Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un medio homogneo, la
disminucin de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio,
lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye exponencialmente
al aumentar aritmticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 2):
Po : Intensidad de la luz incidente P : Intensidad de la luz transmitida b : Espesor del medio absorbente
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la luz incidente,
del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del medio.
P / P0 = e -kc
donde :
Po : Intensidad de la luz incidente P : Intensidad de la luz transmitida
c : Concentracin de la solucin
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ESCUELA Ciencias Bsicas, Tecnologas e Ingenieras - ECBTI
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la luz
incidente, de la concentracin de la solucin, y frecuentemente, de la naturaleza del medio.
log P0 / P = a b c A = a b c
A = log P0 / P = - log T
donde :
del medio (longitud de
a : Absortividad b : Longitud o espesorla cubeta)
c : Concentracin de la solucin P/Po= T : Transmitancia
Transmitancia (T) : Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una muestra y
la energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa radiante incidente como la
transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.
T = P / P0 = 10-abc %T = 100 P / P0
Absorbancia(A) : Se define como la cantidad de energa radiante absorbida por una sustancia
pura o en solucin. Matemticamente, corresponde al logaritmo negativo de la
transmitancia.T, transmitancia expresada como fraccin decimal %T, transmitancia expresada
como porcentaje.
A = - log T = 2 log %T
Pero.
T = P / P0 = 10-abc
Luego
A=abc
Esta ecuacin indica que la absorbancia es una funcin lineal de la concentracin, donde a es
una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a depende de las
unidades de b y c. Si la concentracin c est expresada en moles por litro y la longitud de la
cubeta b en centmetros, la constante a recibe el nombre de absortividad molar ( ) . Luego
A=bc
Curva de Calibracin.
Una vez obtenida la grfica se determina la funcin matemtica que presenta dicha recta a
travs del tratamiento estadstico de regresin de los mnimos cuadrados, la cual relaciona la
absorbancia y la concentracin de un analito. La siguiente ecuacin matemtica corresponde
a dicha funcin:
A=mc+n (Ecuacin 1)
problema, antes de realizar la lectura y que permite que esta lectura este dentro de las
obtenidas para la curva de calibracin. En el caso contrario, si la concentracin del analito es
mayor que la concentracin del estndar ms concentrado la solucin problema deber ser
diluida.
Los espectrofotmetros ofrecen una mayor especificidad, es por esto que son los instrumentos
elegidos para la formulacin del color en productos alimenticios, establecimiento de
estndares y tolerancias, comunicacin del color entre plantas y el control de calidad del color
en las operaciones del proceso. Durante la ltima dcada, los espectrofotmetros, se han
adoptado cada vez ms en la industria alimenticia para la estandarizacin del color y la
inspeccin de control de calidad de los ingredientes antes de usarlos, para la especificacin
del color del producto final (particularmente en mermeladas, jaleas, reservas, bebidas, etc),
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El ojo humano es un mquina que posee dos tipos de receptores, conos y bastones:
Los conos, que tienen una sensibilidad mxima a la luz de una longitud de onda de 555nm.
La parte del espectro amarillo/verde.
Los bastones, que tienen una sensibilidad mxima a la luz de una longitud de onda de 505nm.
La parte del espectro azul/verde. La parte central de la fvea, no tiene conos. La percepcin
del color no es posible si slo estn activos los bastones. Los Conos, tienen su mxima
funcionalidad en luminancias altas, comprendidas entre 3 y 10 cd/m2, e incluso mayores
(situaciones diurnas). Es entonces cuando hablamos de Visin fotpica para el ojo humano.
La visin humana en colores es posible porque disponemos de conos sensibles al rojo, verde
y azul. La sensibilidad espectral de la visin fotpica, est caracterizada por la curva
V(lambda) y alcanza la mxima sensibilidad a una longitud de onda de 555nm
correspondiente a los colores amarillo-verde. Es por ello que las fuentes de luz con alto
contenido en esta parte del espectro son muy eficaces para la visin humana cuando sta
acta de forma Fotpica.
PROCEDIMIENTO
Se coloc la solucin en
una buretra, se agrega las
cantidades
correspondientes y se
termina de agregar agua
destilada hasta lograr
15mL.
Se tapa la muestra con
papel celofn, se agita, sin
dejar que el aire ingrese en
el tubo, esto con el fin de
homogenizar la solucin,
y se conserva al abrigo de
la luz hasta su uso.
Se conecta el instrumento
a 110 voltios, se enciende
y se deja durante 10 min
prendido para que se
estabilice.
Despus de ello se calibra
el espectrofotmetro con
una celda de agua
destilada hasta dar un
valor de 100%, y se llena
otra celda con la muestra.
Se toma opera el
espectrofotmetro para
variar la longitud de
onda para las diferentes
soluciones.
Se toman los datos de
concentracin y
absorbancia y se realizan
las diferentes tablas.
DATOS EXPERIMENTALES
490 0.5%
500 0.4%
580 8.5%
590 15.7%
600 19.0%
650 29.7%
660 31.6%
670 33.7%
680 35.4%
690 36.8%
700 38.4%
710 40.0%
720 40.8%
730 42.0%
740 60.5%
750 61.9%
760 63.0%
Tabla #1
N 1 Mn Absorbancia ( )( ) ( )
Mg/litro
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( )
1 0.37 0.084 0.031 0.13
2 0.73 0.005 0.003 0.53
3 1.10 0.242 2.466 1.21
4 1.47 0.093 0.136 2.16
5 1.83 0.111 0.203 3.348
6 2.20 0.205 0.451 4.84
7 2.57 0.008 0.020 6.60
8 2.93 0.30 0.879 8.58
9 3.30 0.018 0.059 10.89
10 3.67 0.249 0.913 13.46
= 20.17 1.315 5.161 51.74
(1 )2
11 4.04 0.003 0.012 16.32
12 4.43 2.86 12.669 19.62
13 4.91 0.062 0.304 24.10
14 5.29 0.232 1.227 27.98
Tabla #3
Grafica