hojas como en semillas,

presentando reaccin positiva con el reactivo gelatina-sal y cloruro ferrico, lo

cual esta corroborado por (Harbone, 1975 y Ahmad. et.al., 2006)

VI. CONCLUSIONES

1. Se encontr escasa presencia de alcaloides en hojas y dudoso en

semillas

2. Presenta cantidad moderada de flavonoides en hojas y en semillas

escaso.

3. Presenta una cantidad abundante de leucoantocianidinas en hojas y

moderado en semillas

4. No se encontr cardiotnicos tanto en semillas como en hojas

5. No se encontr saponinas tanto en hojas como semillas

6. Presenta taninos en cantidad moderada en hojas y escaso en semillas

7. Presento una reaccin dudosa para los metabolitos de esteroles y/o

triterpenos.

8. No se encontr quinonas.
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VI.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

1. Li PV Actividad biolgica del extracto acuoso atomizado de hojas de

Bixa orellana L (Achiote) en animales de experimentacin.

2. Harborne, J.B., 1975. Flavonoid bisulfates and their co-occurrences with

ellagicacid in the Bixaceae, Frankeniaceae, and related families.

Phytochemistry 14, 13311337.

3. Lawrence, B.M., Hogg, J.W., 1973. Ishwarane in Bixa orellana leaf oil.

Phytochemistry 12, 2995.

4. CORDOVA v., J.A. (1987). El Achiote: Cultivo, Beneficio y posibilidades

de Exportacin. Revista ESSO Agrcola vol 34 N1 pp. 3-7
5. JARAMILLO MORENO, C.A. Y MUOZ MORENO, O.A. (1992).
Extraccin de colorantes de Achiote. Trabajo de Grado (ingeniero
Qumico). Medelln. Universidad de Medelln. Facultad de Mina.
Departamento de Procesos Qumicos
6. MARTINEZ, A. ; OSPINA, F; VALENCIA,G; JIMENEZ, N. (2003).
Manual de Practicas de Laboratorio de Farmacognosia y Fitoqumica
2003. Universidad de Antioquia. Facultad de Qumica Farmacutica.
Departamento de Farmacia. Medelln. Colombia