I.

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pengembangan metode yang sederhana, murah, dan ramah lingkungan
untuk pemurnian protein rekombinan dalam skala besar masih tetap menantang
[1,2]. Kromatografi afinitas dengan menggunakan berbagai tag afinitas di berbagai
resin yang populer di laboratorium dan perusahaan bioteknologi [1,3,4]. Tetapi
tidak dapat diterapkan untuk harga jual yang rendah protein non-terapi, seperti
enzim industri. Sebuah biaya yang rendah dan metode pengukuran untuk skala
besar pemurnian protein adalah prasyarat untuk komersial biokommoditas produk
mediasi oleh enzim skala industri atau jalur enzimatik sintetis.
Selulosa-bindingmodule (CBM) tag telah digunakan untuk pemurnian
protein rekombinan pada matriks selulosa komersial atau bubuk (Avicel,
mikrokristalin selulosa atau Sigmacell) [9-14], Karena (i)sangat spesifik mengikat
protein CBM-tag, (ii) rendah non-spesifik mengikat protein lain, (iii) biaya yang
rendah untuk afinitas matrix (selulosa), (iv) meningkatkan lipatan protein [13] , Dan
(v) peningkatan hasil protein [14]. Tapi kristal selulosa komersial memiliki
kapasitas pengikatan matriks berpori yang rendah, sebagian besar permukaan
mengikat yang bersifat internal [15]. Protein terikat tidak dapat dilepas karna
permukaan yang mengikat bersifat internal [15]. Protein terikat tidak dapat dihapus
secara efisien karena efek jebakan enzim [16], sehingga menghasilkan pemulihan
protein yang lebih rendah. Selain itu, protease tidak bisa bekerja efesien pada
protein yang terperangkap untuk melepaskan protein target.
Regenerasi Selulosa Amorf (RAC), yang terbuat dari Avicel melalui
penguraian asam fosfat [17], Memiliki luas permukaan yang lebih besar 20 kali
lipat dari Avicel [15] . Selain itu, permukaan yang mengikat seluruh RAC adalah
eksternal oleh protein target, dan protein mengikat RAC lebih cepat dari pada
Avicel.
Inteins protein intron bisa mengeluarkan diri mereka sendiri atau
bergabung kembali dua fragmen bersama-sama [18,19] . Untuk menghindari
menggunakan peptida-spesifik protease yang mahal dan menyederhanakan proses
purifikasi, pembelahan diri intein dapat digunakan untuk menggantikan peptida-
spesifik protease yang mahal melalui perubahan pH atau konsentrasi pereaksi tiol.
Pada penelitian ini kita mengembangkan metode yang generik, murah,
terukur, untuk purifikasi protein berdasarkan afinitas adsorpsi dengan biaya-
rendah, biodegradable, kapasitas adsorpsi yang tinggi oleh adsorben, RAC.
Pemurnian protein yang tinggi dengan kemurnian dapat dipisahkan melalui
pembelahan diri oleh intein yang terkait CBM dan protein target.
1.2 Rumusan Masalah
1. Bagaimana memurnikan protein dengan cara kromatografi afinitas.
2. Bagaimnana metode yang generik, murah, terukur, untuk purifikasi protein
berdasarkan afinitas adsorpsi dengan biaya-rendah, biodegradable,
kapasitas adsorpsi yang tinggi oleh adsorben, RAC.
1.3 Tujuan
1. Untuk memurnikan protein dengan cara kromatografi afinitas.
2. Untuk mengetahui bagaimana mengembangkan metode yang generik, murah,
terukur, untuk purifikasi protein berdasarkan afinitas adsorpsi dengan biaya-
rendah, biodegradable, kapasitas adsorpsi yang tinggi oleh adsorben, RAC.