LABORATORIO N4

TIEMPO DE REDUCCIN DE AZUL DE METILENO

1. OBJETIVOS:

Determinar de forma directa el grado de desarrollo microbiano en leche fresca

o envasada.
Conocer los pasos y operaciones necesarias para llevar a cabo este anlisis.

2. MARCO TEORICO:

El mtodo esta basado en la propiedad que tiene ciertas enzimas, producidas por
bacterias capaces de transferir hidrgeno de un sustrato a un aceptor biolgico (Azul de
Metileno que es un reactivo coloreado) reducindolo.

La prueba consiste en medir el tiempo que tarda la leche en decolorar el azul de

metileno pro reduccin, siendo el tiempo de reduccin inversamente proporcional al
nmero de microorganismos contenidos en la leche al realizar a incubacin.

3. MATERIALES/EQUIPOS:

Pipeta aforada de 10ml

Pipeta aforada de 1 ml.
Tubos de ensayo de 10 ml provisto de tapones previamente esterilizados
Bao Termosttico con regulador de temperatura
Gradillas porta tubos

4. MUESTRA/REACTIVOS:

Leche
Reactivo Azul de Metileno

5. PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS:

1) Con una pipeta transferimos 1 ml de solucin de azul de metileno en un tubo de

ensayo previamente esterilizado cuidando de no exponerlo mucho tiempo a la luz.
2) Adicionamos 10 ml de leche previamente homogenizada.
3) Tapamos los tubos y volteamos cuidadosamente los mismos hasta mezclar ambos
lquidos.
4) Una vez preparada la mezcla dentro de los tubos, colocamos los mismos en un
bao termorregulador a temperatura de 37 C.

TEC. DE LECHE Y DERIVADOS PRQ 302

Nombre :Rudy Alex Mamani Leon Reg:210204230
 5) Registramos el tiempo de incubacin.
6) Observamos continuamente si las muestras decoloraron y en los casos que lo
hicieron tomamos registro de esos tiempos.

6. ESQUEMA:

Con una pipeta transferimos 1 ml

Adicionamos 10 ml de leche
previamente homogenizada.
Tapamos los tubos y volteamos
cuidadosamente los mismos
hasta mezclar ambos lquidos.
de solucin de azul de metileno
en un tubo de ensayo previamente
esterilizado
Observamos continuamente si las
muestras decoloraron y en los

TEC. DE LECHE Y DERIVADOS PRQ 302

Nombre :Rudy Alex Mamani Leon Reg:210204230
 casos que lo hicieron tomamos registro de esos tiempos.

7. EXPRESIN DE RESULTADO:

Las interpretaciones de este ensayo pueden varia segn las fuentes consultadas o las
exigencias de calidad de cada regin o pas. Por ejemplo:

Si el tiempo de decoloracin mnimo es 1-2 horas, se tiene una leche de buena

calidad.
Si el tiempo de decoloracin mnimo es 2-3 horas, se tiene una leche media.
Si el tiempo de decoloracin es mayor que 3 horas, se tiene una leche baja
calidad.

Para la realizacin de estas experiencias se tomaron 3 muestras de leche que son la

siguiente:

B = leche deL campo

C = leche pil
D = leche delicia

8. OBSERVACIONES:

Se pudo observar que el color azul del indicador azul del metileno se volvi celeste porque
a medida que calentamos este se decolora ya que los m.o. consumen el oxigeno y el
potencial de oxido reduccin.
Tambin se observo que este es un anlisis muy demoroso para realizarlo ya que los
anlisis de calidad de la leche deberan ser de corto tiempo.

9. CONCLUSIN:

La leche comprada del mercado es de calidad media

La leche comprada del campo es de baja calidad
La leche PIL es de buena calidad

Podemos concluir que los resultados obtenidos en la experiencia no son los

adecuados debido al corto tiempo que se da para la prctica en el laboratorio ya
que lo adecuado para esta experiencia debera ser de 4 horas para poder obtener
los resultados adecuados.

TEC. DE LECHE Y DERIVADOS PRQ 302

Nombre :Rudy Alex Mamani Leon Reg:210204230