UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FACULTAD DE INGENIERA GEOGRFICA, AMBIENTAL Y ECOTURISMO

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

AISLAMIENTO DE NDULOS DE RHIZOBIUM Y HONGOS AMBIENTALES

CURSO: MICROBIOLOGA.

DOCENTE: MG. GISELA YUPANQUI SICCHA

ESTUDIANTE: HUAMAN COVARRUBIAS MOLLY 2014002543

SILVA VEGA VERONICA 2014
VILLANUEVA VALLES XIOMARA 2014

CICLO
SEXTO CICLO.
ACADMICO:
FECHA DE
28/10/2016.
ENTREGA:
Laboratorio de Microbiologa 2016

PRCTICA N 10 AISLAMINETO DE NDULOS DE RHIZOBIUM

1. INTRODUCCION

Los microorganismos del suelo que realizan la fijacin del nitrgeno atmosfrico, los ms comunes y efectivos

son los del genero Rhizobium, que colonizan y forman ndulos en las races de las leguminosas, las bacterias

obtienen alimento de la planta y sta a cambio, recibe compuestos nitrogenados (Instituto Regional Federico

Errzuriz).En las condiciones medioambientales adecuadas, las bacterias fijadoras de nitrgeno producen

enzimas que toman el nitrgeno en su forma gaseosa de la atmsfera, y, con los azcares que obtienen de la

planta, fijan el nitrgeno dentro de la biomasa bacteriana. Se dan dos grandes divisiones de bacterias fijadoras

de nitrgeno: las bacterias fijadoras de nitrgeno simbiticas y las bacterias fijadoras de nitrgeno asociativas.

Las bacterias fijadoras de nitrgeno simbiticas, tales como el Rhizobium, se dan en las legumbres. Estas

bacterias forman ndulos en las races de las plantas. Y estos ndulos son fciles de contar. Las bacterias

fijadoras de nitrgeno asociativas ocupan los espacios entre las clulas de las races de la planta, y no alteran

la arquitectura de la raz en absoluto. A finales de la dcada de los 70, Kloepper (1994) utiliz el trmino PGPR

(plantgrowth promoting rizobacterias; rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal) para referirse a las

rizobacterias capaces de provocar un efecto benfico en las plantas. Recientemente, la denominacin se

ha extendido a microorganismos PGP para incluir hongos y cualquier organismo afn. Sin embargo, en la

ltima dcada un inters creciente ha sido dirigido hacia los microorganismos endfitos, los cuales al estar

menos afectados por el estrs ambiental y ms aclimatados con su hospedero podran representar una mayor

ventaja ecolgica. Sin embargo, la presencia de bacterias endfitas y su papel dependen probablemente del

cultivar y de su coevolucin con la especie microbiana.

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2. OBJETIVOS:

Aislar bacterias fijadoras de nitrgeno del gnero Rhizobium de los ndulos de las races de la planta de
Culantrillo.

Probar diferentes medios de cultivo para el aislamiento de la mayor cantidad de microorganismos fijadores de
nitrgeno.

Identificar mediante tincin Gram los microorganismos fijadores de nitrgeno aislados en los medios de cultivo

Comparar cuantitativamente en que medio se obtuvo la mayor cantidad de microorganismos.

3. MATERIALES
Races de plantas
Frasquitos estriles
Agua destilada
Lmina portaobjetos
Lmina cubreobjetos
Safranina
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona

4. MTODOS

Lavar con agua corriente las race

Seleccionar los ndulos en especial los de coloracin rojiza, dejando 5mm de raz en ambos lados y

colocarlos en un envase estril.

1. Agregar HgCl2 al 2.5% a los frascos estriles que contienen los ndulos y dejarlo por 5min

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2. Lavar sucesivamente 5 veces con agua destilada estril

3. Colocar un ndulo entre dos lminas portaobjetos, presionando una contra otra

4. De la muestra anterior una parte sembrarlas en medio YMA-79 y otra parte destinarla para
observacin microscpica con coloracin GRAM

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5. Hacer coloracin Gram

Aplicacin de Cristal violeta por

1min y su posterior enjuague

Se aplica sobre el portaobjetos

Lugol, ya que permite fijar el
cristal violeta en las gram + , se
deja un minuto de reposo, para
luego enjuagar con agua
destilada.

Se agrega el alcohol acetona

por 30 segundos, ya que el
alcohol acta como un
decolorante, posteriormente,
al igual que los anteriores
pasos enjuagar con agua
destilada.

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Se aplica safranina y se
deja por 1min y luego
llevarlo al microscopio
para su observacin

6. Sembrar en medio YMA-79

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5. RESULTADOS

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Observacin de colonias
pobladas en el cultivo Se aprecia las colonias que se
estn formando gracias al
cultivo

Se aprecia las colonias con

esporas y ya pobladas.

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Diplobacilos

Observamos la muestra de en
el microscopio e identificamos

Esafilobacilos

- La muestra analizada con GRAM son bacilos Gram negativos, no esporulados con grnulos
metacromticos.
- Se pueden observar diplobacilos y estafilobacilos

Recomendacin

- Usar mascarilla y guantes al manipular los insumos por precaucin ya que puede haber
reacciones secundarias al entrar en contacto con ellos
- Al aplicar el lactofenol (una sola gota sobre la muestra de rhizobium ) ya que en el porta
objeto se debe colocar el cubreobjetos a 45 de inclinacin para que encaje perfectamente
y as no daar los ndulos de la muestra que se ver en el microscopio

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Practica N12
Aislamiento de hongos ambientales

1. INTRODUCCIN
Se sabe en la actualidad que los hongos son organismos cosmopolitas que pueden desarrollarse en

los sustratos ms variados, en todos los climas de la tierra e incluso en condiciones extremas. Su

mbito es tan amplio, que sus esporas incluso sobrepasan la atmsfera su desarrollo fngico est

supeditado a ciertas condiciones ambientales tales como la humedad relativa, temperatura,

precipitacin, inversiones trmicas, contaminacin, disponibilidad de sustrato y actividades humanas,

las que influye en de manera determinante en la proliferacin y propagacin de las partculas fngicas

hacia los espacios interiores la mayora de estos hongos viven libres en el suelo o en el agua y

obtienen su energa por respiracin o fermentacin de materiales orgnicos solubles presentes en

estos ambientes

El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos pero es el portador de

aerosoles biolgicos como polvo, gotitas de agua & otros, que pueden estar cargados de los diversos

grupos de microorganismos. ) De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos que

proceden principalmente del suelo, de la vegetacin y del mar. Algunos de los gneros ms

comnmente aislados del aire son penicillium, Aspergillus, Rhizopus, mucor y cladosporium, entre

otros. Todos los hongos se reproducen por esporulacin. Las esporas fngicas son componentes

normales de ambientes externos y pueden ser la fuente contaminante de los ambientes internos y

muchos de estos pueden servir como sitios de amplificacin para el crecimiento de los hongos

En la presente practica hicimos aislamiento de hongos con las muestras obtenidas que fueron pelusa

de perro, limn, capas y hongo de pie con la finalidad demostrar la presencia y distribucin de los

hongos que se encuentran en el medio ambiente y Analizar muestras obtenidas de perro, limn,

hongos de pie, caspa, y observar los hongos presentes en cada una de ellas. La metodologa que

se empleo fue dejar incubar las muestras obtenidas por 3 das a temperatura ambiente para as

observar las colonias elevadas opacas y bien definidas, diferenciando as su estructura fngica

como: aspergillus y penicilium , y hasta su reproduccin que fue por gemacin.

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2. OBJETIVOS
2.1. GENERAL:
- Aislar y analizar los hongos ambientales

2.2 ESPECIFICO:
- Demostrar la presencia y distribucin de los hongos que se encuentran en el medio ambiente
- Analizar muestras obtenidas de perro, limn, hongos de pie, caspa , y observar los hongos presentes
en cada una de ellas.
- Diferenciar las estructuras fngicas de cada uno de los hongos encontrados en la muestra analizar
usando tcnicas de coloracin sencillas.

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3. PROCEDIMIENTOS

Para la realizacin de esta prctica se tuvo que llevar las placas con medio Agar, a nuestras casas, las
muestras fueron:

a. caspa
b. los perritos del perro.
c. Limn (muestra de proporcionada por la profesora )
d. hongo de pie

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3.1. Materiales y sustancias

a. Caja Petri conteniendo medio de Saboureaud dextrosa agar (SDA).
b. Asa bacteriolgica.
c. Lacto-fenol-azul de algodn.
d. Mechero Bunsen.
e. Encendedor
f. Portaobjetos.
g. Cubreobjetos.
h. Microscopio.

3.2. Procedimiento

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Depositamos pequeas partculas de caspa, partculas de pelitos de perro y otros muestras

proporcionadas por la profesora, en el medio de cultivo.
Dejamos en incubacin por 3 das a temperatura ambiente.
Observamos las colonias elevadas opacas y bien definidas.
De la placa se retira una pequea muestra con la cinta.
En el porta objeto se coloca una gota de lactofenol
segundo la cinta con la muestra se coloca encima de la gota de lactofenol para luego agrega otra
gota de esta misma y colocar el cubre objeto.
observarlo en el microscopio.

Ilustracin 1: se observa la cinta con microorganismos

Ilustracin 3: Segrega un agota de Ilustracin 2: Incorporar una gota

lactofenol antes de incorporar a la mas lactofenol en cima de la cinta
cinta con la muestra para que se adhiera al cubre
objeto
4. RESULTADOS

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Reproduccion asexual
por Gemacion x100
Esporas

Resultados

Resultados del lunes 24 de octubre

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Reproduccin
asexual por
gemacin

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5. CONCLUSIONES
Que en una muestra se puede encontrar diferentes tipos de hongos, como es el caso del Aspergillus
(no patgeno) y Penicillium.

6. RECOMENDACIONES

Se recomienda, trabajar con mucha paciencia y aptitud, porque de alguna de varios intentos varios
se podr observar los hongos.

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